JP7737447B2 - サーコウイルス科カプシドタンパク質を含む融合タンパク質、及びそれから構成されるキメラウイルス様粒子 - Google Patents

Description

本発明は、ワクチンを調製するため、特に、少なくとも１つの病原体による感染によって引き起こされる１つ又は複数の臨床徴候、例えば、ウイルス感染によって引き起こされる臨床徴候を低減するために有用な、組換え的に構築されたポリペプチドに関する。より具体的には、本発明は、異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）カプシドタンパク質を含むポリペプチド、及びそのようなポリペプチドから構成されるキメラウイルス様粒子を対象とする。一例において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片に連結されたＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質を含み、イノシシ属動物におけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ又は複数の臨床徴候、死亡率又は糞便排出を低減するために有用である、融合タンパク質が提供される。

背景情報
ある範囲の植物及び動物種において見出され、一般にサーコウイルスと称される、サーコウイルス科という名称のウイルスの科は、単一タンパク質の６０コピーから構成される正２０面体カプシドを有する円形の非エンベロープビリオンとして特徴付けられている。サーコウイルスのｓｓＤＮＡゲノムは、既知の最小のウイルスＤＮＡレプリコンを示す。

この科に含まれる動物ウイルスは、ニワトリ貧血ウイルス（ＣＡＶ）、ハトサーコウイルス、嘴羽毛病ウイルス（ＢＦＤＶ）、コウモリ関連サーコウイルス及びブタサーコウイルス（ＰＣＶ）である。最も経済的に深刻なサーコウイルスの１つは、ブタサーコウイルス関連疾患の原因であるブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）である。
ＰＣＶ２ ＯＲＦ遺伝子は、昆虫細胞培養において発現することができる。ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質がウイルス様粒子（ＶＬＰ）に集合することも示されている。これらのＶＬＰは、本質的に、空ＰＣＶ２カプシドであり、非常に免疫原性である。
抗原担体としてＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質を利用するいくつかの試みが文献に記載されている。短い（≦３０アミノ酸）ペプチドをコードする配列が、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２リーディングフレームの３’末端に付け加えられ、表面露出ループをコードする領域に挿入されている。

組換えＰＣＶ２ウイルス及びバキュロウイルス感染昆虫細胞を使用して発現されたＶＬＰは両方とも、粒子表面でペプチドを提示するようになる（Beach et al. J Virol. 85(9): 4591-4595 (2011)；Huang et al. Virus Res. 161: 115-123 (2011)；Li et al. Vet Microbiol. 163: 23-32 (2013)；Huang et al. Appl Microbiol Biotechnol. 98: 9339-9350 (2014)；Hu et al. Vaccine 34: 1896-1903 (2016)；Wang et al. Front Cell Infect Micriobiol. 8: 232 (2018)；Ding et al. Adv Healthcare Mater. 1900456 (2019)；Wang et al. Vet. Microbiol. 235: 86-92(2019)）。これらとしては、より最近の国際公開第２０１６１６０７６１Ａ２号と一緒に国際公開第２００９０８８９５０Ａ２がさらに挙げられる。これまでに、サーコウイルスカプシド又はＶＬＰの外面に提示される第２のタンパク質又はタンパク質ドメインをもたらす、サーコウイルスカプシドタンパク質及び第２のタンパク質又はかなりの長さのタンパク質ドメインからなる単一ポリペプチドの発現について、文献に記載されていない。最近、ＢＣループ又はＣ末端伸長のいずれかに挿入された７アミノ酸のＱタグ配列を伴って発現されたＰＣＶ２ ＯＲＦ２が、６アミノ酸のＫタグＣ末端伸長を伴って発現された高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）にコンジュゲートされた。このコンジュゲーションは、改変ＰＣＶ２ ＯＲＦ２、ＥＧＦＰの別々の発現及び精製、並びにＱタグとＫタグとの間の反応を触媒する微生物トランスグルタミナーゼを必要とする。その上、コンジュゲーションは、ＶＬＰの存在がなかったことを確認した（Masuda et al. J Insect Biotechnol Sericol. 87: 53-60 (2018)）。

しかしながら、適切なワクチン接種を達成するために十分な免疫応答を誘導するために、３０アミノ酸残基よりも長い抗原、特にタンパク質ドメイン又はタンパク質を担体タンパク質にコンジュゲートすることが必要であり得る。これに関して、そのような融合タンパク質が、ホモ多量体化してウイルス様粒子（ＶＬＰ）を形成することができる単一分子として細胞によって発現され得、次いで、抗原が、必要な免疫応答を誘導するのに十分な免疫原性を有するように、適切なフォールディング及び粒子の表面上でのより長い抗原の提示を誘導することが望ましい。
したがって、より長い抗原にコンジュゲートされた担体タンパク質を含み、融合タンパク質が上記の有利な特性を有するポリペプチドが必要とされている。
また、ロタウイルスなどの複雑なビリオンを有するウイルスに対する適切な免疫応答を誘導することができるそのような融合タンパク質を作出することが所望されている。

ロタウイルスは、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）内の属を含む二本鎖ＲＮＡウイルスである。ロタウイルス感染は、胃腸疾患を引き起こすことが知られており、幼児における胃腸炎の最も一般的な原因と考えられている。ロタウイルスは、糞口経路によって伝染し、小腸を覆う細胞に感染する。感染した細胞は、胃腸炎を誘発するエンテロトキシンを産生し、重度の下痢、時には脱水による死をもたらす。
ロタウイルスは、１１セグメントの二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）から構成されるゲノムを有し、国際ウイルス分類委員会（ＩＣＴＶ）によって定義され、Matthijnssens et al.(Arch Virol 157:1177-1182 (2012))（本明細書において言及されるこの刊行物及びさらなる刊行物は、それらの全体が参照により組み込まれる）によって要約されるように、抗原性及び内部ウイルスカプシドタンパク質６（ＶＰ６）の配列に基づく分類に基づき８つの群（Ａ～Ｈ）に現在分類されている。
ロタウイルスのゲノムは、６つの構造タンパク質（ＶＰ１～ＶＰ４、ＶＰ６及びＶＰ７）及び６つの非構造タンパク質（ＮＳＰ１～ＮＳＰ６）をコードし、ここで、ゲノムセグメント１～１０はそれぞれ、１つのロタウイルスタンパク質をコードし、ゲノムセグメント１１は、２つのタンパク質（ＮＳＰ５及びＮＳＰ６）をコードする。

ロタウイルスＡとの関連において、種々の株は、構造タンパク質ＶＰ７及びＶＰ４に基づいて遺伝子型（比較配列解析及び／又は核酸ハイブリダイゼーションデータによって定義される）又は血清型（血清学的アッセイによって定義される）として分類できる。ＶＰ７及びＶＰ４は、最外タンパク質層（外側カプシド）の構成成分であり、両方とも、中和エピトープを持つ。ＶＰ７は、ビリオンの外側層又は表面を形成する糖タンパク質である（したがって、「Ｇ」と表される）。ＶＰ７は、Ｇ型の株を決定し、Ｇ血清型及びＧ遺伝子型の割当数字は同一である。ＶＰ４は、プロテアーゼに感受性であり（したがって、「Ｐ」と表される）、ウイルスのＰ型を決定する。Ｇ型とは対照的に、Ｐ血清型及び遺伝子型に割り当てられる数字は異なる（Santos N. et Hoshino Y., 2005, Reviews in Medical Virology, 15, 29-56）。したがって、Ｐ血清型は、Ｐとそれに続く割り当てられた数として表され、Ｐ遺伝子型は、Ｐとそれに続く括弧内の割り当てられた数によって表される（例えば、「Ｐ［７］」又は「Ｐ［１３］」）。同じ遺伝子型に属する株は、８９％よりも高いアミノ酸配列同一性を有する（Estes and Kapikian. Rotaviruses. In: Knipe, D.M.; Howley, P.M. Fields Virology, 5th ed.；Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health: Philadelphia, PA, USA (2007)；Gorziglia et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 87(18):7155-9 (1990)）。

ロタウイルスは、特に、ほぼ１００％のブタに存在する群Ａ及びＣのロタウイルスに対する抗体を有するイノシシ属動物における胃腸炎の主要な原因でもある（Vlasova et al. Viruses. 9(3): 48 (2017)）。現在、改変生ワクチン又は死菌ワクチンのみが、ロタウイルスＡに対して利用可能である。実験室においてロタウイルスＣを培養することができないことは、この群に対するワクチンの開発を妨げ、次いで、組換えワクチンの魅力を増大させる。

組換え抗ロタウイルスワクチンの作製は、３つの層に配置される４つのタンパク質から構成されるロタウイルスカプシドの複雑さによって妨害される。最内層は、Ｔ＝１対称性を有するＶＰ２の６０の二量体から構成される。ＶＰ２層は、Ｔ＝１３対称性を有するＶＰ６の２６０の三量体によって形成される中間層の適切な順序のために必要である。ＶＰ２とＶＰ６との間の得られる対称性のミスマッチは、５つの別個のＶＰ６三量体位置、及び３つの別個のポア型を生じる。ＶＰ２の非存在下において、ＶＰ６は、塩及びｐＨ依存性の様式で、規則正しい高分子量の微小管及び球状体を容易に形成し、これは、ウイルス集合の副生成物を示し得る。カプシドにおいて、ＶＰ６層は、適所でＶＰ４スパイクを保持するクランプとして作用するＶＰ７の２６０のＣａ²⁺依存性三量体によって覆われる。ＶＰ７は、グリコシル化されるか、又はＧ型抗原であり、中和エピトープを含有する。中和抗体の大部分は、三量体ＶＰ７のみを認識し、ＶＰ７三量体の解離を防止することによって次にスパイクの放出を遮断する作用をすると考えられる。ロタウイルスのスパイクは、ＩＩ型ポアでのみＶＰ６層に挿入されるＶＰ４の６０個の三量体として存在する。ＶＰ４は、中和エピトープを含有し、Ｐ型抗原であり、トリプシンによってスパイクベースＶＰ５^*、及び切断後にＶＰ５^*と会合したままの細胞相互作用ヘッドＶＰ８^*に切断される。トリプシン処理は細胞侵入のためにスパイクを刺激し、その際スパイクが大規模な構造再編成を受けて、宿主細胞における受容体結合のための活性、部位を露出させる。上記集合プロセスの複雑さを無視して、適切な集合を促進する環境条件でのロタウイルスカプシドタンパク質の化学量論的発現を達成することは困難である。

ロタウイルスカプシド集合の困難さを考慮して、サブユニットワクチンアプローチへの関心があった。ＶＰ７及びＶＰ４は、中和エピトープを含有する２つのタンパク質であるが、しかしながら、ＶＰ７の使用は、そのグリコシル化及びカルシウム依存性三量体化によって複雑になるであろう。ＶＰ４の使用は、その三量体化、トリプシン処理、及び潜在的なコンフォメーション状態の範囲によって複雑になる。ＶＰ４のトリプシン処理によって生じるＶＰ８ドメイン又はＶＰ８^*とも名付けられたＶＰ８タンパク質は、中和エピトープを含有し、単量体であり、その構造が高分解能で決定されており（Dormitzer et al. EMBO J. 21(5): 885-897 (2002)）、非常に安定と記載されている。
さらにまた、ＶＰ８タンパク質内で、レクチン様ドメイン（ａａ６５～２２４）は、宿主受容体と相互作用し、ウイルスの宿主細胞への付着に関与すると考えられる（Rodriguez et al., PloS Pathog. 10(5):e1004157 (2014)）。

小児用のロタウイルスサブユニットワクチンを開発するためのアプローチが記載されており、ここで、Ｎ末端で破傷風トキソイドユニバーサルＣＤ４⁺Ｔ細胞エピトープ（ａａ８３０～８４４）Ｐ２に連結された短縮型ＶＰ８タンパク質（ＶＰ８^*のアミノ酸残基６４（又は６５）～２２３）が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）において産生され（Wen et al. Vaccine. 32(35): 4420-7 (2014)）、乳幼児において試験された（Groome et al. Lancet Infect Dis.17(8):843-853 (2017)）。しかしながら、一価サブユニットワクチン（ロタウイルス遺伝子型Ｐ［８］の短縮型ＶＰ８タンパク質に基づく）のこの使用は、異型ロタウイルス株に対して不十分な応答を誘発し、また、三価ワクチン製剤（遺伝子型Ｐ［４］、Ｐ［６］、Ｐ［８］）が、最近、試験された（Groome et al. Lancet Infect Dis. S1473-3099(20)30001 (2020)）。

別のアプローチにおいて、Ｎ末端短縮型ＶＰ８タンパク質「ＶＰ８－１」（ａａ２６～２４１）は、コレラ毒素の五量体化されている非毒性Ｂサブユニット（ＣＴＢ）とＮ末端又はＣ末端で融合された。得られた五量体融合タンパク質（ＣＴＢ－ＶＰ８－１、ＶＰ８－１－ＣＴＢ）のうち、ＣＴＢ－ＶＰ８－１（即ち、ＣＴＢにＮ末端で融合されたＶＰ８－１）のみが、ＶＰ８－１－ＣＴＢと比較して、さらなる開発のための実行可能な候補であると考えられ、これは、マウスモデルにおいて、ＧＭ１、又はＶＰ８^*に特異的な中和モノクローナル抗体に感受性のコンフォメーションに対するより高い結合活性を示し、より高い力価の中和抗体を誘発し、より高い保護有効性を付与した（Xue et al. Hum Vaccin Immunother. 12(11) 2959-2968 (2016)）。
しかしながら、ロタウイルスカプシド集合の困難さを考慮して、特に、サブユニットワクチンが一般に非常に安全であると考えられているので、代替のサブユニットワクチンアプローチへの関心がある。また、培養することが困難であるそのようなロタウイルスのワクチン抗原の簡単な生成を可能にする、有効なロタウイルスサブユニット抗原の組換え発現は、強く所望されている。さらにまた、ロタウイルスは、イノシシ属動物における胃腸炎の主要な原因であるので、特に、イノシシ属動物のために現在市販されているＭＬＶロタウイルスワクチンと同等の、又はそれよりもさらにより有効な有効性を可能にする抗原を含む、イノシシ属動物用のサブユニットワクチンを有する必要性が高い。

発明の説明
上記の技術的課題に対する解決手段は、特許請求の範囲において特徴付けられる記載及び実施形態によって達成される。
したがって、本発明は、その異なる態様において、特許請求の範囲に従って実行される。
本発明は、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、既知の３０アミノ酸残基の長さよりも実質的に長い非サーコウイルス科抗原とコンジュゲートされると、これが、それらの表面で非サーコウイルス科抗原を提示する安定なキメラウイルス様粒子を作出するという驚くべき知見に基づく。

ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質ＶＬＰの陰性染色電子顕微鏡画像を示す図である。 ＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質ＶＬＰの陰性染色電子顕微鏡画像を示す図である。 Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄ（エマルシゲンＤ）を用いて製剤化されたＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質（研究－１日目に開始する（上側の）線によって折れ線グラフに表される結果）又はプラセボ（研究１日目に開始する（下側の）線によって折れ線グラフに表される結果）のいずれかでワクチン接種されたブタの血清ＩｇＧ応答を示す図である。 Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄを用いて製剤化されたＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質（ラベルに「ＰＣＶ２ ＯＲＦ２ ＶＬＰ担体ＡＶＰ８」と記載）又はプラセボ（「無関係ワクチン対照」）でワクチン接種されたブタの試料における、ブタロタウイルスＡウイルスを中和することができる抗体を検出及び定量化するために実施されたＶＮ（ウイルス中和）アッセイの結果を示す図である。 群及び研究日による雌ブタ血清におけるロタウイルスに対する平均ＶＮ力価を示す図である。図中、研究日のＤ０及びＤ２８は、「分娩６週間前及び２週間前」の時点（即ち、治験薬が、それぞれ、Ｔ０１及びＴ０２研究群に投与された場合）を表し、研究日のＤ７、Ｄ２８及びＤ３５は、「分娩５週間前、２週間前及び１週間前」の時点（即ち、市販ワクチンがＴ０６に投与された場合）を表す。 研究日による糞便における群の中央値ｌｏｇロタウイルスＡ ＲＮＡゲノムコピー（ｇｃ）／ｍＬを示す図である。 研究日による血清における群の中央値抗ＰＣＶ２力価（バー＝範囲）を示す図である。

特に、ロタウイルスＡ又はＣのＶＰ８タンパク質の大きな断片のＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質のＣ末端への融合が、三層のロタウイルスカプシドに集合する困難性なく、ロタウイルス関連ＶＬＰの形成を可能にすることを予想外にも見出した。これらの融合タンパク質のパートナーは、文献に以前に記載された≦３０アミノ酸融合物よりもかなり大きく、１６８アミノ酸残基（ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の断片）及び１８１アミノ酸残基（ロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の断片）の長さであり、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２の２３３又は２３４アミノ酸残基のサイズに近くなる。ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質に連結されたロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含むそのようなポリペプチドの雌ブタへの投与は、中和抗体の受動的伝達を介して、ロタウイルスによる負荷後のそれらの子における臨床徴候及び糞便排出、並びに死亡率を有意に低減した。

第１の態様において、本発明は、したがって、異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質を含むポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチドは、本明細書の以下で、「本発明のポリペプチド」とも称する。
特定の好ましい態様によれば、本発明のポリペプチドは、異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質からなり、ここで、必要に応じて、前記カプシドタンパク質は、リンカー部分を介して、異種タンパク質又はその断片に連結されている。

本明細書において使用される「ポリペプチド」という用語は、特に、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸残基の任意の鎖を指し、特定の長さの生成物は指さない。例えば、「ポリペプチド」は、アミノ酸残基の長い鎖、例えば、１５０～６００アミノ酸残基長、又はそれよりも長いものを指し得る。「ポリペプチド」という用語は、１つ又は複数の翻訳後修飾を有するポリペプチドを含み、ここで、翻訳後修飾としては、例えば、グリコシル化、リン酸化、脂質化（例えば、ミリストイル化など）、アセチル化、ユビキチン化、硫酸化、ＡＤＰリボシル化、ヒドロキシル化、Ｃｙｓ／Ｍｅｔ酸化、カルボキシル化、メチル化などが挙げられる。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本発明の文脈において互換的に使用される。

「サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、「サーコウイルス科ウイルスのカプシドタンパク質」と同等であることが理解される。
「カプシドタンパク質」は、本明細書において使用される場合、特に、カプシド、即ち、ウイルス又はウイルス様粒子のタンパク質シェルに、それぞれ、組み込まれ得るか、又は天然に見出され得る、タンパク質を指す。本発明の文脈における「サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質」という用語は、特に、サーコウイルス科ウイルスのゲノムに由来するアミノ酸配列を有し、同じタンパク質のさらなるサブユニットとの自己集合によって、ウイルス様粒子を形成することができるタンパク質であると理解される。
好ましくは、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質は、サーコウイルス科ウイルスの全長カプシドタンパク質、例えば、全長ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質である。

本発明との関係における「異種タンパク質」は、特に、本明細書において言及されるカプシドタンパク質が由来するサーコウイルス科ウイルス以外の実体に由来するタンパク質に関する。したがって、一例において、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）ＯＲＦ２タンパク質である場合、前記異種タンパク質又はその断片は、ＰＣＶ２において見出されないアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。好ましくは、異種タンパク質又はその断片は、サーコウイルス科ウイルス以外のウイルスのゲノムによって、例えば、ロタウイルスのゲノムによってコードされるタンパク質又はその断片である。

したがって、本明細書において言及される異種タンパク質は、特に、非サーコウイルス科タンパク質であり、「その断片」は、特に、非サーコウイルス科タンパク質の断片である。「非サーコウイルス科タンパク質」は、本明細書において言及される場合、特に、サーコウイルス科ウイルスにおいて見出されないタンパク質に関する。「非サーコウイルス科タンパク質の断片」は、特に、サーコウイルス科ウイルスにおいて見出されないアミノ酸配列を有することがさらに理解される。より具体的には、本明細書において言及される異種タンパク質は、サーコウイルス科（Ｃｉｒｏｖｉｒｉｄａｅ）ウイルス以外の病原体のゲノムによってコードされるタンパク質であり、「その断片」は、特に、サーコウイルス科（Ｃｉｒｏｖｉｒｉｄａｅ）ウイルス以外の病原体のゲノムによってコードされるタンパク質の断片である。非限定的な例として、本明細書において言及される異種タンパク質は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質であり得る。

本明細書において使用される場合、「その断片」という用語は、特に、全長異種タンパク質について特定された特定の機能性に関して、それぞれ、同じ活性、又は活性の種類を有する異種タンパク質の断片を指す。より具体的には、「その断片」という用語は、タンパク質ドメイン、特に、異種タンパク質のタンパク質ドメインを含むか、又はそれからなる異種タンパク質の断片に関する。したがって、異種タンパク質又はその断片は、好ましくは、タンパク質ドメインを含むか、又はそれからなる。前記タンパク質ドメインは、好ましくは、少なくとも５０アミノ酸残基の長さ、より好ましくは、少なくとも１００アミノ酸残基の長さ、最も好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基の長さである。
「タンパク質ドメイン」という用語は、本明細書において使用される場合、タンパク質の残りから独立した機能的特徴を有する特定の三次元構造を有するタンパク質の領域を指す。この構造は、タンパク質に特定の活性を提供することができる。例示的な活性としては、限定されないが、酵素活性、別の分子に対する認識モチーフの作出、又は特定の環境に存在するタンパク質のために必要な構造構成成分を提供することが挙げられる。タンパク質ドメインは、通常、タンパク質ファミリー内及び類似の機能を行うタンパク質スーパーファミリー内の両方のタンパク質の進化的に保存された領域である。タンパク質ドメインについての非限定的な例は、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインである。
したがって、非限定的な例において、前記異種タンパク質の断片は、本明細書において言及される場合、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の断片であり得、ここで、前記断片は、少なくとも１５０アミノ酸残基、例えば、１５０～２００アミノ酸残基の長さであり、及び／又は前記断片は、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインを含む。

本明細書において使用される「に連結される（ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ）」という用語は、特に、ポリペプチド内で、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質を、異種タンパク質又はその断片に接続するための任意の手段を指す。連結するという意味の例は、（１）異種タンパク質又はその断片に直接連結され、前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質にも結合する介在部分による、異種タンパク質又はその断片へのサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質の間接連結、及び（２）共有結合による、異種タンパク質又はその断片へのサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質の直接連結を含む。「に連結される（ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ）」及び「と連結される（ｌｉｎｋｅｄ ｗｉｔｈ）」という用語は、本発明の文脈において、互換的に使用される。

特に、「異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質を含むポリペプチド」という表現は、本明細書において使用される場合、
「 － サーコウイルス科ウイルスのカプシドタンパク質のアミノ酸配列、及び
－ 異種タンパク質又はその断片のアミノ酸配列、
を含むポリペプチド」
という表現と同等であることが理解される。
「異種タンパク質又はその断片」という用語は、本明細書において記載される場合、特に、「異種タンパク質又は前記異種タンパク質の断片」と同等であることが理解される。「異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質」という表現は、本明細書において言及される場合、さらに、「異種タンパク質又は前記異種タンパク質の断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質」と同等であることが特に理解される。
好ましい態様によれば、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基は、異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基に連結されている。

好ましくは、前記カプシドタンパク質は、リンカー部分を介して異種タンパク質又はその断片に連結されている。
リンカー部分は、本明細書において記載される場合、本発明の文脈において、好ましくは、ペプチドリンカーである。
「ペプチドリンカー」という用語は、本明細書において使用される場合、１つ又は複数のアミノ酸残基を含むペプチドを指す。より具体的には、「ペプチドリンカー」という用語は、本明細書において使用される場合、２つの可変のタンパク質及び／又はドメイン、例えば、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質及びサーコウイルス科ウイルス以外のウイルスのゲノムによってコードされるタンパク質又はその断片を接続することができるペプチドを指す。

特定の好ましい態様において、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質は、リンカー部分を介して異種タンパク質又はその断片に連結されており、ここで、
－ サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質は、リンカー部分のＮ末端アミノ酸残基と前記カプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基との間のペプチド結合を介して、リンカー部分に連結されており、
－ リンカー部分は、異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基とリンカー部分のＣ末端アミノ酸残基との間のペプチド結合を介して、異種タンパク質又はその断片に連結されている。
また、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基と異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基との間のペプチド結合を介して、異種タンパク質又はその断片に連結されていることが好ましい場合がある。

本発明のポリペプチドは、特に、融合タンパク質であることが理解されるであろう。
本明細書において使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、同じではない２つ以上のポリペプチドの全部又は一部を融合する（即ち、連結する）ことによって形成されるタンパク質を意味する。典型的には、融合タンパク質は、２つ以上のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを端と端で連結することによって、組換えＤＮＡ技法を使用して作製される。より具体的には、「融合タンパク質」という用語は、したがって、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列及び第２のポリペプチドをコードする少なくとも第２の核酸を組み合わせることによって作製される核酸転写物から翻訳されるタンパク質を指し、ここで、融合タンパク質は、天然に存在するタンパク質ではない。核酸構築物は、融合タンパク質中で連結されている２つ以上のポリペプチドをコードし得る。

別の好ましい態様において、本発明は、ポリペプチド、特に、上記で言及されるポリペプチドであって、前記ポリペプチドが、式ｘ－ｙ－ｚ（式中、
ｘは、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質からなるか、又は前記カプシドタンパク質を含み、
ｙは、リンカー部分であり、
ｚは、異種タンパク質又はその断片である）
の融合タンパク質であるポリペプチドを提供する。
式ｘ－ｙ－ｚは、特に、前記カプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基が、前記リンカー部分と、好ましくは、前記リンカー部分のＮ末端アミノ酸残基とのペプチド結合を介して連結されていること、及び前記異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基が、前記リンカー部分と、好ましくは、前記リンカー部分のＣ末端アミノ酸残基とのペプチド結合を介して、連結されていることが理解されるべきである。

本明細書において言及されるサーコウイルス科ウイルスは、好ましくは、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）、コウモリ関連サーコウイルス２（ＢＡＣＶ２）及び嘴羽毛病ウイルス（ＢＦＤＶ）からなる群から選択される。
本発明の一態様において、本明細書において言及されるサーコウイルス科ウイルスは、ＰＣＶ２である。
前記ＰＣＶ２は、好ましくは、ＰＣＶ２サブタイプａ（ＰＣＶ２ａ）及びＰＣＶ２サブタイプｄ（ＰＣＶ２ｄ）からなる群から選択される。
好ましい態様において、サーコウイルス科カプシドタンパク質は、本明細書において言及される場合、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質、ＢＡＣＶ２カプシドタンパク質及びＢＦＤＶカプシドタンパク質からなる群から選択される。
本発明の特定の好ましい態様において、本明細書において言及されるサーコウイルス科カプシドタンパク質は、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質である。

前記ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質は、好ましくは、ＰＣＶ２サブタイプａ（ＰＣＶ２ａ）ＯＲＦ２タンパク質及びＰＣＶ２サブタイプｄ（ＰＣＶ２ｄ）ＯＲＦ２タンパク質からなる群から選択される。
別の好ましい態様において、サーコウイルス科カプシドタンパク質は、本明細書において記載される場合、コウモリ関連サーコウイルス２（ＢＡＣＶ２）カプシドタンパク質である。
さらなる好ましい態様において、サーコウイルス科カプシドタンパク質は、本明細書において言及される場合、嘴羽毛病ウイルス（ＢＦＤＶ）カプシドタンパク質である。

特定の好ましい態様において、本明細書において記載されるサーコウイルス科カプシドタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
さらなる好ましい態様によれば、異種タンパク質又はその断片は、本明細書において言及される場合、少なくとも５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。好ましくは、異種タンパク質又はその断片は、本明細書において言及される場合、少なくとも１００アミノ酸残基の長さ、最も好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
特に、本明細書において言及される異種タンパク質又はその断片は、５０～１０００アミノ酸残基の長さ、好ましくは、１００～５００アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。最も好ましくは、前記異種タンパク質又はその断片は、１５０～２５０アミノ酸残基の長さである。

異種タンパク質又はその断片は、本明細書において言及される場合、好ましくは、病原体のゲノムによってコードされ、ここで、病原体は、特に、サーコウイルス科ウイルス以外のウイルスである。非限定的な一例において、前記病原体は、ロタウイルスである。
好ましくは、異種タンパク質又はその断片は、本明細書において記載される場合、ロタウイルスタンパク質ドメイン又はロタウイルスタンパク質である。
特に、本明細書において記載される異種タンパク質又はその断片は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質ドメイン又はその断片である。前記異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含むか、又はそれである場合が特に好ましい。

最も好ましい態様において、本発明は、
－ ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質を含むポリペプチド、特に融合ペプチド、
及び／又は
－ 式ｘ－ｙ－ｚ（式中、
ｘは、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質からなるか、又は前記カプシドタンパク質を含み、
ｙは、リンカー部分であり、
ｚは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片である）
の融合タンパク質
に関する。
「ＶＰ８タンパク質」という用語は、本明細書において記載される場合、特に、ロタウイルスとの関係で頻繁に使用される、「ＶＰ８ドメイン」、「ＶＰ８^*」又は「ＶＰ４のＶＰ８断片」という用語のいずれかと同等であることが理解され、ロタウイルスＶＰ４のＮ末端トリプシン切断産物に関する。

「免疫原性断片」という用語は、特に、それが由来するタンパク質の免疫原性を少なくとも部分的に保持するタンパク質の断片を指すことが理解される。したがって、「ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片」は、具体的には、全長ＶＰ８タンパク質の免疫原性を少なくとも部分的に保持するロタウイルスＶＰ８タンパク質の断片を指すことが理解される。
好ましい態様において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、好ましくは、前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が投与される対象におけるロタウイルスに対する免疫応答を誘導することができる。
別の好ましい態様において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、５０～２００、好ましくは、１４０～１９０アミノ酸残基の長さであるポリペプチドである。
本明細書において言及されるロタウイルスは、好ましくは、ロタウイルスＡ及びロタウイルスＣからなる群から選択される。そのため、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、好ましくは、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片及びロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片からなる群から選択される。

別の好ましい態様によれば、本明細書において言及されるロタウイルスは、ブタロタウイルスである。
特定の好ましい一態様において、本明細書において言及されるロタウイルスは、ロタウイルスＡである。したがって、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において記載される場合、好ましくは、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片である。
「ロタウイルスＡ」及び「ロタウイルスＣ」という用語は、それぞれ、本明細書において言及される場合、ＩＣＴＶ（Matthijnssens et al. Arch Virol 157:1177-1182 (2012)によって要約）によって定義される、それぞれ、ロタウイルスＡ及びロタウイルスＣに関する。
さらに好ましい態様において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインを含む。「ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメイン」は、本明細書において言及される場合、好ましくは、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインであることが理解される。

「ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメイン」という用語は、特に、それぞれ、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４からなるアミノ酸配列に対応するロタウイルスＶＰ８タンパク質の残基６５～２２４を指し、ここで、前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４は、好ましくは、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４である。
したがって、「ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメイン」は、好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質、特に、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４のアミノ酸配列からなる。

好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のＮ末端伸長したレクチン様ドメインであり、ここで、前記Ｎ末端伸長は、１～２０アミノ酸残基、特に、５～１５アミノ酸残基の長さである。最も好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のＮ末端伸長したレクチン様ドメインであり、ここで、前記Ｎ末端伸長は、８アミノ酸残基の長さである。
前記Ｎ末端伸長のアミノ酸残基は、好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸配列中のレクチン様ドメインのＮ末端アミノ酸残基に隣接している個々の長さのアミノ酸配列である。
したがって、特定の態様において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質、特に、ロタウイルスＡタンパク質の、アミノ酸残基６０～２２４、アミノ酸残基５９～２２４、アミノ酸残基５８～２２４、アミノ酸残基５７～２２４、アミノ酸残基５６～２２４、アミノ酸残基５５～２２４、アミノ酸残基５４～２２４、アミノ酸残基５３～２２４、アミノ酸残基５２～２２４、アミノ酸残基５１～２２４、アミノ酸残基５０～２２４、又はアミノ酸残基４９～２２４のアミノ酸配列からなる。

最も好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、ロタウイルスＶＰ８タンパク質、特に、ロタウイルスＡタンパク質のアミノ酸残基５７～２２４のアミノ酸配列からなる。
アミノ酸残基の上記の番号付け（例えば、「６５～２２４」又は「５７～２２４」）は、好ましくは、野生型ロタウイルスＶＰ８タンパク質、特に、野生型ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のアミノ酸配列を参照する。前記野生型ロタウイルスＶＰ８タンパク質は、好ましくは、配列番号５に示されるタンパク質である。
さらなる好ましい態様によれば、本明細書において言及されるロタウイルスは、遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルス、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルス及び遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスからなる群から選択されるロタウイルス、特に、ロタウイルスＡである。したがって、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、好ましくは、遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片及び遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片からなる群から選択され、特に、遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片及び遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片からなる群から選択される。

「遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルス」、「遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルス」、「遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルス」及び「遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、Estes and Kapikian. Rotaviruses. In: Knipe, D.M.; Howley, P.M. Fields Virology, 5th ed.；Wolters Kluwer/Lippincott Williams & Wilkins Health: Philadelphia, PA, USA (2007)；Gorziglia et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 87(18):7155-9 (1990)に記載されている、ロタウイルスの確立されたＶＰ４（Ｐ）遺伝子型分類（例えば、Ｐ［６］、Ｐ［７］、Ｐ［１３］又はＰ［２３］）に関する。

最も好ましくは、本明細書において言及されるロタウイルスは、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスである。そのため、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において言及される場合、最も好ましくは、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、特に、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片である。
本明細書において言及されるロタウイルスＶＰ８タンパク質は、最も好ましくは、配列番号５の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインは、本明細書において言及される場合、好ましくは、配列番号６の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
一例において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、配列番号７の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。
別の好ましい態様において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分、特に、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列からなるか、又はそれである。

本明細書において使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、特に、関連する配列のファミリーにおいて最も頻繁に存在するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987)を参照されたい）。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列中のそれぞれの位置は、ファミリーにおけるその位置に最も高頻度で存在するアミノ酸によって占められる。「コンセンサス配列」という用語は、したがって、推定のアミノ酸配列（又はヌクレオチド配列）を表す。コンセンサス配列は、複数の類似する配列を表す。コンセンサス配列におけるそれぞれの位置は、３つ以上の配列を整列させることによって決定されるその位置に最も高頻度で存在するアミノ酸残基（又はヌクレオチド塩基）に対応する。

好ましくは、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列は、本明細書において言及される場合、
－ ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分をコードする複数のヌクレオチド配列をアミノ酸配列に翻訳するステップ、
－ 好ましくは、ＭＵＳＣＬＥ配列アライメントソフトウェアＵＰＧＭＢ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ及びデフォルトギャップペナルティパラメーターを使用することによって、前記アミノ酸配列を既知のロタウイルスＶＰ８タンパク質と整列させるステップ、
－ 前記整列された配列を系統発生解析に付し、ロタウイルスＶＰ８タンパク質配列に基づく近隣結合系統発生再構築を作製するステップ、特に、前記整列されたアミノ酸配列を、系統発生解析のためのＭＥＧＡ７ソフトウェアにインポートし、ロタウイルスＶＰ８タンパク質配列に基づいて近隣結合系統発生再構築を作製するステップ、
－ 系統発生のブートストラップテストを伴うポアソン補正法を使用して最適樹を計算するステップ（ｎ＝１００）、
－ 全１７０位置にわたって、部位ごとのアミノ酸置換の単位で、進化距離に等しい枝の長さを用いて一定の縮尺で最適樹を描くステップ、
－ ブートストラップクラスター関連が７０％よりも高いノードを有意として見なすステップ、
－ およそ１０％の距離及び７０％よりも高いブートストラップクラスター関連を有するノードをクラスターとして指定するステップ、並びに
－ クラスターを選択し、クラスター内の整列された位置ごとの最大頻度を特定することによって、コンセンサス配列を作製するステップ、並びに
－ 任意に、アミノ酸の同等の割合が整列された位置において観察される場合において、事前に定義された生成物保護プロファイルと併せて、報告された疫学データに基づいて、アミノ酸残基を選択するステップ
を含む、方法によって得られ得る。

例えば、この文脈において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、好ましくは、配列番号８及び配列番号９からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。
さらなる好ましい態様において、本明細書において言及されるロタウイルスは、ロタウイルスＣである。この態様によれば、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、好ましくは、ロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片である。
この態様の文脈において、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、好ましくは、配列番号１０の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。

本発明によれば、異種タンパク質又はその断片は、したがって、好ましくは、
－ ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、特に、本明細書において記載されるロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片のいずれか、若しくは
－ ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分、例えば、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の一部分、好ましくは、コンセンサス配列の文脈において、本明細書において記載されるロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片のいずれかのコンセンサス配列、若しくは
－ ロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、特に、本明細書において記載されるロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片のいずれか
からなるか、又はそれである。

特定の好ましい態様において、異種タンパク質又はその断片は、本明細書において記載される場合、配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドである。
本明細書において言及されるリンカー部分、特に、本発明の文脈において記載されるペプチドリンカーは、好ましくは、１～５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列、特に、３～２０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列である。例えば、リンカー部分は、３、８又は１０アミノ酸残基の長さであるペプチドリンカーであり得る。
目的に応じて、短いリンカーが、融合タンパク質パートナー間のタンパク質分解のリスクを減少させるために所望されることがある。したがって、本発明の文脈において記載されるペプチドリンカーは、好ましくは、それぞれ、１～５アミノ酸残基、より好ましくは、２～４アミノ酸残基、最も好ましくは、３アミノ酸残基の長さを有するか、又はそれからなる。

好ましくは、本明細書において記載されるリンカー部分は、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３からなる群から選択される配列と、少なくとも６６％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
さらなる態様によれば、本発明のポリペプチドは、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０及び配列番号２１からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に、１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるタンパク質である。
好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０及び配列番号２１からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるタンパク質である。

「アミノ酸配列からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」又は「アミノ酸配列からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」という表現は、それぞれ、本明細書において使用される場合、特に、タンパク質又はタンパク質ドメインが発現される細胞によって影響を受けるアミノ酸配列のあらゆる共翻訳の及び／又は翻訳後の１つ若しくは複数の修飾にも関係することが理解される。したがって、「アミノ酸配列からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」又は「アミノ酸配列からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」という表現は、それぞれ、本明細書において使用される場合、タンパク質又はタンパク質ドメインが発現される細胞によってもたらされる１つ又は複数の修飾、特に、タンパク質生合成及び／又はタンパク質プロセシングにおいてもたらされる、好ましくは、グリコシル化、リン酸化及びアセチル化からなる群から選択されるアミノ酸残基の修飾を有するアミノ酸配列も対象とする。

「少なくとも９０％」という用語に関して、本発明の文脈において言及される場合、前記用語は、好ましくは、「少なくとも９１％」、より好ましくは、「少なくとも９２％」、さらにより好ましくは、「少なくとも９３％」、又は特に、「少なくとも９４％」に関することが理解される。
「少なくとも９５％」という用語に関して、本発明の文脈において言及される場合、前記用語は、好ましくは、「少なくとも９６％」、より好ましくは、「少なくとも９７％」、さらにより好ましくは、「少なくとも９８％」、又は特に、「少なくとも９９％」に関することが理解される。

「少なくとも９９％」という用語に関して、本発明の文脈において言及される場合、前記用語は、好ましくは、「少なくとも９９．２％」、より好ましくは、「少なくとも９９．４％」、さらにより好ましくは、「少なくとも９９．６％」、又は特に、「少なくとも９９．８％」に関することが理解される。
「１００％の配列同一性を有する」という用語は、本明細書において使用される場合、「同一である」という用語と同等であることが理解される。

配列同一性パーセントは、当技術分野で認識される意味を有し、２つのポリペプチド又はポリヌクレオチド配列の間の同一性を測定するための多くの方法がある。例えば、Lesk, Ed., Computational Molecular Biology, Oxford University Press, New York, (1988)；Smith, Ed., Biocomputing: Informatics And Genome Projects, Academic Press, New York, (1993)；Griffin & Griffin, Eds., Computer Analysis Of Sequence Data, Part I, Humana Press, New Jersey, (1994)；von Heinje, Sequence Analysis In Molecular Biology, Academic Press, (1987)；及びGribskov & Devereux, Eds., Sequence Analysis Primer, M Stockton Press, New York, (1991)を参照されたい。ポリヌクレオチド又はポリペプチドを整列させるための方法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux et al., Nuc.Acids Res.12:387 (1984)）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Atschul et al., J.Molec.Biol.215:403 (1990)）、及びSmith and Waterman (Adv.App.Math., 2:482-489 (1981)）のローカル相同アルゴリズムを使用するＢｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ用のバージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７１１）を含むコンピュータプログラムにおいて体系化されている。例えば、ＦＡＳＴＡアルゴリズムを利用するコンピュータプログラムＡＬＩＧＮを、ギャップオープンペナルティ－１２及びギャップ伸張ペナルティ－２でアフィンギャップサーチを用いて、使用することができる。本発明の目的のために、ヌクレオチド配列は、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｉｎｃ．によるＭｅｇＡｌｉｇｎソフトウェア バージョン１１．１．０（５９），４１９におけるＣｌｕｓｔａｌ Ｗ法を使用して、このプログラムにおけるデフォルトの複数のアライメントパラメーターセット（ギャップペナルティ＝１５．０、ギャップ長さペナルティ＝６．６６及び遅延不一致配列（％）＝３０％、ＤＮＡ転移ウェイト＝０．５０及びＤＮＡウェイトマトリックス＝ＩＵＢ）を使用して整列され、そして、それぞれ、タンパク質／アミノ酸配列は、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｉｎｃ．によるＭｅｇＡｌｉｇｎソフトウェア、バージョン１１．１．０（５９），４１９のＣｌｕｓｔａｌ Ｗ法を使用して、このプログラムにおけるデフォルトの複数のアライメントパラメーターセット（ギャップペナルティ＝１０．０、ギャップ長さペナルティ＝０．２、及び遅延不一致配列（％）＝３０％によるＧｏｎｎｅｔシリーズタンパク質ウェイトマトリックス）を使用して整列される。

本明細書において使用される場合、「配列番号Ｘの配列との配列同一性」という用語は、それぞれ、「配列番号Ｘの長さにわたる配列番号Ｘの配列との配列同一性」という用語、又は「配列番号Ｘの全長にわたる配列番号Ｘの配列との配列同一性」という用語と同等であることが特に理解される。この文脈において、「Ｘ」は、「配列番号Ｘ」が本明細書において言及される配列番号のいずれかを表すように、１～３３から選択されるあらゆる整数である。
「配列番号［．．．］、．．．及び配列番号［．．．］からなる群」という表現は、本明細書において使用される場合、「配列番号［．．．］の配列、．．．及び配列番号［．．．］の配列からなる群」と互換可能である。この文脈における「［．．．］」は、配列の番号についてのプレースホルダーである。例えば、「配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群」という表現は、「配列番号７の配列、配列番号８の配列、配列番号９の配列及び配列番号１０の配列からなる群」と互換可能である。

最も好ましい態様によれば、本発明のポリペプチドは、複数の同じポリペプチドと集合して、ウイルス様粒子を形成することができる。
「集合する」、又はそれぞれ、「複数の同じポリペプチドと集合する」という表現は、本明細書において言及される場合、特に、「自己集合」と同等であることが理解される。
「複数の同じポリペプチド」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、「同じアミノ酸配列からなる複数のポリペプチド」と互換可能である。
さらなる態様によれば、ウイルス様粒子が、本発明のポリペプチドを含むか、又は複数の本発明のポリペプチドから構成される、ウイルス様粒子が提供される。本明細書の以下で「本発明によるウイルス様粒子」とも称される前記ウイルス様粒子は、好ましくは、単離されたウイルス様粒子である。

本発明の文脈における「ウイルス様粒子」は、特に、ウイルスゲノムを含まない粒子構造を指し、この構造は、いくつかのタンパク質の自己集合によって形成され、ここで、構造を形成するタンパク質の少なくとも一部は、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質のアミノ酸配列を含むタンパク質などのウイルス構造タンパク質（カプシドタンパク質）と同一であるか、又はそれに由来し、構造は、好ましくは、少なくとも６０タンパク質によって形成される。

好ましくは、本発明のポリペプチドによって構成される異種タンパク質又はその断片、例えば、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片は、本明細書において記載される場合、本発明のウイルス様粒子の外面に提示されている。
本発明は、本発明のポリペプチド及び／又は本発明のウイルス様粒子を含む免疫原性組成物をさらに提供し、ここで、前記免疫原性組成物は、本明細書の以下で、「本発明の免疫原性組成物」とも称する。
本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、少なくとも１００ｎＭ、好ましくは、少なくとも２５０ｎＭ、より好ましくは、少なくとも５００ｎＭ、最も好ましくは、少なくとも１μＭの濃度の本発明のポリペプチドを含む。
別の好ましい態様によれば、本発明の免疫原性組成物は、１００ｎＭ～５０μＭ、好ましくは、２５０ｎＭ～２５μＭ、最も好ましくは、１～１０μＭの濃度の本発明のポリペプチドを含有する。
特に、１ｍＬ、又は場合によっては、２ｍＬの本発明の免疫原性組成物が、対象に投与される。したがって、対象に投与される本発明の免疫原性組成物の用量は、好ましくは、１ｍＬ又は２ｍＬの体積を有する。
好ましくは、１用量又は２用量の免疫原性組成物が、対象に投与される。

本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、全身的に又は局所的に投与される。慣習的に使用される投与の好適な経路は、非経口又は経口投与、例えば、筋肉内、皮内、静脈内、腹腔内、皮下、鼻腔内、及び吸入である。しかしながら、化合物の性質及び作用機序に応じて、免疫原性組成物は、同様に、他の経路によって投与されてもよい。免疫原性組成物が筋肉内投与されることが最も好ましい。
本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、薬学的に又は獣医学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む。
本明細書において使用される場合、「薬学的に又は獣医学的に許容される担体」としては、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、安定化剤、希釈剤、保存剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤、吸着遅延剤などが挙げられる。いくつかの好ましい実施形態、特に、凍結乾燥された免疫原性組成物を含む実施形態において、本発明において使用するための安定化剤は、凍結乾燥又はフリーズドライのための安定剤を含む。

いくつかの実施形態において、本発明の免疫原性組成物は、アジュバントを含有する。
「アジュバント」としては、本明細書において使用される場合、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム、サポニン、例えば、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＳ－２１（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）、ＧＰＩ－０１００（Ｇａｌｅｎｉｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、水中油中水型エマルジョンが挙げられ得る。エマルジョンは、特に、軽質流動パラフィン油（欧州薬局方タイプ）；スクアラン又はスクアレンなどのイソプレノイド油；アルケン、特に、イソブテン又はデセンのオリゴマー化から得られる油；直鎖状アルキル基を含有する酸又はアルコールのエステル、より具体的には、植物油、オレイン酸エチル、プロピレングリコールジ（カプリレート／カプレート）、グリセリルトリ（カプリレート／カプレート）、又はプロピレングリコールジオレエート；分枝状脂肪酸又はアルコールのエステル、特に、イソステアリン酸エステルに基づくことができる。油は、乳化剤と組み合わせて使用して、エマルジョンを形成する。乳化剤は、好ましくは、非イオン性界面活性剤、特に、ソルビタン、マンニド（例えば、無水マンニトールオレエート）、グリコール、ポリグリセロール、プロピレングリコール、及びオレイン酸、イソステアリン酸、リシノール酸又はヒドロキシステアリン酸のエステルであって、エトキシル化されていてもよいエステル、並びにポリオキシプロピレン－ポリオキシエチレンコポリマーブロック、特に、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ製品、特に、Ｌ１２１である。Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D.E.S.), JohnWiley and Sons, NY, pp51-94 (1995)及びTodd et al., Vaccine 15:564-570 (1997)を参照されたい。例示的なアジュバントは、「Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach」 edited by M.Powell and M.Newman, Plenum Press, 1995の１４７頁に記載されているＳＰＴエマルジョン、又はこの同じ書籍の１８３頁に記載されているエマルジョンＭＦ５９である。

アジュバントのさらなる例は、アクリル酸又はメタクリル酸のポリマー、並びに無水マレイン酸及びアルケニル誘導体のコポリマーから選択される化合物である。有利なアジュバント化合物は、架橋されている、特に、糖又はポリアルコールのポリアルケニルエーテルで架橋されている、アクリル酸又はメタクリル酸のポリマーである。これらの化合物は、カルボマーという用語によって知られている（Phameuropa Vol.8, No.2, June 1996）。当業者は、少なくとも３つのヒドロキシルの水素原子が少なくとも２つの炭素原子を有する不飽和脂肪族基によって置き換えられた、少なくとも３つのヒドロキシル基、好ましくは、８を超えないヒドロキシル基を有するポリヒドロキシル化化合物で架橋されたそのようなアクリルポリマーを記載する米国特許第２，９０９，４６２号も参照することもできる。好ましい基は、２～４個の炭素原子、例えば、ビニル、アリル及び他のエチレン性不飽和基を含有するものである。不飽和基は、それら自身が、メチルなどの他の置換基を含有していてもよい。ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）という名称で販売されている製品（ＢＦ Ｇｏｏｄｒｉｃｈ、Ｏｈｉｏ、ＵＳＡ）が、特に適切である。それらは、アリルスクロース又はアリルペンタエリスリトールで架橋されている。その中でも、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（カルボポール） ９７４Ｐ、９３４Ｐ及び９７１Ｐが言及され得る。ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）９７１Ｐの使用が最も好ましい。中でも、無水マレイン酸及びアルケニル誘導体のコポリマーは、無水マレイン酸及びエチレンのコポリマーであるコポリマーＥＭＡ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）である。これらのポリマーの水への溶解は、免疫原性組成物、免疫学的組成物又はワクチン組成物それ自身に組み込まれるアジュバント溶液を与えるために、好ましくは、生理学的ｐＨに中和される酸溶液をもたらす。

アジュバントが選択され得るさらなる好適なアジュバントとしては、限定されるものではないが、多くの他のものの中で、ＲＩＢＩアジュバントシステム（Ｒｉｂｉ Ｉｎｃ．）、ブロックコポリマー（ＣｙｔＲｘ、Ａｔｌａｎｔａ Ｇａ）、ＳＡＦ－Ｍ（Ｃｈｉｒｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ ＣＡ）、モノホスホリルリピドＡ、アブリジン脂質－アミンアジュバント、大腸菌に由来する易熱性エンテロトキシン（組換え又はその他）、コレラ毒素、ＩＭＳ１３１４又はムラミルジペプチド、或いは天然に存在するか、若しくは組換えのサイトカイン又はそのアナログ、又は内因性サイトカイン放出の刺激因子が挙げられる。
アジュバントが、用量当たり約１００μｇ～約１０ｍｇの量、好ましくは、用量当たり約１００μｇ～約１０ｍｇの量、より好ましくは、用量当たり約５００μｇ～約５ｍｇの量、さらにより好ましくは、用量当たり約７５０μｇ～約２．５ｍｇの量、最も好ましくは、用量当たり約１ｍｇの量で添加され得ると予想される。或いは、アジュバントは、最終製品の体積の約０．０１～５０％の濃度、好ましくは、約２％～３０％の濃度、より好ましくは、約５％～２５％の濃度、さらにより好ましくは、約７％～２２％の濃度、最も好ましくは、１０％～２０％の濃度であり得る。

「希釈剤」としては、水、生理食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが挙げられ得る。等張剤としては、とりわけ、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール及びラクトースが挙げられ得る。安定剤としては、とりわけ、アルブミン、及びエチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｔｅｔｒａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）のアルカリ塩が挙げられる。

特に好ましい態様によれば、本発明は、免疫原性組成物、特に、本発明の免疫原性組成物も提供し、ここで、免疫原性組成物は、
－ 本発明のポリペプチド、及び
－ 薬学的に若しくは獣医学的に許容される担体又は賦形剤、及び
－ 任意に、アジュバント
を含むか、又はこれらからなる。
本発明の文脈におけるアジュバントは、好ましくは、乳化された水中油型アジュバント及びカルボマーからなる群から選択される。
「免疫原性組成物」という用語は、免疫原性組成物が投与される宿主中で免疫学的応答を誘発する少なくとも１つの抗原を含む組成物を指す。そのような免疫学的応答は、本発明の免疫原性組成物に対する細胞性免疫応答及び／又は抗体媒介免疫応答であり得る。宿主はまた、「対象」と記載される。好ましくは、本明細書において記載又は言及される宿主又は対象のいずれかは、動物である。
「動物」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、哺乳動物、好ましくは、イノシシ属動物、より好ましくは、ブタ、最も好ましくは、子ブタに関する。

通常、「免疫学的応答」としては、限定されるものではないが、１つ又は複数の以下の効果が挙げられる：本発明の免疫原性組成物に含まれる１つ又は複数の抗原に特異的に対する、抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、並びに／又は細胞傷害性Ｔ細胞及び／若しくはガンマ－デルタＴ細胞の産生或いは活性化。好ましくは、宿主は、保護的免疫学的応答又は治療的応答のいずれかを提示する。
「保護的免疫学的応答」は、感染した宿主によって通常提示される１つ若しくは複数の臨床徴候の低減若しくは欠如、より迅速な回復時間及び／若しくは感染期間の低下、又は感染した宿主の組織若しくは体液若しくは排出物におけるより低い病原体力価のいずれかによって実証される。

「病原体」又は「特定の病原体」は、本明細書において言及される場合、特に、異種タンパク質又はその断片が由来する病原体に関する。例えば、病原体は、本明細書において言及される場合、病原性ウイルス、例えば、ロタウイルス、特に、ロタウイルスＡ又はロタウイルスＣである。

宿主が、新たな感染への抵抗性が増強され、及び／又は疾患の臨床重症度が低減されるような防御的免疫学的応答を提示する場合において、免疫原性組成物は、「ワクチン」と記載される。
「抗原」は、本明細書において記載される場合、限定されるものではないが、そのような抗原又はその免疫学的に活性な構成成分を含む目的の免疫学的組成物又はワクチンに対して、宿主において免疫学的応答を誘発する構成成分を指す。特に、「抗原」という用語は、本明細書において使用される場合、宿主に投与されたら、宿主において免疫学的応答を誘発し得るタンパク質又はタンパク質ドメインを指す。

「処置及び／又は予防」という用語は、集団における特定の病原体感染の出現を減少させること、又は特定の病原体感染によって引き起こされるか、若しくはそれに関連する１つ若しくは複数の臨床徴候の重症度の低減を指す。したがって、「処置及び／又は予防」という用語は、特定の病原体に感染するようになる集団における動物の数の低減（＝特定の病原体感染の出現を減少させること）、又は動物がそのような免疫原性組成物を受けていない動物の群と比較して、動物が本明細書において提供される有効量の免疫原性組成物を受けた動物の群における病原体による感染に、通常、関連するか、若しくはそれによって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候の重症度の低減を指す。
「処置及び／又は予防」は、一般に、そのような処置／予防を必要とするか、又はそれから利益を受け得る対象又は対象の集団への、有効量の本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物の投与を含む。「処置」という用語は、集団の対象又は少なくとも一部の動物がそのような病原体に既に感染し、そのような動物がそのような病原体感染によって引き起こされるか、又はそれに関連するいくつかの臨床徴候を既に示している時点での有効量の免疫原性組成物の投与を指す。「予防」という用語は、病原体によるそのような対象のあらゆる感染の前の、又は少なくともそのような動物若しくは動物の群におけるすべての動物がそのような病原体による感染によって引き起こされるか、若しくはそれに関連する１つ若しくは複数の臨床徴候も示さない場合の、対象への投与を指す。

「有効量」という用語は、本明細書において使用される場合、限定されるものではないが、対象において免疫応答を誘発する又は誘発することができる、抗原、特に、本発明のポリペプチドの量を意味する。そのような有効量は、集団における特定の病原体感染の出現を減少させることができ、又は特定の病原体感染の１つ若しくは複数の臨床徴候の重症度を低減することができる。好ましくは、１つ又は複数の臨床徴候は、処置されていないか、又は本発明の前に適用可能であった免疫学的組成物で処置されたが、その後特定の病原体に感染した対象のいずれかと比較して、少なくとも１０％、より好ましくは、少なくとも２０％、さらにより好ましくは、少なくとも３０％、さらにより好ましくは、少なくとも４０％、さらにより好ましくは、少なくとも５０％、さらにより好ましくは、少なくとも６０％、さらにより好ましくは、少なくとも７０％、さらにより好ましくは、少なくとも８０％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％、出現又は重症度を減少させる。

「臨床徴候」という用語は、本明細書において使用される場合、特定の病原体からの対象の感染の徴候を指す。感染の臨床徴候は、選択される病原体に依存する。そのような臨床徴候の例としては、限定されるものではないが、下痢、嘔吐、発熱、腹痛及び脱水が挙げられる。
対象における特定の病原体感染によって引き起こされるか、若しくはそれに関連する１つ若しくは複数の臨床徴候の出現の低減又はその重症度の低減は、対象への１用量又は複数用量の本発明の免疫原性組成物の投与によって達成することができる。

「糞便排出を低減する」という用語は、限定されるものではないが、糞便１ｍＬ当たりのロタウイルスなどの病原性ウイルスのＲＮＡコピー数、又は糞便１デシリットル当たりのプラーク形成コロニー数の低減を意味し、組成物を受けておらず、感染するようになり得る対象と比較して、少なくとも５０％、本発明の組成物を受けている対象の糞便において低減される。より好ましくは、糞便排出レベルは、本発明の組成物を受けている対象において、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９９．９％、より好ましくは、少なくとも９９．９９％、さらにより好ましくは、少なくとも９９．９９９％低減される。
「糞便排出」という用語は、本明細書において使用される場合、医学及びウイルス学におけるその明白な通常の意味に従って使用され、対象の糞便を介した、感染した対象からの環境への対象の細胞からのウイルスの産生及び放出を指す。

本発明のポリペプチドは、好ましくは、組換えタンパク質、特に、組換えバキュロウイルス発現タンパク質である。
「組換えタンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、組換えＤＮＡ技法によって産生されるタンパク質を指し、ここで、一般に、発現タンパク質をコードするＤＮＡは、好適な発現ベクターに挿入され、次に、これを使用して、形質転換するか、又はウイルスベクターの場合において、宿主細胞に感染させて、異種タンパク質を産生させる。したがって、「組換えタンパク質」という用語は、本明細書において使用される場合、特に、組換えＤＮＡ分子から発現されるタンパク質分子を指す。「組換えＤＮＡ分子」は、本明細書において使用される場合、分子生物学的技法によって一緒に結合されたＤＮＡのセグメントから構成されるＤＮＡ分子を指す。組換えタンパク質の産生のための好適な系としては、限定されるものではないが、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス）、原核細胞系（例えば、大腸菌）、真菌（例えば、ミセリオフソラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、ウスティラゴ・マイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ））、酵母（例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ））、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣、ＨＥＫ２９３）、植物（例えば、ベニバナ）、藻類、鳥類細胞、両生類細胞、魚類細胞、及び無細胞系（例えば、ウサギ網状赤血球溶血液）が挙げられる。

別の態様によれば、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを提供し、ここで、前記ポリヌクレオチドは、本明細書の以下で、「本発明によるポリヌクレオチド」とも称し、好ましくは、単離されたポリヌクレオチドである。
好ましくは、本発明によるポリヌクレオチドは、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、又は特に、１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

本明細書に記載されるポリヌクレオチドの産生は、当技術分野における技能内であり、他のものの中でも、Sam brook et al., 2001, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Amusable, et al., 2003, Current Protocols In Molecular Biology, Greene Publishing Associates & Wiley Interscience, NY；Innis et al.(eds), 1995, PCR Strategies, Academic Press, Inc., San Diego；及びErlich (ed), 1994, PCR Technology, Oxford University Press, New Yorkに記載される組換え技法に従って行うことができ、これらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる。
またさらなる態様において、本発明は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するベクターを提供する。

「ベクター」及び「本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するベクター」は、本発明の目的のために、好適な発現ベクター、好ましくは、バキュロウイルス発現ベクターを指し、次に、これを使用して、ＤＮＡによってコードされるタンパク質又はポリペプチドを産生するように、宿主細胞にトランスフェクトするか、又はバキュロウイルス発現ベクターの場合において、宿主細胞に感染させる。ベクター、並びに発現のためのベクター（又は組換え体）を作製及び／又は使用するための方法は、米国特許４，６０３，１１２号、同第４，７６９，３３０号、同第５，１７４，９９３号、同第５，５０５，９４１号、同第５，３３８，６８３号、同第５，４９４，８０７号、同第４，７２２，８４８号、同第５，９４２，２３５号、同第５，３６４，７７３号、同第５，７６２，９３８号、同第５，７７０，２１２号、同第５，９４２，２３５号、同第３８２，４２５号、ＰＣＴ公開の国際公開第９４／１６７１６号、国際公開第９６／３９４９１号、国際公開第９５／３００１８号；Paoletti, 「Applications of pox virus vectors to vaccination: An update, 「PNAS USA 93: 11349-11353, October 1996；Moss, 「Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression, vaccination, and safety,」 PNAS USA 93: 11341-11348, October 1996；Ｓｍｉｔｈら、米国特許第４，７４５，０５１号（組換えバキュロウイルス）；Richardson, C.D.(Editor), Methods in Molecular Biology 39, 「Baculovirus Expression Protocols」(1995 Humana Press Inc.)；Smith et al., 「Production of Human Beta Interferon in Insect Cells Infected with a Baculovirus Expression Vector」, Molecular and Cellular Biology, December, 1983, Vol.3, No.12, p.2156-2165；Pennock et al., 「Strong and Regulated Expression of Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus vector, 「Molecular and Cellular Biology March 1984, Vol.4, No.3, p.406；欧州特許出願第０３７０５７３号；１９８６年１０月１６日に出願された米国出願第９２０，１９７号；欧州特許出願公開第２６５７８５号；米国特許第４，７６９，３３１号（組換えヘルペスウイルス）；Roizman, 「The function of herpes simplex virus genes: A primer for genetic engineering of novel vectors,」PNAS USA 93:11307-11312, October 1996；Andreansky et al., 「The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors,」 PNAS USA 93: 11313-11318, October 1996；Robertson et al., 「Epstein-Barr virus vectors for gene delivery to B lymphocytes」, PNAS USA 93: 11334-11340, October 1996；Frolov et al., 「Alphavirus-based expression vectors: Strategies and applications,」 PNAS USA 93: 11371-11377, October 1996；Kitson et al., J.Virol.65, 3068-3075, 1991；米国特許第５，５９１，４３９号、同第５，５５２，１４３号；国際公開第９８／００１６６号；両方とも１９９６年７月３日に出願され、認可された米国出願第０８／６７５，５５６号及び同第０８／６７５，５６６号（組換えアデノウイルス）；Grunhaus et al., 1992, 「Adenovirus as cloning vectors,」 Seminars in Virology (Vol.3) p.237-52, 1993；Ballay et al.EMBO Journal, vol.4, p.3861-65, Graham, Tibtech 8, 85-87, April, 1990；Prevec et al., J.Gen Virol.70, 42434；ＰＣＴ国際公開第９１／１１５２５号；Felgner et al.(1994), J.Biol.Chem.269, 2550-2561, Science, 259: 1745-49, 1993；及びMcClements et al., 「Immunization with DNA vaccines encoding glycoprotein D or glycoprotein B, alone or in combination, induces protective immunity in animal models of herpes simplex virus-2 disease」, PNAS USA 93: 11414-11420, October 1996；並びに米国特許第５，５９１，６３９号、同第５，５８９，４６６号及び同第５，５８０，８５９号、並びに国際公開第９０／１１０９２号、国際公開第９３／１９１８３号、国際公開第９４／２１７９７号、国際公開第９５／１１３０７号、国際公開第９５／２０６６０号；とりわけ、ＤＮＡ発現ベクターに関する、Tang et al., Nature及びFurth et al., Analytical Biochemistryにおいて開示されている方法によって、又はそれと類似する方法で、作製する又は行うことができる。また、国際公開第９８／３３５１０号；Ju et al., Diabetologia, 41: 736-739, 1998（レンチウイルス発現系）；Ｓａｎｆｏｒｄら、米国特許第４，９４５，０５０号；Fischbach et al.（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）；国際公開第９０／０１５４３号；Robinson et al., Seminars in Immunology vol.9, pp.271-283 (1997)（ＤＮＡベクター系）；Szokka et al.、米国特許第４，３９４，４４８号（method of inserting DNA into living cells）；McCormick et al.、米国特許第５，６７７，１７８号（use of cytopathic viruses）；及び米国特許第５，９２８，９１３号（vectors for gene delivery）、並びに本明細書で引用される他の文献も参照されたい。

好ましいウイルスベクターとしては、特に、産生細胞が昆虫細胞であるならば、ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）などのバキュロウイルスが挙げられる。バキュロウイルス発現系が好ましいが、上記に記載したものを含む他の発現系が、本発明の目的のために、即ち、組換えタンパク質の発現のために働くことが当業者に理解される。

したがって、本発明は、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含有するバキュロウイルスも提供する。本明細書の以下で「本発明によるバキュロウイルス」とも称される前記バキュロウイルスは、好ましくは、単離されたバキュロウイルスである。
さらにまた、本発明は、したがって、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むプラスミド、好ましくは、発現ベクターも提供する。本明細書の以下で「本発明によるプラスミド」とも称される前記プラスミドは、特に、単離されたプラスミドである。
本発明は、本発明のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むバキュロウイルス、又は本発明のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むプラスミド、好ましくは、発現ベクターに感染した、及び／又はそれを含有する細胞も提供する。本明細書の以下で「本発明による細胞」とも称される前記細胞は、好ましくは、単離された細胞である。

「単離された」という用語は、単離された細胞との関係において使用される場合、人間の手によって、その天然環境から離れて存在する、したがって、天然の産物ではない、細胞である。
また別の態様において、本発明は、医薬、好ましくは、ワクチンの調製のための、本発明のポリペプチド、本発明によるバキュロウイルス、本発明の免疫原性組成物、本発明によるポリヌクレオチド、本発明によるウイルス様粒子、本発明によるプラスミド、及び／又は本発明による細胞の使用にも関する。

この文脈において、本発明は、本発明のポリペプチド及び／又は本発明のウイルス様粒子を生成する方法であって、細胞、好ましくは、昆虫細胞を、本発明によるバキュロウイルスに感染させるステップを含む、前記方法も提供する。
さらにまた、本発明は、本発明のポリペプチド及び／又は本発明のウイルス様粒子を生成する方法であって、細胞を、本発明によるプラスミドでトランスフェクトするステップを含む、前記方法も提供する。
本発明のポリペプチドは、好ましくは、ウイルス様粒子の安定な自己集合のために十分な高い量で発現され、次いで、これは、ワクチン接種のために使用され得る。
「ワクチン接種」又は「ワクチン接種すること」という用語は、本明細書において使用される場合、限定されるものではないが、抗原、例えば、免疫原性組成物に含まれる抗原の対象への投与を含むプロセスを意味し、ここで、前記抗原、例えば、本発明のポリペプチドは対象に投与されると、前記対象において保護的免疫学的応答を誘発するか、又は保護的免疫学的応答を誘発することができる。
本発明は、医薬として、好ましくは、ワクチンとして使用するための、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物も提供する。

特に、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、病原体による感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候若しくは疾患を低減又は防止する方法であって、病原体が、好ましくは、異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体である、前記方法において使用するために提供される。病原体がウイルスである場合、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、特に、ウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候若しくは疾患を低減又は防止する方法であって、ウイルスが、好ましくは、異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種のウイルスである、前記方法において使用するために提供される。したがって、特定の一例において、本明細書において言及される異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＡのゲノムによってコードされる場合、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、ロタウイルスＡによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率、糞便排出若しくは疾患を低減又は防止する方法において使用するためのものである。

より具体的には、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、対象におけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法において使用するため、或いは対象におけるロタウイルスによる感染を処置又は防止する方法において使用するために提供される。
ロタウイルス感染は、本明細書において言及される場合、特に、ロタウイルスＡ又はロタウイルスＣによる感染を指す。
さらにまた、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、対象におけるロタウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法において使用するために提供される。

別の好ましい態様によれば、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、
対象における、好ましくは同時に、
異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体に対する免疫応答を誘導するための方法、
及び
サーコウイルス科ウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法であって、前記サーコウイルス科ウイルスが、好ましくは、前記サーコウイルス科カプシドタンパク質をコードする種のウイルスである、方法
において使用するために提供される。

特に、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、好ましくは同時に、対象におけるロタウイルス及びＰＣＶ２に対する免疫応答を誘導するための方法において使用するために提供される。
対象は、本明細書において言及される場合、好ましくは、哺乳動物、例えば、イノシシ属動物若しくはウシ亜科動物、又は鳥類、例えば、ニワトリである。特に、対象は、ブタであり、ここで、ブタは、好ましくは、子ブタ又は雌ブタ、例えば、妊娠雌ブタである。最も好ましくは、対象におけるロタウイルスに対する免疫応答を誘導するという文脈において、前記対象は、妊娠雌ブタである。対象におけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する、或いは対象におけるロタウイルスによる感染を処置又は防止するという文脈において、前記対象は、最も好ましくは、子ブタである。

好ましい一態様によれば、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、子ブタにおけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法であって、子ブタが、免疫原性組成物が投与された雌ブタによって授乳される、前記方法において使用するためのものである。免疫原性組成物が投与された前記雌ブタは、好ましくは、免疫原性組成物が、前記雌ブタが妊娠している、特に、前記子ブタを妊娠している間に投与された雌ブタである。
さらにまた、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、
－ 異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体による感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、
及び
－ サーコウイルス科ウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候であって、サーコウイルス科ウイルスが、好ましくは、前記サーコウイルス科カプシドタンパク質をコードする種のものである、臨床徴候
を低減又は防止する方法において使用するためのものである。

病原体がウイルスである場合、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、特に、好ましくは同時に、
－ 異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種のウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、
及び
－ サーコウイルス科ウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候であって、サーコウイルス科ウイルスが、好ましくは、前記サーコウイルス科カプシドタンパク質をコードする種のものである、臨床徴候
を低減又は防止する方法において使用するために提供される。
特に、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、
－ ロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出、
及び
－ ＰＣＶ２によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは鼻排出
を低減又は防止するための方法において使用するために提供される。

したがって、特定の一例において、本明細書において言及されるサーコウイルス科カプシドタンパク質が、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質であり、本明細書において言及される異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＡのゲノムによってコードされる場合、
本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、
ロタウイルスＡによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、糞便排出若しくは疾患を低減又は防止する方法、
及び、ＰＣＶ２による感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、鼻排出若しくは疾患を低減又は防止する方法
において使用するための免疫原性組成物である。

さらなる態様によれば、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、好ましくは、ブタにおける、特に、好ましくは妊娠雌ブタにおける、ロタウイルス及びＰＣＶ２に対する免疫応答を誘導するための方法において使用するための免疫原組成物である。
さらにまた、本発明は、ロタウイルス感染の処置又は防止、ロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出の低減、防止又は処置、或いはロタウイルス感染によって引き起こされる疾患の防止又は処置のための方法であって、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む、前記方法に関する。
また、好ましくは、妊娠雌ブタにおける、ロタウイルスに特異的な抗体の産生を誘導するための方法であって、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物を前記雌ブタに投与するステップを含む、前記方法が提供される。

さらにまた、本発明は、子ブタにおけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法であって、前記方法が、
－ 本発明のポリペプチド又は本発明による免疫原性組成物を雌ブタに投与するステップ、及び
－ 前記子ブタが、前記雌ブタによって授乳されるステップ
を含み、前記雌ブタが、好ましくは、特に前記子ブタを妊娠している雌ブタである、前記方法を提供する。
好ましくは、前記２つの方法は、
－ 本発明のポリペプチド又は本発明による免疫原性組成物を、子ブタを妊娠している雌ブタに投与するステップ、
－ 前記雌ブタに、前記子ブタを出産させるステップ、及び
－ 前記子ブタが、前記雌ブタによって授乳されるステップ
を含む。
また、子ブタにおけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減する方法であって、子ブタが、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物が投与された雌ブタによって授乳される、前記方法が提供される。

１つ又は複数の臨床徴候は、本明細書において言及される場合、好ましくは、
－ 下痢、
－ 病原体コロニー形成、特に、異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体のコロニー形成であって、前記病原体コロニー形成が、好ましくは、ロタウイルスコロニー形成である、コロニー形成、
－ 病変、特に、肉眼的病変、及び
－ １日当たりの平均体重増加の減少
からなる群から選択される。
一例によれば、本明細書において言及される１つ又は複数の臨床徴候は、腸、特に、小腸のロタウイルスコロニー形成である。別の例によれば、本明細書において言及される１つ又は複数の臨床徴候は、腸病変、特に、肉眼的腸病変である。

別の特定の好ましい態様によれば、本発明のポリペプチド又は本発明の免疫原性組成物は、上記に記載される方法であって、
－ 前記ロタウイルス感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
－ 前記ロタウイルスによる感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
－ 前記ロタウイルスに対する免疫応答が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに対する免疫応答である、又は
－ 前記ロタウイルスに特異的な抗体が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに特異的な抗体であり、
好ましくは、それぞれ、前記本発明のポリペプチドが、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含む本明細書に記載される本発明のポリペプチドのいずれかであるか、或いは前記本発明の免疫原性組成物が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含む本明細書に記載される本発明のポリペプチドのいずれかを含むか、或いは前記方法において投与される前記ポリペプチド又は免疫原性組成物が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含む本明細書に記載される本発明のポリペプチドのいずれかであるか、又は前記ポリペプチドを含み、
より好ましくは、
－ 前記断片が、配列番号７の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、及び／又は
－ 前記ポリペプチドが、配列番号１４からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に、１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるタンパク質である、
方法のいずれかにおいて使用するためのものである。

以下の実施例は、本開示を説明することを意図するのみである。それらは、決して特許請求の範囲を限定するものではない。

（実施例１）
融合タンパク質の設計、生成及び試験：
構築物設計：
模範的に、ロタウイルスＡ又はＣのＶＰ８タンパク質断片のＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質のＣ末端への融合物を試験した。ＰＣＶ２－ＶＰ８融合物において使用されるＰＣＶ２ ＯＲＦ２ ＤＮＡ配列は、配列番号１のアミノ酸配列をコードするＰＣＶ２ａ配列に対応する。

ロタウイルスＡ ＶＰ４配列は、イノシシ属動物の糞便試料から元は得られたものであり、これは、ＧｅｎＢａｎｋ配列ＪＸ９７１５６７．１に最も近く一致し、Ｐ［７］遺伝子型として分類される。ＶＰ４アミノ酸５７～２２４（配列番号７）を使用したが、これは、ＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインに対応するがＮ末端が８アミノ酸残基伸長している。リンカー部分は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１１）である。ＰＣＶ２ ＯＲＦ２（ネイティブ配列）をコードするＩＤＴ Ｇｂｌｏｃｋ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、及びＡＶＰ８（昆虫細胞に対してコドン最適化された）を、受け取り（配列番号２２）、本明細書においてＰＣＶ２－ＡＶＰ８と名付けられた。ＰＣＶ２－ＡＶＰ８によってコードされるタンパク質（配列番号１４）はまた、本明細書において「ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質」とも称される。

ＰＣＶ２－ＣＶＰ８配列は、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８について使用された同じＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質及びリンカー配列を、配列番号１０をコードするＣＶＰ８融合タンパク質パートナー配列とともに使用している。二次構造を含む配列アライメント（ＰＲＯＭＡＬＳ３Ｄ）を、融合タンパク質において使用されているロタウイルスＣＶＰ８ ＶＰ４アミノ酸５７～２３７による設計支援として使用した。ＰＣＶ２ ＯＲＦ２（ネイティブ配列）をコードするＩＤＴ Ｇｂｌｏｃｋ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、及びＣＶＰ８（昆虫細胞に対してコドン最適化された）を受け取り（配列番号２７）、本明細書の以下でＰＣＶ２－ＣＶＰ８と称する。ＰＣＶ２－ＣＶＰ８によってコードされるタンパク質（配列番号１９）はまた、本明細書において「ＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質」とも称される。

クローニング、発現、精製及び電子顕微鏡法：
ＰＣＶ２－ＡＶＰ８及びＰＣＶ２－ＣＶＰ８の両方をＴＯＰＯクローニングし、その後、ＢａｍＨＩ及びＮｏｔＩ制限部位を使用して、バキュロウイルス移入プラスミドｐＶＬ１３９３に挿入し、次いで、ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄでＳｆ９細胞に同時トランスフェクトして組換えバキュロウイルスを作製した。ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質及びＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質の生成を、以下の通り行った。３Ｌのスピナーフラスコ中の１ＬのＳｆ＋細胞に、５ＤＰＩで回収された使用済み培地を用いて０．２ＭＯＩで感染させ、１５，０００ｇで２０分遠心分離し、０．２μｍ濾過した。清澄化された培地を、１２の１×３．５インチのＵｌｔｒａＣｌｅａｒ遠心分離管（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、カタログ番号３４４０５８）に管当たり３６ｍＬで入れ、１００，０００ｇ及び４℃で２時間遠心分離した。上清を取り出し、それに続いて、３００μＬのＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１００１０－０２３）をペレット化材料に添加し、次いで、４℃で１時間インキュベートした。ペレットを、再懸濁させ、５ｍＬの最終体積のために混ぜ合わせた（４３２ｍＬから出発、８６．４倍濃縮）。１０～６０％のスクロースの段階的勾配（１０％段階）を設定し、５ｍＬの濃縮物を適用し、１００，０００ｇ及び４℃で２時間遠心分離し、強いバンドが、下から１／３に観察された。２ｍＬの画分を、上部からピペッティングで取り出し、画分を、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて一緒にした。ピーク画分を一緒にし、３～１２ｍＬのＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６６８１０）に入れ、１回の緩衝液交換を伴って、３．５ＬのＴＢＳに対して透析した。濃度を、ＢＳＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２３２２７）によって決定し、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質について、２２５．６μｇ／ｍＬ、約２０ｍＬの体積、約４．５ｍｇの収量、及びＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質について、９０μｇ／ｍＬ、約２７ｍＬの体積、約２．４ｍｇの収量であった。

ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質及びＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質の試料を、陰性染色電子顕微鏡によって評価した。ＰＣＶ２ ＯＲＦ２ ＶＬＰは、図１において示されるように、およそ２２ｎｍの直径を有する比較的滑らかな正２０面体粒子である。ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質及びＰＣＶ２－ＣＶＰ８タンパク質の電子顕微鏡（ＥＭ）画像により、ＰＣＶ２ ＶＬＰの直径と類似の直径を有するが、表面上の小さな小塊を特色とするＶＬＰが明らかになった（図２において、ＰＣＶ２－ＣＶＰ８について例示的に示される）。これらの小塊は、使用されたロタウイルスＡ及びＣのＶＰ８タンパク質断片とサイズが一致しているように見える。

したがって、電子顕微鏡は、
（ｉ）ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片に連結されたＢＡＣＶ２カプシドタンパク質を含む配列番号１７の融合タンパク質、及び
（ｉｉ）ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片に連結されたＢＦＤＶカプシドタンパク質を含む配列番号１８の融合タンパク質
のＶＬＰ形成を可視化することも可能であり、ここで、ＥＭ画像を得るために、バキュロウイルス上清を回収し、１００，０００ｇでの超遠心分離によってペレット化し、ペレットをＰＢＳに再懸濁させて、約５０～６０倍の濃縮物を得て、これを、次いで、１０～６０％のスクロース勾配により、１００，０００ｇで２時間実行し、試料を、勾配の上部からピペッティングで取り出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて流し、ピークであると判定された画分を一緒にし、ＴＢＳに対して透析し、次いで、ＥＭ画像を取得した。

血清学研究：
スクロース勾配精製されたＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質及びＰＣＶ２－ＣＰＶ８タンパク質を、８７．５％の抗原及び１２．５％のアジュバントを含むＥｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄで製剤化した。およそ７週齢のブタは、２１日後のブーストで、頸部側面においてＩＭによって２ｍＬ用量を受けた。血清試料を、７週間の間、毎週収集した。ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質でワクチン接種されたブタからの血清を、下記に記載されるようにして（「ＥＬＩＳＡのためのプロトコール」）、ＥＬＩＳＡによって（図３）、下記に記載されるようにして（「ウイルス中和アッセイのためのプロトコール」）、ウイルス中和アッセイ（図４）によって、評価した。無関係のワクチン対照と比較して、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質でワクチン接種されたブタからのＩｇＧ ＥＬＩＳＡの結果は、７日目のピークでＳＰ比の増加を示し、２１日目のブースト後に再び上昇した。ウイルス中和力価は、同様に、７日目及び１４日目の増加、それに続いて、２１日目のブースト後の２８日目に２回目のピークを示した。

ＥＬＩＳＡのためのプロトコール
ＩｇＡ ＥＬＩＳＡのために、培地タンパク質が結合している９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、１×ＰＢＳで１：１６に希釈された全ロタウイルス抗原でコーティングした。プレートを、４℃の温度で終夜インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、１×ＰＢＳＴを使用して洗浄し、次いで、カゼインブロッキング溶液で、３７℃で１時間ブロッキングした。洗浄後、ブロッキング緩衝液中で１：４０の最終希釈に希釈された１００μＬの一次抗体を、プレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ウェルを、１００μｌの１：３２００希釈の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗イノシシ属動物ＩｇＡでコーティングし、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを、室温で１５分間、３，５，３’，５’－テトラメチルベンジジンで展開し、反応を、４５０ｎｍでの光学密度（ＣＤ）測定の前に、１ＮのＨＣｌで停止した。陽性対照及び陰性対照を含む試料を、二つ組でウェルにおいて実行し、結果を、（試料－陰性対照）と（陽性対照－陰性対照）の比（Ｓ－Ｎ）／（Ｐ－Ｎ）の平均として報告する。

ＩｇＧ ＥＬＩＳＡのために、培地タンパク質が結合している９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、１×ＰＢＳで１：８に希釈された全ロタウイルス抗原でコーティングした。プレートを、４℃の温度で終夜インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、１×ＰＢＳＴを使用して洗浄し、次いで、ブロッティンググレードのブロッキング溶液で、３７℃で１時間ブロッキングした。洗浄後、ブロッキング緩衝液中で１：６２５の最終希釈に希釈された１００μＬの一次抗体をプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ウェルを、１００μｌの１：８０００希釈の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヤギ抗イノシシ属動物ＩｇＧでコーティングし、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを室温で１０分間、３，５，３’，５’－テトラメチルベンジジンで現像し、反応を１ＮのＨＣｌで停止して、４５０ｎｍでの光学密度（ＣＤ）測定した。陽性対照及び陰性対照を含む試料を、二つ組でウェルにおいて実行し、結果を、（試料－陰性対照）と（陽性対照－陰性対照）の比（Ｓ－Ｎ）／（Ｐ－Ｎ）の平均として報告する。

ウイルス中和アッセイのためのプロトコール
すべての血清及び乳試料を、５６℃で３０分間、熱失活させた。試料を、ロタウイルス成長培地（ＭＥＭ＋２．５％のＨＥＰＥＳ＋０．３％のトリプトースホスフェートブロス＋０．０２％の酵母＋１０μｇ／ｍＬのトリプシン）中、１：４０から１：２，５６０まで連続希釈した。ロタウイルスＡ分離株（力価７．０ｌｏｇ ＴＣＩＤ₅₀／ｍＬ）を、ロタウイルス成長培地に１：２５，０００希釈した。合計で２００μｌの希釈された血清を、２００μｌの希釈されたウイルスに添加し、混合物を、３７℃±５％のＣＯ₂で１時間、インキュベートした。成長培地を、ＭＡ１０４細胞が播種された３～４日の９６ウェルプレートから無菌で除去した。インキュベーション後、２００μｌのウイルス－血清混合物を、細胞培養プレートに移した。細胞を、３７℃±５％のＣＯ₂で７２時間、インキュベートした。ストック及び希釈されたウイルスを、使用の日に滴定して、アッセイにおいて使用される希釈物を確認した。インキュベーション後、上清を廃棄し、プレートを２００μＬ／ウェルの１×ＰＢＳで１回洗浄した。固定後、１００μＬ／ウェルの５０％／５０％のアセトン／メタノールを添加した。プレートを、室温で１５分間インキュベートし、風乾し、次いで、１００μＬ／ウェルの１×ＰＢＳで再水和した。一次抗体（ウサギ抗ロタウイルスＡポリクローナル血清、内部で作製）を、１×ＰＢＳ中、１：１０００希釈した。１００μＬ／ウェルの希釈された一次抗体を添加し、プレートを、３７℃±５％のＣＯ₂で１時間、インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、１００μＬ／ウェルの１×ＰＢＳで２回洗浄した。二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＦＩＴＣ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ カタログ番号１１１－０９５－００３）を、１×ＰＢＳ中、１：１００希釈した。１００μＬ／ウェルの希釈された二次抗体を添加し、プレートを、３７℃±５％のＣＯ₂で１時間、インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、１００μＬ／ウェルの１×ＰＢＳで２回洗浄した。プレートを、紫外線顕微鏡を使用して、蛍光の存在について読み取った。アッセイは、希釈されたウイルスの力価（Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法を使用して作製）が２．８±０．５ｌｏｇ ＴＣＩＤ₅₀／ｍＬであることが見出された場合に、有効と見なした。加えて、既知の陽性試料及び陰性試料を、対照としてそれぞれのアッセイに含めた。血清力価を、染色が観察されなかったものを最高希釈として報告した。

（実施例２）
負荷研究：
この研究の主要な目的は、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質（配列番号１４）を含む本明細書において「ＰＣＶ２：ＡＶＰ８」とも称されるプロトタイプワクチン及び本明細書において「プラセボ」と称される無関係の対照ワクチンの従来の雌ブタへの投与が、病原性のあるロタウイルスＡ負荷に対してブタに受動的保護を付与したかを評価することであった。さらに、比較のために、本明細書において「市販製品」又は「市販ワクチン」とも称される市販のＭＬＶロタウイルスワクチン（ＰｒｏＳｙｓｔｅｍ（登録商標）Ｒｏｔａ、Ｍｅｒｃｋ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）を、研究において使用した。プロトタイプワクチンのＰＣＶ２：ＡＶＰ８を、下記のセクション「ワクチン生成：ＰＣＶ２：ＡＶＰ８」において記載されるように、感染のために使用される異なる体積及びより長いインキュベーション期間を用いたが、実施例１において上記に記載される生成と同様に生成した。市販製品を、ワクチンＰｒｏＳｙｓｔｅｍ（登録商標）ＴＧＥ／Ｒｏｔａについて製造業者によって提供されたラベル説明（投薬量及び指導、並びにイノシシ属動物の経口ワクチン接種のための推奨方法）に従って使用した。

合計で１６頭の雌ブタを研究に含めた。雌ブタを、下記の表１において記載されるように、３つの処置群及び１つの厳密な対照群に無作為化した。Ｔ０１及びＴ０２の雌ブタは、３つの部屋の間で混ぜ合わせた。Ｔ０６及びＴ０７の雌ブタは、２つの別々の部屋に収容した。すべての雌ブタに、表１において列挙される適切な経路によって適切な材料でワクチン接種した。Ｔ０７の雌ブタは、ワクチン未接種のままであった（厳密な対照）。血清を、ワクチン接種期間全体を通して、定期的に雌ブタから収集し、抗体陽転の証拠についてアッセイした。糞便試料を、分娩前に収集し、ＲＴ－ｑＰＣＲによってスクリーニングして、母獣が分娩前に活発にロタウイルスを排出しなかったことを確認した。全体的な健康観察を、それぞれの雌ブタにおいて、毎日記録した。分娩は、雌ブタが妊娠１１４日目に達する時まで、自然に起こさせた。この時以後、分娩を誘発した。子ブタを、分娩の時に、試験に登録した。出生時に健康であった子ブタのみをタグ付けし、施設の標準的な操作手順に従って処理し、試験に含めた。ブタが、０～５日齢になったら、それらを出血させ、糞便スワブを収集し、ブタを負荷した（Ｔ０７を除く）。負荷の時に、ブタに、胃内に５ｍＬ用量の重炭酸ナトリウム、次いで、胃内に５ｍＬ用量の負荷材料を投与した。負荷期間全体を通して、すべての動物を、腸疾患（下痢、及び挙動の変化）の存在について、毎日モニターした。糞便試料を、負荷期間全体を通して、定期的に収集した。負荷２日後（ＤＰＣ ２）、それぞれの同腹仔からおよそ３分の１のブタを、安楽死させた。安楽死の後、剖検を行い、ブタを肉眼的病変について評価した。腸切片を、顕微鏡評価及び免疫組織学的評価のために収集した。腸スワブを、ＲＴ－ｑＰＣＲ評価のために収集した。ＤＰＣ ２１に、すべての残ったブタを、体重測定し、出血させ、糞便スワブを収集した。試料収集後、ブタを安楽死させた。ブタを肉眼的病変について評価し、腸スワブを収集した。

研究全体を通して、Ｔ０７（厳密な対照）からの雌ブタの血清ＶＮ力価（図５に示す；ウイルス中和は実施例１（「ウイルス中和アッセイのためのプロトコール」）において上記に記載されるようにして評価した）は、一定のままであったか、又は減少して、曝露の欠如及び有効な研究を示した。ワクチン接種段階の間、４群の血清の最高中央値ＶＮ力価が、ＰＣＶ２：ＡＶＰ８（Ｔ０１）プロトタイプワクチンでワクチン接種された雌ブタにおいて観察された。この群（Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８））において、分娩６週間前の１用量投与が、４／５の動物において力価の４倍以上の増加をもたらした。プラセボ群（Ｔ０２）の雌ブタは、ワクチン接種段階の間に、血清ＶＮ力価の有意な増加（＜２倍）を有さなかった。Ｔ０６（市販ワクチン）の雌ブタは、Ｄ３５まで、血清ＶＮ力価の有意な増加（＜２倍）を有さなかった。ブタの負荷の時の前に、Ｔ０６（市販ワクチン）の両雌ブタは、力価の４倍の増加を有していた。負荷材料への側面曝露後、Ｔ０２（プラセボ）及びＴ０６（市販ワクチン）の雌ブタにおけるＶＮ血清力価が増加した。逆に、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）において、血清ＶＮ力価は、３／５の動物において増加し、１／５の動物において同じままであり、負荷材料への側面曝露後、残りの動物において減少した。

初乳及び乳ＶＮ力価（データは示さない）に関して、Ｔ０１群（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）において、ＶＮ力価は、分娩時に最も高く、負荷前の試料において減少し、負荷後の試料においてさらに減少した。プラセボ群（Ｔ０２）において、ＶＮ力価は、分娩時及び負荷前に低かったが、負荷材料への側面曝露後に増加した。群Ｔ０６（市販ワクチン）において、ＶＮ力価は、分娩時に最も高く、負荷前の試料において減少し、次いで、負荷後の試料において増加した。負荷前のブタ血清におけるＶＮ力価は、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）のブタの大部分において高く（＞１２８０）、雌ブタからブタへの免疫の受動的移動を示した。

負荷段階全体を通して、４群における最高の死亡数が、死亡したブタの８／５７（１４．０％）で、Ｔ０２（プラセボ）において観察された。逆に、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）において、２／４５（４．４％）のみのブタが死亡し、Ｔ０６（市販ワクチン）において１／２２（４．５％）のブタが死亡し、及びＴ０７（厳密な対照）において１／２７（３．７％）のブタが死亡した。下痢の臨床徴候は、研究全体を通して、Ｔ０７（厳密な対照）のブタにおいて観察されなかった。Ｔ０２（プラセボ）のブタにおける下痢の臨床徴候は、負荷後１日目（ＤＰＣ１）又は２日目に開始し、ＤＰＣ１０までに大部分の動物において解消された。全体として、下痢の臨床徴候は、研究の間に少なくとも１回、Ｔ０２（プラセボ）の動物の４４／５７（７７．２％）において観察された。これらの４４頭の動物のうち、下痢は、２９頭（６５．９％）の動物において、重度と見なされた。対照的に、下痢の臨床徴候は、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）のブタにおいて低減された。群ごとの臨床的下痢の結果の概要について、下記の表２を参照されたい。

負荷の前に、ＲＴ－ｑＰＣＲによるロタウイルスＡ ＲＮＡの検出はなく、有効な研究を示した。加えて、研究全体を通して、Ｔ０７（厳密な対照）からの雌ブタ又はブタにおいて、ＲＴ－ｑＰＣＲによるロタウイルスＡ ＲＮＡの検出はなかった。負荷後のブタにおいて、排出は、Ｔ０２（プラセボ）において最も蔓延していた。大部分のブタにおいて、排出は、ＤＰＣ１～３に開始し、ＤＰＣ１４まで続いた。最も興味深かったのは、Ｔ０２（プラセボ）及びＴ０６（市販ワクチン）と比較して、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）において観察された排出の低減であった。排出のパーセンテージ及び検出されたＲＮＡの量の中央値は両方とも低減された（研究日による糞便における群の中央値ｌｏｇロタウイルスＡ ＲＮＡゲノムコピー（ｇｃ）／ｍＬについて、図６を参照されたい、試験は、下記に記載されるようにして行った（「ロタＡ ｑＲＴ－ＰＣＲのためのプロトコール」））。
それぞれの群から無作為に選択されたブタのサブセットを、ＤＰＣ２で安楽死及び剖検した。ブタを、肉眼的腸病変（薄壁、ガス膨張した小腸、純粋な液体含量など）、顕微鏡病変（萎縮腸）、及び免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によるロタウイルスＡ特異的染色の存在について評価した。下記の表３は、剖検の時に腸病変を有していた群ごとのブタの数を示す。負荷は、プラセボ群（Ｔ０２）のブタの８４．２％（１６／１９）が肉眼的病変を有し、その６３．２％（１２／１９）が染色されていたので、成功と見なした。最も興味深かったのは、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）における、動物のロタウイルスＡ染色の欠如であった。加えて、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）において、Ｔ０２（プラセボ）及び市販製品（Ｔ０６）と比較して、肉眼的病変を有するブタのパーセンテージの低減があった。

１日当たりの平均体重（ｋｇ）増加を、生存しているブタについて算出し、下記の表４に示す。３つのワクチン接種群の１日当たりの平均体重増加（ＡＤＷＧ）における最高数的利益は、Ｔ０１（ＰＣＶ２：ＡＶＰ８）からのブタにおいて観察された。ワクチン接種後のＡＤＷＧの増加は、Ｔ０２（プラセボ）と比較して、有意に異なった。

結論として、ＰＣＶ２：ＡＶＰ８プロトタイプワクチン（配列番号１４のポリペプチドを含む）による分娩６週間前及び２週間前での従来の雌ブタのワクチン接種は、雌ブタの血清及び初乳において高い中和抗体力価をもたらす。これらの中和抗体は、ワクチン接種された雌ブタからのブタの血清における高い力価（＞１２８０）の検出によって証拠付けられるように、出生後のブタに受動的に伝達された。ブタにおける高い中和抗体力価の存在は、臨床的保護をもたらす。詳細には、ワクチン接種された雌ブタから生まれたブタは、プラセボ対照及び市販ワクチンから生まれたブタと比較して、ロタウイルスＡ ＲＮＡの糞便排出が低減され、死亡率が低減され、下痢の臨床徴候が低減され、ＤＰＣ２で肉眼的病変が低減され、ＡＤＷＧが増加した。

ロタＡ ｑＲＴ－ＰＣＲのためのプロトコール
糞便試料中のロタウイルスＡ ＲＮＡを決定するために、定量的１ステップＲＴ－ＰＣＲキット（ｉＴａｑ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ＰＣＲキット；ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号１７２５１４０）を、アッセイのために使用した。プライマー及びプローブの情報について、下記の表５を参照されたい。

リアルタイムＲＴ－ＰＣＲを、５μｌの抽出された総核酸、１μｌのそれぞれのプローブ（５μＭ）、１μｌのそれぞれのプライマー（１０μＭ）、１０μｌの２×ＲＴ－ＰＣＲミックス、０．５μｌのｉＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素及び０．５μｌのＤＥＰＣ処理水を含有する２０μｌの反応物において行った。反応を、以下の条件下、ＣＦＸ９６リアルタイムＰＣＲ検出システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して行った：５０℃で１０分間の最初の逆転写、それに続く９５℃で３分間の最初の変性、９５℃で１５秒間の変性、並びに６０℃で４５秒間のアニーリング及び伸長を４０サイクル。相対定量データを作製するために、２つのロタウイルスＡ ｇ－ブロックの連続希釈を、それぞれの実行に含めた。等量のｇ－ブロックのそれぞれを、出発濃度として５．０×１０⁷ゲノムコピー／μＬを使用して、実行に含めた。光学データを、ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを使用して解析した。それぞれの決定のために、閾値の線を、サイクル閾値（Ｃｔ）決定モードのための回帰設定を使用して自動で算出した。ベースライン減算を、ベースライン減算モードを使用して自動で行った。１０未満のベースライン最終値を有する曲線を手動で補正した。

二重免疫応答についての試験
プロトタイプワクチンＰＣＶ２：ＡＶＰ８（ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質（配列番号１４）を含む）の投与もＰＣＶ２に対して免疫応答を誘導したかをさらに試験した。この目的のために、上記に記載されるようにして収集され、ウイルス中和アッセイのために使用された雌ブタ血清を、ＰＣＶ２に特異的な抗体の存在についても試験した。この目的のために、間接ＥＬＩＳＡ（Ｉｎｍｕｎｏｌｏｇｉａ ｙ Ｇｅｎｅｔｉｃａ Ａｐｌｉｃａｄａ、ＳＡ （ＩＮＧＥＮＡＳＡ）、ＩＮｇｅｚｉｍ ＣＩＲＣＯ ＩｇＧキット（Ｒ．１１．ＰＣＶ．Ｋ１））を、製造業者の説明書に従って、試料に対して用いた。結果として、Ｔ０１における動物は、明確に、プラセボ群と比較して、ＰＣＶ：ＡＶＰ８によるワクチン接種後に血清において数値的により高い抗ＰＣＶ２応答を有しており、これが、負荷前の試料において特に有意であったことが分かった（図７）。

ＰＣＶ２：ＡＶＰ８の生成
８Ｌの抗原のロットを、１０Ｌのバイオリアクター中、８ＬのＳｆ＋（スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ））細胞に、およそ１×１０⁶個細胞／ｍＬの濃度で、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２－ロタウイルスＡ ＶＰ８コア融合タンパク質（ＢＧ／ｐＶＬ１３９３－ＰＣＶ２－ＡＶＰ８；４．１０×１０⁷ＴＣＩＤ₅₀／ｍＬ）を含有する１４ｍＬの組換えバキュロウイルスストックを感染させることによって生成した。バイオリアクターを、およそ１００ｒｐｍの一定撹拌で、２８℃±２℃で、９日間インキュベートした。細胞及び培地を、８×１Ｌの遠心分離ボトルに無菌で移し、細胞を、１０，０００ｇで、４℃で２０分間、ペレット化した。得られた上清を、０．８／０．２μｍフィルター（ＰｏｌｙＣａｐ ７５ＴＣ０．８／０．２μｍフィルター、８２０ｃｍ２ ＥＦＡ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号６７１５－７５８２）を通過させた。バキュロウイルスを、５ｍＭのＢＥＩで、２７℃で５日と１７時間、不活化し、その後、これを、１００００ＮＭＷＣ Ｘａｍｐｌｅｒ超遠心分離カートリッジ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＵＦＰ－１０－Ｃ－４ＭＡ）によって７倍に濃縮した。得られたＰＣＶ２－ＡＶＰ８濃縮物（１２８．９μｇ／ｍＬ）を、１×ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ カタログ番号１００１０－０２３）中、７５μｇ／ｍＬの標的濃度に希釈した。希釈された材料を、１２．５％のＥｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄを用いて製剤化した。

（実施例３）
血清学研究：
この研究の主要な目的は、ＰＣＶ２－ＡＶＰ８タンパク質（配列番号１４）を含むプロトタイプワクチン及び本明細書において「プラセボ」と称される対照ワクチンの従来の雌ブタへの投与が、ロタウイルスＡに対する血清学的応答を生じるかを評価することであった。本明細書において「ＰＣＶ２＃ＡＶＰ８」とも称されるプロトタイプワクチン（アジュバントとしてＥｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄ又はＣａｒｂｏｐｏｌのいずれかを含む、参照．下記の表７及び７Ｂ）を、セクション「ワクチン生成：ＰＣＶ２’ＡＶＰ８」において下記に記載されるようにして、感染のために使用される異なる体積及びより長いインキュベーション期間を用いたが、実施例１及び２において上記に記載される生成と同様に生成した。

合計で１７頭の雌ブタを研究に含めた。雌ブタを、下記の表６において記載されるように、４つの処置群に無作為化した。雌ブタを、研究全体を通して、混ぜ合わせた。すべての雌ブタに、表６において列挙されるように、Ｄ０及びＤ２１において、筋肉内に適切な材料でワクチン接種した。血清を、研究全体を通して、定期的に雌ブタから収集し、ウイルス中和アッセイによって、抗体陽転の証拠についてアッセイした。全体的な健康観察を、それぞれの雌ブタにおいて、毎日記録した。研究を、Ｄ４２に終了した。

研究全体を通して、Ｔ０６及びＴ０７（プラセボ群）からの雌ブタの血清ＶＮ力価は、一定のままであったか、又は減少して、曝露されていないこと及び有効な研究であることを示した（ウイルス中和は、実施例１（「ウイルス中和アッセイのためのプロトコール」）において上記に記載されたようにして評価した）。ワクチン接種段階の間、ＰＣＶ２＃ＡＶＰ８／Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄ（Ｔ０４）及びＰＣＶ２＃ＡＶＰ８／Ｃａｒｂｏｐｏｌ（Ｔ０５）プロトタイプワクチンでワクチン接種された雌ブタは、力価が有意に増加した（＞４倍）。両群（Ｔ０４及びＴ０５）について、群平均力価は、１回のワクチン接種後に６４０を上回り、研究期間全体を通して６４０を上回ったままであった。対照的に、プラセボ群（Ｔ０６及びＴ０７）の雌ブタは、研究全体を通して、血清ＶＮ力価の有意な増加はなかった（＜２倍）。
結論として、ＰＣＶ２＃ＡＶＰ８プロトタイプワクチン（配列番号１４のポリペプチドを含む）による分娩６週間前及び２週間前での通常の雌ブタへのワクチン接種は、雌ブタの血清において高い中和抗体力価をもたらす。

ワクチン生成：ＰＣＶ２＃ＡＶＰ８
プロトタイプワクチンＰＣＶ２＃ＡＶＰ８を、８ＬのＳｆ＋細胞を１．００×１０⁶個細胞／ｍＬの密度で蒔いた１０ＬのＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｂｉｏｓｔａｔ Ｂガラスジャケット容器において生成した。細胞に、ＢＧ／ｐＶＬ１３９３－ＰＣＶ２－ＡＶＰ８クローン３Ｅ７／１Ｆ５（Ｐ８、１．２１×１０⁸ＴＣＩＤ₅₀／ｍＬ）を０．２のＭＯＩで感染させた。バイオリアクターを、１００ｒｐｍの撹拌及び１分当たり０．３標準リットルで拡散された酸素を用いて、２７℃で１０日間実行した。インキュベーション後、回収液体を、１０，０００×ｇ、４℃で２０分間遠心分離した。次いで、上清を、０．８／０．２μｍフィルター（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号６７１５－３６８２）を通過させた。清澄化された材料を、５ｍＭのＢＥＩで２７℃で５日と１７時間、不活化した。残ったＢＥＩのチオ硫酸ナトリウムによる中和後、不活化された材料を、およそ８回、１０ｋＤａ中空繊維フィルター（ＧＥ、カタログ番号ＵＦＰ－１０－Ｃ－４ＭＡ）を使用して濃縮した。濃度は１３．５μｇ／ｍＬであると決定された。材料を、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（カルボポール）（表７Ａ）又はＥｍｕｌｓｉｇｅｎ Ｄ（エマルシゲンＤ）（表７Ｂ）のいずれかを含有するシリーズを製剤化するために使用した。

（実施例４）
コンセンサス配列の作製：
配列番号８（遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルスＶＰ８タンパク質に基づく）及び配列番号９（遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスＶＰ８タンパク質に基づく）のコンセンサス配列を、以下に記載されるようにして作製した。

配列を、ＮＣＢＩ Ｖｉｒｕｓ Ｖａｒｉａｔｉｏｎデータベースからの公に利用可能なイノシシ属動物ロタウイルスＶＰ４ヌクレオチド配列、及び内部で誘導したロタウイルス分離株配列から収集した。分離株名称、分離株Ｐ型、地理的起源、及び利用可能な場合は分離日についてのメタデータを含む、配列についての追加のメタデータもコンパイルした。ヌクレオチド配列を、タンパク質配列に翻訳し、ＭＵＳＣＬＥ配列アライメントソフトウェアＵＰＧＭＢ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ及びデフォルトギャップペナルティパラメーターを使用して、既知のＶＰ８タンパク質と整列させた。整列されなかったＶＰ５アミノ酸をトリミングし、廃棄した。ＶＰ８の整列されたタンパク質配列を、系統発生解析のためにＭＥＧＡ７ソフトウェアにインポートし、近隣結合系統発生再構築を、ＶＰ８タンパク質配列に基づいて作製した。最適樹を、系統発生のブートストラップテストを伴うポアソン補正法を使用してコンピュータ処理し（ｎ＝１００）、全１７０位置にわたって、部位ごとのアミノ酸置換の単位で、進化距離に等しい枝の長さを用いて一定の縮尺で描いた。ブートストラップクラスター関連が７０％よりも高かったノードを有意と見なした。およそ１０％の距離及び７０％よりも高いブートストラップクラスター関連を有するノードをクラスターとして指定した。大きなクラスターにフィットしない異常配列を、配列品質及びＰ型の起源について、個々に評価した。疑わしい低い品質の配列を、解析から除去した一方、イノシシ属動物ロタウイルスにおいて稀に観察されるＰ型からの配列を保持した。コンセンサス配列を作製するために使用されるクラスターを、所望の生成物保護プロファイル、及びインビトロ血清交差中和研究に基づいて選択した。コンセンサス配列を、整列された位置ごとの最大頻度によって作製し、アミノ酸の同等の割合が整列された位置において観察された場合において、アミノ酸残基を、生成物保護プロファイルと併せて、報告された疫学データに基づいて選択した。

配列表／起源及び地理的起源（適用可能な場合）において：
配列番号１は、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質の配列に相当する。
配列番号２は、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質の配列に相当する。
配列番号３は、ＢＡＣＶ２カプシドタンパク質の配列に相当する。
配列番号４は、ＢＦＤＶカプシドタンパク質の配列に相当する。
配列番号５は、米国ノースカロライナの農場が起源の（遺伝子型Ｐ［７］）ロタウイルスＶＰ８タンパク質の配列に相当する。
配列番号６は、米国ノースカロライナの農場が起源の（遺伝子型Ｐ［７］）ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインの配列に相当する。
配列番号７は、米国ノースカロライナの農場が起源の（遺伝子型Ｐ［７］）ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片の配列に相当する。
配列番号８は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片の配列、即ち、ロタウイルスＶＰ８タンパク質（遺伝子型Ｐ［６］に基づく）の一部分のコンセンサス配列に相当する。
配列番号９は、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片の配列、即ち、ロタウイルスＶＰ８タンパク質（遺伝子型Ｐ［１３］に基づく）の免疫原性断片のコンセンサス配列の一部分のコンセンサス配列に相当する。
配列番号１０は、ロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片の配列に相当する。

配列番号１１は、リンカー部分の配列に相当する。
配列番号１２は、リンカー部分の配列に相当する。
配列番号１３は、リンカー部分の配列に相当する。
配列番号１４は、配列番号１、配列番号１１及び配列番号７の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号１５は、配列番号１、配列番号１１及び配列番号８の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号１６は、配列番号１、配列番号１１及び配列番号９の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号１７は、配列番号３、配列番号１１及び配列番号７の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号１８は、配列番号４、配列番号１１及び配列番号７の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号１９は、配列番号１、配列番号１１及び配列番号１０の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号２０は、配列番号３、配列番号１１及び配列番号１０の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。

配列番号２１は、配列番号４、配列番号１１及び配列番号１０の配列を含むポリペプチド（融合タンパク質）の配列に相当する。
配列番号２２は、配列番号１４のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２３は、配列番号１５のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２４は、配列番号１６のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２５は、配列番号１７のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２６は、配列番号１８のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２７は、配列番号１９のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２８は、配列番号２０のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号２９は、配列番号２１のポリペプチド（融合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドの配列に相当する。
配列番号３０～３３：プライマー及びプローブ配列（表３）。

以下の項も本明細書に開示する。したがって、本開示は、以下の項を特色とする態様をさらに含む。
１．異種タンパク質又はその断片に連結されたサーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質を含むポリペプチド。
２．前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基が、前記異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基に連結されている、項１に記載のポリペプチド。
３．前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、リンカー部分を介して、前記異種タンパク質又はその断片に連結されているか、又は
前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質のＣ末端アミノ酸残基と前記異種タンパク質又はその断片のＮ末端アミノ酸残基との間のペプチド結合を介して、前記異種タンパク質又はその断片に連結されている、項１又は２に記載のポリペプチド。
４．前記ポリペプチドが、融合タンパク質である、項１～３のいずれか１項に記載のポリペプチド。

５．前記ポリペプチドが、式ｘ－ｙ－ｚ（式中、
ｘは、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質からなるか、又は前記カプシドタンパク質を含み、
ｙは、リンカー部分であり、
ｚは、異種タンパク質又はその断片である）
の融合タンパク質であるポリペプチド、特に、項１～４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
６．前記異種タンパク質又はその断片が、少なくとも５０アミノ酸残基の長さ、好ましくは、少なくとも１００アミノ酸残基の長さ、最も好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列からなる、項１～５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
７．前記異種タンパク質又はその断片が、５０～１０００アミノ酸残基の長さ、好ましくは、１００～５００アミノ酸残基の長さ、最も好ましくは、１５０～２５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、項１～６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
８．前記異種タンパク質又はその断片が、タンパク質ドメインを含むか、又はタンパク質ドメインからなり、前記タンパク質ドメインが、好ましくは、少なくとも５０アミノ酸残基の長さ、より好ましくは、少なくとも１００アミノ酸残基の長さ、最も好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基の長さである、項１～７のいずれか１項に記載のポリペプチド。

９．前記異種タンパク質又はその断片が、非サーコウイルス科タンパク質又はその断片である、及び／又は前記異種タンパク質又はその断片が、サーコウイルス科ウイルス以外の病原体のゲノムによってコードされるタンパク質又はその断片である、項１～８のいずれか１項に記載のペプチド。

１０．前記異種タンパク質又はその断片が、サーコウイルス科ウイルス以外のウイルスのゲノムによってコードされるタンパク質又はその断片である、項１～９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１１．前記サーコウイルス科ウイルスが、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）、コウモリ関連サーコウイルス２（ＢＡＣＶ２）及び嘴羽毛病ウイルス（ＢＦＤＶ）からなる群から選択される、項１～１０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１２．前記サーコウイルス科ウイルスがＰＣＶ２であり、前記ＰＣＶ２が、好ましくは、ＰＣＶ２サブタイプａ（ＰＣＶ２ａ）及びＰＣＶ２サブタイプｄ（ＰＣＶ２ｄ）からなる群から選択される、項１～１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１３．前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質、ＢＡＣＶ２カプシドタンパク質及びＢＦＤＶカプシドタンパク質からなる群から選択される、項１～１２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１４．前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質がＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質であり、前記ＰＣＶ２ ＯＲＦ２タンパク質が、好ましくは、ＰＣＶ２サブタイプａ（ＰＣＶ２ａ）ＯＲＦ２タンパク質及びＰＣＶ２サブタイプｄ（ＰＣＶ２ｄ）ＯＲＦ２タンパク質からなる群から選択される、項１～１３のいずれか１項に記載のポリペプチド。

１５．前記サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、項１～１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１６．前記異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスタンパク質又はその断片である、項１～１５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１７．前記異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質又はその断片である、項１～１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１８．前記異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片を含むか、又はそれである、項１～１７のいずれか１項に記載のポリペプチド。
１９．前記異種タンパク質又はその断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片である、項１～１８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
２０．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が投与される対象においてロタウイルスに対する免疫応答を誘導することができる、項１８又は１９に記載のポリペプチド。
２１．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、５０～２００、好ましくは、１４０～１９０アミノ酸残基の長さである、項１８～２０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

２２．前記ロタウイルスが、ブタロタウイルスである、項１６～２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
２３．前記ロタウイルスが、ロタウイルスＡ及びロタウイルスＣからなる群から選択される、項１６～２２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
２４．前記ロタウイルスがロタウイルスＡである、項１６～２３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
２５．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片がロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインを含む、項１６～２４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
２６．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のＮ末端伸長したレクチン様ドメインであり、前記Ｎ末端伸長が、１～２０アミノ酸残基、好ましくは、５～１５アミノ酸残基の長さである、項１６～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。

２７．ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインが、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４のアミノ酸配列からなる、項２５又は２６に記載のポリペプチド。
２８．前記Ｎ末端伸長のアミノ酸配列が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸配列中のレクチン様ドメインのＮ末端側アミノ酸残基に隣接している個々の長さのアミノ酸配列である、項２６又は２７に記載のポリペプチド。
２９．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の、アミノ酸残基６０～２２４、アミノ酸残基５９～２２４、アミノ酸残基５８～２２４、アミノ酸残基５７～２２４、アミノ酸残基５６～２２４、アミノ酸残基５５～２２４、アミノ酸残基５４～２２４、アミノ酸残基５３～２２４、アミノ酸残基５２～２２４、アミノ酸残基５１～２２４、アミノ酸残基５０～２２４、又はアミノ酸残基４９～２２４、のアミノ酸配列からなる、項１６～２８のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３０．前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基５７～２２４のアミノ酸配列からなる、項１６～２９のいずれか１項に記載のポリペプチド。

３１．前記アミノ酸残基の番号付けが、野生型ロタウイルスＶＰ８タンパク質、特に野生型ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質のアミノ酸配列を参照し、前記野生型ロタウイルスＶＰ８タンパク質が、好ましくは、配列番号５に示されるタンパク質である、項２７～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３２．前記ロタウイルスが、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルス、遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルス及び遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスからなる群から選択される、項１６～３１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３３．ロタウイルスＶＰ８タンパク質が、配列番号５の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は前記配列からなる、項１６～３２のいずれか１項に記載のポリペプチド。

３４．ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインが、配列番号６の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、項２５～３３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３５．ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、配列番号７の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、項１６～３４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３６．ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分、特に、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列からなるか、又はそれであり、
前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列が、好ましくは、
－ ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分をコードする複数のヌクレオチド配列をアミノ酸配列に翻訳するステップ、
－ 好ましくは、ＭＵＳＣＬＥ配列アライメントソフトウェアＵＰＧＭＢ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ及びデフォルトギャップペナルティパラメーターを使用することによって、前記アミノ酸配列を既知のロタウイルスＶＰ８タンパク質と整列させるステップ、
－ 前記整列された配列を系統発生解析に付し、ロタウイルスＶＰ８タンパク質配列に基づく近隣結合系統発生再構築を作製するステップ、特に、前記整列されたアミノ酸配列を、系統発生解析のためのＭＥＧＡ７ソフトウェアにインポートし、ロタウイルスＶＰ８タンパク質配列に基づいて近隣結合系統発生再構築を作製するステップ、
－ 系統発生のブートストラップテストを伴うポアソン補正法を使用して最適樹を計算するステップ（ｎ＝１００）、
－ 全１７０位置にわたって、部位ごとのアミノ酸置換の単位で、進化距離に等しい枝の長さを用いて一定の縮尺で最適樹を描くステップ、
－ ブートストラップクラスター関連が７０％よりも高いノードを有意として見なすステップ、
－ およそ１０％の距離及び７０％よりも高いブートストラップクラスター関連を有するノードをクラスターとして指定するステップ、並びに
－ クラスターを選択し、クラスター内の整列された位置ごとの最大頻度を特定することによって、コンセンサス配列を作製するステップ、並びに
－ 任意に、アミノ酸の同等の割合が整列された位置において観察される場合において、事前に定義された生成物保護プロファイルと併せて、報告された疫学データに基づいて、アミノ酸残基を選択するステップ
を含む方法によって得られ得る、項１６～３５のいずれか１項に記載のポリペプチド。

３７．ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、配列番号８及び配列番号９からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、項１６～３６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３８．前記ロタウイルスがロタウイルスＣである、項１６～２３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
３９．ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、配列番号１０の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、又はさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、項１６～２３及び３８のいずれか１項に記載のポリペプチド。

４０．前記異種タンパク質又はその断片が、
－ 項２４～３５のいずれか１項若しくは複数に規定される、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、又は
－ 項３６若しくは３７に規定される、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分、特に、ロタウイルスＡ ＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列、又は
－ 項３８若しくは３９に規定される、ロタウイルスＣ ＶＰ８タンパク質の免疫原性断片、
からなるか、又は前記免疫原性断片若しくはコンセンサス配列である、項１～３９のいずれか１項に記載のポリペプチド。
４１．前記異種タンパク質又はその断片が、配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は前記アミノ酸配列からなる、項１～４０のいずれか１項に記載のポリペプチド。

４２．前記リンカー部分が１～５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列である、項３～４１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
４３．前記リンカー部分が、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３からなる群から選択される配列と、少なくとも６６％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は前記アミノ酸配列からなる、項３～４２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
４４．配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０及び配列番号２１からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に、１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるタンパク質である、項１～４３のいずれか１項に記載のポリペプチド。

４５．組換えタンパク質、好ましくは、組換えバキュロウイルス発現タンパク質である、項１～４４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
４６．複数の同じポリペプチドと集合して、ウイルス様粒子を形成することができる、項１～４５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
４７．異種タンパク質又はその断片が、ウイルス様粒子の外面に提示されている、項４６に記載のポリペプチド。
４８．項１～４７のいずれか１項に記載の複数のポリペプチドを含むか、又はそれから構成されるウイルス様粒子。
４９．異種タンパク質又はその断片がウイルス様粒子の外面に提示されている、項４８に記載のウイルス様粒子。

５０．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド及び／又は項４８若しくは４９に記載のウイルス様粒子を含む免疫原性組成物。
５１．薬学的に又は獣医学的に許容される担体又は賦形剤をさらに含む、項５０に記載の免疫原性組成物。
５２．アジュバントをさらに含む、項５０又は５１に記載の免疫原性組成物。
５３．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド及び／又は項４８若しくは４９に記載のウイルス様粒子、並びに
薬学的に又は獣医学的に許容される担体又は賦形剤、並びに、
任意的に、アジュバント、
を含む、又はそれらからなる免疫原性組成物。
５４．アジュバントが、乳化された水中油型アジュバントである、項５２又は５３に記載の免疫原性組成物。
５５．アジュバントがカルボマーである、項５２又は５３に記載の免疫原性組成物。

５６．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
５７．配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、又は特に、１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、項５６に記載のポリヌクレオチド。
５８．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むプラスミド、好ましくは、発現ベクター。
５９．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むプラスミド、好ましくは、発現ベクターを含む細胞。

６０．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含有するバキュロウイルス。
６１．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含有するバキュロウイルスを含む細胞、好ましくは、昆虫細胞。
６２．医薬、好ましくは、ワクチンの調製のための、
－ 項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド、
－ 項４８若しくは４９に記載のウイルス様粒子、
－ 項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物、
－ 項５６若しくは５７に記載のポリヌクレオチド、
－ 項５８に記載のプラスミド、
－ 項５９若しくは６１に記載の細胞、
及び／又は
－ 項６０に記載のバキュロウイルス、
の使用。

６３．医薬として使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
６４．ワクチンとして使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
６５．病原体による感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候若しくは疾患を低減又は防止する方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
６６．病原体が、前記異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体である、項６５に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。
６７．対象におけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法において使用するための、又は、対象におけるロタウイルス感染を処置又は防止する方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。

６８．対象におけるロタウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
６９．対象における、
異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体に対する免疫応答を誘導するための方法、
及び
サーコウイルス科ウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法であって、サーコウイルス科ウイルスが、好ましくは、前記サーコウイルス科カプシドタンパク質をコードする種のものである、前記方法、
において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。

７０．対象におけるロタウイルス及びＰＣＶ２に対する免疫応答を誘導するための方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
７１．対象が、哺乳動物又は鳥類であり、鳥類が、好ましくは、ニワトリである、項６７～７０のいずれか１項に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。
７２．対象が、哺乳動物であり、哺乳動物が、好ましくは、イノシシ属動物又はウシ亜科動物である、項６７～７１のいずれか１項に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。
７３．対象が、ブタであり、ブタが、好ましくは、子ブタ又は雌ブタである、項６７～７２のいずれか１項に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。
７４．対象が、子ブタである、項６７に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。

７５．対象が、妊娠雌ブタである、項６８～７０のいずれか１項に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。
７６．子ブタにおけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物であって、子ブタが前記免疫原性組成物が投与された雌ブタによって授乳される、ポリペプチド又は免疫原性組成物。
７７．免疫原性組成物が投与された前記雌ブタが、前記雌ブタが妊娠している、特に、前記子ブタを妊娠している間に前記免疫原性組成物が投与された雌ブタである、項７６に記載のポリペプチド又は免疫原性組成物。

７８．－ 異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体による感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、
及び
－ サーコウイルス科ウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候であって、サーコウイルス科ウイルスが、好ましくは、前記サーコウイルス科カプシドタンパク質をコードする種のウイルスである、臨床徴候、
を低減又は防止する方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
７９．－ ロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出、
及び
－ ＰＣＶ２によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは鼻排出
を低減又は防止する方法において使用するための、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。

８０．ロタウイルス感染の処置又は防止、ロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出の低減、防止又は処置、或いはロタウイルス感染によって引き起こされる疾患の防止又は処置のための方法であって、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む、前記方法。
８１．雌ブタにおけるロタウイルスに特異的な抗体の産生を誘導するための方法であって、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を前記雌ブタに投与するステップを含む、前記方法。
８２．子ブタにおけるロタウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法であって、
－ 項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を、雌ブタに投与するステップ、及び
－ 前記子ブタが、前記雌ブタによって授乳されるステップ
を含む、前記方法。
８３．前記雌ブタが、妊娠している、特に、前記子ブタを妊娠している雌ブタである、項８２に記載の方法。

８４． － 項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を、前記子ブタを妊娠している雌ブタに投与するステップ、
－ 前記雌ブタに、前記子ブタを出産させるステップ、及び
－ 前記子ブタが、前記雌ブタによって授乳されるステップ
を含む、項８２又は８３に記載の方法。
８５．子ブタにおけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法であって、子ブタが、項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド又は項５０～５５のいずれか１項に記載の免疫原性組成物が投与された雌ブタによって授乳される、前記方法。

８６．前記１つ又は複数の臨床徴候が、
－ 下痢、
－ 病原体コロニー形成、特に、異種タンパク質又はその断片をコードするゲノムを有する種の病原体のコロニー形成であって、前記病原体コロニー形成が、好ましくは、ロタウイルスコロニー形成である、コロニー形成、
－ 病変、特に、肉眼的病変、
－ １日当たりの平均体重増加の減少、及び
－ 胃腸炎
からなる群から選択される、項６５～７９のいずれか１項に記載のポリペプチド若しくは免疫原性組成物又は項８０～８５のいずれか１項に記載の方法。
８７．前記病原体コロニー形成が、腸のロタウイルスコロニー形成であり、及び／又は前記病変が、腸病変である、項８６に記載のポリペプチド若しくは免疫原性組成物又は項８６に記載の方法。

８８．－ 前記ロタウイルス感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
－ 前記ロタウイルスによる感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
－ 前記ロタウイルスに対する免疫応答が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに対する免疫応答である、又は
－ 前記ロタウイルスに特異的な抗体が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに特異的な抗体である、
項６５～７９、８６及び８７のいずれか１項に記載のポリペプチド若しくは免疫原性組成物又は項８０～８７のいずれか１項に記載の方法。
８９．前記ポリペプチドが、項１～３７及び４０～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドであり、前記異種タンパク質の前記断片が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であることを特徴とする、項８８に記載のポリペプチド。

９０．項１～３７及び４０～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドを含み、異種タンパク質の断片が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であることを特徴する、項８８に記載の免疫原性組成物。
９１．－ 項１～３７及び４０～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドであって、異種タンパク質の断片が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であることを特徴とする、前記ポリペプチド、又は
－ 項１～３７及び４０～４７のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む免疫原性組成物であって、前記異種タンパク質の前記断片が、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であることを特徴する、前記免疫原性組成物
が投与されるか、又は投与されている、項８８に記載の方法。

９２．－ 前記断片が、配列番号７の配列と、少なくとも９０％、好ましくは、少なくとも９５％、より好ましくは、少なくとも９８％、若しくはさらにより好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、及び／又は
－ 前記ポリペプチドが、配列番号１４からなる群から選択される配列と、少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、若しくは特に、１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は前記アミノ酸配列からなるタンパク質である、
項８９に記載のポリペプチド、項９０に記載の免疫原性組成物又は項９１に記載の方法。

９３．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド及び／又は項４８若しくは４９に記載のウイルス様粒子を生成する方法であって、細胞を項５８に記載のプラスミドでトランスフェクトするステップを含む、方法。
９４．項１～４７のいずれか１項に記載のポリペプチド及び／又は項４８若しくは４９に記載のウイルス様粒子を生成する方法であって、細胞、好ましくは、昆虫細胞を、項６０に記載のバキュロウイルスに感染させるステップを含む、方法。

Claims (21)

1. 異種タンパク質の断片に連結されたサーコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）ウイルスカプシドタンパク質を含む融合タンパク質であって、前記断片が、少なくとも５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列からなり、前記断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であり、前記断片が、配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、前記融合タンパク質。
2. 式ｘ－ｙ－ｚ（式中、
   ｘは、サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質からなるか、又は前記カプシドタンパク質を含み、
   ｙは、リンカー部分であり、
   ｚは、異種タンパク質の断片である）
   の融合タンパク質であり、及び、
   前記断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片であり、前記断片が、配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、
   前記融合タンパク質。
3. サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）ＯＲＦ２タンパク質、コウモリ関連サーコウイルス２（ＢＡＣＶ２）カプシドタンパク質及び嘴羽毛病ウイルス（ＢＦＤＶ）カプシドタンパク質からなる群から選択され、並びに／或いは
   サーコウイルス科ウイルスカプシドタンパク質が、配列番号１、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、
   請求項１又は２に記載の融合タンパク質。
4. ロタウイルスが、ブタロタウイルスであり、並びに／又はロタウイルスが、ロタウイルスＡ及びロタウイルスＣからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
5. ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質のＮ末端伸長したレクチン様ドメインであり、前記ロタウイルスＶＰ８タンパク質のレクチン様ドメインがロタウイルスＶＰ８タンパク質のアミノ酸残基６５～２２４からなり、かつ、前記Ｎ末端伸長が、１～２０アミノ酸残基の長さである、請求項１～４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
6. ロタウイルスが、遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルス、遺伝子型Ｐ［６］ロタウイルス及び遺伝子型Ｐ［１３］ロタウイルスからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
7. ロタウイルスＶＰ８タンパク質の免疫原性断片が、ロタウイルスＶＰ８タンパク質の一部分のコンセンサス配列からなるか、又は前記コンセンサス配列である、
   請求項１～６のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
8. リンカー部分が、１～５０アミノ酸残基の長さであるアミノ酸配列であり、並びに／或いは
   リンカー部分が、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は前記アミノ酸配列からなる、
   請求項２～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
9. 配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０及び配列番号２１からなる群から選択される配列と、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又は前記アミノ酸配列からなるタンパク質である、請求項１～８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
10. 請求項１～９のいずれか１項に記載の複数の融合タンパク質を含むか、又は、前記複数の融合タンパク質から構成されるウイルス様粒子。
11. 請求項１～９のいずれか１項に記載の融合タンパク質及び／又は請求項１０に記載のウイルス様粒子を含む免疫原性組成物。
12. 請求項１～９のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
13. 請求項１～９のいずれか１項に記載の融合タンパク質又は請求項１１に記載の免疫原性組成物を含む医薬。
14. 対象におけるロタウイルス感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止するための、或いは対象におけるロタウイルス感染を処置又は防止するための、及び／又は対象におけるロタウイルスに対する免疫応答を誘導するための、請求項１３に記載の医薬。
15. 対象における、
    ロタウイルスに対する免疫応答を誘導するため、
    及び
    サーコウイルス科ウイルスに対する免疫応答を誘導するための、請求項１３に記載の医薬。
16. 子ブタにおけるロタウイルスによる感染によって引き起こされる１つ若しくは複数の臨床徴候、死亡率若しくは糞便排出を低減又は防止する方法であって、
    － 請求項１～９のいずれか１項に記載の融合タンパク質又は請求項１１に記載の免疫原性組成物を、雌ブタに投与するステップ、及び
    － 前記子ブタが、前記雌ブタによって授乳されるステップ
    を含む、前記方法。
17. １つ又は複数の臨床徴候が、
    － 下痢、
    － ロタウイルスコロニー形成、
    － 病変、
    － 1日当たりの平均体重増加の減少、及び
    － 胃腸炎
    からなる群から選択される、請求項１４に記載の医薬。
18. １つ又は複数の臨床徴候が、
    － 下痢、
    － ロタウイルスコロニー形成、
    － 病変、
    － 1日当たりの平均体重増加の減少、及び
    － 胃腸炎
    からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
19. － ロタウイルス感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
    － ロタウイルスによる感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、又は、
    － ロタウイルスに対する免疫応答が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに対する免疫応答である、
    請求項１４、１５若しくは１７のいずれか１項に記載の医薬。
20. － ロタウイルス感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、
    － ロタウイルスによる感染が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスによる感染である、又は、
    － ロタウイルスに対する免疫応答が、遺伝子型Ｐ［２３］ロタウイルス及び／若しくは遺伝子型Ｐ［７］ロタウイルスに対する免疫応答である、
    請求項１６若しくは１８に記載の方法。
21. － 細胞を請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含むプラスミドでトランスフェクトするステップ、又は
    － 昆虫細胞を請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含むバキュロウイルスに感染させるステップ、
    を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の融合タンパク質及び／又は請求項１０に記載のウイルス様粒子を生成する方法。