JP7759174B2

JP7759174B2 - 繊毛病のための遺伝子治療

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Publication number: JP7759174B2
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Authority: JP
Inventors: ビールズ，フィリップ; ヘルナンデス，ビクター
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Publication date: 2025-10-23
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Description

本発明は、バルデ・ビードル症候群をはじめとする繊毛病の処置のための遺伝子治療ベクターに関する。

繊毛病は、体内のほとんどの細胞上で見出される非運動性繊毛の機能不全により誘発される疾患の医療的に重要な分類として近年になり話題となっている (Waters & Beales, Pediatr Nephrol (2011) 26:1039-1056)。ほとんどの繊毛病が、網膜変性をはじめとする
共通の表現型を有する。恐らく繊毛の機能不全から生じる疾患が１００種より多く存在すると予測されており、３０種より多くの疾病が現在、立証されている。これらの疾病の全てが衰弱性で、多くが致死性であり、それらはほぼ全てが機能損失性であるため、ほとんどが処置の遺伝子治療的アプローチから利益を享受するであろう。繊毛病は、一般人口５００人中およそ１人の集合的有病率を有する。繊毛病の全てが、繊毛機能の破壊と、それによる臓器病変の重複を有する。

常染色体劣性バルデ・ビードル症候群（ＢＢＳ）は、最もよく特徴づけられた繊毛病の１種であり、早期発症型失明、重度肥満、複合的な内分泌機能不全、認知障害及び腎不全に関連する。遺伝性バルデ・ビードル症候群として出生した患者は、一定範囲の衰弱性の医学的問題に見舞われることになり、それらの一部は致死性である。罹患した小児は、目の裏側（網膜）にある感光性細胞の障害により通常、１０歳までに失明し始めて、最終的に失明する。患者は、最初の歳に異常な量で体重が増加し、チェックされなければ、生命を脅かす肥満、糖尿病及び高血圧にまで進行するであろう。多くの患者は、一生のある時点で腎不全も発症し（透析処置及び／又は腎移植を必要とする場合もある）、ほとんどが、何らかの形態の学習困難を有するであろう。同時に、これらの問題は、成人患者が独立して生活する能力に影響を与え、ほとんどの患者が無職である。早期に診断された場合でも、症状に基づく処置は、網膜変性及び食事の手段に応答しない肥満などの予防不能の合併症を管理するに過ぎない。

ＢＢＳは、多くの繊毛病と同様に、常染色体劣性遺伝子障害である。これまでに、２１種の遺伝子に因果関係が見出されている。これらの遺伝子産物の多くは、マルチサブユニット複合体において相互作用する。例えば、多数のこれらのタンパク質は、ＢＢＳｏｍｅと呼ばれる複合体を形成する。ＢＢＳｏｍｅは、一次繊毛へのタンパク質輸送を媒介すると考えられている。ＢＢＳ／ＣＣＴシャペロニン複合体という別の複合体は、ＢＢＳｏｍｅの組み立てを容易にし、複数のＢＢＳタンパク質と多数のＣＣＴシャペロニンタンパク質とで構成されている。ＢＢＳ遺伝子のタンパク質産物が物理的に相互作用して共通の機能を実施する結果、多くの異なる遺伝子の突然変異が、表現型所見の同じ異常な組み合わせを誘発する。ＢＢＳ患者において突然変異する最も共通する遺伝子は、ＢＢＳ１（４２％）及びＢＢＳ１０（２２％）である。ＢＢＳ１遺伝子内の３０を超える突然変異が、バルデ・ビードル症候群の人々で同定されている。ヒトＢＢＳ１遺伝子は、１３位の染色体１１の長い（ｑ）アームに配置される。ＢＢＳ１遺伝子内の突然変異は、同様に繊毛の正常な形成及び機能に影響を及ぼす。これらの細胞構造の欠損は、発達の間の重要な化学的シグナル伝達経路を破壊し、感覚認知の異常に導く。ヒトＢＢ１遺伝子は、１７のエキソンを含み、およそ２３ｋｂに及ぶ。ほとんどのＢＢＳ１遺伝子の突然変異は、ミスセンス又はストップ突然変異であり、最も共通する突然変異は、タンパク質３９０位（Ｍｅｔ３９０Ａｒｇ又はＭ３９０Ｒ）でアミノ酸メチオニンをアミノ酸アルギニンと交換する。Ｍ３９０Ｒ突然変異は、全ＢＢＳ１突然変異のおよそ８０％を占める。ヒトＢＢＳ１０遺伝子は、染色体１２上に存在し、ＢＢＳ１０転写産物は、７２３のアミノ酸タンパク質をコ
ードするエキソンを２つだけ含有する。ＢＢＳ１０患者に見出される突然変異は、ミスセンスと、ノンセンスとフレームシフトの各突然変異の混合である。最も共通する変化は、Ｃ９１ｆｓであり、ほぼ５０％の頻度である。

これまでの繊毛病のための現行の遺伝子治療は全て、１つの損傷臓器を処置することを目的としている。例えば、多数のグループが、遺伝子治療ベクターの網膜下注射を利用して目の網膜症を処置する試みを行った（例えば、Seo et al., Invest Ophthalmol Vis Sci. 54(9):6118-32 (2013))。しかし、単一臓器を直接標的化したそのようなアプローチの利用は、繊毛病などの多系統の障害では個々の標的臓器に異なるベクターをあつらえる必要があるということになる。多くのベクターを使用する必要があるなら、経費が法外になり、定期的操作が厄介になる。多系統の注射よりむしろ単回注射の利用が、患者にとって非常に望ましく、侵襲性も低く、外来回数も減少し、反復処置によるリスクも低減するであろう。それゆえ、個別の臓器よりむしろ幾つか又は全ての罹患臓器の欠陥に取り組み得るアプローチの利用が、求められている。

Williams CLら（Mol Ther. 25(4):904-916(2017))は、バルデ・ビードル症候群におけ
る末梢嗅覚障害の回復を記載している。先に議論された研究と同様に、Williamsは、単一臓器の標的化を記載しており、多臓器の処置を企図していない。Williamsは、蛍光タンパク質（ＧＦＰ又はｍＣｈｅｒｒｙ）を標識されたマウスＢＢＳ遺伝子を含有する遺伝子治療ベクターの鼻内投与を通してマウス鼻内組織中の嗅覚感覚ニューロン（ＯＳＮ）を標的とする。決定的なこととして、Williamsにより用いられたマウスモデルにおいて、ＢＢＳタンパク質の機能は、成熟した嗅覚ニューロン（ＯＳＮ）内のみで欠損しているため、このマウスモデルは、ＯＳＮ細胞の回復を示し得るに過ぎない。このことは、用いられたマウスモデルのせいで、Williamsの文献に記載された実験が他の細胞型又は組織におけるＢＢＳ遺伝子発現に関するいかなる情報も提供し得ず、多臓器回復を示し得ない、ということを意味する。

ＷＯ０３／１０２１４１には、突然変異したＢＢＳ１遺伝子の同定及びそれらの様々な使用が記載されている。

本発明の第一の態様において、繊毛病を処置するためのベクターであって、該ベクターが、繊毛病遺伝子に動作可能に連結されたプロモーターを含み、該ベクターが、多臓器への繊毛病遺伝子の形質導入を提供することができ、該プロモーターが、形質導入された臓器における繊毛病遺伝子の発現を提供し得るユビキタスプロモーターであり、該繊毛病遺伝子が、繊毛病において突然変異された機能的タンパク質に対応する該タンパク質をコードする、ベクターが提供される。

繊毛病は、一般に、体内のほとんどの細胞上で見出された非運動性繊毛の機能不全をもたらす単一遺伝子への突然変異により誘発される。それゆえ、機能的タンパク質を発現する正しい遺伝子の導入で、突然変異された遺伝子を補填し、繊毛病の影響を改善する。先に定義されたベクターは、多臓器における形質導入を提供する。それゆえ１つの投与経路による該ベクターの投与を利用して、多臓器での遺伝子発現を提供し、繊毛病に関連する病状を改善することができる。これは、先に実施されたような罹患した各臓器又は組織を個別に処置する必要がないということである。多臓器を一度に標的化するこのアプローチは、繊毛病において過去に用いられておらず、そのようなアプローチが作用することが企図されなかった。

繊毛病は、繊毛の異常な形成又は機能をもたらす欠損タンパク質をコードする遺伝子突然変異に関連する障害の群である。それゆえ繊毛病は、「繊毛の異常な形成又は機能をもたらす、いずれのタンパク質もコードしない、又は欠損タンパク質をコードする遺伝子突然変異に関連する障害」と定義される。繊毛は、ほぼ全ての脊椎動物細胞の成分であるため、繊毛の機能不全は、特徴的に網膜変性、腎疾患及び大脳異常を含む特色群として症状発現し得る。追加的な症状発現としては、肝臓の先天性線維嚢胞性疾患、糖尿病、肥満及び骨格異形成が挙げられる。繊毛病の特色は、４０を超える遺伝子の突然変異に関連づけられている。

先に記載されたベクターを用いで処置され得る繊毛病は、繊毛病において突然変異された機能的タンパク質に対応する該タンパク質の発現により処置され得る任意の繊毛病であり得る。主としてこれは、タンパク質機能の喪失を誘発する突然変異から生じる繊毛病である。該機能的タンパク質の発現は、タンパク質の機能を回復させて、繊毛の異常な形成又は機能を改善する。そのような繊毛病は、当業者に公知である。処置され得る繊毛病は、バルデ・ビードル症候群、メッケル・グルーバー症候群、髄質性嚢胞腎、シニア・ローケン症候群、マキュージック・カウフマン症候群、レーバー先天性黒内障及びジュベール症候群から選択されてもよい。幾つかの実施形態において、該ベクターで処置される繊毛病は、バルデ・ビードル症候群、髄質性嚢胞腎、シニア・ローケン症候群、マキュージック・カウフマン症候群及びレーバー先天性黒内障から選択される。他の実施形態において、該ベクターで処置される繊毛病は、バルデ・ビードル症候群、シニア・ローケン症候群、マキュージック・カウフマン症候群及びレーバー先天性黒内障から選択される。様々な実施形態において、該ベクターで処置される繊毛病は、バルデ・ビードル症候群及びマキュージック・カウフマン症候群から選択される。特別な実施形態において、該ベクターで処置される繊毛病は、バルデ・ビードル症候群である。

該ベクターは、繊毛病において突然変異された機能的タンパク質に対応する該タンパク質をコードする繊毛病遺伝子を含む。言い換えると、該繊毛病遺伝子は、繊毛病を誘発する突然変異タンパク質に対応する機能的タンパク質をコードする。該繊毛病遺伝子は、好ましくはヒトタンパク質、例えば野生型ヒトタンパク質をコードする。正確な繊毛病遺伝子は、処置される繊毛病、及び突然変異されていて繊毛病の病状を誘発する遺伝子に依存する。そのため例えば、患者がＢＢＳ１遺伝子における突然変異により誘発された繊毛病を有する場合、この患者を処置するためのベクターは、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする繊毛病遺伝子を含むことになる。

幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０、ＢＢＳ１１／ＴＲＩＭ３２、ＢＢＳ１２、ＢＢＳ１３／ＭＫＳ１、ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０、ＢＢＳ１５／Ｃ２ＯＲＦ８６、ＢＢＳ１６／ＳＤＣＣＡＧ８、ＢＢＳ１７／ＬＺＴＦＬ１、ＢＢＳ１８／ＢＢＩＰ１、ＢＢＳ１９／ＩＦＴ２７、ＢＢＳ２０／ＩＦＴ７４及びＢＢＳ２１／Ｃ８ＯＲＦ３７タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０、ＢＢＳ１１／ＴＲＩＭ３２、ＢＢＳ１２、ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０、ＢＢＳ１５／Ｃ２ＯＲＦ８６、ＢＢＳ１６／ＳＤＣＣＡＧ８、ＢＢＳ１７／ＬＺＴＦＬ１、ＢＢＳ１８／ＢＢＩＰ１、ＢＢＳ１９／ＩＦＴ２７及びＢＢＳ２０／ＩＦＴ７４タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ
６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０、ＢＢＳ１１／ＴＲＩＭ３２、ＢＢＳ１２、ＢＢＳ１５／Ｃ２ＯＲＦ８６、ＢＢＳ１６／ＳＤＣＣＡＧ８、ＢＢＳ１７／ＬＺＴＦＬ１、ＢＢＳ１８／ＢＢＩＰ１、ＢＢＳ１９／ＩＦＴ２７及びＢＢＳ２０／ＩＦＴ７４タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

複数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０、ＢＢＳ１２、及びＢＢＳ１８／ＢＢＩＰ１タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０及びＢＢＳ１２タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

具体的な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１及びＢＢＳ１０タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。

他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。

幾つかの実施形態において、処置される繊毛病は、バルデ・ビードル症候群であり、該繊毛病遺伝子は、ＢＢＳ１、ＢＢＳ２、ＢＢＳ３／ＡＲＬ６、ＢＢＳ４、ＢＢＳ５、ＢＢＳ６／ＭＫＫＳ、ＢＢＳ７、ＢＢＳ８、ＢＢＳ９、ＢＢＳ１０、ＢＢＳ１１／ＴＲＩＭ３２、ＢＢＳ１２、ＢＢＳ１３／ＭＫＳ１、ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０、ＢＢＳ１５／Ｃ２ＯＲＦ８６、ＢＢＳ１６／ＳＤＣＣＡＧ８、ＢＢＳ１７／ＬＺＴＦＬ１、ＢＢＳ１８／ＢＢＩＰ１、ＢＢＳ１９／ＩＦＴ２７、ＢＢＳ２０／ＩＦＴ７４及びＢＢＳ２１／Ｃ８ＯＲＦ３７タンパク質から選択される機能的タンパク質をコードする。

他の実施形態において、処置される繊毛病は、メッケル・グルーバー症候群であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１３／ＭＫＳ１タンパク質をコードする。

様々な実施形態において、処置される繊毛病は、髄質性嚢胞腎であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０タンパク質をコードする。

特別な実施形態において、処置される繊毛病は、シニア・ローケン症候群であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０タンパク質をコードする。

幾つか実施形態において、処置される繊毛病は、マキュージック・カウフマン症候群であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ６／ＭＫＫＳタンパク質をコードする。

他の実施形態において、処置される繊毛病は、レーバー先天性黒内障であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０タンパク質をコードする。

様々な実施形態において、処置される繊毛病は、ジュベール症候群であり、該繊毛病遺伝子は、機能的ＢＢＳ１４／ＣＥＰ２９０タンパク質をコードする。

繊毛病遺伝子によりコードされる機能的タンパク質は、好ましくは野生型タンパク質中で見出されない追加的アミノ酸を含有しない。任意の追加的アミノ酸が、該タンパク質の正常な機能を妨害し得る。例えば、該機能的タンパク質が、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）若しくはｍＣｈｅｒｒｙなどの蛍光タンパク質、又はＦＬＡＧタグ若しくはポリヒスチジンタグなどのタグを含まないことが、好ましい。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド
配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性を有し
、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７４％
の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと
少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有
するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌ
クレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８２％の配列同一
性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくと
も８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか
、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも８６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８８％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９０％
の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれ
と少なくとも９２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を
有するか、又はそれと少なくとも９４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１の
ヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９６％の配列同
一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少な
くとも９７％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有する
か、又はそれと少なくとも９８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌク
レオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１のヌクレオチド配列を有する。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド
配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７
４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又は
それと少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド
配列を有するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有し
、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８２
％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又は
それと少なくとも８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８６％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８
８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又は
それと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド
配列を有するか、又はそれと少なくとも９２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９４％の配列同一性を有し
、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９５
％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又は
それと少なくとも９６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも９７％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９８％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも
９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２のヌクレオチド配列を有する。

先の実施形態において、該繊毛病遺伝子のヌクレオチド配列は、該タンパク質の発現を最大にするようにコドン最適化されてもよい。コドン最適化において、該コードされたタンパク質のアミノ酸配列は同一のままであり、そのため依然として機能的であろう。それは、単に修飾されたヌクレオチド配列である。ＳＥＱＩＤＮＯ:１１及び１２は、Ｂ
ＢＳ１をコードするコドン最適化されたヌクレオチド配列であり、ＳＥＱＩＤＮＯ:
１３及び１４は、ＢＢＳ１０をコードするコドン最適化されたヌクレオチド配列である。これらの配列は、遺伝子発現の予想外に大きな増加を与えることが見出されている。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも
７４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８
２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８６％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも
８８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも９２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９４％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９
５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも９６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも９７％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９８％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくと
も９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１１のヌクレオチド配列を有する。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも
７４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８
２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８６％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも
８８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも９２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９４％の配列同一性を有
し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９
５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又
はそれと少なくとも９６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも９７％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９８％の配列同一性を
有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくと
も９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２のヌクレオチド配列を有する。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性
を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なく
とも７４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有する
か、又はそれと少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌ
クレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列
同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと
少なくとも８２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列
を有するか、又はそれと少なくとも８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し
、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８
６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、
又はそれと少なくとも８８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９２％の配列同一性
を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なく
とも９４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有す
るか、又はそれと少なくとも９５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３の
ヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９７％の
配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有するか、又はそ
れと少なくとも９８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１３のヌクレオチド配列を有する。

特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも７０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７２％の配列同一性
を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なく
とも７４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有する
か、又はそれと少なくとも７６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌ
クレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも７８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８０％の配列
同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと
少なくとも８２％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列
を有するか、又はそれと少なくとも８４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有し
、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも８
６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、
又はそれと少なくとも８８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオ
チド配列を有するか、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９２％の配列同一性
を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なく
とも９４％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有す
るか、又はそれと少なくとも９５％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特定の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４の
ヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９６％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９７％の
配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。多数の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有するか、又はそ
れと少なくとも９８％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチ
ド配列を有するか、又はそれと少なくとも９９％の配列同一性を有し、機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。特別な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１４のヌクレオチド配列を有する。

様々な実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:９のタンパク質配
列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する機能的ＢＢＳ１タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該機能的ＢＢＳ１タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:９のタンパク質配列、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有する。他の実施
形態において、該機能的ＢＢＳ１タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:９のタンパク質配
列、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する。多数の実施形態において、該機能的ＢＢＳ１タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:９のタンパク質配列、又はそれと少な
くとも９５％の配列同一性を有する。特別な実施形態において、該機能的ＢＢＳ１タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:９のタンパク質配列を有する。

他の実施形態において、該繊毛病遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１０のタンパク質配
列、又はそれと少なくとも８０％の配列同一性を有する機能的ＢＢＳ１０タンパク質をコードする。幾つかの実施形態において、該機能的ＢＢＳ１０タンパク質は、ＳＥＱＩＤ
ＮＯ:１０のタンパク質配列、又はそれと少なくとも８５％の配列同一性を有する。様
々な実施形態において、該機能的ＢＢＳ１０タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１０の
タンパク質配列、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する。多数の実施形態において、該機能的ＢＢＳ１０タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１０のタンパク質配列
、又はそれと少なくとも９５％の配列同一性を有する。特別な実施形態において、該機能的ＢＢＳ１０タンパク質は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１０のタンパク質配列を有する。

先の記載において、用語「同一性」は、２つの配列の類似性を指すために用いられる。本発明の目的では、同一性は、２つの配列の同一性％を決定するために、該配列を最適な比較目的でアライメントすること、と本明細書で定義される（例えば、第一の配列内に、第二のアミノ酸又は核酸配列との最適なアライメントのためにギャップを導入することができる）。その後、各位置のヌクレオチド／アミノ酸残基を比較する。第一の配列内のある位置が、第二の配列内の対応する位置と同じアミノ酸又はヌクレオチド残基に占有されていれば、該分子は、その位置で同一である。２つの配列間の同一性％は、該配列によって共有される同一位置の数の関数である（即ち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数（即ち、重複する位置）×１００）。一般に２つの配列は、同じ長さである。配列の比較は、典型的には比較される２つの配列の全長にわたって実施される。

当業者は、２つの配列間の同一性を決定するために複数の異なるコンピュータプログラムを利用可能であることを、察知するであろう。例えば、２つの配列の配列比較及び同一性％の決定は、数学アルゴリズムを利用して完遂され得る。好ましい実施形態において、２つの核酸配列間の同一性％は、グローバルＤＮＡアライメント、パラメータ：両鎖、スコアリングマトリクス：線形（ミスマッチ２、ＯｐｅｎＧａｐ４、ＥｘｔＧａｐ１）を利用した配列アライメントソフトウエアClone Manager 9(Sci-Ed software - www.scied.com)を利用して決定される。

或いは、２つのアミノ酸又は核酸配列間の同一性％は、Blosum 62マトリクス又はPAM250マトリクスのいずれか、並びに１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップウ
ェイト、及び１、２、３、４、５、又は６のレングスウェイトを用いて、Accelrys GCGソフトウエアパッケージ（http://www.accelrys.com/products/gcg/から入手)内のGAPプロ
グラムないに組み込まれたNeedleman及びWunsch (1970)のアルゴリズムを利用して決定され得る。２つのアミノ酸又は核酸配列間の同一性％を評定するさらなる方法は、 National Center for Biotechnology Information（ＮＣＢＩ）ウェブサイト(www.blast.ncbi.nlm.nih.gov)から入手可能なＢＬＡＳＴ配列比較ツールを使用すること、例えばデフォル
トパラメータを用いたヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴｎ又はアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴｐを使用することであり得る。

該繊毛病遺伝子は、「機能的」タンパク質をコードする。このことは、該タンパク質が発現される場合に、野生型ヒトタンパク質と同じ機能及び活性を有することを意味する。これは、当業者により容易に決定され得る。繊毛病遺伝子によりコードされたタンパク質は、野生型ヒトタンパク質であってもよい。先に議論された様々なタンパク質の野生型ヒト配列は、当業者に周知である。例えばそれらは、National Center for Biotechnology Informationの公的にアクセル可能なデータベースに見出すことができる。さらにこれら
のタンパク質をコードする（そして該ベクター内に含まれる）ヌクレオチド配列は、例えば特別なヌクレオチドコドンを特別なアミノ酸と相関させる遺伝子コードを利用して、当業者により即座に発見又は決定され得る。

該ベクター内に含まれるプロモーターは、繊毛病遺伝子に動作可能に連結されたユビキタスプロモーターであるため、該プロモーターは、形質導入された臓器内での繊毛病遺伝子の発現を指揮する。ユビキタスプロモーターは、広範囲の細胞及び組織内で強い活性を有し、構成的発現を提供するものである。適切なユビキタスプロモーターは、当業者に周
知である。ユビキタスプロモーターは、組織特異性ではない。それは、複数の組織／臓器における発現を提供する。該ユビキタスプロモーターは、形質導入された臓器において繊毛病遺伝子の発現をもたらし、該発現されたタンパク質は、繊毛病に関連する病状を改善する。

適切なユビキタスプロモーターとしては、短い伸長因子プロモーター（ＥＦＳ）、ＣＡＧプロモーター、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセラートキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）及びベータアクチンプロモーター、例えばニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢＡ）が挙げられる。これらのプロモーターは当業者によく知られている。これらのプロモーターの配列の例は、ＳＥＱＩＤＮＯ:３、ＳＥＱＩＤＮＯ:４、ＳＥＱＩＤＮＯ:５、Ｓ
ＥＱＩＤＮＯ:６、ＳＥＱＩＤＮＯ:７、ＳＥＱＩＤＮＯ:８及びＳＥＱＩ
ＤＮＯ:４５として与えられる。それゆえ幾つかの実施形態において、該プロモーター
は、ＳＥＱＩＤＮＯ:３、ＳＥＱＩＤＮＯ:４、ＳＥＱＩＤＮＯ:５、ＳＥＱ
ＩＤＮＯ:６、ＳＥＱＩＤＮＯ:７、ＳＥＱＩＤＮＯ:８及びＳＥＱＩＤ
ＮＯ:４５から選択された配列を有する。

特別な実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:３又はＳＥＱＩ
ＤＮＯ:４６のヌクレオチド配列を有し得るＥＦＳプロモーターである。

幾つかの実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:４又はＳＥＱ
ＩＤＮＯ:４７のヌクレオチド配列を有し得るＣＡＧプロモーターである。

様々な実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:６又はＳＥＱＩ
ＤＮＯ:４５のヌクレオチド配列を有し得るＣＭＶプロモーターである。

特定の実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:５又はＳＥＱＩ
ＤＮＯ:４８のヌクレオチド配列を有し得るＵＢＣプロモーターである。

多数の実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:７のヌクレオチド
配列を有し得るＰＧＫプロモーターである。

複数の実施形態において、該プロモーターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:８又はＳＥＱＩ
ＤＮＯ:４９のヌクレオチド配列を有し得るベータアクチンプロモーターである。

要素の特別な組み合わせに関して、該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＥＦＳプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２
から選択されてもよい。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:１５、１６及び１７
のうちの１つの配列を含んでいてもよい。或いは該ベクターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＥＦＳプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２
、１３及び１４から選択されてもよい。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:３０
、３１及び３２のうちの１つの配列を含んでいてもよい。

該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＵＢＣプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２から選択されてもよい。例えば該ベ
クターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:１８、１９及び２０のうちの１つの配列を含んでいても
よい。或いは該ベクターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＵＢＣプロモータ
ーを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２、１３及び１４から選択されてもよ
い。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:３３、３４及び３５のうちの１つの配列
を含んでいてもよい。

該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＣＭＶプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２から選択されてもよい。例えば該ベ
クターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:２１、２２及び２３のうちの１つの配列を含んでいても
よい。或いは該ベクターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＣＭＶプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２、１３及び１４から選択されてもよ
い。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:３６、３７及び３８のうちの１つの配列
を含んでいてもよい。

該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＣＢＡプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２から選択されてもよい。例えば該ベ
クターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:２４、２５及び２６のうちの１つの配列を含んでいても
よい。或いは該ベクターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＣＢＡプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２、１３及び１４から選択されてもよ
い。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:３９、４０及び４１のうちの１つの配列
を含んでいてもよい。

該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＣＡＧプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２から選択されてもよい。例えば該ベ
クターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:２７、２８及び２９のうちの１つの配列を含んでいても
よい。或いは該ベクターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＣＡＧプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２、１３及び１４から選択されてもよ
い。例えば該ベクターは、ＳＥＱＩＤＮＯ:４２、４３及び４４のうちの１つの配列
を含んでいてもよい。

該ベクターは、ＢＢＳ１遺伝子に動作可能に連結されたＰＧＫプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:１、１１及び１２から選択されてもよい。或いは該ベ
クターは、ＢＢＳ１０遺伝子に動作可能に連結されたＰＧＫプロモーターを含んでいてもよく、該ベクターは、バルデ・ビードル症候群の処置のためのものである。該ＢＢＳ１０遺伝子は、ＳＥＱＩＤＮＯ:２、１３及び１４から選択されてもよい。

先に記載されたベクターは、多臓器への繊毛病遺伝子の形質導入を提供することができる。これは、任意の適切なベクターであり得、そのようなベクターは、当業者に周知である。特別な実施形態において、該ベクターは、血液脳関門を交差し得る。これは、目をはじめとする脳及び神経系内、並びに内臓器官及び筋系において形質導入を可能にする。それゆえ単一ベクターを用いて多臓器における遺伝子発現を提供して、繊毛病に関連する病状を改善することができる。この遺伝子発現は、身体全体の複数の部位で起こり得るため、全身性であり得る。さらに、限定された経路数によるベクターの投与を利用して全身の遺伝子発現を提供し、身体全体の繊毛病に関連する病状を改善することができる。これは
、罹患した各組織を個別に処置する必要がない、ということを意味する。多臓器を一度に標的化するこのアプローチは、過去に繊毛病で用いられておらず、そのようなアプローチが作用することは、企図されなかった。

先に記載されたベクターを形質導入され得る臓器は、中枢神経系、目（例えば、網膜光受容部及び網膜色素上皮）、心臓、肝臓、筋肉、膵臓、脾臓、肺及び腎臓から選択されてもよい。それゆえ幾つかの実施形態において、該ベクターは、中枢神経系、目、心臓、肝臓、筋肉、膵臓、脾臓、肺及び腎臓から選択される多臓器への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。他の実施形態において、該ベクターは、中枢神経系、目、心臓、肝臓、筋肉、膵臓、脾臓、肺及び腎臓から選択される少なくとも３つの臓器への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。様々な実施形態において、該ベクターは、言及された臓器のうちの少なくとも４つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。多数の実施形態において、該ベクターは、言及された臓器のうちの少なくとも５つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。幾つかの実施形態において、該ベクターは、言及された臓器のうちの少なくとも６つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。他の実施形態において、該ベクターは、言及された臓器のうちの少なくとも７つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。様々な実施形態において、該ベクターは、言及された臓器のうちの少なくとも８つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。特別な実施形態において、該ベクターは、中枢神経系、目、心臓、肝臓、筋肉、膵臓、脾臓、肺及び腎臓への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。特定の実施形態において、該ベクターは、少なくとも中枢神経系（例えば、脳）及び目への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。様々な実施形態において、該ベクターは、少なくとも中枢神経系（例えば、脳）、目、そして肝臓、腎臓及び脾臓のうちの１つへの繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。幾つかの実施形態において、該ベクターは、少なくとも中枢神経系（例えば、脳）、目及び肝臓への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。特別な実施形態において、該ベクターは、少なくとも中枢神経系（例えば、脳）、目、肝臓、腎臓及び脾臓への繊毛病遺伝子の形質導入を提供する。

適切なベクターとしては、アデノ随伴ウイルス－８（ＡＡＶ８）及びアデノ随伴ウイルス－９（ＡＶＶ９）、並びにＡＡＶ８又はＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化された他のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２）が挙げられる。そのようなベクターは、ＷＯ２００５／０３３３２１に記載されている。他の適切なベクターとしては、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ａ及びＡＡＶＰＨＰ.Ｂ(Nature Biotechnology 34, 204-209 (2016))、ＡＡＶ９
．４７(Hum Gene Ther. 2016 Jul;27(7):497-508)、ＡＡＶ－Ｂ１(Mol. Ther. 24, 1247-1257)、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）(Mol Ther 2009; 17: 463-471)、並びにＡＡＶ２－ＴＴ
（ＷＯ２０１５／１２１５０１に記載)が挙げられる。例えばTrends in Molecular Medicine, April 2016, Vol. 22, No. 4及びTher Deliv. 2010 October; 1(4): 517-534に記載される通り、レンチウイルスベクターもまた、用いることができる。

幾つかの実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９などのＡＡＶベクター、ＡＡＶ８若しくはＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ａ、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ｂ、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ－Ｂ１、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）又はＡＡＶ２－ＴＴである。他の実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ８又はＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ａ、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ｂ、ＡＡＶ９．４７及びＡＡＶ－Ｂ１から選択される。様々な実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ８又はＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ａ及びＡＡＶ－ＰＨＰ.Ｂから選択される。多数の実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ８又はＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター、及びＡＡＶ－ＰＨＰ.Ｂから選択さ
れる。特別な実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ８又はＡＡ
Ｖ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクターから選択される。幾つかの実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ８からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ８からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶ２（ＡＡＶ２／８））から選択される。他の実施形態において、該ベクターは、ＡＡＶ９、及びＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶ２（ＡＡＶ２／９））から選択される。

該アデノ随伴ウイルスベクターは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターであってもよい。ＡＡＶは、Kenneth I. Berns, "Parvoviridae: The Viruses and Their Replication," Chapter 69 in Fields Virology (3d Ed. 1996)に記載されたパルボウイルス科の１つである。

全ての公知ＡＡＶ血清型のゲノム編成は、非常に類似している。ＡＡＶのゲノムは、約５，０００ヌクレオチド（ｎｔ）未満の長さの直鎖状一本鎖ＤＮＡ分子である。末端逆位配列（ＩＴＲ）が、非構造複製（Ｒｅｐ）タンパク質及び構造（ＶＰ）タンパク質のための特有のコードヌクレオチド配列に隣接している。ＶＰタンパク質（ＶＰ１、－２及び－３）は、カプシドを形成している。末端１４５ｎｔは、自己相補性であり、Ｔ形ヘアピンを形成するエネルギー的に安定した分子内デュプレックスが形成され得るように組織化される。これらのヘアピン構造は、ウイルスＤＮＡ複製の起点として機能し、細胞内ＤＮＡポリメラーゼ複合体のためのプライマーとして働く。哺乳動物細胞における野生型（ｗｔ）ＡＡＶ感染に続いて、Ｒｅｐ遺伝子（即ち、Ｒｅｐ７８及びＲｅｐ５２タンパク質をコードする）が、それぞれＰ５プロモーター及びＰ１９プロモーターから発現され、両方のＲｅｐタンパク質が、ウイルスゲノムの複製における機能を有する。ＲｅｐＯＲＦにおけるスプライシングイベントが、事実上４つのＲｅｐタンパク質（即ち、Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２及びＲｅｐ４０）の発現をもたらす。しかし、哺乳動物細胞におけるＲｅｐ７８及びＲｅｐ５２タンパク質をコードする非スプライシングｍＲＮＡが、ＡＡＶベクター生成に充分であることが示されている。同じく昆虫細胞において、Ｒｅｐ７８及びＲｅｐ５２タンパク質は、ＡＡＶベクター生成に充分である。

遺伝子治療ベクターとしての使用に適したＡＡＶにおいて、該ベクターゲノムは、典型的には標的細胞への送達のために包装された核酸（例えば、繊毛病遺伝子）を含む。この特別な実施形態によれば、該異種ヌクレオチド配列は、ベクターゲノムのいずれかの末端にあるウイルスＩＴＲの間に配置される。さらなる好ましい実施形態において、該パルボウイルス（例えば、ＡＡＶ）ｃａｐ遺伝子及びパルボウイルス（例えば、ＡＡＶ）ｒｅｐ遺伝子が、鋳型ゲノムから（そしてそれによりそこから生成されたビリオンＤＮＡから）欠失されている。この構造が、パルボウイルスカプシドにより運搬され得る核酸配列（複数可）のサイズを最大にする。

この特別な実施形態によれば、該核酸は、基質のいずれかの末端のウイルスＩＴＲの間に配置される。パルボウイルスゲノムは、１つのＩＴＲのみで機能することが可能である。こうしてパルボウイルスに基づく遺伝子治療ベクターにおいて、該ベクターゲノムは、少なくとも１つのＩＴＲに、しかしより典型的には２つのＡＡＶＩＴＲ（一般にはベクターゲノムのいずれか一方の側、即ち５’末端の１つ及び３’末端の１つ）に隣接される。ベクターゲノム内の核酸と、ＩＴＲの１つ又は複数との間に介在する配列が存在してもよい。

一般に繊毛病遺伝子（即ち、（哺乳動物細胞内の発現のために）繊毛病において突然変異された機能的タンパク質に対応する該タンパク質をコードするヌクレオチド配列））は、２つの通常のＩＴＲの間に配置されるか、又は２つのＤ領域で操作されたＩＴＲのいず
れかの側に配置される、パルボウイルスゲノムに組み込まれる。

一態様において、本発明は、先に記載されたベクターと、１種又は複数の医薬的に許容できる賦形剤と、を含む医薬組成物を提供する。該１種又は複数の賦形剤としては、担体、希釈剤及び／又は他の薬品、医薬剤若しくはアジュバントが挙げられる。

本発明はまた、先に記載された通り治療有効量のベクターを、繊毛病に罹患した患者に投与することを含む、繊毛病を処置する方法を提供する。好ましくは該患者は、ヒトである。

繊毛病が、上記方法で「処置」される場合、これは、繊毛病の１つ又は複数の症状が改善されることを意味する。それは、該症状がもはや患者に存在しなくなるように完全に療養されることを意味しないが、幾つかの方法において、これがあてはまる場合がある。該処置の方法により、繊毛病の１つ又は複数の症状で処置前よりも重症度が低くなる。該処置の方法により、繊毛病の複数の症状で処置前よりも重症度が低くなる場合がある。多臓器における形質導入及び遺伝子発現により、該症状の改善が多臓器で生じる。

「治療有効量」は、（繊毛病の症状を改善するのに充分なレベルに導くために）対象における機能的タンパク質のレベルの上昇など、所望の治療結果を実現するのに必要となる投与量及び期間で効果的となる量を指す。

処置の方法は、対象における機能的タンパク質のレベルの上昇を誘発する。幾つかの実施形態において、該処置の方法は、約正常レベル（即ち、正常な健康対象に見出されるレベル）までの機能的タンパク質レベルの上昇を生じる。一実施形態において、該処置方法は、最も正常なレベルまでの機能的タンパク質レベルの上昇を誘発する。

該ベクターは、多臓器での繊毛病遺伝子の発現を可能にするように、任意の適切な方法で投与されてもよい。特別な実施形態において、該ベクターの単回投与を利用して遺伝子発現を提供し、繊毛病に関連する病状を改善することができる。該ベクターの投与は、全身性の遺伝子発現を提供して、身体全体の繊毛病に関連する病状を改善してもよい。該ベクターは、静脈内又は頭蓋内に投与されてもよい。特別な実施形態において、該ベクターは、静脈内に投与される。幾つかの実施形態において、該ベクターは、頭蓋内に投与される。様々な実施形態において、該ベクターは、静脈内及び頭蓋内に投与される。

該ベクターは、髄腔内に投与されてもよい。これは、単独であり得る、又は静脈内及び／若しくは頭蓋内投与に加えられ得る。

頭蓋内投与は、定位注射を利用した脳の特定領域へのベクターの直接送達である。頭蓋内投与は、網膜下投与、例えば網膜下注射を含まない。

さらに該ベクターは、好ましくは鼻内に投与されるべきではない。鼻内投与経路は、ベクターの発現を鼻内細胞の小区分に制限する可能性があり、身体の他の部分にある主要罹患組織をベクターに標的化させることができない。加えて該鼻内経路は、鼻内細胞の小区分の急速な交換により、導入遺伝子の長期持続的発現を可能にしない。

該ベクターが、複数の投与経路、例えば静脈内及び頭蓋内で投与される場合、該ベクターは、同日に両部位に投与される。幾つかの実施形態において、該複数の投与は、６時間間隔以内、４時間間隔以内、又は２時間間隔以内で与えられる。幾つかの実施形態において、該複数の投与は、同時に与えられる。

該ベクターは、一時点で投与されてもよい。例えば単回注射が、与えられてもよい。該ベクターが、複数の投与経路、例えば静脈内及び頭蓋内で投与される場合、該ベクターは、両部位に１回のみ（そして先に記載された通り少なくとも同日に）投与される。次に、さらなる投与が与えられない。

さらに本発明は、治療における、例えば繊毛病の処置における使用のために、上記のベクターを提供する。

加えて本発明は、繊毛病を処置するための薬剤の製造における上記のベクターの使用を提供する。

本明細書で引用された全ての特許及び文献の参考資料は、全体として参照により本明細書に組み入れられる。

ここに、本発明を以下の通り図のみを参照して実施例により詳細に記載する。
制限消化。Ｘｈｏ１を用いて消化されたＡＡＶ２／８、ヘルパーウイルス及びＢＢＳ１のプラスミドＤＮＡ。１％アガロースゲル上が制限酵素Ｘｈｏ１で消化された各ヘルパープラスミド（ｐＨＧＴＩ、レーン２）、ＡＡＶ２／８プラスミド(ｐＬＴ－ＡＡＶ２／８、レーン３)及びＢＢＳ１プラスミド（ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１、レーン４）のプラスミドＤＮＡを示したゲル電気泳動。HyperLadderが、レーン１に認められる。プラスミドを用いて、ｈＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１を作製した。ヘルパープラスミドのバンドサイズは、それぞれ６３１８ｂｐ及び１１５４９ｂｐ(レーン２）、そしてＡＡＶ２／８プラスミドでは１８６ｂｐ、２１０９ｂｐ及び４８４４ｂｐ(レーン３）であった。ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１では、バンドサイズは、２３６ｂｐ、６４３ｂｐ、１１９５ｂｐ及び５０７８ｂｐ(レーン４）であった。２９３Ｔ細胞のヒトＢＢＳ１トランスフェクション。ＥＦＳ－ＢＢＳ１プラスミドによる２９３Ｔのトランスフェクション後のタンパク質及びｍＲＮＡの発現。Ａ）トランスフェクト及び非トランスフェクト２９３Ｔ細胞から抽出されたｍＲＮＡからの逆転写ＰＣＲ後の２％アガロースゲル。レーン１マーカー、並びにレーン２、４及び６は、トランスフェクトｃＤＮＡを示し；レーン３、５及び７は逆転写されていないトランスフェクト細胞を示し；レーン８、１０及び１２は非トランスフェクトｃＤＮＡを示し、レーン９、１１及び１３は、非トランスフェクトの非逆転写酵素対照を示す。レーン１４は、陰性対照としてのＰＣＲ用のｄｄＨ２０試料を示す。Ｂ）トランスフェクション後のＢＢＳ１タンパク質発現は、トランスフェクション後の２９３Ｔ細胞で可視であった。レーン２、３及び４は、トランスフェクト細胞であり、レーン５、６及び７は、トランスフェクトされていない。ＨＳＰ９０β及びＧＡＰＤＨのタンパク質発現を、内部対照として用いた。網膜及びＣＮＳ（中枢神経系）におけるヒトＢＢＳ１の発現。導入遺伝子のヒトＢＢＳ１発現を示したＲＴ－ＰＣＲ。頭蓋内及び全身送達後のＰ３５動物。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１の頭蓋内注射(Ｉ.Ｃ.）は、脳及び目におけるマウスＢｂｓ１に並んだヒトＢＢＳ１の明確な発現を示しており（黒い矢印）、良好な形質導入及び発現が示される。ヒトＢＢＳ１の明確な発現は、静脈内（全身）注射された動物（Ｉ．Ｖ．）の目で観察される（白い矢印）。マウス及びヒトＢＢＳ１を識別するための特異的プライマーを設計した。ｍＢｂｓ１（マウスＢｂｓ１）；ＡＡＶ－ｈＢＢＳ１（形質導入されたヒトＢＢＳ１）；β－アクチン（β－アクチン陽性対照）；ネフリン（陰性対照）。マウスにおけるＰ０頭蓋内及び全身送達後のＰ１８０（注射後１８０日目）の網膜及びＣＮＳ（中枢神経系）におけるＲＴ－ＰＣＲによるヒトＢＢＳ１の発現。Ａ）ヒトＢＢＳ１の明確な発現は、静脈内（全身）注射された動物（Ｉ．Ｖ．）の脳及び目で観察される。Ｂ）ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１の頭蓋内注射(Ｉ.Ｃ.）は、脳におけるヒトＢＢＳ１の明確な発現を示しており、良好な形質導入及び発現が示される。マウス及びヒトＢＢＳ１を識別するための特異的ヒトプライマーを設計した。Ｍ３９０Ｒ＝Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物。＋／＋＝野生型動物。ＲＴ－＝ＲＴ－ＰＣＲ陰性対照。処置及び非処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}における表現型発現から、Ｐ０頭蓋内処置動物における体重減少が実証される。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１構築物で頭蓋内処置された場合、Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物は、雄及び雌の野生型レベルまでの統計学的有意な体重回復を示している（ｐ値参照）。ＩＣ＝頭蓋内。Ｈｅｔ＝ヘテロ接合型動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。ＷＴ＝野生型動物。Ｍ３９０Ｒ＝ホモ接合動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。エラーバーは、平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）を示す。ｐ値は、非線形曲線フィッティング（ゴンペルツの成長曲線フィッティング）と、続く分散分析及びテューキー検定の後に得られた。処置及び非処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}における表現型発現から、Ｐ０全身処置動物における体重減少が実証される。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１構築物で静脈内処置された場合、Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物は、雄及び雌の野生型レベルまでの体重増加の減弱を示す（ｐ値参照）。ＩＶ＝静脈内。Ｈｅｔ＝ヘテロ接合型動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。ＷＴ＝野生型動物。Ｍ３９０Ｒ＝ホモ接合動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。エラーバーは、平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）を示す。ｐ値は、非線形曲線フィッティング（ゴンペルツの成長曲線フィッティング）と、続く分散分析及びテューキー検定の後に得られた。ゴンペルツ成長非線形回帰解析のグラフ表示。検定された全ての非線形回帰曲線関数の最良にフィットされたゴンペルツ成長。Ａ．頭蓋内Ｐ０処置の雄。Ｂ．全身Ｐ０処置の雄。Ｃ．頭蓋内Ｐ０処置の雌。Ｄ．全身Ｐ０処置の雌。Ｉ．Ｃ．＝頭蓋内。Ｉ．Ｖ．＝静脈内。血清レプチン血漿濃度／体重。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１ＩＶ及びＩＣＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}処置動物は、処置の６ヶ月後に低下された血清レプチン濃度を有した。Ｍ３９０Ｒ＝ホモ接合動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。ＷＴ＝野生型動物。ＩＣ＝頭蓋内処置。ＩＶ＝静脈内処置。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１ＩＶ処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物が処置の６ヶ月後に光受容部喪失の減弱を有したことを示すエオジン・ヘマトキシリン網膜区分。定量については、図１１参照。ＯＮＬ＝外顆粒層。ＩＮ＝内顆粒層。全ての画像が４０倍の対物レンズで撮影された。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１ＩＣ処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物が処置の６ヶ月後に光受容部喪失の減弱を有したことを示すエオジン・ヘマトキシリン網膜区分。定量については、図１１参照。ＯＮＬ＝外顆粒層。ＩＮ＝内顆粒層。全ての画像が４０倍の対物レンズで撮影された。外顆粒層区分の網膜厚の定量。Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}処置動物において回復されたＯＮＬの顆粒の数は、非処置動物に比較して２倍である。ベクターのマップは、主要な特色が示された、以下の実施例で用いられたＥＦＳ及びヒトＢＢＳ１（ＥＦＳ－ｈＢＢＳ１）を含む。このベクターを用いて、ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１ウイルスを生成した。本発明の特定の実施形態において、該プロモーター、繊毛病遺伝子及び制限部位は、最終生成物に応じて異なり得る。Ｐ０頭蓋内ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１送達後５２週目の目及び脳におけるＲＴ－ＰＣＲによるヒトＢＢＳ１の発現。ヒトＢＢＳ１の明確な発現が、ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１の頭蓋内注射（ＩＣ処置）後の注射された動物の目及び脳で観察され、良好な形質導入及び長期持続性の発現が示される。マウス及びヒトＢＢＳ１を識別するための特異的ヒトプライマーを設計し、マウスＢｂｓ１の検出は観察されなかった。Ｍ３９０Ｒ＝Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}、ＷＴ：野生型動物、ＵＴ：非処置、ＩＣ処置：頭蓋内処置。注射の１年後の構築物の有効性。構築物であるＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１での出生期頭蓋内処置１２ヶ月後に、Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}処置の雄は、野生型非処置同腹子に比較して体重減少を継続して示した。ＷＴ＝野生型動物。Ｍ３９０Ｒ＝ホモ接合動物のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}。エラーバーは、平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）を示す。処置５２週後の循環レプチンのレベル。雄及び雌Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物は、レプチンレベルの上昇を示している。雄ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１処置動物は、非処置野生型動物と同じレプチンレベルを有する。処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}対非処置野生型は、有意差がない（ｐ値０．６４７）。非処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}対処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}は、有意なｐ値０．０２７を有する。雌ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１処置動物は、非処置Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物に比較してレプチンレベルの有意な低下を示す（ｐ値０．０４１）。Ｍ：雄、Ｆ：雌、ＷＴ：野生型；ＨＯＭ：Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}、ＵＴ：非処置、ＩＣ：頭蓋内。ＳＥＱＩＤＮＯ:１５～ＳＥＱＩＤＮＯ:２９の全ての構築物での個別のトランスフェクション後のＢＢＳ１の発現を示すリアルタイムＰＣＲ。構築物のトランスフェクション後に、総ＲＮＡを抽出して、ＲＮＡのレベルを定量し、ＳＥＱＩＤＮＯ:１５を有する構築物について正規化させた（ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１）。ＳＥＱＩＤＮＯ:３０～ＳＥＱＩＤＮＯ:４４の全ての構築物での個別のトランスフェクション後のＢＢＳ１０の発現を示すリアルタイムＰＣＲ。構築物のトランスフェクション後に、総ＲＮＡを抽出して、ＲＮＡのレベルを定量し、非トランスフェクトのＨＥＫ２９３Ｔ総ｍＲＮＡを有する構築物について正規化させた。ＳＥＱＩＤＮＯ:１５～ＳＥＱＩＤＮＯ:２９の構築物での個別のトランスフェクション後のＢＢＳ１タンパク質の発現を示すウェスタンブロット。ＩｍａｇｅＪを用いてブロットを定量し、ＢＢＳ１発現レベルをＳＥＱＩＤＮＯ:１５について正規化させた（ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１）。ＩｍａｇｅＪを用いて図１８のブロットを定量し、全てのＢＢＳ１発現レベルをＳＥＱＩＤＮＯ:１５について正規化させた（ＥＦＳＷＴＢＢＳ１）。ほぼ全ての構築物及び新しいＢＢＳ１配列が、初期ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１構築物に比較してＢＢＳ１タンパク質発現の増加を示した。Ｐ０ＡＡＶ２／９－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１を頭蓋内注射された動物の試料からのＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１のＲＴ－ＰＣＲ。Ｂｂｓ１^{＋Ｍ３９０Ｒ}動物を、Ｐ０ＡＡＶ２／９－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１での注射後８日、１４日及び４０日目に殺処分した。総ＲＮＡを抽出して、ｃＤＮＡを合成した。１８８のヌクレオチドの予測されたバンドを有するＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１のＰＣＲを実施して、遺伝子発現を脳及び目で検出した。Ｐ：注射後の日数、Ｃ：注射された対照ビヒクル、ｂｐ：塩基対。

発明の詳細な記載
本発明者らは、簡単な注射により投与され、多臓器を一度に標的化する、単一のベクターを開発した。このアプローチは、代わりのマルチベクターアプローチよりも簡単で、確かにより費用対効果がある。１つより多くの臓器の機能を回復させること（例えば、視力及び体重減少）が、繊毛病患者の健康及び生活の質を改善して人生を変えることになる。

繊毛病において広範囲の臓器病変があることを条件に、中枢神経系及び内蔵症状の両方に取り組む多臓器治療が求められている。さらに、幼児患者における症状の早期出現は、理想的にはそのような治療が可能な限り早期に施されることを必要とする。新生児期での単一治療薬の送達は、多臓器を効果的に標的化して、不可逆的な病状を予防し、費用対効果がある。

これらの目標を実現するために、本発明者らは、アデノ随伴ウイルスを利用して多臓器治療を実現する、遺伝子治療に基づくプロトコルを利用した。近年になるまで、末梢臓器を標的として血液脳関門を交差することが可能なウイルスベクターを見出すことができず、多臓器遺伝子送達が困難であった。しかし、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９が、マウス(Foust KD et al. Nat Biotechnol. 2009;27(1):59-65)及び非ヒト霊長類(Foust KD et al. Nat Biotechnol. 2010; 28(3): 271-4; Bevan AK et al. Mol Ther. 2011; 19(11): 1971-80)
の血液脳関門を交差すること、及び中枢神経系への高度に効率的な遺伝子送達を媒介することが可能であるという発見が、この分野の見通しを変化させた。ここに、ベクター投与の簡便化を検討することを実行可能にし、臓器レジメンごとに１回の投与を利用するよりもむしろ少ない投与経路で多臓器を処置することを可能にする。例えば、新生マウスに緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子を運搬するＡＡＶ８又はＡＡＶ９の静脈内投与が、目をはじめとする脳及び神経系の広範囲かつ包括的な形質導入に導くことが実証された。さらに本発明者らは、このアプローチが内臓器官及び筋系をはじめとする広範囲の全身形質導入も導くことを示すデータを有する(FASEB J. 2015 Sep;29(9):3876-88.)。

バルデ・ビードル症候群など、幼児において症状を提示する多系統及び進行性の障害は、新生児期治療性ＡＡＶ送達の理想的候補である。ＢＢＳを誘発する最も共通する突然変異は、ＢＢＳ１に見出されるため、本発明者らは、１つのＢＢＳネズミ疾患モデルＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}においてヒト遺伝子ＢＢＳ１を運搬するＡＡＶ８及びＡＡＶ９ベクターをテストした。このモデルは、共通する突然変異の「ノックイン」であり、ヒトＢＢＳ表現型（失明及び肥満など）を再現することが十分に検証され、特徴づけられている。外来ＢＢＳ１遺伝子の転写は、標的臓器内で広く発現される哺乳動物のユビキタスＥＦＳプロモーターにより駆動される。このアプローチは、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９の能力を発揮して血液脳関門を交差し、その後、網膜、海馬／歯状回又は視床下部食欲中枢などの神経欠損を標的とし、これによりそれぞれ網膜機能及び肥満を回復させることができる。これらの疾患モデルにおける有効な全身遺伝子移入は、患者のための臨床試験に先立って、ベクターの必要な原理証明、最適な投与量情報、回復の有効性、並びに毒性及び安全性プロファイルを提供する。

本発明者らは、短い伸長因子プロモーター（ＥＦＳ）の制御下にあるヒトＢＢＳ１ｃＤＮＡを、アデノ随伴ウイルス－８（ＡＡＶ２／８）からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶ－２ベクター内にクローニングした。これらのデータから、ＥＦＳ－ＢＢＳ１構築物を効率的にトランスフェクトして、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内でヒトＢＢＳ１を発現することが実証される。Ｐ０の子犬の頭蓋内送達又は全身（ＩＶ）送達を介したウイルス生成及び感染の後、良好な形質導入が網膜及び脳において示された。処置マウスにおける毒性的影響は、観察されなかった。本発明者らは、突然変異体Ｂｂｓ１^{Ｍ３０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物が処置された場合に、肥満及び網膜表現型が高度に救済され得ることを実証することができた。

ＢＢＳ１ヌクレオチド及びアミノ酸配列は、ヒトとマウスの間で高度に保存されている（９２．２％）。患者で最も共通する突然変異であるＢｂｓ１遺伝子のＭ３９０Ｒ突然変異を含むノックインマウスが生成された（Proc Natl Acad Sci USA. 2007 Dec 4; 104(49): 19422-19427）。Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}マウス網膜の連続組織学的検査から、誕生後６ヶ月までに緩やかで完全な内部及び外部区分（ＩＳ及びＯＳ）の進行性の変性が示された。Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}ノックインマウスの網膜電図（ＥＲＧ）は、ａ波及びｂ波における有意な減弱と、ｃ波のより小さな減弱を示し、この変性が円錐形及び円柱形の光受容部細胞に優先的に影響を及ぼし、網膜色素上皮（ＲＰＥ）には影響を及ぼさないことが示唆される。加えて、Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}マウスはまた、脂肪細胞由来レプチンホルモンの高い血清レベルに関連する肥満を発症し、レプチン抵抗性、食物摂取の増加及び自発運動活性の低下が示唆される。同じく、認知及び学習に重要
な領域である線条体及び海馬のサイズ減少など、数多くの神経解剖学的欠損が検出される。これらの表現型は、ヒト疾患を再現し、新規な処置を評定するのに理想的なマウスモデルを作製させる。マウスＢｂｓ１０及びヒトＢＢＳ１０遺伝子は両者とも、２つのエキソンによりコードされる。それらのタンパク質は、６７％同一のアミノ酸配列で保存されている。Ｂｂｓ１０ヌル（Ｂｂｓ１０^－／－）マウスは、Ｂｂｓ１０のエキソン２を完全に欠いている。Ｂｂｓ１０^－／－マウスは、周産期に矮小で８日後から（from 8 onwards）肥満を発症するという典型的なＢＢＳ表現型を示し、３ヶ月齢で過体重になる。Ｂｂｓ１０^－／－マウスはまた、過食症及び高レベルの循環レプチンを発症する。Ｂｂｓ１０^－／－マウスは、重度の網膜変性を発症し、３ヶ月齢までに光受容部の内部ＩＳ及びＯＳ並びにＯＮＬの明確な喪失を生じる(Cilia 2015 4:10)。

材料と方法
ヒトＢＢＳ１ｃＤＮＡ（ＳＥＱＩＤＮＯ:１－ＮＭ＿０２４６４９．４）が
ＡＡＶ２／８ウイルスプラスミド内でのＥＦＳプロモーター（ヒト真核生物翻訳伸長因子１ α１ショートプロモーター）の制御下でクローニングされた構築物を生成した。この実験計画の目標は、バルデ・ビードル症候群１（ＢＢＳ１）のためのウイルス遺伝子治療に向けて始動することであるため、ヒト野生型ＢＢＳ１ｃＤＮＡを含み、伸長因子１αショート（ＥＦＳ）プロモーターにより駆動されるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を生成した。ウイルス生成のために、通常の方法を用いた。４０００ｃｍ^２のＨＥＫ２９３Ｔ細胞単層細胞に、ＥＦＳ－ＢＢＳ１－ＡＡＶ－ＩＴＲ含有プラスミド、ＡＡＶ２Ｒｅｐ－Ｃａｐプラスミド及びヘルパープラスミドをトランスフェクトした。細胞変性効果を示したら、細胞を回収して溶解し、ウイルスを遊離させた。該アデノ随伴ウイルスを、２つの連続塩化セシウム勾配を利用した遠心分離により精製した。最終生成物を脱塩し、ウイルス粒子のために分光光度法で、そしてＰＦＵ／ＩＦＵのためにプラーク形成アッセイで力価測定した。

本発明者らはまた、ＥＦＳプロモーターの制御下でＢＢＳ１０野生型ｃＤＮＡ（ＳＥＱ
ＩＤＮＯ:２）を、そしてＢＢＳ１（ＳＥＱＩＤＮＯ:１１及び１２）及びＢＢＳ１０（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３及び１４）のための完全に新規なコドン最適化配列をクローニングして、遺伝子発現及び有効性のレベルを改善した。新規な配列を、ＥＦＳ、ＣＡＧ、ＣＭＶ、ＣＢＡ、ＵＢＣプロモーターの制御下でクローニングした。記載されたプロモーターと、記載されたＢＢＳ１及びＢＢＳ１０配列との全ての可能な組み合わせを、ｐＡＶ－ＡＡＶ－ＩＴＲ含有プラスミドにクローニングした。プロモーターをＳｐｅＩとＥｃｏＲＩの制限部位の間にクローニングし、その後、プロモーターの３’下流側のＢＢＳコード配列をＥｃｏＲＩ及びＳａｌＩ制限酵素で挿入した。クローンを配列決定して、プロモーター及びコード配列内の望まない突然変異をチェックした。該プロモーター及び遺伝子配列を含有する全ての配列を、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５～ＳＥＱＩＤＮＯ:
４４として提示する。

改善された遺伝子発現をテストするために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、Lipofectamine 2000プロトコルを利用し、１μｇ／μｌＤＮＡを用いて、全ての異なる構築物：ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＷＴＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＷＴＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＷＴＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＷＴＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１、ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＷＴＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ１－
ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＷＴＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＷＴＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＷＴＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０、ｐＡＶ－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０でトランスフェクトした。

細胞を、総ｍＲＮＡのために０．５ｍｌ Trizolで回収した。総ｍＲＮＡを定量して、リアルタイムＰＣＲを、各トランスフェクションのためにｍＲＮＡ１μｇを利用して実施した。各配列の特異的プライマーを、各構築物のために使用して、ヒトＢＢＳ１発現のレベルを定量した。Ｃｔ値発現レベルを、全てのＢＢＳ構築物のためにＥＦＳ－ＢＢＳ１について、そしてＢＢＳ１０構築物のために非トランスフェクト試料について正規化した。

別の実験において、細胞を同じくＢＢＳ１タンパク質発現のためにトランスフェクトした。ＲＩＰＡ緩衝液を用いて、総タンパク質を抽出し、総タンパク質を各トランスフェクションのために定量した。各トランスフェクションのための１μｇ／μｌの試料タンパク質を、４～２０％アクリルアミドゲルにロードした。ウェスタンブロットを、ＢＢＳ１に対する特異的抗体で実施し、ゲルをスキャニングして、分析した。ローディング対照として、第二のウェスタンブロットをＧＡＰＤＨ抗体で実施した。最初に、各レーンをＧＡＰＤＨについて正規化し、その後、各ゲルをＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１発現に正規化することにより、ブロットを定量した。

ウイルス投与及び力価
Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／＋}雄とＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／＋}雌の間で、時限的な交尾（timed matings）を調製した。Ｐ０の子犬を、性別及びＢｂｓ１遺伝子型についてジェノタイプ
化した。アデノウイルス随伴ベクターを、ａ）頭蓋内（３．５×１０^１３ｖｇ／ｍｌ（ベクターゲノム／ｍｌ）５μｌ）及び全身に（ＩＶ）（３．５×１０^１３ｖｇ／ｍｌ２０μｌ）の２つの投与経路を介してＰ０動物に与えた。全身注射は、側部顔面静脈を通して実行した。

本発明者らは、３つの異なる動物群：Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物、野生型及びヘテロ接合型に注射した。非注射対照を、各群の対照として用いた。総数６匹／群を用いた。処置された動物は、注射の６ヶ月後に任意の物理的又は行動的苦痛を示さない。

コドン最適化配列及び構築物での結果に基づき、本発明者らは、ヒトＢＢＳ１を異なる組織に送達及び発現する新しい構築物の能力をテストすることを決定した。著者らは、新しいウイルスカプシド（ＡＡＶ２／９）、新しいＣＡＧプロモーター及び新しいＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１構築物（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）をテストした。ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１構築物（ＳＥＱＩＤＮＯ：２８）を含むＡＡＶ２／９ベクターを生成して、Ｐ０新生犬に投与してＢｂｓ１活性を回復させることによる有効性をテストした。Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}新生動物に、０．１７５×１０^１２ｖｇ／動物を５μｌ注射で頭蓋内注射した。対照、Ｂｂｓ１^{＋／Ｍ３９０}及びＷＴ動物に、ＡＡＶ２／９－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１又はビヒクルを注射して、注射後１４及び４０日目にヒトＢＢＳ１発現についてテストした。

結果
本発明者らは、遺伝子治療技術を利用した、繊毛病のバルデ・ビードル症候群により罹患された多組織の処置を初めて示す。ユビキタスプロモーターＥＦＳの制御下でのヒトＢＢＳ１ｃＤＮＡは、ＡＡＶ２／８ベクターにおけるＢＢＳ１タンパク質の発現を形質導
入した。図１は、クローニングされたｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１の消化後の正しいサイズを示しており（レーン４）、正確なクローニングが実証されている。このＡＡＶを作製するために、プロデューサープラスミドｐＨＧＴＩ、ｐＬＴ－ＡＡＶ２－８、及びｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１を得た。ヘルパープラスミドはｐＨＧＴＩであり、単純ヘルペスウイルスタンパク質をコードする配列を含む。これらは、ＡＡＶの効率的生成に必須である。ｐＬＴ－ＡＡＶ２－８プラスミドは、ＡＡＶ２及びＡＡＶ８からそれぞれＡＡＶｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子をコードする配列を含む。ｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ複製に必須であり、ｃａｐ遺伝子は、カプシドタンパク質をコードし、ＡＡＶの向性を決定する。最後に、該ｐＬＴ－ＡＡＶ２－８プラスミドは、ＢＢＳ１ｃＤＮＡと共に、ＡＡＶ末端逆位配列を含み、ＥＦＳプロモーターにより制御される。それは、ＡＡＶ内に包装されて細胞に送達されるこれらの配列である。

得られたプロデューサープラスミドが、予測された通りであるかを評定するために、ｐＬＴ－ＡＡＶ２－８、ｐＨＧＴＩ、及びｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１プラスミドＤＮＡを消化することにより、制限酵素消化を実行した（図１）。ｐＬＴ－ＡＡＶ２－８プラスミドのバンドサイズは、それぞれ１８６ｂｐ、２１０９ｂｐ及び４８４４ｂｐであった（レーン３、図１）。導入遺伝子ｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１構築物の場合、バンドサイズは、２３６ｂｐ、６４３ｂｐ、１１９５ｂｐ及び５０７８ｂｐであった(レーン４、図１）。ヘ
ルパープラスミドの場合、可視のバンドサイズは、それぞれ６３１８ｂｐ及び１１５４９であり（レーン２、図１）、プラスミド内に追加の望まないＤＮＡが存在しないことが検証された。

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をｐＡＶ－ＥＦＳ－ＢＢＳ１プラスミドでトランスフェクトした場合に、ＢＢＳ１の高発現が観察された。このデータから、ＥＦＳがインビトロでのヒトＢＢＳ１の発現を駆動する可能性が示される（図２）。本発明者らは、ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１を生成及び精製して、頭蓋内及び全身送達でＰ０野生型胚に注射した。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１の形質導入能力が、網膜及び脳の両組織で実証された。網膜及び脳におけるヒトＢＢＳ１の特異的発現が、認められた（図３、図４）。

Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}マウスモデルにおけるＢＢＳ１発現の有効性を評定する機能的試験を実行した。野生型、ヘテロ接合型Ｂｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／＋}及びＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}の同腹子に、ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１をＰ０で注射した。並行して、３つの遺伝子型全てからの非処置動物のコホートを、対象として飼育した。本発明者らは、このコホートを２６週間追跡し、各動物の体重を毎週測定した。頭蓋内及び全身注射の両方のＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物における体重維持について、有意な改善が実証された（図５～７）。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１で処置された野生型動物と非処置動物の間に、体重差は観察されなかった。ヒトＢＢＳ１が、頭蓋内注射の５２週後に目及び網膜において発現されることが見出されたため、ヒトＢＢＳ１発現レベルが少なくとも１年間持続することが示された（図１３）。体重の調節における改善もまた、図１４に示される通り、１年間全体を通して維持された。非線形回帰と、続くテューキー検定統計解析を含む一元配置分散分析の工程により、体重の救済が、非処置動物に比較してＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１で処置されたＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物で有意であることが、統計学的に立証された（図６）。血清中のレプチンレベルを、分析した。ＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１で静脈内及び頭蓋内処置されたＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物において、正常なレプチンレベルまで回復した（図８）。正常なレプチンレベルは、出生時にＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１で処置された雄及び雌の両方で５２週間維持された（図１５）。

Ｐ０にＡＡＶ２／８－ＥＦＳ－ＢＢＳ１で処置されたＢｂｓ１^{Ｍ３９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物はまた、外顆粒細胞ＯＮＬ数損失の減弱を示した。その減弱は、非処置Ｂｂｓ１^Ｍ３
^{９０Ｒ／Ｍ３９０Ｒ}動物に比較して、６ヶ月目の処置動物の網膜に存在する生存する光受容部の顆粒数を定量することにより実証された。この効果は、静脈内及び頭蓋内の両方の処置群で観察された（図９、１０及び１１）。

研究者らは、新規なコドン最適化配列を用いて、ＢＢＳ１ｍＲＮＡの相対的発現がＢＢＳ１構築物のトランスフェクション後に改善されることを示した（図１６参照）。ＣＭＶプロモーターは、最高レベルの発現を示し、その後にＣＡＧプロモーターの発現を示した。ＢＢＳ１コドン最適化配列であるＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１及びＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１は、野生型ヒトＢＢＳ１ｃＤＮＡよりもかなり良好な発現を有する。良好な発現を有する該構築物は、１９倍増加のＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１、１０倍増加のＣＭＶ－ＷＴＢＢＳ１、及び７倍増加のＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１である。全ての発現を、ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１発現に対して正規化する。新規なＢＢＳ１０構築物でのトランスフェクションもまた、ヒトＢＢＳ１０発現の増加を示し、プロモーター－ＢＢＳ１０配列の組み合わせのほとんどにおいて、新しいコドン最適なＢＢＳ１０配列は、ＢＢＳ１０ＲＮＡをより良好な収率で送達する（図１７）。

全てのＢＢＳ１構築物のトランスフェクションからのタンパク質抽出物のウェスタンブロットは、全てのＢＢＳ１構築物のためのタンパク質発現の増加を示した。ＢＢＳ１（６５ｋＤａ）及びＧＡＰＤＨ（３８ｋＤａ）の特異的バンド（図１８参照）が検出された。タンパク質量の分析及び正規化は、図１９に示された通り実施した。

ゲルの分析から、発現を駆動するために用いられるプロモーターに関わらず、新しいコドン最適化配列であるＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１及びＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ２がどのようにして野生型ＢＢＳ１よりも良好にＢＢＳ１を発現することができるかが示される。最高の発現が、配列ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１で見出され、それはＣＭＶプロモーターでは３３倍増加を、そしてＣＡＧプロモーターでは２４倍増加を実現する。

本発明者らは、ベクターの形質導入の４０日後に、脳及び目におけるＡＡＶ２／９－ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１構築物中の新しいコドン最適化配列ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１の発現を実証した（図２０参照）。バンドの特異性をチェックするために、バンドを切断して洗浄し、サンガー配列決定を行い、ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１の正しい配列を観察した。

考察
これらの結果は、本発明者らが野生型ＢＢＳ１タンパク質を発現するヒト機能性ＢＢＳ１遺伝子を、遺伝子治療ベクターの単回投与により複数の罹患した臓器に送達し得たことを実証している。ＣＮＳ中のＷＴＢｂｓ１の発現増加に続いて、体重減少及び循環レプチン減少により示された通り視床下部レプチン調節機能が回復した。同様に、目におけるヒトＢＢＳ１の発現に続いて、全身送達６ヶ月後の網膜変性が減弱した（図３～１５）。

ほとんどの繊毛病の多組織的性質が、単回処置による異なる幾つか又は全ての罹患臓器の処置を困難にする。特異的臓器を処置するために遺伝子治療を現在開発しているという状況においても、その遺伝子治療は、その特異的表現型のみに有用であり、より疾病をより全般的に処置することはないであろう。

全ての繊毛病は、異なる重症度で罹患された同じ臓器を有する（N Engl J Med 2011; 364:1533-1543 April 21, 2011のレビュー参照）。それらの全てのうち、ＢＢＳは、より
多くの臓器がＢＢＳ遺伝子内の突然変異により直接罹患されている繊毛病の１種である。本発明者らは、遺伝子治療が単一ベクターの投与で複数の罹患組織を標的化し得ることを立証した。それゆえ本発明は、単回投与により、罹患した臓器内の特異的繊毛病遺伝子を
標的化して機能を回復させ得るであろう。

一部の繊毛機能による網膜障害の場合のように、繊毛病が主に単一臓器を罹患している場合であっても、静脈内投与、頭蓋内投与、並びに／又は静脈内及び頭蓋内投与が、網膜下治療の現在の技術よりも効果的でリスクを伴わないであろう。

他の繊毛病の処置
先に記載された実験で、繊毛病、この場合バルデ・ビードル症候群を担う突然変異遺伝子の機能を交換するタンパク質の全身発現が、繊毛病により罹患された一部又は全ての臓器を処置する効果的方法になることが示される。それゆえこれは、過去の試みよりも効果的な、繊毛病を処置する方法となる。全ての繊毛病は、繊毛機能又は構造に何らかの形で影響を及ぼす類似範囲の障害の一部である。その関連性の表現型による収穫が、同じ遺伝子が１つより多くの繊毛病に因果関係があることを見出されている、ということである。異なる繊毛病で共有される遺伝子を見出すことができ、例えばＭＫＫＳ／ＢＢＳ６は、バルデ・ビードル症候群及びマキュージック・カウフマン症候群に関連する。同じ臓器が罹患したことを意味する表現型発現の共有、及び同じ遺伝子が１つより多くの繊毛病に関与することを意味する遺伝的等質性という事実により、本発明のこの遺伝子送達及び発現が、多くの繊毛病を処置するための特有のアプローチになる。それゆえこのアプローチは、バルデ・ビードル症候群のみに限定されず、多くの繊毛病に適用可能である。その上、全ての繊毛病が、単一遺伝子内の突然変異により誘発され、それゆえ適当な非突然変異遺伝子の全身発現が、繊毛病関連の病状を全身で改善させる。

先に実証された通り、バルデ・ビードル症候群は、この遺伝子治療アプローチを用いて処置され得る。以下の表は、突然変異を生じてバルデ・ビードル症候群に関連する表現型の病状を誘発し得る多数の遺伝子を示している。それゆえ野生型非突然変異タンパク質を発現する適当な遺伝子を含む先に記載された遺伝子治療ベクターを使用すれば、バルデ・ビードル症候群を処置することができる。

加えて、バルデ・ビードル症候群に関連する遺伝子の幾つかは、他の関係する繊毛病にも関連づけられている。その結果、適当な遺伝子を用いた上記のアプローチを利用して、ジュベール症候群、メッケル・グルーバー症候群、髄質性嚢胞腎、シニア・ローケン症候群、マキュージック・カウフマン症候群及びレーバー先天性黒内障などの他の繊毛病を処置することもできる。例えばマキュージック・カウフマン症候群は、ＭＫＫＳ／ＢＢＳ６遺伝子内の突然変異によって誘発される。それゆえ、野生型ＭＫＫＳ／ＢＢＳ６タンパク質が発現されるようにＭＫＫＳ／ＢＢＳ６遺伝子の発現を提供するベクターを用いて、マキュージック・カウフマン症候群及びバルデ・ビードル症候群を処置又は改善することができる。このことは、以下の表で参照される様々な他の繊毛病にもあてはまる。

配列
ＳＥＱＩＤＮＯ．１－ヒトバルデ・ビードル症候群１（ＢＢＳ１）ヌクレオチド配列（ＷＴ）、ｃＤＮＡ（ＮＭ＿０２４６４９．４）
ＳＥＱＩＤＮＯ. ２－ヒトバルデ・ビードル症候群１０（ＢＢＳ１０）ヌクレオチド配列（ＷＴ）、ｃＤＮＡ（ＮＭ＿０２４６８５．３）
ＳＥＱＩＤＮＯ. ３－短い伸長因子（ＥＦＳ）プロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４－ＣＡＧプロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ５－ユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ６－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター配列ＳＥＱＩＤＮＯ. ７－ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター配列ＳＥＱＩＤＮＯ. ８－ニワトリベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ９－ヒトＢＢＳ１全長タンパク質配列（Ｑ８ＮＦＪ９）
ＳＥＱＩＤＮＯ. １０－ヒトBＢＳ１０全長タンパク質配列（Ｑ８ＴＡＭ１）
ＳＥＱＩＤＮＯ. １１－ヒトＢＢＳ１タンパク質をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列（ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１と称する)
ＳＥＱＩＤＮＯ. １２－ヒトＢＢＳ１タンパク質をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列(ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する)
ＳＥＱＩＤＮＯ. １３－ヒトＢＢＳ１０タンパク質をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列(ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０と称する)
ＳＥＱＩＤＮＯ. １４－ヒトＢＢＳ１０タンパク質をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列(ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する)
ＳＥＱＩＤＮＯ１５－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及び野生型Ｂ
ＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２３８～３０１９）を含む構築物（ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ１６－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２４３～３０２４）を含む構築物（ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ１７－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及びＣＯＳＥＱ２
－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２４３～３０２４）を含む構築物（ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ１８－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及び野生型
ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８１～３０６２）を含む構築物（ＵＢＣ－ＷＴＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ１９－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及びＣＯＳ
ＥＱ１－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８５～３０６６）を含む構築物（ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ１１ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２０－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及びＣＯＳ
ＥＱ２－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８５～３０６６）を含む構築物（ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２１－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及び野生型
ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ６２６～２４０７）を含む構築物（ＣＭＶ－ＷＴＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２２－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及びＣＯＳ
ＥＱ１－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ６３０～２４１１）を含む構築物（ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２３－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及びＣＯＳ
ＥＱ２－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ６３０～２４１１）を含む構築物（ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２４－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及び野生型Ｂ
ＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ４６９～２２５０）を含む構築物（ＣＢＡ－ＷＴＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２５－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ４７３～２２５４）を含む構築物（ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２６－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及びＣＯＳＥ
Ｑ２－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ４７３～２２５４）を含む構築物（ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２７－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及び野生型Ｂ
ＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ７１２～２４９３）を含む構築物（ＣＡＧ－ＷＴＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２８－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ７１６～２４９７）を含む構築物（ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ２９－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及びＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１ヌクレオチド配列（ｎｔ７１６～２４９７）を含む構築物（ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３０－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及び野生型Ｂ
ＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２４３～３４１４）を含む構築物（ＥＦＳ－ＷＴＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３１－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２４３～３４１４）を含む構築物（ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３２－ＥＦＳプロモーター（ｎｔ４１～２７２）及びＣＯＳＥ
Ｑ２－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２４３～３４１４）を含む構築物（ＥＦＳ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３３－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及び野生型
ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８５～３４５６）を含む構築物（ＵＢＣ－ＷＴＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３４－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及びＣＯＳ
ＥＱ１－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８５～３４５６）を含む構築物（ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ１ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３５－ＵＢＣプロモーター（ｎｔ２９～１１９８）及びＣＯＳ
ＥＱ２－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ１２８５～３４５６）を含む構築物（ＵＢＣ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３６－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及び野生型
ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ６３０～２８０１）を含む構築物（ＣＭＶ－ＷＴＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３７－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及びＣＯＳ
ＥＱ１－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ６３０～２８０１）を含む構築物（ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３８－ＣＭＶプロモーター（ｎｔ３６７～５７０）及びＣＯＳ
ＥＱ２－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ６３０～２８０１）を含む構築物（ＣＭＶ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ３９－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及び野生型Ｂ
ＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ４７３～２６４４）を含む構築物（ＣＢＡ－ＷＴＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ４０－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ４７３～２６４４）を含む構築物（ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ４１－ＣＢＡプロモーター（ｎｔ４２～３１９）及びＣＯＳＥ
Ｑ２－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ４７３～２６４４）を含む構築物（ＣＢＡ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ４２－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及び野生型Ｂ
ＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ７１６～２８８７）を含む構築物（ＣＡＧ－ＷＴＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ４３－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及びＣＯＳＥ
Ｑ１－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ７１６～２８８７）を含む構築物（ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ１－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ４４－ＣＡＧプロモーター（ｎｔ３５～５６２）及びＣＯＳＥ
Ｑ２－ＢＢＳ１０ヌクレオチド配列（ｎｔ７１６～２８８７）を含む構築物（ＣＡＧ－ＣＯＳＥＱ２－ＢＢＳ１０と称する）
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４５－代わりのＣＭＶプロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４６－代わりの短い伸長因子（ＥＦＳ）プロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４７－代わりのＣＡＧプロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４８－代わりのユビキチンＣ（ＵＢＣ）プロモーター配列
ＳＥＱＩＤＮＯ. ４９－代わりのニワトリベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーター配列

Claims

ベクターを含む、バルデ・ビードル症候群を処置するための医薬組成物であって、
前記ベクターが、繊毛病遺伝子に動作可能に連結されたプロモーターを含み、
前記プロモーターが、形質導入された臓器における前記繊毛病遺伝子の発現を提供し得るユビキタスプロモーターであり、
前記繊毛病遺伝子が、ＳＥＱＩＤＮＯ．１のヌクレオチド配列を有するか、又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有し、機能的ヒトＢＢＳ１タンパク質をコードし、
前記医薬組成物が、静脈内及び／又は頭蓋内投与されること、並びに、多臓器への前記繊毛病遺伝子の形質導入を提供することを特徴とする、医薬組成物。
前記ベクターがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター又はレンチウイルスベクターである、請求項１に記載の医薬組成物。
前記ベクターがＡＡＶベクターである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
前記ベクターが、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ８若しくはＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクター、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ａ、ＡＡＶ－ＰＨＰ.Ｂ、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ－Ｂ１、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）又はＡＡＶ２－ＴＴから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ベクターが、ＡＡＶ８ベクター、ＡＡＶ９ベクター、又はＡＡＶ８若しくはＡＡＶ９からのカプシドタンパク質でシュードタイプ化されたＡＡＶベクターである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記プロモーターが、短い伸長因子プロモーター（ＥＦＳ）、ＣＡＧプロモーター、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ）、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセラートキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）及びベータアクチンプロモーターから選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記プロモーターが、ＳＥＱＩＤＮＯ．３、ＳＥＱＩＤＮＯ．４、ＳＥＱＩ
ＤＮＯ．５、ＳＥＱＩＤＮＯ．６、ＳＥＱＩＤＮＯ．７、ＳＥＱＩＤＮＯ．８及びＳＥＱＩＤＮＯ．４５から選択される配列を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記プロモーターが、ＳＥＱＩＤＮＯ．４又はＳＥＱＩＤＮＯ．４７のヌクレオチド配列を有し得るＣＡＧプロモーターである、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
１種又は複数の医薬的に許容できる賦形剤を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
一時点で投与され、反復投与されない、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。