JP7789304B2 - Ｃｄ４７抗体及びその応用 - Google Patents

Description

本発明は生物免疫技術分野に関し、特に完全ヒト抗ＣＤ４７のＩｇＧ抗体に関し、より具体的には顕著なヒト赤血球の血球凝集反応、ヘモグロビン減少、貧血及び／又は血小板減少を引き起こさないＣＤ４７抗体、これらの抗体の調製方法及び薬物の調製におけるこれらのモノクローナル抗体の応用に関する。

ＣＤ４７は、インテグリン関連タンパク質（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ、ＩＡＰ）とも呼ばれ、細胞表面に広く発現する膜貫通糖タンパク質であり、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００７）。ＣＤ４７は、そのリガンドであるシグナル調節タンパク質α（Ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎａ、ＳＩＲＰα）に結合することで、マクロファージの貪食作用を阻害する（ＭａｔｏｚａｋｉＴ、ｅｔ ａｌ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００９）。ＣＤ４７は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞とＴ細胞急性白血病、非ホジキンリンパ腫などの多くの悪性腫瘍において全て過剰発現しており、「食うな」（「Ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」）というシグナルをマクロファージに伝達することで、免疫監視から逃れ、且つＣＤ４７の高発現は臨床予後不良に関連することが研究で確認されている（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２）。

米国特許出願２００９／０１９１２０２において、スタンフォード大学のＷｅｉｓｓｍａｎ教授のチームは、同所性免疫不全マウスに対する異種移植動物モデルの実験を通じて、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体を投与することで大きな腫瘍の成長と転移を阻害することができ、小さな腫瘍を治癒することができることを明らかにしたことが開示されている。米国特許出願２０１６／０２５１４３５は、腫瘍の治療における抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の応用が開示されている。特許出願ＷＯ２０１３０５６３５２は、血液腫瘍、特に白血病の治療に用いられるヒト化抗ヒトＳＩＲＰαの全長モノクローナル抗体及びそれに由来する抗体断片が記載されている。ＣＤ４７－ＳＩＲＰαシグナル伝達経路を遮断すると、マクロファージによる腫瘍細胞の貪食を促進し、腫瘍の免疫治療に新しい手段を提供することができる。

本発明は、ＣＤ４７を認識して結合する抗体を提供する。幾つかの実施形態において、本発明の抗体はヒトＣＤ４７を認識して結合することができる。本発明の抗体はＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻止することができるとともに、赤血球の顕著な血球凝集反応を引き起こさない。本発明により提供される抗体は「ＣＤ４７抗体」と総称される。

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体は、非限定的な実施例の方法を通じてヒト又はマカクＣＤ４７を特異的に認識すること、ＣＤ４７とそのリガンドＳＩＲＰαとの相互作用を効果的に阻害すると同時に顕著な赤血球の血球凝集反応を引き起こさないこと、及び効果的な抗腫瘍活性を有することなど、複数の必要な特性が示されている。

幾つかの実施形態において、本発明は、ヒトインテグリン関連タンパク質（ＣＤ４７）に特異的に結合するとともに、１、２、３、４、５又は６個の下記のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体又は抗原結合断片を提供し、そのうち：
（ａ） ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列、又は配列番号１４の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号１４の変異体を含み、
（ｂ） ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列、又は配列番号１７の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号１７の変異体を含み、
（ｃ） ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列、又は配列番号２３の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号２３の変異体を含み、
（ｄ） ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号３０～３１に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、
（ｅ） ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号３２～３３に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、及び
（ｆ） ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号３４～３５に示される何れか１つのアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態において、本発明は、ヒトインテグリン関連タンパク質（ＣＤ４７）に特異的に結合するとともに、１、２、３、４、５又は６個の下記のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２及びＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体又は抗原結合断片を提供し、そのうち：
（ａ） ＶＨ ＣＤＲ１は、配列番号１４～１６に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、
（ｂ） ＶＨ ＣＤＲ２は、配列番号１７～２２に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、
（ｃ） ＶＨ ＣＤＲ３は、配列番号２３～２９に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、
（ｄ） ＶＬ ＣＤＲ１は、配列番号３０～３１に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、
（ｅ） ＶＬ ＣＤＲ２は、配列番号３２～３３に示される何れか１つのアミノ酸配列を含み、及び
（ｆ） ＶＬ ＣＤＲ３は、配列番号３４～３５に示される何れか１つのアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態において、本発明は、ヒトインテグリン関連タンパク質（ＣＤ４７）に特異的に結合するとともに、１、２、３、４、５又は６個の下記の配列を含む抗体は抗原結合断片を提供する：
（ａ） 配列番号１４に示されるＶＨ ＣＤＲ１、又は配列番号１４の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号１４の変異体、
（ｂ） 配列番号１７に示されるＶＨ ＣＤＲ２、又は配列番号１７の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号１７の変異体、
（ｃ） 配列番号２３に示されるＶＨ ＣＤＲ３、又は配列番号２３の配列において表１に示される１～３個のアミノ酸置換を有する配列番号２３の変異体、
（ｄ） 配列番号３０～３１に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ１、
（ｅ） 配列番号３２～３３に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ２、又は
（ｆ） 配列番号３４～３５に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ３。

幾つかの実施形態において、本発明は、ヒトインテグリン関連タンパク質（ＣＤ４７）に特異的に結合するとともに、下記のものを含む抗体は抗原結合断片を提供する：
（ａ） 配列番号１４～１６に示される何れか１つのＶＨ ＣＤＲ１、
（ｂ） 配列番号１７～２２に示される何れか１つのＶＨ ＣＤＲ２、
（ｃ） 配列番号２３～２９に示される何れか１つのＶＨ ＣＤＲ３、
（ｄ） 配列番号３０～３１に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ１、
（ｅ） 配列番号３２～３３に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ２、又は
（ｆ） 配列番号３４～３５に示される何れか１つのＶＬ ＣＤＲ３。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１１、３６～４４、５０及び５６から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１１、３６～４４、５０及び５６の何れか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１２～１３、４５～４９、５１～５５及び６５から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１２～１３、４５～４９、５１～５５及び６５の何れか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

幾つかの実施形態において、本発明は、ヒトインテグリン関連タンパク質（ＣＤ４７）に特異的に結合するとともに、配列番号１４に示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３０に示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２に示されるＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号３４に示されるＶＬ ＣＤＲ３を含む抗体又は抗原結合断片を提供する。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、Ｋａｂａｔに従って番号付けられた以下の１つ又は複数から選ばれるアミノ酸残基変異を含む重鎖可変領域ＶＨを含む：
（ａ） Ｒ８１Ｋ、及び
（ｂ） Ｒ８２ａＳ。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１１及び５０から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１１及び５０の何れか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３、４５～４９、５１～５５及び６５から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１３、４５～４９、５１～５５及び６５の何れか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１１又は５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨと、配列番号１３又は６５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬとを含む。

幾つかの実施形態において、本明細書のＣＤ４７抗体は、ヒト又はマカクＣＤ４７に特異的に認識して結合し、上記抗体は、配列番号１１、３６～４４、５０から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列の重鎖可変領域及び／又は配列番号１２、１３、４５～４９、５１～５５、６５から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、配列番号６０及び６２～６３から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列を含む重鎖Ｈと、配列番号６１及び６４から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌとを含む。

幾つかの実施形態において、ＣＤ４７抗体が存在しない場合でのＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用のレベルに比べると、本発明のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％の相互作用を阻害する。

幾つかの実施形態において、上記抗体は、配列番号３又は４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。

ＩｇＧ１重鎖定常領域配列（配列番号３）：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

ＩｇＧ４重鎖定常領域配列（配列番号４）：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

軽鎖定常領域配列（配列番号５）
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体は顕著な細胞凝集を引き起こさず、例えば本発明のＣＤ４７抗体は顕著な赤血球の血球凝集反応を引き起こさない。幾つかの実施形態において、従来のＣＤ４７抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４が存在する場合での凝集レベルに比べると、本発明のＣＤ４７抗体が存在する場合での凝集レベルが、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９９％低下すると、本発明のＣＤ４７抗体は顕著な凝集レベルを引き起こさないことが示されている。幾つかの実施形態において、抗体の濃度が４００ｐＭと８００ｎＭとの間にある場合、本発明のＣＤ４７抗体は顕著な細胞凝集を引き起こさない。

幾つかの実施形態において、当該分野で既知の抗体に比べると、本発明の抗体は腫瘍モデルにおいても顕著に有効である。例えば、本発明のＣＤ４７抗体が存在する場合、腫瘍細胞に対するマクロファージの貪食能力は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９９％向上する。

幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選ばれるＩｇＧアイソタイプである。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、ＩｇＧ４ＰとＩｇＧ４ＰＥから選ばれるＩｇＧアイソタイプである。そのうち、ＩｇＧ４Ｐは、ＩｇＧ４ヒンジ領域のＳｅｒ２２８部位をＰｒｏに変異させて鎖交換を防止することを指す。ＩｇＧ４ＰＥは、ＩｇＧ４ヒンジ領域のＳｅｒ２２８部位をＰｒｏに変異させて鎖交換を防止し、定常領域内のＬｅｕ２３５をＧｌｕに変異させてＦｃ受容体の相互作用を改変させることを指す。

幾つかの実施形態において、上記抗体は、キメラ、ヒト化又は完全ヒトのものである。幾つかの実施形態において、上記抗体はヒトＣＤ４７に結合する。

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、単離したＣＤ４７抗体又は抗原結合断片である。

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体又はその断片である。

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、がん又は感染症を治療する薬物の調製に適用することができる。幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、固形腫瘍又は血液腫瘍を治療する薬物の調製に適用することができる。幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳がん、卵巣がん、頭頸部がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、乳がん、卵巣がん、肺がん、前立腺がん、黒色腫、結腸直腸がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、肝臓がん及び腎臓がんを治療する薬物の調製に適用することができる。幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体又は抗原結合断片は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫又は濾胞性リンパ腫を治療する薬物の調製に適用することができる。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、がん又は他の腫瘍病状の治療、進行の遅延、再発の回避又は症状の緩和に適用することができる。例えば、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、血液悪性腫瘍及び／又は腫瘍などの血液悪性腫瘍及び／又は腫瘍の治療に使用することができる。例えば、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７^＋腫瘍の治療に使用することができる。非限定的な実施例として、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳がん、卵巣がん、頭頸部がん、膀胱がん、黒色腫、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫などの治療に使用することができる。固形腫瘍は、例えば乳がん、卵巣がん、肺がん、前立腺がん、黒色腫、結腸直腸がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、肝臓がん及び腎臓がんを含む。例えば、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫又は濾胞性リンパ腫の治療に使用することができる。

本明細書において、「血液がん」は、白血病、リンパ腫及び骨髄腫などを含む。「白血病」は、感染症と効果的に戦うことができない過剰な白血球を作り、血小板や赤血球などの、血液を構成する他の成分を締め出す血液がんを意味する。白血病の症例は、急性又は慢性に分類することができる。非限定的な実施例として、白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び脊髄異形成症候群を含むことができる。「リンパ腫」は、ホジキンリンパ腫、無痛性と侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫及び濾胞性リンパ腫（小細胞と大細胞）などを含むことができる。骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫及び軽鎖又はベンス－ジョーンズ骨髄腫を含むことができる。

本発明の例示的なモノクローナル抗体は、例えば本明細書に記載の抗体を含む。例示的な抗体は、配列番号１１、３６～４４、５０及び５６から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列の重鎖可変領域と、配列番号１２、１３、４５～４９、５１～５５、６５から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを有する抗体を含む。上記抗体は、配列番号１１、３６～４４、５０及び５６のうちの少なくとも１つの配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号１２、１３、４５～４９、５１～５５、６５のうちの少なくとも１つの配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の同一性を有する軽鎖可変領域とを有する抗体を更に含む。これらの抗体は、ヒトＣＤ４７に対する特異性を示すとともに、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻止することができ、同時に赤血球の顕著な血球凝集反応を引き起こさない。

幾つかの実施形態において、本発明は、以下のような生体材料を更に提供する。
（１）本発明に記載の抗体又は抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド、又は、
（２）本発明に記載の抗体又は抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現担体、又は、
（３）本発明に記載の抗体又は抗原結合断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチドを含む細胞。

本発明の薬物組成物は、本発明の抗体及び薬学的に許容される担体を含むことができる。これらの薬物組成物は、例えば診断試薬キットなどの試薬キットに含まれてもよい。

本発明は、投与後に顕著な赤血球の血球凝集反応を引き起こすことなく、それを必要とする、ＣＤ４７又はその免疫活性断片に結合する１種又は複数種のモノクローナル抗体を対象に投与することによって、がん又は他の腫瘍疾患の症状を緩和する方法を更に提供する。上記抗体の投与量は、対象におけるがん又は他の腫瘍病状の症状を緩和するのに十分でなければならない。幾つかの実施形態において、上記対象はヒトである。幾つかの実施形態において、上記抗体又はその免疫活性断片は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻害する。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、１種又は複数種の他の試薬と組み合わせて使用される。適切な他の試薬は、特定の応用（例えば、がん）に用いられる既存の薬物及び／又は外科的療法を含む。例えば、上記ＣＤ４７抗体は、１種又は複数種の他の化学療法剤又は抗腫瘍試薬と組み合わせて使用される。又は、他の化学療法剤は放射線療法である。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は細胞死誘導剤である。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は、原形質膜を横切るリン脂質の非対称損失を誘導し、例えばホスファチジルセリン（ＰＳ）の細胞表面露出を引き起こす。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は、小胞体（ＥＲ）ストレスを誘導する。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤である。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は、ＥＲタンパク質の細胞表面への移動を誘導する。幾つかの実施形態において、上記化学療法剤は、カルレティキュリンの移動及び細胞表面露出を誘導する。

幾つかの実施形態において、上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬は、単一の治療組成物として調製され、また、上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬を同時に投与する。又は、上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬は互いに独立して、例えば独立した治療組成物としてそれぞれ調製され、また、上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬を同時に投与するか、又は、治療レジメンの間で上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬を異なる時点で投与する。例えば、他の試薬を投与する前に上記ＣＤ４７抗体を投与するか、他の試薬を投与した後に上記ＣＤ４７抗体を投与するか、又は上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬を交互に投与する。本明細書において、単一用量又は複数の用量で上記ＣＤ４７抗体及び他の試薬を投与する。

幾つかの実施形態において、がん又は感染症を治療する薬物の調製における、本発明の抗体又は抗原結合断片、組成物、生体材料の応用を提供する。

当業者であれば、本発明の抗体が様々な用途を有することを理解すべきである。例えば、本発明の抗体は、治療剤として、診断試薬キットにおける試薬又は診断ツールとして、又は治療剤を生成するために競合実験における試薬として用いることができる。

ＣＨＯ－ＣＤ４７細胞（図１Ａ）又はＪｕｒｋａｔ細胞（図１Ｂ）をそれぞれ使用して抗体１７－ＳｃＦｖが細胞表面上のＣＤ４７に結合する能力を示す一連のグラフである。 抗体１７－ＳｃＦｖとリガンドＳＩＲＰαがＣＨＯ表面上のＣＤ４７への結合を競合する能力に対するフローサイトメトリーによる分析を示す。 一連のグラフであり、図３Ａ～３Ｅは、ＣＤ４７抗原へのＳＩＲＰαの結合を遮断するＣＤ４７抗体の能力に対する競合ＥＬＩＳＡによる評価を示す。 一連のグラフであり、図４Ａ～４Ｅは、ＣＤ４７抗体による赤血球（ＲＢＣ）の血球凝集反応を示し、外観は線に流れ込む赤血球塊が血球凝集反応を引き起こさず、わずかに凝集するものが点であり、明らかに凝集するものがウェル全体の凝集であることを示し、図４Ａは、抗体１１が明らかな凝集現象を引き起こすことを示し、図４Ｂは、抗体Ｌ１２が血球凝集反応を引き起こさないことを示し、図４Ｃは、抗体Ｌ１２－６が血球凝集反応を引き起こさないことを示し、図４Ｄは、抗体１７、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４が明らかな血球凝集現象を引き起こすが、ＡＢ６．１２－Ｇ１、ＳＩＲＰαが血球凝集反応を引き起こさないことを示し、図４Ｅは、抗体６Ｙ－Ｇ４が血球凝集反応を引き起こさないことを示す。 一連のグラフであり、図５Ａ～５Ｂは、ヒトＣＤ４７又はマカクＣＤ４７へのＣＤ４７抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ法による評価を示す。 一連のグラフであり、図６Ａ～６Ｂは、Ｒａｊｉに対するＲＡＷ２６４．７の貪食を促進するＣＤ４７抗体の能力に対するフローサイトメトリーによる評価を示す。 一連のグラフであり、図７Ａ～７Ｄは、カニクイザル体内での抗体６Ｙ－Ｇ１の赤血球、血小板への影響を分析し、図７Ａ～７Ｂは、抗体６Ｙ－Ｇ１がヘモグロビン及び赤血球の減少を引き起こし、約２週間後に徐々に回復し、反応の程度が抗体ＡＢ６．１２－Ｇ１、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４と類似することを示し、図７Ｃは、抗体６Ｙ－Ｇ１の各投与の後に血小板が変動し、投与終了後に回復することを示し、図７Ｄは、抗体６Ｙ－Ｇ１の各投与の後に網状赤血球の数が増加し、且つその増加が抗体ＡＢ６．１２－Ｇ１、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４投与群よりも大きかったことを示す。 陽性対照として抗体ＡＢ６．１２－Ｇ１、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を使用した、ヒト血液腫瘍ＭＶ４－１１全身性腫瘍モデルにおける抗体Ｌ１２の抗腫瘍作用を示す。マウスは全て、週に３回、２００μｇの抗体用量で処置される。 ラージ腫瘍モデルにおける６Ｙ－Ｇ４抗体の抗腫瘍効果を分析するものである。マウスは、週に３回、１００μｇの抗体用量で処置される。

本発明は、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体を提供する。幾つかの実施形態において、本発明の抗体はヒトＣＤ４７に特異的に結合することができる。本明細書において、これらの抗体は、抗ＣＤ４７抗体と総称される。本明細書で特に説明しない限り、抗体の可変領域と定常領域におけるアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔに従って番号付けられる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。

本明細書に記載の抗体の幾つかの特性には、ａ）ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７及びマカクＣＤ４７）への特異的結合、ｂ）ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の遮断、ｃ）顕著な血細胞凝集活性がないこと、ｄ）マクロファージによる腫瘍細胞の貪食の促進、及び／又はｅ）ヒトがんのマウスモデルにおいて有効な抗腫瘍活性を示すことが含まれる。

従って、本明細書に記載の抗体は、様々ながんの治療において重要な位置を占めている。

多くの既存のＣＤ４７抗体はＳＩＲＰαを遮断するが、ＳＩＲＰαを遮断する既存の抗体は、望ましくない血球凝集反応の副作用を引き起こす。他の既存の抗体（例えば、２Ｄ３）は血球凝集反応を引き起こさないが、これらの抗体はＳＩＲＰαも遮断しないため、貪食作用を効果的に促進することができない。従って、細胞の凝集は、既存の完全ＩｇＧ抗体を使用してＣＤ４７を治療的に標的とする主な制限である。従って、ＳＩＲＰαを遮断できると同時に細胞凝集を引き起こさないＣＤ４７抗体を取得する緊急な必要性がある。

本発明のＣＤ４７抗体は、望ましくない血球凝集反応を回避することによって、ＣＤ４７を治療的に標的とする効果を高め、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する能力を維持し、それによりＣＤ４７発現細胞に対する貪食作用を促進する。幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体（例えば、抗体Ｌ１２及び抗体Ｌ１２－６など）は、細胞を顕著なレベルで凝集させない。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、ＲＢＣを顕著なレベルで凝集させない。

本発明のＣＤ４７抗体は、ヒトＣＤ４７に結合するとともにＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する（図３Ａ～３Ｅ）。これらの抗体は、顕著なヒト赤血球の血球凝集反応を引き起こさない（図４Ａ～４Ｅ）。これらの抗体は、マクロファージによる腫瘍細胞の貪食を促進することができる（図６Ａ～６Ｂ）。また、これらのＣＤ４７抗体は、ヒトＲａｊｉリンパ腫のマウスモデルにおいて有効な抗腫瘍活性を示す（図９）。従って、本発明のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７を治療的に標的とするために使用される主な制限要因を克服する。従って、本発明のＣＤ４７抗体は、多数のがんの治療において非常に重要である。

ＣＤ４７エピトープに結合する本発明の抗体の平衡解離定数（ＫＤ）は１μＭ以下であり、例えば１００ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下である。例えば、本明細書により提供されるＣＤ４７抗体は、１ｎＭ未満のＫＤ値を示す。

本発明のＣＤ４７抗体は、広く分布するＣＤ４７の機能活性を調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和又は干渉することに用いられる。ＣＤ４７の機能活性には、例えばＳＩＲＰαとの相互作用によるシグナル伝達、細胞外マトリックスへの細胞接着後の細胞内カルシウムイオン濃度の調節（例えば増加）、トロンボスポンジンのＣ末端細胞結合ドメインとの相互作用、フィブリノーゲンとの相互作用及び様々なインテグリンとの相互作用が含まれる。例えば、ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を部分的又は完全に調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和又は干渉することによって、ＣＤ４７の機能活性を完全又は部分的に阻害する。

定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される科学的及び技術的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。一般的には、本明細書に記載の細胞培養、分子生物学及びタンパク質精製で使用される命名と技術は、当該分野では既知で、一般的に使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成と細胞培養及び形質転換（例えば電気穿孔、リポフェクション）について、標準技術が使用された。酵素反応と精製技術は、製造業者の説明書又は当該分野で一般的に使用されるか、又は本明細書に記載された方法に従って行われる。上述した技術と方法は、一般的には、当該分野で既知であり、かつ本明細書で参照及び説明される複数の総合と比較的具体的な文献に記載されるように使用される。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（『分子クローニング：実験マニュアル』）（第２版、コールドスプリングハーバーラボラトリー出版社（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨークコールドスプリング（１９８９））を参照されたい。

本開示で使用されるように、特に説明しない限り、以下の用語は、以下の意味を有すると理解されるべきである。「血液の赤血球」及び「赤血球」という用語は、同義語であり、互換的に使用されてもよい。

「凝集」という用語は、細胞が塊になることを指し、「血球凝集反応」という用語は、特定の種類の細胞（即ち赤血球）が塊になることを指す。従って、血球凝集反応は、凝集の１種である。本明細書に記載の血球凝集アッセイにおいて、赤血球は所定のウェルにおいて「ボタン」、「ハロー」又は両者の中間体の形態として形成されてもよい。「線」という用語は、９６ウェルプレートを４５°傾斜させた後、赤血球塊が線状に流れることを意味する。「顕著な血球凝集活性」という用語は、本明細書に記載の抗体を加える場合、ウェル内に任意のハロー形態が存在することを意味する。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性部分、即ち抗原に特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。「特異的に結合する」又は「免疫反応する」又は「対する」は、抗体が他のポリペプチドと反応せずに標的抗原の１つ又は複数の抗原決定基と反応するか、又は非常に低い親和性（ＫＤ＞１０^－６ｇ／ｍＬ）で他のポリペプチドに結合することを意味する。抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ－及びＦ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ及びＦａｂ発現ライブラリーを含むが、これらに限定されない。

抗体の基本構造単位には四量体が含まれることは知られている。各四量体（又は「全抗体」と呼ばれる）は、２対の同一のポリペプチド鎖で構成され、各対は１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１本の「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０個又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を限定する。一般的には、ヒトから得られた抗体分子は、分子内に存在する重鎖の性質により互いに異なるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤの任意の種類に関連する。特定の種類には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びその他などのサブクラスもある。なお、ヒトにおいて、軽鎖は、κ鎖又はλ鎖に分類することができる。

本明細書で使用されるように、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、固有の軽鎖遺伝子産物と固有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子のうちの分子の種類のみを含む抗体分子の集団を指す。具体的には、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、当該集団の全ての分子において同一である。ＭＡｂは、抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。

「単鎖抗体」（ｓｃＦｖ）という用語は、抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）が１５～２０個のアミノ酸のリンカーショートペプチド（ｌｉｎｋｅｒ）によって連結された抗体を指す。

「抗原結合部位」又は「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。当該抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖と軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の３つの高度に分化した分岐（「超可変領域」と呼ばれる）は、より保存的な分岐（「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」と呼ばれる）の間に位置する。従って、「ＦＲ」という用語は、超可変領域間に天然に存在するか、又は超可変領域に隣接する免疫グロブリンのアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域と重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間で互いに対向して配列され、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の３次元表面と相補的であり、且つ各重鎖と軽鎖の３つの超可変領域は全て、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」と呼ばれる。各ドメインのアミノ酸のアラインメントは、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７と１９９１））又はＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋの記事（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９））の定義と一致することができる。

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン又はその断片又はＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定領域を含む。エピトープ決定領域は、一般的には、分子の化学活性表面基（例えばアミノ酸又は糖側鎖）からなり、且つ一般的には、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

本明細書で使用されるように、「特異的結合」という用語は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンの特異的抗原との間で起こる非共有相互作用のタイプを指す。免疫学的結合相互作用の強度又は親和性は、相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）で表すことができ、そのうち、ＫＤが小さいほど親和性が高くなる。選択されたポリペプチドの免疫結合特性は、当該分野でよく知られている方法で定量されてもよい。一方法では、抗原結合部位／抗原複合体の形成と解離の速度を測定する必要があり、そのうち、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性及び２つの方向においてこの速度に等しく影響する幾何学的パラメータに依存する。従って、「結合速度定数」（ｋ_ｏｎ）と「解離速度定数」（ｋ_ｏｆｆ）の両方は、濃度及び実際の会合と解離の速度を計算することによって測定することができる。（Ｎａｔｕｒｅ ３６１：１８６－８７（１９９３）を参照）。ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ比は、親和性に関連しない全てのパラメータを排除することができ、平衡解離定数ＫＤに等しい。（一般的には、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５９：４３９－４７３を参照）。特異的結合は、放射性リガンド結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー結合アッセイ、又は当業者に既知された類似アッセイで測定することができ、平衡解離定数（ＫＤ）≦１μＭ（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、又は１ｎＭ以下）の場合、本開示の抗体はＣＤ４７に特異的に結合する。

「単離した」抗体は、その自然環境の成分から単離及び／又は回収する抗体である。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断又は治療的使用を妨害する物質であり、酵素、モルモン、及び他のタンパク質又は非タンパク質性溶質を含んでもよい。幾つかの実施形態において、前記抗体は以下の程度まで精製される：（１）前記抗体は、Ｌｏｗｒｙ法で測定した場合、重量パーセントで９５％を超え、例えば９９％を超える。（２）スピニングカップシークエネーターを用いることで、Ｎ－末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得ることができる。又は（３）クーマシーブルー又は銀染色を使用して、還元又は非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、同質性を有することを測定する。単離した抗体は、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕ抗体を含む。通常、単離した抗体は、少なくとも１つ又は複数の精製ステップによって調製される。幾つかの実施形態において、単離した抗体の純度は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、又は、これらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（終点を含む）又はそのうちの任意の値である。

本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、天然タンパク質、断片又はポリペプチド配列の類似体を示す一般用語であり、従って、天然タンパク質断片及び類似体はポリペプチド属の１種である。

「配列同一性」又は「配列相同性」という用語は、比較ウィンドウにおいて２つのポリヌクレオチド又はアミノ酸配列が同一である（即ち、ヌクレオチド対ヌクレオチド又は残基対残基に基づいて同一である）ことを意味する。「配列同一性パーセント」という用語は、以下の方法によって計算される：比較ウィンドウにおいて２つの最適アラインメントの配列を比較し、２つの配列で同じ核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ又はＩ）又はアミノ酸残基の出現位置の数を決定して、一致した位置の数が得られ、一致した位置の数を比較ウィンドウにおける位置の総数（即ち、ウィンドウサイズ）で割り、次に結果に１００を掛けて配列同一性パーセントを得る。

本明細書で使用されるように、２０個の従来のアミノ酸及びその略語は、従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂとＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編集、Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ ７ Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照。２０個の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ－アミノ酸）、非天然アミノ酸（α－、α－二置換アミノ酸など）、Ｎ－アルキルアミノ酸、乳酸及び他の特殊なアミノ酸は、本開示のポリペプチドに適する成分であってもよい。特殊なアミノ酸の例には、４－ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸塩、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリジン、ε－Ｎ－アセチルリジン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリシル、σ－Ｎ－メチルアルギニン及び他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば４－ヒドロキシプロリン）が含まれる。本明細書で使用されるポリペプチドの表記法において、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向であり、標準的な用法と慣例と一致する。従来の（又は天然の）アミノ酸は、アラニン（３文字符号：Ａｌａ、１文字符号：Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）を含む。

類似的には、特にに明記しない限り、単鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写産物の５’から３’の付加方向は転写方向と呼ばれ、ＲＮＡ配列と同一であり、且つＲＮＡ転写産物の５’末端の５’であるＤＮＡ鎖の配列領域は「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡ配列と同一であり、且つＲＮＡ転写産物の３’末端３’であるＤＮＡ鎖の配列領域は「下流配列」と呼ばれる。ポリペプチドに適用される場合、「基本的に同一」という用語は、２つのペプチド配列が、ＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどによって、デフォルトのギャップ重みを使用して最適アラインメントを行う際に少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有することを意味する。

幾つかの実施形態において、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。

アミノ酸配列の同一性が少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、９０％、９５％又は９９％に維持されることを条件として、抗体又は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の微小な変化は何れも、本開示に含まれる。幾つかの実施形態において、変化は保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は、その側鎖での関連するアミノ酸ファミリー内で発生する置換である。遺伝子によりコードされるアミノ酸は、（１）アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩である酸性アミノ酸、（２）リジン、アルギニン、ヒスチジンである塩基性アミノ酸、（３）アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである非極性アミノ酸、及び（４）グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである非荷電極性アミノ酸に大まか分類される。アミノ酸の他のファミリーには、（ｉ）脂肪族－ヒドロキシルファミリーのセリンとスレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーのアスパラギンとグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーのアラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン、並びに（ｉｖ）芳香族ファミリーのフェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンが含まれる。幾つかの実施形態において、保存的アミノ酸置換群は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン－グルタミンである。例えば、イソロイシン又はバリンによるロイシンの個別置換、グルタミン酸塩によるアスパラギン酸塩の置換、セリンによるスレオニンの置換、又は、特に置換が結合部位内のアミノ酸を含まない場合、得られる分子の結合又は特性に重要な影響を与えずに構造的に関連するアミノ酸によるアミノ酸の類似の置換を合理的に予測することができる。アミノ酸変化が機能性ペプチドをもたらすか否かは、ポリペプチド誘導体の比活性を測定することによって容易に決定することができる。前記測定は、本明細書に詳細に記載されている。抗体又は免疫グロブリン分子の断片又は類似体は、当業者によって容易に調製され得る。

幾つかの実施形態において、アミノ酸置換は、（１）タンパク質の加水分解作用に対する感受性を低下させ、（２）酸化作用に対する感受性を低下させ、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更し、（４）結合親和性を変更し、（５）このような類似体の他の物理化学的又は機能的特性を付与又は改善するといった効果がある。類似体は、配列が天然に存在するペプチド配列と異なる様々な変異タンパク質を含むことができる。例えば、天然に存在する配列（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン以外のポリペプチド部分）に、単一又は複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）を行うことができる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造特性を顕著に変化させてはならない（例えば、置換されたアミノ酸は、親配列に存在する螺旋構造を破壊するか、又は親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向があってはならない）。人工的に認識されたポリペプチドの二次と三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編集、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎとＪ．Ｔｏｏｚｅ編集、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１））、及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。

本明細書で使用される「試薬」という用語は、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子又は生体材料から調製した抽出物を意味する。

本明細書で使用されるように、「標識」又は「標識された」という用語は、例えば、放射性標識アミノ酸、又は標識アビジン（例えば、蛍光標識を含有するか、又は光学的方法又は熱量測定法によって検出された酵素活性を有するストレプトアビジン）により検出可能なビオチン基部分に付着したポリペプチドを組み込むことにより、検出可能な標識を組み込むことを意味する。場合によっては、マーカー又は標識は、治療的なものであってもよい。ポリペプチドと糖タンパク質を標識する様々な方法は、当該分野で既知で且つ使用可能なものである。ポリペプチド用のマーカーの例としては、放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ）、蛍光マーカー（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素マーカー（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光標識、ビオチニル基、二次レポーター遺伝子によって認識された所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、標識は、可能な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームを介して結合される。

「薬剤」又は「薬物」という用語は、患者に適切に投与された場合に所望の治療効果を誘発することができる化合物又は組成物を指す。

本明細書で使用される「抗腫瘍薬」という用語は、ヒトにおける腫瘍、特に、がん、肉腫、リンパ腫又は白血病などの悪性（がん性）病変の発生又は進行を阻害する機能的特性を有する試薬を指す。転移の阻害は、多くの場合、抗腫瘍薬の特性である。

本明細書の他の化学用語は、当該分野の従来の方法に従って使用され、例えばＴｈｅ ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（『マグロウヒル化学用語辞典』）（Ｐａｒｋｅｒ、Ｓ．編集、グラウヒル社（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ）、サンフランシスコ（１９８５））。

ＣＤ４７抗体
本発明の抗体は、ＣＤ４７に結合して、ＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合を阻害し、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を減少させ、貪食作用を促進し、腫瘍の成長及び／又は転移を阻害する能力を有する。例えば、本明細書の実施例に記載されている細胞実験を使用して阻害作用を決定することができる。

本発明の例示的な抗体には、抗体１７、抗体Ｌ１２、抗体６Ｙ－Ｇ１、抗体６Ｙ－Ｇ４など、及び同一又は類似のＣＤＲ領域を有する他の類似の抗体が含まれる。

抗体１７のＶＨ ＣＤＲには配列番号１４（ＶＨ ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＶＨ ＣＤＲ２）及び配列番号２３（ＶＨ ＣＤＲ３）があり、ＶＬ ＣＤＲには配列番号３１（ＶＬ ＣＤＲ１）、配列番号３３（ＶＬ ＣＤＲ２）及び配列番号３５（ＶＬ ＣＤＲ３）がある。ＶＨ ＣＤＲは重鎖超可変領域であり、ＶＬ ＣＤＲは軽鎖超可変領域である。

幾つかの実施形態において、本発明は、抗体１７をもとに、そのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及び／又はＶＨ ＣＤＲ３のうちの１つ又は複数のアミノ酸部位を置換する。幾つかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２及び／又はＶＨ ＣＤＲ３の置換可能な部位（親）及び置換に使用可能なアミノ酸は、表１の１つ又は複数に示されている。表１の「位置」は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列の左から右へのアミノ酸部位を表し、例えば、位置３０は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列の左から右への３０番目のアミノ酸「Ｄ」を表す。

抗体Ｌ１２と抗体Ｌ１２－６のＶＨ ＣＤＲには配列番号１４（ＶＨ ＣＤＲ１）、配列番号１７（ＶＨ ＣＤＲ２）及び配列番号２３（ＶＨ ＣＤＲ３）があり、ＶＬ ＣＤＲには配列番号３０（ＶＬ ＣＤＲ１）、配列番号３２（ＶＬ ＣＤＲ２）及び配列番号３４（ＶＬ ＣＤＲ３）がある。

実験の検証により、ＶＨ ＣＤＲ１配列は配列番号１５又は１６であってもよい。ＶＨ ＣＤＲ２配列は配列番号１８、１９、２０、２１又は２２であってもよい。ＶＨ ＣＤＲ３配列は配列番号２４、２５、２６、２７、２８又は２９であってもよい。他のＣＤＲ配列は、表１に示されるアミノ酸置換で実現することができる。幾つかの実施形態において、１個、２個、又は３個のアミノ酸が置換される。

ＣＤＲの変化に加えて、フレームワーク領域のアミノ酸も適当に変化できる。例えば、抗体Ｌ１２の重鎖のフレームワーク領域への２つの変異（Ｒ８１ＫとＲ８２ａＳ）により生成されたＬ１２－１－ＶＨ、Ｌ１２－２－ＶＨ、Ｌ１２－３－ＶＨ、Ｌ１２－６－１－ＶＨ、Ｌ１２－６－ＶＨ、Ｌ１２－８－ＶＨ又はＬ１２－９－ＶＨも、適切な重鎖可変領域である。幾つかの実施形態において、ＣＤ４７抗体の重鎖可変領域は、位置８１にＫ、又は位置８２ａにＳを持つことができる（Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）。他のフレームワーク領域の変異も、異なる抗体配列に反映されている。従って、本発明は、Ｒ８１Ｋ及び／又はＲ８２ａＳ（Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）変異を有する重鎖フレームワーク領域を提供する。

本発明の例示的な抗体は、配列が配列番号１１、３６～４４、５０又は５６から選ばれる重鎖可変領域と、配列が配列番号１２～１３、４５～４９、５１～５５、６５から選ばれる軽鎖可変領域とを有する抗体を含む。特に、例示的な抗体は、抗体１７、抗体３－３、抗体３－６、抗体３、抗体６、抗体１０、抗体１１、抗体１６、抗体１８、抗体２４、抗体２５、抗体Ｌ１、抗体Ｌ２、抗体Ｌ５、抗体Ｌ１２－１－１、抗体Ｌ１２、抗体Ｌ２４、抗体Ｌ２６、抗体Ｌ１２－１、抗体Ｌ１２－２、抗体Ｌ１２－３、抗体Ｌ１２－４、抗体Ｌ１２－５、抗体Ｌ１２－６－１、抗体Ｌ１２－６、抗体Ｌ１２－７、抗体Ｌ１２－８、抗体Ｌ１２－９、抗体Ｌ１２－１０、抗体Ｌ１２－１１、及び上記抗体の配列と適切な配列同一性を有する抗体を含む。例えば、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有する。幾つかの実施例において、同一性を有するこれらの配列は、少なくともＣＤＲが変化しない。

幾つかの実施形態において、抗体Ｌ１２に対してヒトフレームワーク適応を行う。幾つかの実施形態において、抗体Ｌ１２のＶＨフレームワーク変異は、表３のＬ１２－１－ＶＨ、Ｌ１２－２－ＶＨ、Ｌ１２－３－ＶＨ、Ｌ１２－６－１－ＶＨ、Ｌ１２－６－ＶＨ、Ｌ１２－８－ＶＨ又はＬ１２－９－ＶＨで標識された下線付きのアミノ酸に示される。幾つかの実施形態において、抗体Ｌ１２のＶＬフレームワーク変異は、表３のＬ１２－１－１－ＶＬ、Ｌ１２－１－ＶＬ、Ｌ１２－２－ＶＬ、Ｌ１２－３－ＶＬ、Ｌ１２－４－ＶＬ、Ｌ１２－５－ＶＬ、Ｌ１２－６－１－ＶＬ、Ｌ１２－７－ＶＬ、Ｌ１２－８－ＶＬ、Ｌ１２－９－ＶＬ、Ｌ１２－１０－ＶＬ又はＬ１２－１１－ＶＬで標識された下線付きのアミノ酸に示される。

本発明は、本明細書に記載のＣＤ４７抗体と同一エピトープに結合する抗体も含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＣＤ４７の１つ又は複数のアミノ酸残基を含むエピトープに特異的に結合する（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｑ０８７２２．１を参照）。

以下、例示的なヒトＣＤ４７のＥＣＤアミノ酸配列、配列番号１を提供する（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｑ０８７２２．１（ＧＩ：１１７１８７９）、参照により本明細書に組み込まれる）。シグナル配列（アミノ酸１－１８）は下線で表される。

配列番号１
MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSP

本明細書に記載の抗体が、ＣＤ４７－及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和又は他の方法で妨害する能力は、本明細書に記載の１種又は複数種の抗体の存在下でＣＤ４７－及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性シグナル伝達を測定するなどを含む方法によって評価することができる。これらの測定は、競合結合アッセイを含むものであってもよいか、又はマクロファージによるＣＤ４７発現細胞の貪食を促進する能力など、生物学的測定値を測定するものであってもよい（例えば、実施例３に記載される）。

本明細書に記載の抗体は、当該分野において知られている様々な方法によって生成することができる（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ及び Ｌａｎｅ Ｄ、１９８８、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、参照により本明細書に組み込まれる）。完全ヒト抗体は、軽鎖と重鎖の両方の配列全体（ＣＤＲを含む）がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。このような抗体は、本明細書において「ヒト抗体」又は「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトモノクローナル抗体を生成するために、ｔｒｉｏｍａ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ、１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照）、及びＥＢＶハイブリドーマ技術により調製することができる（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、７７～９６ページを参照）。ヒトモノクローナル抗体を利用し、ヒトハイブリドーマ（Ｃｏｔｅ ｅｔ ａｌ、１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２０２６～２０３０を参照）を使用するか、又は体外でバーウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ ＢａｒｒＶｉｒｕｓ）を用いてヒトＢ細胞を形質転換する（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、７７～９６ページを参照）ことによって生成することができる。

抗体は、主に免疫血清中のＩｇＧ画分を提供するタンパク質Ａ又はタンパク質Ｇを使用したアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術により精製することができる。また、免疫グロブリンが標的する特異的抗原又はそのエピトープをカラムに固定して、免疫アフィニティークロマトグラフィーにより免疫特異的抗体を精製することができる。免疫グロブリンの精製については、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎの論文（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ、Ｉｎｃ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｐａ．発行、第１４巻、第８期（２０００年４月１７日）、２５～２８ページ）を参照することができる。

本開示のＣＤ４７抗体は、モノクローナル抗体であり得る。ＣＤ４７－及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性細胞シグナル伝達を調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和又は他の方法で妨害するモノクローナル抗体は、例えば膜結合及び／又は可溶性ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７又はその免疫原性断片、誘導体又は変異体）で動物を免疫することによって生成される。或いは、ＣＤ４７をコードする核酸分子を含む担体でトランスフェクトされた細胞で動物を免疫することで、ＣＤ４７が発現され、トランスフェクトされた細胞の表面に関連付けられる。或いは、抗体又は抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーをスクリーニングすることによって、ＣＤ４７に結合するための抗体を得る。このライブラリーは、ファージにおいて、ファージコートタンパク質に融合したタンパク質又はペプチドの融合物を組み立てられたファージ粒子の表面に発現させ、コードされたＤＮＡ配列をファージ粒子内に組み込むことによって調製される（即ち、「ファージディスプレイライブラリー」）。次いで、ＣＤ４７への結合反応によってスクリーニングされる。

例えば、ハイブリドーマ法により、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）に記載されるようなモノクローナル抗体を調製する。ハイブリドーマ法において、免疫剤と特異的に結合する抗体を産生する又は産生可能になるリンパ球を引き起こすように、通常、免疫剤でマウス、ハムスター又は他の適当な宿主動物を免疫する。或いは、リンパ球を体外で免疫することができる。

免疫剤は通常、タンパク質抗原、その断片、又はその融合タンパク質を含む。通常、ヒト細胞が求められる場合は、末梢血リンパ球が使用され、又は非ヒト哺乳動物供給源が求められる場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。その後、ポリエチレングリコールなどの適当な融合剤により、リンパ球を不死化細胞株と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、（１９８６）５９～１０３ページ）。不死化細胞株は通常、ラット又はマウスの骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、適当な培地において培養することができ、当該培地は、未融合の不死化細胞の成長又は生存を阻害する１つ又は複数の物質を含むことが好ましい。例えば、親細胞にヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）が欠乏すると、ハイブリドーマの培地は通常、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミン（「ＨＡＴ培地」）を含み、前記物質はＨＧＰＲＴ－欠陥の細胞の成長を防止するものである。

モノクローナル抗体は更に、例えば、米国特許Ｎｏ．４，８１６，５６７に記載されるようなＤＮＡを組換える方法で調製することができる。本明細書に記載のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、通常の方法（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用すること）により、単離及び配列決定することができる。本明細書に記載のハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好適な由来とされる。単離された後、ＤＮＡを発現担体に入れ、免疫グロブリンを別に産生しないチャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、サルＣＯＳ細胞、ＰＥＲ．ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０や骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクトすることで、組換え宿主細胞において合成されたモノクローナル抗体を得ることができる。ＤＮＡはまた、例えば、ヒトの重鎖と軽鎖定常ドメインのコード配列で相同マウス配列を置換することによって（米国特許Ｎｏ．４，８１６，５６７、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ３６８、８１２－１３（１９９４）を参照）、又は免疫グロブリンのコード配列を非免疫グロブリンポリペプチドの全て又は一部のコード配列に共有結合することによって、修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本明細書に記載の抗体の定常ドメインを置換し、又は本明細書に記載の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインを置換し、キメラ二価抗体を生成することができる。

当業者に知られている技術により、抗体を産生する細胞株を選択、構築及び培養することができる。これらの技術は何れも、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ、Ｄ．Ｌ．Ｈａｃｋｅｒ、Ｆ．Ｍ．Ｗｕｒｍ、ｉｎ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｍｏｄｕｌｅ ｉｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０１７などの種々のラボマニュアル及び主な出版物に記載されており、追加内容を含むその内容の全ては参照により全文に組み込まれる。

幾つかの実施形態において、従来の方法に従って、本明細書に記載の抗体アミノ酸配列に基づいて、抗体をコードするＤＮＡを設計して合成し、それを発現担体に入れてから、宿主細胞をトランスフェクトし、トランスフェクトされた宿主細胞を培地にて培養し、モノクローナル抗体を産生することができる。幾つかの実施形態において、発現抗体担体は、少なくとも１つのプロモータエレメント、抗体コード配列、転写終了シグナルとｐｏｌｙＡ尾部を含む。他の要素は、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列及び挿入配列の両側のＲＮＡスプライシングのドナーと受容体部位を含む。ＳＶ４０の前期と後期プロモーター、レトロウイルス由来の長い末端反復配列、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＩＶＩ及びサイトメガロウイルスの早期プロモーターによって、高効率な転写を得ることができ、アクチンプロモーターのような他の幾つかの細胞のプロモーターを適用することもできる。適切な発現担体は、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ－Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ－Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ、又はＰｌｎｃｘ、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／－）、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／－）、ＰＳＶＬ、ＰＭＳＧ、ｐＲＳＶｃａｔ、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ、ｐＢＣ１２ＭＩ及びｐＣＳ２などを含むことができる。一般的に用いられる哺乳動物細胞は、２９３細胞、Ｃｏｓ１細胞、Ｃｏｓ７細胞、ＣＶ１細胞、マウスＬ細胞及びＣＨＯ細胞などを含む。

幾つかの実施形態において、挿入遺伝子断片は、スクリーニング標識を含有する必要があり、よく見られるスクリーニング標識は、トランスフェクションに成功した細胞のスクリーニング及び単離を容易にするために、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、グルタミン合成酵素、ネオマイシン耐性、ハイグロマイシン耐性などのスクリーニング遺伝子を含む。構築されたプラスミドを上記遺伝子無しの宿主細胞にトランスフェクトし、選択培地で培養し、トランスフェクションに成功した細胞が大量増殖し、所望の目的タンパク質を産生する。

幾つかの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体をコードするＤＮＡ配列は、抗体のアミノ酸配列を当該分野における従来の方法と組み合わせることによって得ることができる。幾つかの実施形態において、抗体６Ｙ－Ｇ４の重鎖をコードするＤＮＡ配列は配列番号５７に示され、そのうち、下線部はＶＨ ＣＤＲをコードし、抗体６Ｙ－Ｇ４の重鎖をコードするアミノ酸配列は配列番号６０に示される。

配列番号５７は以下の通りである：
caggtgcagctgcaggagtccggccctggcctggtgaagccttccgagaccctgtccctgacctgtaccgtgagcggcggcagcctggataactattactggagctggatccggcagcctcctggcaagggcctggagtggatcggctacatctactattccggcaacaccaattacaacccttccctgaagagccgggtgaccatctccgtggacaccagcaagaaccagtttagcctgaagctgtcctccgtgaccgccgctgataccgccgtgtactactgtgccaggggcggccggttcctggagagatattggggccagggtaccctcgtgaccgtgtccagcgctagcaccaagggcccttccgtgttccccctggccccctgtagccggtccacctctgagagcaccgctgctctgggctgtctggtgaaggattactttcccgaaccggtgaccgtgtcatggaactccggggctctgacatccggtgtccacacttttcctgcagtgctgcagtcatccggcctgtacagcctgagctctgtggtcacagtcccaagttcatccctgggaaccaagacatatacttgcaacgtggatcataaacccagcaatactaaggtcgacaaacgagtggagtctaagtacggaccaccttgcccaccatgtccagcacctgagttcctgggaggaccaagcgtgttcctgtttcctccaaagcctaaagataccctgatgatcagtcggactcccgaggtcacctgcgtggtcgtggacgtgtcccaggaggaccctgaagtccagttcaactggtacgtggacggcgtcgaagtgcacaatgctaagacaaaacctcgagaggaacagtttaactccacataccgtgtcgtgagcgtcctgactgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaggagtataagtgcaaagtgagcaataagggactgccaagctctatcgagaaaactatttctaaggctaaaggacagcctagggaaccacaggtgtacaccctgccccctagtcaggaggaaatgactaagaaccaggtctcactgacctgtctggtgaaagggttctatccttcagatattgcagtggagtgggaatccaatggtcagccagagaacaattacaagacaactccacccgtgctggacagcgatgggtctttctttctgtattctagactgaccgtggacaaaagtcgctggcaggagggtaatgtcttttcttgtagtgtgatgcacgaagccctgcacaaccactacactcagaaaagcctgtcactgtccctgggtaaa

配列番号６０は以下の通りである：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLDNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGRFLERYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

幾つかの実施形態において、抗体６Ｙ－Ｇ４の軽鎖をコードするＤＮＡ配列は配列番号５８に示され、そのうち、下線部はＶＬ ＣＤＲをコードし、抗体６Ｙ－Ｇ４の軽鎖をコードするアミノ酸配列は配列番号６１に示される。

配列番号５８は以下の通りである：
gagatcgtgctgacccagtccccctccagcctgagcgccagcgtgggagaccgggtgaccatcccctgccgggcttccctgtccatcggcagcttcctgaactggtatcagcagaggcctggcgaggcccctaagctgctgatctttgccgcttccagcctgcggagcggcgtgcctagcaggttctccggcagcggctccggcaccgatttcaccctgaccatcagcggcctgcagcccgaggatttcgccacctactactgccagcagacctacaccaccccttacacctttggccagggcaccaaggtggacatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttga

配列番号６１は以下の通りである：
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTIPCRASLSIGSFLNWYQQRPGEAPKLLIFAASSLRSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISGLQPEDFATYYCQQTYTTPYTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

幾つかの実施形態において、抗体６Ｙ－Ｇ１重鎖のアミノ酸配列は配列番号６２に示される。

配列番号６２は以下の通りである：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLDNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGRFLERYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

幾つかの実施形態において、抗体６Ｙ－Ｇ１軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１に示される。

幾つかの実施形態において、抗体１７重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３に示される。

配列番号６３は以下の通りである：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSLDNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGNTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLRLRSVTAADTAVYYCARGGRFLERYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

幾つかの実施形態において、抗体１７軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６４に示される。

配列番号６４は以下の通りである：
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTISCRANQAIGTWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYTTPLTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

幾つかの実施形態において、抗体Ｌ１２重鎖のアミノ酸配列は配列番号６３に示される。幾つかの実施形態において、抗体Ｌ１２軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６１に示される。

ヒト抗体及びヒト化抗体
本明細書に記載の抗体には、完全ヒト抗体又はヒト化抗体が含まれる。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒト免疫応答を引き起こすことなく、ヒトへの投与に適する。

ＣＤ４７抗体は、例えば、ファージディスプレイ法によってヒト配列のみを含む抗体を使用して生成される。このような方法は、当該分野で周知であり、例えばＷＯ９２／０１０４７及び米国特許Ｎｏ．６，５２１，４０４である。この方法において、天然又は組換えＣＤ４７由来又はその断片を用いて、ランダムな軽鎖と重鎖対を持つファージの組み合わせライブラリーをスクリーニングする。別の方法において、ＣＤ４７抗体は、少なくとも１つの方法ステップがヒトＣＤ４７タンパク質でトランスジェニック非ヒト動物を免疫するような方法によって生成することができる。このような方法において、トランスジェニック非ヒト動物の一部は、内因性重鎖及び／又はｋ軽鎖遺伝子座を失い、抗原に応答する免疫グロブリンをコードする遺伝子を生成するために必要な再編成をもたらすことができない。また、少なくとも１つのヒト重鎖遺伝子座及び少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座は、動物に安定してトランスフェクトされている。従って、投与された抗原に応答して、ヒト遺伝子座は、抗原に対して免疫特異性を有するヒト可変領域をコードする遺伝子を提供するために再編成される。従って、免疫する際に、トランスジェニックマウスは、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。

免疫原性が低下した抗体の産生は、適切なライブラリーを使用したヒト化技術、キメラ化技術及びディスプレイ技術によっても実現される。マウス抗体又は他の種に由来する抗体は、当該分野でよく知られるの技術を使用してヒト化又は霊長類化できることが理解されるべきである。例えば、ＷｉｎｔｅｒとＨａｒｒｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ １４：４３ ４６（１９９３）及びＷｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２１２５－１６８（１９９２）を参照する。関心のある抗体は、対応するヒト配列でＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン及び／又は骨格ドメインを置換するように、組換えＤＮＡ技術によってエンジニアリング改変を実行することができる（ＷＯ ９２１０２１９０及び米国特許Ｎｏ．５，５３０，１０１、５，５８５，０８９、５，６９３，７６１、５，６９３，７９２、５，７１４，３５０、及び５，７７７，０８５を参照）。キメラ免疫グロブリン遺伝子を構築するためのＩｇ ｃＤＮＡの使用も当該分野で知られている（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ、 Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．８４：３４３９（１９８７）及びＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１（１９８７））。ｍＲＮＡは、抗体を生成するハイブリドーマ又は他の細胞から単離され、ｃＤＮＡの生成に使用される。関心のあるｃＤＮＡは、特異的プライマーを使用し、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅することができる（米国特許４，６８３，１９５及び４，６８３，２０２）。或いは、関心のある配列は、ライブラリーを構築してスクリーニングすることで単離される。その後、抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列をヒト定常領域配列に融合する。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌによって発行されたＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎ．Ｉ．Ｈ．ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２（１９９１））に記載されている。ヒトＣ領域遺伝子は、既知のクローンから容易に得ることができる。アイソタイプの選択は、補体結合又は抗体依存性細胞毒性の活性などの所望のエフェクター機能に基づいて導かれる。好ましいアイソタイプは、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２である。任意のヒト軽鎖定常領域、即ちｋ又はλを使用し、次に従来の方法によってキメラヒト化抗体を発現させることができる。

幾つかの実施形態において、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂなどの抗体断片は、プロテアーゼ又は化学的切断など、完全なタンパク質の切断によって調製することができる。（ｉ）ペプシンで抗体分子を消化してＦ（ａｂ’）２断片を得ること、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片のジスルフィド結合を還元してＦａｂ断片を得ること、（ｉｉｉ）パパインと還元剤で抗体分子を処理してＦａｂ断片を生成すること、及び（ｉｖ）Ｆｖ断片を含むが、これらに限定されない。

重鎖と軽鎖のコンセンサス配列のＪ領域は、Ｊ領域内に有用な制限性部位を導入した後、Ｖ領域の断片をヒトＣ領域断片に連結するために、プライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドの設計に用いられてもよい。Ｃ領域のｃＤＮＡは、ヒト配列の類似の位置に制限性部位を配置するために、部位特異的突然変異誘発によって修飾されてもよい。

本明細書に記載のＣＤ４７抗体は、上記抗体をコードするＤＮＡ断片を含む担体から発現されてもよい。発現担体は、プラスミド、レトロウイルス、ＹＡＣ、ＥＢＶ誘導の付加体などを含む。適切な担体は通常、機能的に完全なヒトの重鎖定常領域（ＣＨ）又は軽鎖定常領域（ＣＬ）の免疫グロブリン配列をコードし、任意のＶＨ又はＶＬ配列を容易に挿入して発現させることができるように適切な制限性部位を有するような担体である。このような担体において、スプライシングは通常、挿入されたＪ領域内のスプライシングドナー部位とヒトＣ領域の前のスプライシング受容体部位との間で発生し、更にヒトＣＨエクソン内に存在するスプライシング領域で発生する。ポリアデニル酸化と転写終了は、コード領域の下流の天然染色体部位で発生する。得られたキメラ抗体は、ＳＶ－４０早期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ．３：２８０（１９８３））、ラウス（Ｒｏｕｓ）肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ、 Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．７９：６７７７（１９８２））及びモロニー（ｍｏｌｏｎｅｙ）マウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ、Ｃｅｌｌ ４１：８８５（１９８５））など、レトロウイルスＬＴＲを含む任意の強力なプロモーターに結合することができる。また、天然のＩｇプロモーターなどを使用することができる。

Ｆｃ修飾
本明細書に記載の抗体の関連するエフェクター機能は、修飾によって、例えば異常なＣＤ４７シグナル伝達に関連する疾患と障害の治療における抗体の有効性を向上させることができる。例えば、１つ又は複数の変異を抗体のＦｃ領域に導入してエフェクター機能をサイレンシングすることで、正常細胞を殺す可能性を減らすことができる。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧアイソタイプである。幾つかの実施形態において、抗体の定常領域は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプである。幾つかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域上のアミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）を修飾して、抗体のグリコシル化を回避し、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）である。幾つかの実施形態において、抗体定常領域上のアミノ酸Ｌｅｕ２３５（Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）を修飾して、Ｆｃ受容体の相互作用を改変させ、例えばＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）又はＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）である。幾つかの実施形態において、抗体定常領域上のアミノ酸Ｌｅｕ２３４（Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）を修飾して、Ｆｃ受容体の相互作用を改変させ、例えばＬｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）である。幾つかの実施形態において、抗体定常領域上のアミノ酸２３４と２３５を同時に修飾し、例えばＬｅｕ２３４ＡｌａとＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）である（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。

幾つかの実施形態において、抗体の定常領域は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプである。

幾つかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域内のヒンジ領域を修飾して、鎖交換を回避又は減少させ、例えばＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）である。他の実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域上のアミノ酸２３５を修飾して、Ｆｃ受容体の相互作用を改変させ、例えばＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）である。幾つかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域内のヒンジ領域及びアミノ酸２３５を修飾し、例えばＳｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）である。幾つかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域上のアミノ酸Ａｓｎ２９７（ボクシング、Ｋａｂａｔに従って番号付けられる）を修飾して、抗体のグリコシル化を回避し、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）である。幾つかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域上のアミノ酸Ｓｅｒ２２８、Ｌｅｕ２３５及びＡｓｎ２９７を修飾する（例えばＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｎ２９７Ａ）。

ＣＤ４７に対する抗体の使用
幾つかの実施形態において、本発明を含むＣＤ４７抗体は、対象における異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病変の診断、予後、モニタリング、治療、緩和及び／又は予防に適用することができる。標準的な方法を使用して、異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病状（がん又は他の腫瘍病状など）に罹患したか、又は疾患の進行リスクがある対象（ヒト患者）を特定することによって、治療レジメンを実施することができる。幾つかの実施形態において、当該疾患又は病状を治療する必要がある対象に有効量の本明細書に記載の抗体又はその製剤を投与することを含む、異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達が関与する疾患又は病状を治療する方法を提供する。抗体の投与は、標的（ＣＤ４７など）の発現、活性及び／又はシグナル伝達機能を無効化又は阻害又は干渉することができる。抗体の投与は、標的（ＣＤ４７など）と、その自然状態で結合した内因性リガンド（ＳＩＲＰαなど）との結合を無効化又は阻害又は干渉することができる。例えば、抗体は標的に結合し、ＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達を調節、遮断、阻害、降低、拮抗、中和又は干渉する。

幾つかの実施形態において、異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達が関与する疾患又は病状は、血液がん及び／又は固体腫瘍を含む。血液がんは、例えば白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む。幾つかの実施形態において、白血病の幾つかの形態は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）及び脊髄異形成症候群を含む。幾つかの実施形態において、リンパ腫の幾つかの形態は、ホジキンリンパ腫、無痛性と侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫及び濾胞性リンパ腫（小細胞と大細胞）を含む。幾つかの実施形態において、骨髄腫の幾つかの形態は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫及び軽鎖又はベンス－ジョーンズ骨髄腫を含む。固形腫瘍は、例えば乳がん、卵巣がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、黒色腫、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、肝臓がん及び腎臓がんを含む。

がん及び他の腫瘍病状に関連する症状は、例えば炎症、発熱、全身倦怠感、発熱、疼痛、局所領域の再発性炎症（ｏｆｔｅｎ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｅｄ ａｒｅａ）、食欲減退、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下、筋肉疲労及び腹部の症状（例えば腹痛、下痢又は便秘）を含む。

本発明の抗体の治療有効量は通常、治療目標を達成するために必要な量に関する。投与に必要な量は、その特異的抗原に対する抗体の結合親和性、疾患、障害又は症状の重篤程度、投与経路、投与された対象に投与された抗体の自由体積から枯渇する速度などに依存する。幾つかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体断片の治療有効量の一般的な範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施形態において、本発明の抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上又はこれらの数値の任意２つの値の間の範囲（終点を含む）の用量で対象に投与される。一般的な投与頻度は、例えば毎日１回～毎週１回である。

別の幾つかの実施形態において、ＣＤ４７に対する抗体は、ＣＤ４７の局在化及び／又は定量に関連する当該分野で既知の方法に適用することができる（例えば、適当な生理学的サンプルにおけるＣＤ４７及び／又はＣＤ４７とＳＩＲＰαの両者のレベルを測定するために用いられ、診断方法に用いられ、タンパク質イメージングなどに用いられる）。特定の実施形態において、抗体由来の抗原結合ドメインを含む、ＣＤ４７又はその誘導体、断片、類似体又はホモローグに特異的な抗体は、薬学的活性化合物（以下、「治療剤」と呼ばれる）として使用される。

別の幾つかの実施形態において、ＣＤ４７ポリペプチドは、免疫親和性、クロマトグラフィー又は免疫沈降などの標準技術によって、ＣＤ４７に特異的な抗体を使用して単離することができる。ＣＤ４７タンパク質に対する抗体（又はその断片）は、生体サンプルにおけるタンパク質の検出に使用することができる。幾つかの実施形態において、例えば、所定の治療レジメンの有効性を決定するために、臨床試験手順の一部として生体サンプルでＣＤ４７を検出することができる。抗体を検出可能な物質にカップリングする（即ち、物理的に結合する）ことによって、検出に役立つことができる。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料及び放射性材料を含む。適切な酵素の例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含む。適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチンとアビジン／ビオチンを含む。適切な蛍光材料の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンを含む。発光材料の例は、ルミノールを含む。生物発光材料の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを含む。また、適切な放射性材料の例は、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ又は^３Ｈを含む。

別の幾つかの実施形態において、本開示の抗体は、サンプル中のＣＤ４７及び／又はＣＤ４７とＳＩＲＰαタンパク質の両者（又はそのタンパク質断片）の存在を検出するための試薬として使用することができる。幾つかの実施形態において、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル抗体、又はより好ましくはモノクローナル抗体である。完全な抗体又はその断片（例えばＦａｂ、ｓｃＦｖ又はＦ（ａｂ’）２）を使用する。前記実施形態の検出方法は、生体サンプル中の分析物のｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡを体外及び体内で検出することに使用することができる。例えば、分析物のｍＲＮＡの体外検出技術は、Ｎｏｒｈｔｅｒｎハイブリダイゼーション及びｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを含む。分析物のタンパク質の体外検出技術は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット、免疫沈降及び免疫蛍光を含む。分析物のゲノムＤＮＡの体外検出技術は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼーションを含む。（ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４２卷、Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、１９９５；Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ及びＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．、１９９６；Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５）。また、分析物のタンパク質の体内検出技術は、標識された抗分析物タンパク質抗体を被験者の体内に導入することを含む。例えば、放射性標識で抗体を標識することができ、次に標準イメージング技術によって、当該放射性標識の被験者体内での存在と位置を検出することができる。

ＣＤ４７抗体の治療的投与及び製剤
本明細書に記載の抗体及びその誘導体、断片、類似体及びホモローグを、投与に適した薬物組成物に組み込むことができる。このような組成物の調製に係る原理や考慮事項及び成分選択のガイダンスは当該分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ、Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ、Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ、Ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ、Ｐａ．、１９９４；Ｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４卷、１９９１、Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照する。

このような組成物は通常、抗体及び薬学的に許容される担体を含む。幾つかの実施形態において、使用された抗体断片は、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片である。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、且つ標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチドである。

本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬物の投与に適合する任意と全ての溶剤、安定剤、緩衝剤、分散媒体、コーティング、抗菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤などを含むことが意図されている。適切な担体は、最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記述されている。このような担体又は希釈剤は、水、塩水、リンガー溶液、グルコース溶液及び５％のヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。

体内投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、無菌ろ過膜でろ過することによって容易に実現することができる。

前記実施形態の薬物組成物は通常、その意図する投与経路に適合する。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（即ち局所）、経粘膜及び直腸投与を含む。薬物組成物は、水、塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶剤などの注射用無菌希釈剤、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、ヒスチジン塩酸塩、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤、塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧調節剤、アルギニン、メチオニン、トレハロース、スクロース、ソルビトールなどの安定剤、トゥイーン２０、トゥイーン８０などの界面活性剤といった成分のうちの１種又は複数種を含むことができる。ｐＨは、酸又は塩基、例えば塩酸又は水酸化ナトリウムで調節することができる。薬物組成物は、アンプル、使い捨て注射器、又はガラスやプラスチック製の多回用量バイアルに包装することができる。幾つかの実施形態において、注射用途に適した薬物組成物は、無菌水性溶液（ここでは水溶性）又は分散体及び無菌注射液又は分散体を即時に調製するための無菌粉末を含む。使用する際、組成物は無菌であり、且つ容易に注射できる程度に流動的でなければならない。それは、製造及び保管条件下で安定でなければならず、例えば細菌や真菌などの微生物の汚染作用を防止することができなければならない。注射用組成物の持続的な吸収は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなど、吸収を遅延させる試薬を前記組成物に含めることによって達成することができる。

経粘膜又は経皮投与の場合、浸透するバリアに適した浸透剤が製剤に使用される。このような浸透剤は通常、当該分野で一般的に知られており、例えば、経粘膜投与に使用される洗浄剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、点鼻剤又は坐剤を使用することによって実現することができる。経皮投与の場合、１種又は複数種の前記抗体は、当該分野で一般的に知られる膏剤、軟膏、ゲル又はクリームに製剤化することができる。

薬物組成物は、用量単位形態で調製され、投与しやすく、用量が均一である。本明細書で使用されるように、用量単位形態は、治療される被験者に使用される、単位用量として適した物理的に分離可能な単位を指し、各単位は、計算により必要な薬物担体に結合して所望の治療効果を生み出す所定量の１種又は複数種の前記抗体を含む。

前記薬物組成物は、容器又は分注器に入れ、投与説明書とともに包装することができる。

本明細書に記載の薬物組成物はまた、治療を必要とする具体的な状況に応じて他の活性成分を含むことができ、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものである。幾つかの実施形態において、組成物は、細胞毒素試薬、サイトカイン、化学療法剤又は成長阻害剤など、その機能を強化する試薬を含むことができる。このような活性成分は、予期される目的に有効な量で適切に併用して存在する。

一実施形態において、ＣＤ４７抗体を含む１種又は複数種の活性成分は、併用療法で投与することができ、即ち、他の試薬、例えば治療剤（例えば、１種又は複数種のサイトカイン及び成長因子阻害剤、免疫阻害剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞毒素又は細胞成長阻害剤など）と併用する。「併用」という用語は、本明細書において、試薬を基本的に同期、同時又は順次に投与することを意味する。幾つかの実施形態において、このような併用療法は、投与された治療剤を低い用量で有利に使用することができるため、様々な単剤療法に関連する可能な毒性又は合併症を回避することができる。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、自己免疫疾患、炎症性疾患などのワクチンアジュバントとして使用される。ワクチンは、様々な抗原であり得る。前記抗原は、標的とされる自己抗原、即ちミエリン塩基性タンパク質などの自己免疫に関与する自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質などの炎症性自己抗原、又はアロ抗原などの移植抗原に由来する。抗原は、タンパク質に由来するペプチド又はポリペプチド、及び、糖、タンパク質、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン又は他の高分子成分の何れか１つの断片を含むことができる。幾つかの実施形態において、１つ以上の抗原は抗原性組成物に含まれる。

本明細書での出版物と特許文献についての引用は、上述したいかなる内容が関連する先行技術であることを認めることを示すものではなく、その内容又は日付を認めることを示すものではない。現在、本発明を書面明細書の方式で説明したが、当業者であれば、本発明を様々な実施形態で実施することができ、上述した明細書と後述する実施例は、本発明の特許請求の範囲を限定するものではなく、説明するものが意図されていることを、認識するであろう。本明細書で引用された全ての出版物、特許及び特許出願は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

下記実施例に用いられる材料、試薬などは、特に説明しない限り、何れも商業的供給源又は既知の方法から入手することができる。以下の実施例において、抗体Ｌ１２－６と抗体６Ｙ－Ｇ１は、同じ抗体である。

ＣＨＯ－ＣＤ４７細胞構築プロセス：ＨｉｎｄＩＩＩ／ＥｃｏＲＩウィンドウを設計し、ＣＤ４７（配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ、Ｑ０８７２２を参照）をコードするポリ核酸をｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ７９０－２０）プラスミドに導入し、ＰｖｕＩシングルカットによってＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－６１）をトランスフェクトし、スクリーニングして、安定したＣＨＯ－ＣＤ４７細胞株が得られた。

Ｊｕｒｋａｔ細胞は、中国科学院上海細胞バンクから購入し、品番がＣｌｏｎｅ Ｅ６－１であった。

ＩｇＧ抗体は、ＢｉｏＸＣｅｌｌから購入し、品番がＢＥ０２９７であった。

マカクＣＤ４７－Ｆｃは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔから購入し、型番がＣＤ４７－７４５Ｃであった。

実施例１：ＣＤ４７抗原の調製
ＣＤ４７抗原調製：ヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（配列番号１）のＣ－末端に６×ＨＩＳタブ（ＨＨＨＨＨＨ、配列番号２）又はヒトＦｃ（配列番号３の下線付き部分）（Ｒ＆Ｄシステムを参照）を追加し、ＣＤ４７組換えタンパク質を構築した。ヒトＣＤ４７のＥＣＤ領域は、遺伝子により６×ＨＩＳ又はＦｃにそれぞれ合成され、哺乳動物の発現担体ｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ７９０－２０）にサブクローニングされた。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞の一過性にトランスフェクトした後、ニッケルベースの固定化金属アフィニティークロマトグラフィーにより精製されたＨｉｓ－タグ付きヒトＣＤ４７－ＥＣＤタンパク質（ＣＤ４７－Ｈｉｓ）及び固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によってｐｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製されて分泌されたＦｃ－タグ付きヒトＣＤ４７－ＥＣＤタンパク質（ＣＤ４７－Ｆｃ）が得られた。

実施例２：ＣＤ４７抗体の調製
３０個の単鎖抗体（ｓｃＦｖ）のＶＨとＶＬの組み合わせは表２に示される。ＶＨのＣ末端とＶＬのＮ末端は、配列番号１０に示される配列（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）のリンカーショートペプチドによって連結され、抗体の重鎖可変領域は１７－ＶＨなどの抗体番号＋「－ＶＨ」で表され、抗体の軽鎖可変領域は１７－ＶＬなどの抗体番号＋「－ＶＬ」で表され、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は１７－ＳｃＦｖなどの抗体番号＋「－ＳｃＦｖ」で表される（１７－ＶＨ（配列番号１１に示される）のＣ末端と１７－ＶＬ（配列番号１２に示される）のＮ末端は、配列番号１０に示されるリンカーショートペプチドで連結され、１７－ＳｃＦｖが得られた）。

３０個のＩｇＧ１完全抗体のＶＨとＶＬの組み合わせは表２に示される。ＶＨとＣＨは抗体の重鎖を構成し、ＶＬとＣＬは抗体の軽鎖を構成し、ＣＨの配列は配列番号３に示され、ＣＬの配列は配列番号５に示され、抗体の重鎖可変領域は１７－ＶＨなどの抗体番号＋「－ＶＨ」で表され、抗体の軽鎖可変領域は１７－ＶＬなどの抗体番号＋「－ＶＬ」で表され、ＩｇＧ１完全抗体は抗体１７などの「抗体」＋抗体番号で表される（抗体重鎖は、１７－ＶＨ（配列番号１１に示される）及び配列番号３に示されるＣＨで構成され、抗体軽鎖は、１７－ＶＬ（配列番号１２に示される）及び配列番号５に示されるＣＬで構成される）。

抗体６Ｙ－Ｇ４は、重鎖のアミノ酸配列が配列番号６０に示され、軽鎖のアミノ酸配列が配列番号６１に示される。

表２に対応するＶＨとＶＬの配列は表３に示され、ここで、重鎖ＣＤＲは表４、軽鎖ＣＤＲは表５に示される。

上記アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を有するように、従来の技術的手段によってプラスミドｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ７９０－２０）を改変させる。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞が上記アミノ酸配列の抗体を発現するように、更にプラスミドをＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一過性にトランスフェクトした。ｐｒｏｔｅｉｎＡカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により精製してＣＤ４７抗体が得られ、配列決定した後に予想される配列と一致し、生物活性の同定に使用した。

標的細胞クリアランスに対して、抗体（例えば、ＣＤ４７抗体）の主なＦｃ依存性機能は、Ｆｃ領域へのＣ１ｑの結合によって開始される補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ領域と免疫エフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞と好中球）上の主にＦｃγＲＩＩＩａであるＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用によって媒介される抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、及びマクロファージがＦｃγＲＩを介してオプシン化標的細胞を認識することによる抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）である。各抗体のサブクラスは、Ｆｃ依存性エフェクター活性を媒介する能力の点で異なる。ヒトにおいて、ＩｇＧ１とＩｇＧ３サブクラスは、Ｃ１ｑに結合するため、ＣＤＣに対して高い効力を有する。また、ＩｇＧ１サブクラスは、ＦｃγＲに対する親和性が最も高いため、ＡＤＣＣとＦｃ依存性ＡＤＣＰで最も有効である。ＩｇＧ４サブクラスは、Ｃ１ｑに対する結合能力がなく、且つＦｃγＲ結合親和性が大幅に低下するため、エフェクター機能が顕著に低下する。

抗体６Ｙ－Ｇ１に基づいて、抗体のヒンジ領域を安定化するために変異Ｓ２２８Ｐを有するＩｇＧ４Ｐサブクラス抗体６Ｙ－Ｇ４を調製し（６Ｙ－Ｇ１における配列番号３に示されるＣＨは、配列番号４に示されるＣＨに置き換えられ、他の配列は変化しない）、抗体Ｆｃエフェクターを更に低下させる。

１７－ＳｃＦｖの調製を例として、本発明のＳｃＦｖの調製方法は以下の通りである：
制限エンドヌクレアーゼＨｉｎｄ ＩＩＩ／ＥｃｏＲＩを使用して、１７－ＳｃＦｖをコードするヌクレオチド配列（配列番号５９に示される）をｐｃＤＮＡ３．１（＋）プラスミド担体に連結した。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞が上記アミノ酸配列の抗体を発現するように、更にプラスミド担体をＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一過性にトランスフェクトした。ｐｒｏｔｅｉｎＡカラムを使用し、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により精製して１７－ＳｃＦｖ抗体が得られ、配列決定した後に予想される配列と一致した。

他のＳｃＦｖを類似の方法により調製して精製し、配列決定した後に予想される配列と一致した。

配列番号５９の配列は以下の通りである：
caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccctcgataattactactggagctggatccggcagcccccagggaagggactggagtggattggatatatctattacagtgggaacaccaactacaacccctccctcaagagtcgagtcaccatatcagtagacacgtccaagaaccagttctcgttgaggctgaggtctgtgaccgctgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaggagggcgatttttggaacgttactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcaggtggaggcggttcaggcggaggtggctctggcggtggcggatcggacatccagatgacccagtctccatcttccgtgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatctcttgtcgggcgaatcaggctattggcacttggttagcctggtatcagcaaaagccaggaaaagcccctaagctcctgatctatgcggcatccactttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcagcaatattatactactcccctcactttcggcggagggaccaagctggagatcaaa

実施例３：ＣＤ４７抗体の生物活性
１、ＦＡＣＳによる１７－ＳｃＦｖの結合活性の検出
１７－ＳｃＦｖのＣＨＯ－ＣＤ４７又はＪｕｒｋａｔ細胞表面のＣＤ４７への結合活性を検証した（図１Ａ～１Ｂ）。結合活性の実験操作は以下の通りである：
１７－ＳｃＦｖ及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４抗体（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４は、重鎖が配列番号８に示される可変領域及び配列番号４に示される定常領域で構成され、軽鎖が配列番号９に示される可変領域及び配列番号５に示される定常領域で構成される）をＰＢＳで異なる濃度（２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５、０．３１３、０．１５６、０．０７８、０．０３９、０．０２、０．０１μｇ／ｍＬ）に希釈し、ＣＨＯ－ＣＤ４７又はＪｕｒｋａｔ細胞表面上のＣＤ４７とともに、４℃で３０ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで１回洗浄し、Ｇｏａｔ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆｃ－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、品番：２１８３６３９）蛍光二次抗体を加え、４℃で１５ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、アップフローマシンでＰＥ－Ａ平均蛍光シグナル値を検出した。図１Ａ～１Ｂは、１７－ＳｃＦｖが細胞表面上のＣＤ４７に用量依存的に結合できることが示されている。

２、ＳＩＲＰ－α遮断活性
ＦＡＣＳ技術によりＣＨＯ－ＣＤ４７細胞表面上のＣＤ４７へのＳＩＲＰａ結合を遮断する１７－ＳｃＦｖの能力を検出し、１７－ＳｃＦｖ抗体をＰＢＳで異なる濃度（１６０、８０、４０、２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５μｇ／ｍＬ）に希釈し、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４及びＩｇＧ抗体（ＰＢＳで異なる濃度４０、２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５、０．３１３、０．１５６、０．０７８μｇ／ｍＬに希釈）をＣＨＯ－ＣＤ４７細胞表面上のＣＤ４７とともに４℃で３０ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで１回洗浄し、ＳＩＲＰα－Ｆｃ－Ｂｉｏ（６．５μｇ／ｍＬ）を加え、４℃で１５ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで１回洗浄し、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、品番：１９９２３４５）蛍光二次抗体を更に加え、４℃で１５ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、アップフローマシンでＰＥ－Ａ平均蛍光シグナル値を検出した。図２は、１７－ＳｃＦｖが細胞表面上のＣＤ４７へのＳＩＲＰα結合を用量依存的に阻害できることが示されている。

ＥＬＩＳＡ競合法を使用し、１７－ＳｃＦｖ又は１８個の抗体（抗体３、抗体３－３、抗体３－６、抗体６、抗体１０、抗体１１、抗体１６、抗体１８、抗体２４、抗体２５、抗体Ｌ１２、抗体Ｌ１、抗体Ｌ５、抗体Ｌ２４、抗体Ｌ２６、抗体１７、抗体６Ｙ－Ｇ１、抗体６Ｙ－Ｇ４）、陽性対照（抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）及び陰性対照（抗体ＩｇＧ）をＰＢＳで異なる濃度（１２、６、３、２、１．５、１．２、０．７５、０．３７５、０．１８８、０．０９４μｇ／ｍＬ）に希釈し、ＥＬＩＳＡプレートにコーティングされたＣＤ４７－Ｈｉｓ（２μｇ／ｍＬ）抗原とともに室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄し、ＳＩＲＰα－Ｆｃ－Ｂｉｏ（０．１μｇ／ｍＬ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＥＺ－Ｌｉｎｋ(登録商標) ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎ Ｒｅａｇｅｎｔｓ試薬キットによる調製を参照）リガンドを更に加えてＣＤ４７－Ｈｉｓ抗原とともに室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄した。結合したＳＩＲＰα－Ｆｃ－ＢｉｏとＨＲＰ－結合ストレプトアビジン二次抗体が化学発光反応を起こし、プレートリーダーによりＯＤ４５０値を検出し、ＯＤ４５０値に基づいて抗体のＩＣ_５０を換算して抗体のＳＩＲＰα遮断活性を判定した。図３Ａ～３Ｅは、測定される抗体が何れも、ＣＤ４７抗原へのＳＩＲＰα結合の用量依存的阻害を示したことが示されている。

３、赤血球凝集アッセイ
ＣＤ４７抗体の赤血球凝集反応を検出した。健康なヒトドナーからヘパリンナトリウムを含む抗凝固チューブに５ｍＬの新鮮な血液を採取し、まずリンパ球分離液でＰＢＭＣを分離し（他の目的のために）、次にチューブ底部から１ｍＬの赤血球を６ｍＬの生理食塩水に採取し、繰り返し洗浄し、２０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清に明らかな赤色がなくなるまで洗浄し、続いて生理食塩水で再懸濁して２％の赤血球懸濁液を作製した。室温下で、ＰＢＳで連続的に２倍希釈した（最高濃度８００ｎＭ、合計１２個の勾配）５０μＬのＣＤ４７抗体と、５０μＬの２％の赤血球懸濁液とを均一に混合し、９６ウェルのＵ形板に加えて４時間インキュベートし、次に抗体赤血球の凝集状況を評価し、９６ウェルのＵ形板を４５°傾斜させ、赤血球塊の流れ方向を観察し、「一字状」になっている場合は、赤血球が凝集していないことを意味する。試験されるＣＤ４７抗体の大部分は、高濃度の場合では赤血球の凝集を誘発し（抗体１７は明らかな赤血球の凝集を引き起こす）、６ｎＭ程度では赤血球の凝集を引き起こさない。そのうち、抗体Ｌ１２、抗体６Ｙ－Ｇ１（即ち抗体Ｌ１２－６）、抗体６Ｙ－Ｇ４は、任意の赤血球の凝集反応を引き起こさない（図４Ａ～４Ｅ）。陽性対照抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４は、赤血球の凝集を引き起こす可能性があり、ＡＢ６．１２－Ｇ１及びリガンドＳＩＲＰαは、赤血球の凝集を引き起こさない。ＡＢ６．１２－Ｇ１は、重鎖が配列番号６に示される可変領域及び配列番号３に示される定常領域で構成され、軽鎖が配列番号７に示される可変領域及び配列番号５に示される定常領域で構成される。Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４は、重鎖が配列番号８に示される可変領域及び配列番号４に示される定常領域で構成され、軽鎖が配列番号９に示される可変領域及び配列番号５に示される定常領域で構成される。表６に示される通りである。

４、ＣＤ４７結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）：
ＥＬＩＳＡ法により、ＣＤ４７抗体の、ヒトＣＤ４７及びマカクＣＤ４７への結合活性を測定した。抗体１７、抗体Ｌ１２、抗体６Ｙ－Ｇ１、抗体６Ｙ－Ｇ４及び抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４を５μｇ／ｍＬからＰＢＳで８個の濃度になるまで３倍希釈した後にＥＬＩＳＡプレートにコーティングされたヒト又はマカクＣＤ４７－Ｆｃ（２μｇ／ｍＬ）抗原とともに室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄し、ＨＲＰ－ａｎｔｉ－ｋａｐｐａ（１：１００００、ｓｉｇｍａ）二次抗体を更に加えて抗体とともに室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄した。結合したＨＲＰ－ａｎｔｉ－ｋａｐｐａとＴＭＢ基質が化学発光反応を起こし、プレートリーダーによりＯＤ４５０値を検出し、ＯＤ４５０値に基づいて抗体のＥＣ_５０を換算して抗体のヒト又はマカクＣＤ４７への結合活性を判定した。図５Ａ～５Ｂは、測定される抗体が何れも、抗体のＣＤ４７抗原への結合の用量依存的結合を示したことが示されている。各パラメータは表７に示される。

５、ＣＤ４７結合アッセイ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）
Ｆｏｒｔｅｂｉｏ法により、ヒトＣＤ４７への１１個の抗体（抗体Ｌ１２－１、抗体Ｌ１２－２、抗体Ｌ１２－３、抗体Ｌ１２－４、抗体Ｌ１２－５、抗体Ｌ１２－６、抗体Ｌ１２－７、抗体Ｌ１２－９、抗体Ｌ１２－１０、抗体Ｌ１２－１１、抗体Ｌ１２）及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４の結合活性を測定した。

Ｐｒｏｔｅｉｎ ＡセンサをＰＢＳで１０分間予め湿らせて使用に備え、試験される抗体を０．５％のＢＳＡを含有するｐＨ６．８のＰＢＳＴ（以下、希釈緩衝液と略称される）で１０μｇ／ｍＬに希釈し、シグナルが約１．７ｎｍになるまでＰＡセンサを抗体で固化させた。ＣＤ４７－Ｈｉｓ抗原を希釈緩衝液で５０、２５、１２．５、６．２５ｎＭに希釈した。希釈緩衝液、勾配濃度の抗原希釈液、再生緩衝液（ｐＨ８．４の１ＭのＭｇＣｌ_２）、中和緩衝液（ＰＢＳＴ）を９６ウェルプレートの対応する列に順に加え、下記ステップを実行した：（１）Ｂａｓｅｌｉｎｅ：希釈緩衝液においてベースラインを６０秒検出した。（２）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：抗原の勾配希釈液及びサンプルブランク（希釈緩衝液）において１００秒結合した。（３）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：希釈緩衝液において７００秒解離した。（４）Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：再生緩衝液において５秒再生した。（５）Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ：中和緩衝液において５秒中和した。（６）Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ及びＮｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎでサイクルを３回行った。

Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ８．２を使用してデータを処理及び分析し、参照（サンプルブランク）シグナルを差し引いた後にサンプルデータをフィッティングし、親和性定数ＫＤが得られた。抗体の親和性結果の統計は表８に示されている。結果は、１１個の抗体がほぼ同様の親和性でＣＤ４７抗原に結合したことが示されている。

６、貪食作用
ＣＤ４７抗体がマクロファージによるＣＤ４７を発現する標的細胞の貪食を強化するか否かを評価するために、体外貪食作用アッセイを行った。簡単に言えば、ＣＤ４７抗体（０．７ｎＭ）の存在下で、ＲＡＷ２６４．７マクロファージ（２×１０^５個／ｍＬ）（中国医学科学院基礎医学研究所細胞資源センター、３１１１Ｃ０００１ＣＣＣ０００１４６）及びＣＦＳＥで標識されたＲａｊｉ細胞（４×１０^５個／ｍＬ）（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＪＡ１５９５）を１：２の比率で２４ウェルボトムプレートに播種し、３７℃で暗所で２時間インキュベートした。インキュベートが完了すると、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、トリプシンでＲＡＷ２６４．７細胞を消化し、消化したマクロファージを１．５ｍＬのＥＰチューブに移し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を除去し、各チューブに１００μＬのＡＰＣ－Ｆ４／８０蛍光抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を加え、４℃で暗所で３０分間インキュベートし、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＰＢＳ緩衝液で２回洗浄した。ＢＤ Ｃ６フローサイトメーターで細胞を取得した。貪食指数を分析し、貪食指数の計算方法は以下の通りである：貪食指数＝ＣＦＳＥ陽性のマクロファージ数（即ち、腫瘍細胞を貪食したマクロファージ数）／マクロファージ５０００個あたり。抗体６Ｙ－Ｇ１、６Ｙ－Ｇ４、１７、Ｌ１２及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４は、強力な貪食強化能力が示される（図６Ａ～６Ｂ）。図６Ｂは、６Ｙ－Ｇ４による細胞貪食反応が６Ｙ－Ｇ１よりもわずかに弱いことが示され、ＩｇＧ４抗体のＦｃエフェクターがより弱いことが示される。

実施例４：血液細胞へのＣＤ４７抗体の影響
本発明の前に、ＳＩＲＰαを遮断し、且つＦｃドメインを含む既知のＣＤ４７結合分子（例えば、ＣＤ４７抗体及び組換えＳＩＲＰα－Ｆｃ融合タンパク質）は何れも、赤血球、血小板の減少を様々な程度で誘発した。そのため、カニクイザルの体内で血液細胞への本発明の抗体の影響を評価し、試験要件を満たすカニクイザルを合計８匹選択し、一般グレードで、雌雄がそれぞれ半分であり、雌雄の体重範囲がそれぞれ３．７０～５．３０ｋｇと２．７５～３．５５ｋｇであり、体重に応じて単純なランダム化の方法で４群に分け、１群あたり２匹の動物であり、雌雄がそれぞれ半分であった。陰性対照群に生理食塩水を投与し、被検物は抗体６Ｙ－Ｇ１（即ち、抗体Ｌ１２－６）及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４、ＡＢ６．１２－Ｇ１であり、溶媒としての生理食塩水を静脈内注入し、週に１回静脈内投与し、１→１０→１０→３０→３０ｍｇ／ｋｇの用量で５回投与し、投与体積が全て１０ｍＬ／ｋｇであった。投与終了後に４２日目まで観察した。図７Ａ～７Ｄに示すように、３つの抗体を投与した後に何れも、ヘモグロビン、赤血球の減少を引き起こし、約２週間後に最下点まで低下し、その後正常レベルに徐々に戻り、血小板の含有量が何れも投与前後で変動し、休薬後に正常に戻り、網状赤血球の数は投与後に何れも増加する傾向があり、そのうち６Ｙ－Ｇ１の網状赤血球の数は、投与後に他の２つの抗体よりも増加した。

実施例５：ＣＤ４７抗体のＦｃ変異体の体内での抗腫瘍活性
ヒト血液腫瘍ＭＶ４－１１全身性腫瘍モデルにおける試験薬抗体Ｌ１２の抗腫瘍作用を評価した。ＮＯＤ．ＳＣＩＤマウス（江蘇集萃薬康生物科技有限公司、体重１８ｇ～２２ｇ、マウス年齢６～８週齢）に尾静脈からＭＶ４－１１細胞（ＡＴＣＣ）を接種したところ、接種後の４週間後にヒト血液腫瘍ＭＶ４－１１全身性腫瘍モデルを確立した。試験を試験群ＡＢ６．１２－Ｇ１ ０．２ｍｇ／匹、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４ ０．２ｍｇ／匹、抗体Ｌ１２ ０．２ｍｇ／匹及び溶媒（生理食塩水）対照群に分け、１群あたり６匹であり、腹腔内投与し、週に３回、合計３週間投与した。生存期間延長時間（ＩＬＳ）に基づいて治療効果を評価し、投与期間の動物の体重変化と死亡状況に基づいて安全性を評価した。図８に示すように、試験薬ＡＢ６．１２－Ｇ１（０．２ｍｇ／匹）、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４（０．２ｍｇ／匹）が溶媒対照群と比較して、生存期間を７．４％及び６．５％延長し、統計学的に有意差がなく（ｐ＝１．０００）、顕著な抗腫瘍作用を示さなかった。抗体Ｌ１２（０．２ｍｇ／匹）の生存期間中央値は何れも６９日で、対照群と比較して、生存期間を何れも２７．８％延長し、統計学的に有意差が示された（ｐ＝０．００７）。

リンパ腫のラージモデルにおいて、抗体６Ｙ－Ｇ４の抗腫瘍活性を評価した。ラージ細胞をＮＯＤ．ＳＣＩＤマウスの皮下に移植し、ランダムに３群に分けた（１群あたり８匹のマウス、０日目）。第１群：溶媒対照（生理食塩水）、第２群：Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４（陽性対照）、第３群：６Ｙ－Ｇ４。腫瘍が触知可能になった時（５０ｍｍ^３、４日目）、各抗体又はビヒクル（緩衝液のみ）で治療し、腫瘍体積が約３０００ｍｍ^３に達した時にマウスを致死した。３日ごとに腫瘍体積を測定した。抗体を各用量１００μｇで、週に３回、合計３週間（マウス当たり合計９回の用量）腹腔内（ＩＰ）投与した。治療は、４日目に開始し、２１日目に終了した。図９に示すように、試験薬６Ｙ－Ｇ４及びＨｕ５Ｆ９－Ｇ４治療群は、０．１ｍｇ／匹の投与濃度で何れも、非常に顕著な抗腫瘍効果が示され、投与開始後に腫瘍の成長を明らかに阻害し、投与開始後の１７日目（ＰＧ－Ｄ１７）にマウス腫瘍の大部分が消失し、６Ｙ－Ｇ４（０．１ｍｇ／匹）、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４（０．１ｍｇ／匹）治療群の平均腫瘍体積がそれぞれ４ｍｍ^３（８匹のマウスで７匹の腫瘍が消失）、７ｍｍ^３（８匹のマウスで５匹の腫瘍が消失）であり、相対腫瘍阻害率ＴＧＩがそれぞれ９９．８７％と９９．７６％であり、溶媒対照群と比較して統計学的に何れも有意差を示した（全てのｐ値＜０．００１）。

Claims (11)

1. 抗体又は抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ４７に特異的に結合するとともに、配列番号１４に示されるＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１７に示されるＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２３に示されるＶＨ ＣＤＲ３、配列番号３０に示されるＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３２に示されるＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号３４に示されるＶＬ ＣＤＲ３を含む、
   ことを特徴とする抗体又は抗原結合断片。
2. 前記抗体又は抗原結合断片は、Ｋａｂａｔに従って番号付けられた以下の１つ又は複数から選ばれるアミノ酸残基変異を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、
   ことを特徴とする請求項１に記載の抗体又は抗原結合断片：
   （ａ）Ｒ８１Ｋ、及び
   （ｂ）Ｒ８２ａＳ。
3. 前記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１１又は５０に示されるアミノ酸配列、又は配列番号１１又は５０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨを含む、
   ことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体又は抗原結合断片。
4. 前記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１３、４５～４９、５１～５５及び６５から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列、又は配列番号１３、４５～４９、５１～５５及び６５の何れか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬを含む、
   ことを特徴とする請求項１～３の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
5. 抗体又は抗原結合断片であって、前記抗体又は抗原結合断片は、配列番号１１又は５０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＶＨと、配列番号１３又は６５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＶＬとを含む、
   ことを特徴とする抗体又は抗原結合断片。
6. 前記抗体は、配列番号６０及び６２～６３から選ばれる何れか１つのアミノ酸配列を含む重鎖Ｈと、配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖Ｌとを含む、
   ことを特徴とする請求項１～５の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
7. 前記抗体又は抗原結合断片は、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプ、又はＩｇＧ４サブタイプから選ばれるＩｇＧアイソタイプである、
   ことを特徴とする請求項１～６の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
8. 前記抗体又は抗原結合断片はＩｇＧ４Ｐである、
   請求項７に記載の抗体又は抗原結合断片。
9. 請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む、
   ことを特徴とする組成物。
10. （１）請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードすることを特徴とするポリヌクレオチド、或いは
    （２）請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含むことを特徴とする発現担体、或いは
    （３）請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードする１種又は複数種のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする細胞
    である生体材料。
11. がん又は感染症を治療する薬物の調製における、請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片、或いは請求項９に記載の組成物、或いは請求項１０に記載の生体材料の使用。