JP7821464B2 - 防疫支援装置、防疫支援方法及びプログラム - Google Patents

Description

本発明は、防疫支援装置、防疫支援方法及びプログラムに関する。

アフリカ豚熱、口蹄疫及び鳥インフルエンザ等の家畜伝染病は、畜産業に甚大な経済的損失をもたらすのみならず、人類にとって食料の安定的な確保という点に関して非常に重要な問題である。家畜における感染症の発生をコントロールするために、感染症の早期発見及び早期対策が必須である。

日本国内で蔓延している重要な家畜伝染病の一つに牛伝染性リンパ腫（ＥＢＬ）がある。ＥＢＬに対する検査の需要が増加する一方、公的検査機関である家畜保健衛生所では予算と人的資源の不足が大きな課題となっている。民間の検査会社でも検査の受診が可能であるが、検査費用が高額な上、検査結果を受け取るまで通常１週間程度を要するため、民間の検査会社を利用する生産者は少ない。また、仮に検査を受診できたとしても検査結果が防疫対策に活かされていない農場が多い。ＥＢＬに対する有効な防疫対策の実行を支援することができる包括的な技術又はシステムの確立が喫緊の課題となっている。

特許文献１には、動物感染症対策に関係する自治体及び農場の各主体が抑止策の作業段階にて意思決定を行うための指標を提供し、動物感染症に関するリスク情報を可視化する装置が開示されている。

特開２０１４－１９９５５６号公報

上記特許文献１に開示された装置では、例えば、ある地域で動物感染症が発生したときにそれが他の農場に空間伝染していく感染確率をマルコフ連鎖モデルで演算し、算出された感染確率をもとに疫学検査を実施すべき農場の目星を付けられるようにする。当該装置は、シミュレーションに基づくリスク情報を提示するものの、農場における実際の家畜伝染病の感染状況に基づいた防疫対策は提示できない。農場において実行可能な防疫対策は、農場の飼育環境によって制限されることがある。

本発明は上述の事情に鑑みてなされたものであり、家畜伝染病に対する有効な防疫対策の実行を支援することができる防疫支援装置、防疫支援方法及びプログラムを提供することを目的とする。

本発明の第１の観点に係る防疫支援装置は、
牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示部を備え、
前記農場に関する情報は、
牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
前記感染量を示すデータは、
ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む。

前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
配列番号９に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号１０に塩基配列が示されるリバースプライマーをさらに含む、
こととしてもよい。

また、前記提示部は、
前記牛個体の血中の前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに対する特異抗体の有無に基づいて前記防疫対策を提示する、
こととしてもよい。

また、前記提示部は、
前記牛個体の前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに対する感受性に基づいて防疫対策を提示する、
こととしてもよい。

また、前記提示部は、
前記牛個体が有する前記牛伝染性リンパ腫ウイルスの遺伝子配列を、前記牛個体以外の牛個体から検出された前記牛伝染性リンパ腫ウイルスの遺伝子配列と比較して、前記牛個体が前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに感染した経路を推定するための情報を提示する、
こととしてもよい。

本発明の第２の観点に係る防疫支援方法は、
牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示ステップを含み、
前記農場に関する情報は、
牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
前記感染量を示すデータは、
ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む。

本発明の第３の観点に係るプログラムは、
コンピュータを、
牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示部として機能させ、
前記農場に関する情報は、
牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
前記感染量を示すデータは、
ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む。

本発明によれば、家畜伝染病に対する有効な防疫対策の実行を支援することができる。

本発明の実施の形態に係る防疫支援装置の構成を示す図である。（Ａ）は防疫支援装置のハードウエア構成を示すブロック図である。（Ｂ）は防疫支援装置の機能を示すブロック図である。 農場データを例示する図である。 解析対象のデータを例示する図である。 図１の防疫支援装置によって提示される防疫対策（作業）を示す図である。 図１の防疫支援装置による防疫対策提示処理のフローチャートを示す図である。 図１の防疫支援装置による高リスク牛防疫対策選択処理のフローチャートを示す図である。 図１の防疫支援装置による情報提示処理のフローチャートを示す図である。 試験例１に係るアニーリング温度の検討結果を示す図である。 試験例１に係るＢＬＶのプロウイルスのｅｎｖ遺伝子と牛のＲＰＰ３０遺伝子を同時測定した結果を示す図である。 試験例１に係るリアルタイムＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）で定量したプロウイルス量とドロップレットデジタル（ｄｄ）ＰＣＲで定量したプロウイルス量との相関を示す図である。 試験例２に係る電気泳動で得られたバンドを示す図である。 試験例３に係る試験Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤの結果を示す図である。Ａ１、Ａ２及びＡ３はそれぞれ試験Ａにおけるサンプル１、２及び３の増幅曲線を示す。Ｂ１、Ｂ２及びＢ３はそれぞれ試験Ｂにおけるサンプル１、２及び３のシグナルを示す。Ｃ１、Ｃ２及びＣ３はそれぞれ試験Ｃにおけるサンプル１、２及び３のシグナルを示す。Ｄ１、Ｄ２及びＤ３はそれぞれ試験Ｄにおけるサンプル１、２及び３のシグナルを示す。

本発明に係る実施の形態について図面を参照して説明する。なお、本発明は下記の実施の形態及び図面によって限定されるものではない。なお、下記の実施の形態において、“有する”、“含む”又は“含有する”といった表現は、“からなる”又は“から構成される”という意味も包含する。

（実施の形態）
本実施の形態に係る防疫支援装置１００について説明する。防疫支援装置１００は、家畜伝染病に対する実行可能な防疫対策の立案に有用な情報処理装置である。家畜は、農用動物、愛玩動物及び実験動物を含み、特には、農用動物である。具体的には、家畜は、牛、水牛、羊、山羊、豚、馬、犬、猫、兎、ラクダ、ラマ、アルパカ、トナカイ、ロバ、ミンク、フェレット、ハムスター、マウス、ラット、モルモット、鶏、鳩、七面鳥、ウズラ、ホロホロチョウ、アヒル、ガチョウ、鯉、金魚、蚕及び蜜蜂等である。好適には、家畜は牛、豚又は鶏である。

家畜伝染病とは、ウイルス、マイコプラズマ、リケッチア、真菌、原虫及び寄生虫等の病原体に感染して引き起こされ、家畜個体から別の家畜個体への伝播性がある疾患である。家畜伝染病としては、牛疫、牛肺疫、口蹄疫、流行性脳炎、狂犬病、水疱性口内炎、リフトバレー熱、炭疽、出血性敗血症、ブルセラ症、結核、ヨーネ病、ピロプラズマ症、アナプラズマ症、伝達性海綿状脳症、鼻疽、馬伝染性貧血、アフリカ馬疫、豚熱、アフリカ豚熱、豚水疱病、家禽コレラ、高病原性鳥インフルエンザ、ニューカッスル病、家きんサルモネラ症、腐蛆病、ブルータング、アカバネ病、悪性カタル熱、チュウザン病、ランピースキン病、牛ウイルス性下痢、牛伝染性鼻気管炎、ＥＢＬ、アイノウイルス感染症、イバラキ病、牛丘疹性口内炎、牛流行熱、類鼻疽、破傷風、気腫疽、レプトスピラ症、サルモネラ症、牛カンピロバクター症、トリパノソーマ症、トリコモナス症、ネオスポラ症、牛バエ幼虫症、ニパウイルス感染症、馬インフルエンザ、馬ウイルス性動脈炎、馬鼻肺炎、ヘンドラウイルス感染症、馬痘、野兎病、馬伝染性子宮炎、馬パラチフス、仮性皮疽、小反芻獣疫、伝染性膿疱性皮膚炎、ナイロビ羊病、羊痘、マエディ・ビスナ、伝染性無乳症、流行性羊流産、トキソプラズマ症、疥癬、山羊痘、山羊関節炎・脳炎、山羊伝染性胸膜肺炎、オーエスキー病、伝染性胃腸炎、豚テシオウイルス性脳脊髄炎、豚繁殖・呼吸障害症候群、豚水疱疹、豚流行性下痢、萎縮性鼻炎、豚丹毒、豚赤痢、鳥インフルエンザ、鶏痘、マレック病、鶏伝染性気管支炎、鶏伝染性喉頭気管炎、伝染性ファブリキウス嚢病、鶏白血病、鳥結核、鳥マイコプラズマ病、ロイコチトゾーン症、あひるウイルス性肝炎、あひるウイルス性腸炎、兎出血病、兎粘液腫、バロア症、チョーク病、アカリンダニ症及びノゼマ症等が挙げられる。

以下では、家畜伝染病をＥＢＬとして本実施の形態について説明する。ＥＢＬは牛伝染性リンパ腫ウイルス（ＢＬＶ）を原因とする。日本国内でのＥＢＬの発生頭数は増加傾向にある。ＢＬＶは主にＢ細胞に感染し、宿主のＤＮＡ中にプロウイルスとして組み込まれ持続感染する。病態が進行するとＢＬＶ感染牛の２～３％がＢ細胞性リンパ腫、すなわちＥＢＬを発症する。ＢＬＶに対するワクチン及びＥＢＬの治療法はなく、ＥＢＬを発症した牛は廃棄される。ＢＬＶ感染牛は、乳量及び免疫が低下してしまう。感染拡大を防ぐためには、ＢＬＶ感染牛を摘発し、淘汰又は隔離飼育するしかないのが現状である。

図１（Ａ）に示すように、防疫支援装置１００は、記憶部１０、ＲＡＭ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｃｅｓｓ Ｍｅｍｏｒｙ）２０、入力装置３０、表示装置４０及びＣＰＵ（Ｃｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｕｎｉｔ）５０が、バス６０で接続された構成を有する。

記憶部１０は、ＲＯＭ（Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）、ＨＤＤ（Ｈａｒｄ Ｄｉｓｋ Ｄｒｉｖｅ）及びフラッシュメモリ等の不揮発性の記憶媒体を備える。記憶部１０は、各種データ及びソフトウェアプログラムの他、農場データ１１及び提示プログラム１２を記憶している。

牛が飼育されている農場に関する情報としての農場データ１１は、例えば、牛の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生子牛の隔離飼育の可否を示すデータを含む。図２に例示された農場データ１１は、複数の農場Ｆ１、Ｆ２及びＦ３の各農場において、牛の淘汰又は更新、隔離飼育、つなぎ飼育及び新生子牛の隔離飼育のそれぞれについて、可能である場合は“可”、不可能である場合は“不可”が割り当てられたテーブルである。なお、隔離飼育とは、１頭又は数頭の牛を牛群から隔離した独立した牛舎（隔離牛舎）で飼育することである。隔離飼育が可能な場合、例えば、フリーストール牛舎で飼育されていた牛群の中から感染牛を隔離牛舎に移して飼育することで、感染牛から非感染牛へのＢＬＶの伝播を防ぐことができる。新生子牛は成牛よりも小さいため、新生子牛に対しては、成牛に要する隔離牛舎よりも容積が小さい牛舎を隔離牛舎とすることができる。つなぎ飼育とは、つなぎ牛舎内に牛を固定又はつなぎ留めて飼育することである。つなぎ飼育が可能な場合、例えば、感染牛をつなぎ牛舎に移すことで、フリーストール牛舎で飼育されている非感染牛と感染牛との接触を避けることができる。

図１（Ａ）に戻って、ＲＡＭ２０はＣＰＵ５０のメインメモリとして機能し、ＣＰＵ５０による提示プログラム１２の実行に際し、提示プログラム１２がＲＡＭ２０に展開される。ＲＡＭ２０には、入力装置３０を介して入力されたデータが一時的に記憶される。

入力装置３０は、使用者が防疫支援装置１００にデータを入力するためのハードウエアである。入力装置３０を介して入力されるデータには、牛におけるＥＢＬの原因となるＢＬＶの感染量を示すデータが含まれる。ＢＬＶの感染量は、例えばプロウイルスのコピー数である。プロウイルスのコピー数は、公知の技術、例えばリアルタイムＰＣＲ又はｄｄＰＣＲで定量することができる。ＰＣＲには、ＢＬＶのｅｎｖ遺伝子又はｐｏｌ遺伝子等を標的としたプライマーを使用すればよい。また、複数の遺伝子領域を増幅対象として複数種のプライマー対を使用するマルチプレックス化したＰＣＲでプロウイルスのコピー数を定量してもよい。

入力装置３０を介して入力されるデータには、農場データ１１、検出された牛ごとのプロウイルスのコピー数に加え、当該複数の牛の血中のＢＬＶに対する特異抗体の有無を示すデータ、当該複数の牛のＢＬＶに対する感受性に関するデータ、及び各牛が有するＢＬＶの遺伝子配列データ等である。入力装置３０を介して入力されたデータは、記憶部１０に記憶される。

血中のＢＬＶに対する特異抗体の有無を示すデータは、例えばＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）法で特異抗体が検出されたか（陽性）否か（陰性）を示すデータである。ＢＬＶに対する特異抗体は市販のＥＬＩＳＡキット（例えば、ＪＮＣ社製）を用いて検出できる。特異抗体としては、牛の血清中に含まれる抗ＢＬＶ Ｅｎｖ ｇｐ５１抗体が例示される。

ＢＬＶに対する感受性に関するデータは、例えば、病原性抵抗性遺伝子又は病原性感受性遺伝子の有無を示すデータである。病原性抵抗性遺伝子又は病原性感受性遺伝子の有無は、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）法で判別できる。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法によって、例えばＭＨＣクラスＩＩ ＤＲＢ３対立遺伝子型に応じてＢＬＶに対する感受性又は抵抗性の有無が決定できる。ＭＨＣクラスＩＩ ＤＲＢ３対立遺伝子型は、制限酵素Ｒｓａ Ｉ、Ｈａｅ ＩＩＩ及びＢｓｔＹ Ｉを使用して判別できる。

ＢＬＶの遺伝子配列データは公知のシーケンス解析法によって取得される。複数の牛各々から検出された複数のＢＬＶの遺伝子配列データがあらかじめ記憶部１０に記憶されていてもよい。この場合、遺伝子配列データは、解析対象として入力される遺伝子配列データと比較可能なデータベースとして記憶部１０に記憶される。

図３は、入力装置３０を介して入力された解析対象のデータを例示する。当該データは、農場で飼育されている牛個体それぞれに割り当てられたＩＤ（１～３２）に、プロウイルスのコピー数、特異抗体の有無を示すデータ及びＢＬＶに対する感受性の有無を示すデータがそれぞれ対応付けられている。

表示装置４０は、ＣＰＵ５０によるデータ解析の結果を出力するためのディスプレイである。ＣＰＵ５０は、記憶部１０に記憶された提示プログラム１２をＲＡＭ２０に読み出して、提示プログラム１２を実行することにより、以下に説明する機能を実現する。

図１に戻って、図１（Ｂ）は、ＣＰＵ５０が実現する機能を示すブロック図である。提示プログラム１２は、ＣＰＵ５０に提示部１及び出力部２としての機能を実現させる。

提示部１は、ＢＬＶのプロウイルスのコピー数及び牛が飼育されている農場に関する農場データ１１に基づいて防疫対策を提示する。具体的には、提示部１は、プロウイルスのコピー数に応じて、農場データ１１を参照して農場で実行可能な防疫対策を提示する。さらに、提示部１は、プロウイルスのコピー数に加えて、特異抗体の有無及びＢＬＶに対する感受性に基づいて防疫対策を提示する。

図４は、提示部１によって提示される防疫対策（作業）を示す。プロウイルスのコピー数が多いほど（例えば５０ｎｇのＤＮＡあたり５００コピー以上）、牛から他の牛にＢＬＶが伝播するリスクが高い。例えば、提示部１は、プロウイルスのコピー数が５００未満の牛に対しては、特異抗体の有無に応じて＃１～４の防疫対策を提示する。一方、プロウイルスのコピー数が５００以上の牛（高リスク牛）については、提示部１は、農場データ１１及び特異抗体の有無に加え、場合によってはＢＬＶに対する感受性に応じて、＃５～１２の防疫対策を提示する。なお、＃１１及び＃１２の対応策における“体質”とは、体内でのＢＬＶの増殖のしやすさ等で、例えば上記のＤＲＢ３対立遺伝子型によって規定されるＢＬＶに対する感受性の有無である。

提示部１は、提示する防疫対策を牛のＩＤに関連付けて記憶部１０に記憶させる。提示部１は、防疫対策とともに当該防疫対策に関連付けられた牛のＩＤを出力部２に入力する。出力部２は、入力された防疫対策と、その防疫対策に関連付けられたＩＤを、表示装置４０を介して表示する。これにより、表示装置４０には、防疫対策とその防疫対策に関連付けられた牛のＩＤが表示される。

提示部１は、牛が有するＢＬＶの遺伝子配列を、当該牛以外の牛から検出されたＢＬＶの遺伝子配列と比較して、当該牛がＢＬＶに感染した経路を推定するための情報を提示する。遺伝子配列の比較では、提示部１は、例えば系統樹解析によりＢＬＶの型が一致するか、ＢＬＶが近縁であるか否か等を判定する。系統樹解析は公知の方法で実行できる。提示部１は、記憶部１０に記憶された系統樹解析ソフトウェアプログラムを実行することで、ＢＬＶの遺伝子配列から求められるＢＬＶ間の進化距離に基づいて構築された系統樹を取得する。系統樹における個々のＢＬＶには、そのＢＬＶが検出された牛のＩＤが対応付けられている。出力部２は系統樹を、解析対象のＢＬＶが検出された牛のＩＤが識別できるように表示装置４０を介して表示する。

防疫支援装置１００による防疫対策提示処理を図５及び図６に示すフローチャートを参照してさらに詳細に説明する。ここでは、図２に例示されていない農場Ｆに図３に示すＩＤ１～３２の牛が飼育されているものとする。使用者は、あらかじめＩＤ１～３２の牛について図３に示すデータを得ているものとする。記憶部１０には、使用者によってあらかじめ入力された農場Ｆに関する農場データ１１が記憶されている。また、記憶部１０には後述の“Ｎ”が記憶されており、防疫対策提示処理の開始前はＮ＝０である。

入力装置３０を介して使用者が図３に示すデータを防疫支援装置１００に入力し、防疫対策提示処理の開始を指示したことを契機に、防疫支援装置１００は防疫対策提示処理を開始する。図５に示すように、提示部１は、入力されたデータを記憶部１０に記憶させ、ＩＤの個数Ｎｔを計数する（ステップＳ１）。続いて、提示部１はＮに１を加算する（ステップＳ２）。提示部１は、記憶部１０に記憶されたデータを参照し、ＩＤがＮに一致する牛のデータを取得する（ステップＳ３）。提示部１は、取得した牛のデータにおける特異抗体が陽性か否かを判定する（ステップＳ４）。特異抗体が陽性でない、すなわち陰性の場合（ステップＳ４；Ｎｏ）、提示部１は、プロウイルスのコピー数が１コピー以上か否かを判定する（ステップＳ５）。プロウイルスのコピー数が１コピー以上でない、すなわちコピー数が０の場合（ステップＳ５；Ｎｏ）、提示部１は、＃１に関連付けてＮ（＝ＩＤ）を記憶部１０に記憶させる（ステップＳ６）。プロウイルスのコピー数が１コピー以上の場合（ステップＳ５；Ｙｅｓ）、提示部１は、＃２に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させる（ステップＳ７）。

特異抗体が陽性の場合（ステップＳ４；Ｙｅｓ）、提示部１は、プロウイルスのコピー数が１コピー以上か否かを判定する（ステップＳ８）。プロウイルスのコピー数が０の場合（ステップＳ８；Ｎｏ）、提示部１は、＃３に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させる（ステップＳ９）。プロウイルスのコピー数が１コピー以上の場合（ステップＳ８；Ｙｅｓ）、提示部１は、プロウイルスのコピー数が５００未満であるか否かを判定する（ステップＳ１０）。プロウイルスのコピー数が５００未満である場合（ステップＳ１０；Ｙｅｓ）、提示部１は、＃４に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させる（ステップＳ１１）。

プロウイルスのコピー数が５００以上である場合（ステップＳ１０；Ｎｏ）、提示部１は、高リスク牛防疫対策選択処理を行う（ステップＳ１２）。ここで、図６を参照しながら高リスク牛防疫対策選択処理について説明する。提示部１は、農場データ１１を参照して牛の淘汰又は更新が可能か否かを判定する（ステップＳ２１）。牛の淘汰又は更新が可能な場合（ステップＳ２１；Ｙｅｓ）、提示部１は、＃５に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させる（ステップＳ２２）。次に、提示部１は、牛のデータにおける感受性を示すデータの有無を判定する（ステップＳ２３）。感受性を示すデータが有る場合（ステップＳ２３；Ｙｅｓ）、提示部１は、感受性の有無を判定する（ステップＳ２４）。牛が感受性を有する場合（ステップＳ２４；Ｙｅｓ）、提示部１は、＃９に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ２５）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。一方、感受性がない、すなわち抵抗性がある場合（ステップＳ２４；Ｎｏ）、提示部１は、＃１０に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ２６）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。感受性を示すデータがない場合（ステップＳ２３；Ｎｏ）、提示部１は、＃１１に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ２７）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。

牛の淘汰又は更新が不可な場合（ステップＳ２１；Ｎｏ）、提示部１は、農場データ１１を参照し、隔離飼育が可能か否かを判定する（ステップＳ２８）。隔離飼育が可能な場合（ステップＳ２８；Ｙｅｓ）、提示部１は＃６に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ２９）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。隔離飼育が不可な場合（ステップＳ２８；Ｎｏ）、提示部１は、農場データ１１を参照し、つなぎ飼育が可能か否かを判定する（ステップＳ３０）。つなぎ飼育が可能な場合（ステップＳ３０；Ｙｅｓ）、提示部１は＃７に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ３１）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。つなぎ飼育が不可な場合（ステップＳ３０；Ｎｏ）、提示部１は、農場データ１１を参照し、新生子牛の隔離飼育が可能か否かを判定する（ステップＳ３２）。新生子牛の隔離飼育が可能な場合（ステップＳ３２；Ｙｅｓ）、提示部１は＃８に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ３３）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。

新生子牛の隔離飼育が不可な場合（ステップＳ３２；Ｎｏ）、提示部１は、牛のデータにおける感受性を示すデータの有無を判定する（ステップＳ３４）。感受性を示すデータが有る場合（ステップＳ３４；Ｙｅｓ）、提示部１は、＃１２に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ３５）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。感受性を示すデータがない場合（ステップＳ３４；Ｎｏ）、提示部１は、＃１１に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させて（ステップＳ２７）、高リスク牛防疫対策選択処理を終了する。

図５に戻って、ステップＳ６、Ｓ７、Ｓ９、Ｓ１１及びＳ１２に続いて、提示部１は、ＮがＮｔに一致するか否かを判定する（ステップＳ１３）。ＮがＮｔと異なる場合（ステップＳ１３；Ｎｏ）、提示部１はステップＳ２に戻る。ＮがＮｔに一致する場合（ステップＳ１３；Ｙｅｓ）、出力部２は記憶部１０を参照し、ＮとＮに関連付けられた防疫対策（＃１～１２）を表示装置４０に表示する（ステップＳ１４）。これにより、表示装置４０には、Ｎ、すなわち牛のＩＤと防疫対策とが表示される。防疫支援装置１００は防疫対策提示処理を終了する。

防疫対策には感染経路の推定が有用である。使用者の指示に従って、提示部１は、感染経路を推定するための情報を提示する情報提示処理を実行する。図７を参照して、情報提示処理について説明する。なお、記憶部１０には、農場Ｆで飼育されている複数の感染牛が有するＢＬＶの遺伝子配列データがあらかじめ記憶されている。

提示部１は、使用者の指示があるまで待つ（ステップＳ４１；Ｎｏ）。使用者が入力装置３０を介して情報提示処理を指示するデータを入力すると（ステップＳ４１；Ｙｅｓ）、提示部１は、系統樹解析ソフトウェアプログラムを実行し、系統樹を取得する（ステップＳ４２）。出力部２は、系統樹を表示装置４０に表示する（ステップＳ４３）。防疫支援装置１００は情報提示処理を終了する。

本実施の形態に係る防疫支援装置１００は、ＢＬＶのプロウイルスのコピー数及び牛が飼育されている農場Ｆに関する農場データ１１に基づいて防疫対策を提示する。このため、ＢＬＶに対する有効な防疫対策の実行を支援することができる。これにより、使用者及び生産者（畜主）は、実行可能性を優先させた最適な防疫対策を立案することができる。

農場データ１１は、牛の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生子牛の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含んでもよいこととした。高リスク牛防疫対策選択処理において、提示部１は、牛の淘汰又は更新→隔離飼育→つなぎ飼育→新生子牛の隔離飼育といった予防効果の高い順に提示するため、各農場で実行可能かつ予防効果の高い防疫対策を提示することができる。なお、農場データ１１は、牛の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生子牛の隔離飼育の可否を示すデータに限定されず、例えば、農場規模、飼養衛生管理の方法、実施している防疫対策の内容、農場の地理的条件、飼料の種類、農場を出入りする人及び車両、堆肥の取扱い及び野生動物の侵入の有無等を含んでもよい。

なお、図４に示す防疫対策は例示であってこれに限定されない。提示部１は、プロウイルス量に応じた防疫対策を提示してもよい。例えば、提示部１は、プロウイルスのコピー数の閾値を超える感染牛を優先的に淘汰又は更新するという防疫対策、及びプロウイルスのコピー数の閾値を超える感染牛を優先的に隔離飼育するという防疫対策を提示してもよい。また、垂直感染を防ぐために、提示部１は、プロウイルスのコピー数の閾値を超える感染牛から子牛を産ませないという防疫対策を提示してもよい。

感染量を示すデータは、ｄｄＰＣＲ等で定量されたプロウイルスのコピー数を含むこととした。ｄｄＰＣＲはＢＬＶの量を高精度に絶対定量できるため、防疫支援装置１００は、精度の高い感染リスクに係る情報に基づいて実行可能かつ予防効果の高い防疫対策を提示することができる。

提示部１は、血中のＢＬＶに対する特異抗体の有無に基づいて防疫対策を提示することとした。これにより、ＢＬＶ感染の有無を防疫対策に活かすことができる。また、特異抗体の有無をプロウイルスのコピー数と組み合わせることで、移行抗体の影響又は検出限界以下の可能性を使用者に示唆することができる。提示部１は、特異抗体の有無に基づいて、出力部２を介して感染歴を表示装置４０に表示してもよいし、防疫対策としてワクチン接種を提示してもよい。

提示部１は、ＢＬＶに対する感受性に基づいて防疫対策を提示することとした。これにより、提示部１は、淘汰又は更新、及び保有を優先する牛を提示することができるため、使用者は効率のよい防疫対策を実施できる。

提示部１は、牛が有するＢＬＶの遺伝子配列を、当該牛以外の牛から検出されたＢＬＶの遺伝子配列と比較して、当該牛がＢＬＶに感染した経路を推定するための情報を提示することとした。感染源を含む感染した経路を推定することで、使用者は、感染源の農場からの牛の導入の停止及び導入前の検査の徹底等の防疫対策をとることができる。なお、提示部１は、農場間の牛の移動歴に関するデータを系統樹解析の結果と組み合わせることで農場間の疫学的関連性を提示してもよい。

また、提示部１は、プロウイルスのコピー数が１コピー以上か否かを判定した後に特異抗体が陽性か否かを判定するようにしてもよい。提示部１は、プロウイルスのコピー数が０で、特異抗体が陰性の場合、＃１に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させ、プロウイルスのコピー数が１以上で、特異抗体が陰性の場合、＃２に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させる。提示部１は、プロウイルスのコピー数が０で、特異抗体が陽性の場合、＃３に関連付けてＮを記憶部１０に記憶させ、プロウイルスのコピー数が１以上で、特異抗体が陽性の場合、ステップＳ１０以降を実行する。

なお、防疫支援装置１００は、インターネット等のネットワーク上のサーバとして機能させてもよい。この場合、例えば、生産者がインターネットを介して防疫支援装置１００にアクセスし、牛個体を識別可能なＩＤを入力することで、記憶部１０に記憶されたＩＤに関連付けられた防疫対策を閲覧できる。農場は複数であってもよく、農場固有の識別情報でのアクセスに応じて、防疫支援装置１００は、当該農場で飼育されている牛の検査結果及び提示された防疫対策の他、農場における感染率（農場で飼育されている牛の頭数に対する高リスク牛の頭数）の推移、感染牛のプロウイルスのコピー数による伝播リスクのランキング、検査履歴及び未検査牛のＩＤ等の情報を、インターネットを介して生産者の端末に伝送してもよい。

防疫支援装置１００で用いられる提示プログラム１２及び各種ソフトウェアプログラムは、ＣＤ－ＲＯＭ（Ｃｏｍｐａｃｔ Ｄｉｓｃ Ｒｅａｄ Ｏｎｌｙ Ｍｅｍｏｒｙ）、ＤＶＤ（Ｄｉｇｉｔａｌ Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ Ｄｉｓｃ）、光磁気ディスク（Ｍａｇｎｅｔｏ－Ｏｐｔｉｃａｌ Ｄｉｓｃ）、ＵＳＢ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｓｅｒｉａｌ Ｂｕｓ）メモリ、メモリカード及びＨＤＤ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体に格納して配布することが可能である。そして、提示プログラム１２及び各種ソフトウェアプログラムを特定の又は汎用のコンピュータにインストールすることによって、当該コンピュータを防疫支援装置１００として機能させることが可能である。また、提示プログラム１２及び各種ソフトウェアプログラムをインターネット上の他のサーバが有する記憶装置に格納しておき、当該サーバから提示プログラム１２及び各種ソフトウェアプログラムがダウンロードされるようにしてもよい。

以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。

（試験例１：ｄｄＰＣＲによるＢＬＶのプロウイルスの定量）
宮崎県内の和牛農場において、ＢＬＶ感染と診断された牛１３９頭の血液を用いた。ＭａｇＤＥＡ Ｄｘ ＳＶ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）及びｍａｇＬＥＡＤ １２ｇＣ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いてＤＮＡを抽出した。抽出したＤＮＡの濃度をＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）にて測定した。

リアルタイムＰＣＲによるＢＬＶのプロウイルス量（プロウイルスのコピー数／５０ｎｇ ＤＮＡ）の測定には、牛伝染性リンパ腫ウイルス検出用プローブ／プライマー／ポジティブコントロール（タカラバイオ社製）とＣｙｃｌｅａｖｅ ＰＣＲ（商標） Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｍｉｘ ＳＰ（タカラバイオ社製）を用いて、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７３００ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて測定した。

ｄｄＰＣＲでＢＬＶのプロウイルスを検出するために、ＢＬＶのｅｎｖ遺伝子を標的遺伝子としてプライマーとプローブを設計した。ｅｎｖ遺伝子を標的遺伝子とするフォワードプライマー、リバースプライマー及びプローブの塩基配列をそれぞれ配列番号１、２及び３に示す。ｅｎｖ遺伝子に対するプローブはＦＡＭで標識した。ＢＬＶの感染率を算出するために牛のＲＰＰ３０遺伝子をハウスキーピング遺伝子として測定した。ＲＰＰ３０遺伝子を標的遺伝子とするフォワードプライマー、リバースプライマー及びプローブの塩基配列をそれぞれ配列番号４、５及び６に示す。ＲＰＰ３０遺伝子に対するプローブはＨＥＸで標識した。

ＰＣＲ反応液（２０μｌ）の組成は、２×ｄｄＰＣＲ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ １０μｌ、プライマー（ｅｎｖ遺伝子） １μｌ、プライマー（ＲＰＰ３０遺伝子） １μｌ、テンプレート ２μｌ及び水 ６μｌとした。サーマルリサイクルは、９５℃を１０分の初期変性の後、９４℃を３０秒及び５１℃を１分のサイクルを４０サイクルに続いて９８℃を１０分、８℃で維持とした。

ドロップレットはＱＸ－２００（商標） ｄｒｏｐｌｅｔ ｇｅｎｅｒａｔｏｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社製）にて調製した。ＰＣＲ反応はサーマルサイクラーＣＦＸ９６（商標）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社製）を使用した。ＰＣＲ反応後、ＱＸ２００（商標） ｄｒｏｐｌｅｔ ｒｅａｄｅｒ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社製）を用いてドロップレット数を測定した。ＢＬＶのプロウイルス量（感染細胞の割合）は以下の式から算出した。
プロウイルス量＝（ＢＬＶのコピー数／（ＲＰＰ３０のコピー数／２））×１００

リアルタイムＰＣＲの測定値とｄｄＰＣＲの測定値との相関性を分析するために、スピアマンの順位相関係数を用い、有意水準５％で検定を行った。

（結果）
ＢＬＶの温度グラジエント（５０～６３℃）を用いたアニーリング温度の条件検討では、図８に示すように、５０℃又は５１℃で最も良好な結果が得られた。１ウェルでＢＬＶのプロウイルス（ｅｎｖ遺伝子）とＲＰＰ３０遺伝子の２つの遺伝子を同時測定した結果、図９に示すように、ｅｎｖ遺伝子及びＲＰＰ３０遺伝子ともにシグナルが強く、ポジティブとネガティブとが明確に区別され、非常に良好な結果が得られた。ＢＬＶのプロウイルス量を算出し、リアルタイムＰＣＲとの相関性を分析した結果、図１０に示すように両者に有意な相関が確認された。

（試験例２：ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法によるＤＲＢ３対立遺伝子型の判別）
次のように、Ｗｉｚａｒｄ（商標） Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を使用してＤＮＡを抽出する。
１．１．５ｍＬチューブにＣｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ９００μｌと血液サンプル３００μｌとを加え、転倒混和する。
２．１０分間静置する。
３．１４０００×ｇで２０秒間遠心する。
４．上清を捨てた後、ペレットをボルテックスする。
５．Ｎｕｃｌｅｉ Ｌｙｓｉｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ３００μｌを加え、軽くピペッティングした後、転倒混和する。
６．３７℃で３０分間静置する。
７．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ １００μｌを加え、２０秒間ボルテックスする。
８．１４０００×ｇで３分間遠心する。
９．上清を吸引し、１００％イソプロパノール３００μｌが入った１．５ｍＬ平底チューブに移し、転倒混和する。
１０．１４０００×ｇで１分間遠心する。
１１．上清をデカントで捨て、７０％エタノール３００μｌを加え、１４０００×ｇで１分間遠心する。
１２．上清を２００μｌピペットで吸引除去し、蓋を開けたままにして風乾させる。
１３．滅菌水を１００μｌ加え、６５℃で１時間又は４℃に一晩静置する。
１４．ＤＮＡ濃度をＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００で測定する。

続いて、ＰＣＲでＢｏＬＡ－ＤＲＢ３ ｅｘｏｎ２領域を増幅する。ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ Ｈｓ ｋｉｔ（タカラバイオ社製）を使用して次の反応液を調製する。プライマー（ＨＬ０３０）及びプライマー（ＨＬ０３２）の塩基配列を配列番号７及び８にそれぞれ示す。反応液の組成は、水 １４．５μｌ、１０×バッファー ２μｌ、ｄＮＴＰ ２μｌ、１０μＭプライマー（ＨＬ０３０） ０．２μｌ、１０μＭプライマー（ＨＬ０３２） ０．２μｌ、Ｅｘ Ｔａｑ Ｈｓ ０．１μｌ及びテンプレート（ＤＮＡ試料） １μｌである。

反応液を０．２ｍｌ ＰＣＲ用チューブに入れ、サーマルサイクラーで反応させる。サーマルサイクルは、９４℃を１０分の後、９４℃を３０秒、６０℃を１５秒及び７２℃を３０秒のサイクルを３５サイクルに続いて、７２℃を１０分、４℃を維持、である。

以下のようにＰＣＲ産物を制限酵素ＢｓｔＹ Ｉ（ＢｉｏＬａｂｓ社製）で切断し、電気泳動で確認される切断断片の大きさによりＤＲＢ３対立遺伝子型の判定を行う。反応液の組成は、ＰＣＲ産物 １０μｌ、ＢｓｔＹ Ｉ（１００００Ｕ／ｍｌ、） ０．５μｌ、ＮＥＢｕｆｆｅｒ２．１：１０×濃度（ＢｉｏＬａｂｓ社製） １．５μｌ及び水 ３．０μｌである。

１．反応液を０．２ｍＬ ＰＣＲ用チューブに入れ、６０℃、５時間反応させる。
２．電気泳動にはＭｅｔａＰｈｏｒ（商標） Ａｇａｒｏｓｅ（Ｌｏｎｚａ社製）を濃度３％で使用する。
３．１％ＴＢＥを緩衝液に使用し、１００Ｖ、４５～５０分泳動を行う。

図１１は電気泳動で得られたバンドを示す。サンプル６は抵抗性型のバンドパターンｅを示す。バンドパターンｅが検出されたサンプルの牛はＥＬＶに抵抗性である。

（試験例３：ｄｄＰＣＲによるＢＬＶの検出）
宮崎県内の農場の牛３頭（サンプル１～３）から採取した血液について、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ、試験Ａ）、試験例１に係るｅｎｖ遺伝子を標的としたプライマー及びプローブを使用したｄｄＰＣＲ（試験Ｂ）、ＢＬＶのｐｏｌ遺伝子を標的としたプライマー及びプローブを使用したｄｄＰＣＲ（試験Ｃ）、及び試験例１に係るｅｎｖ遺伝子を標的としたプライマー及びプローブとｐｏｌ遺伝子を標的としたプライマー及びプローブとを併用したマルチプレックスｄｄＰＣＲ（試験Ｄ）で測定した。

試験ＡにおけるｑＰＣＲでは、ウシ白血病ウイルス検出キット（ＲＣ２０１Ａ、タカラバイオ社製）を、キットに添付の取扱説明書に従って使用した。試験ＢにおけるｄｄＰＣＲは、試験例１のｄｄＰＣＲと同様に行った。試験Ｃでは、フォワードプライマー、リバースプライマー及びプローブを、ｐｏｌ遺伝子を標的とするフォワードプライマー、リバースプライマー及びプローブに代えて、試験例１のｄｄＰＣＲと同様に行った。ｐｏｌ遺伝子を標的とするフォワードプライマー、リバースプライマー及びプローブの塩基配列をそれぞれ配列番号９、１０及び１１に示す。ｐｏｌ遺伝子を標的とするプローブもＦＡＭで標識した。

試験Ｄでは、ＰＣＲ反応液（２０μｌ）の組成を、２×ｄｄＰＣＲ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ １０μｌ、プライマー（ｅｎｖ遺伝子） ０．５μｌ、プライマー（ｐｏｌ遺伝子） ０．５μｌ、プライマー（ＲＰＰ３０遺伝子） １μｌ、テンプレート ２μｌ及び水 ６μｌとすることを除いて、試験例１と同様にｄｄＰＣＲを行った。

（結果）
試験ＡのｑＰＣＲの場合、サンプル１及びサンプル２については増幅を確認できたが（図１２のＡ１及びＡ２）、サンプル３についてはＣｔ値が高く、シグナルが異常に低い値を示した（図１２のＡ３）。試験Ｂのｅｎｖ遺伝子を標的としたｄｄＰＣＲでは、サンプル１及びサンプル３については増幅を示すシグナルを検出できたが（図１２のＢ１及びＢ３）、サンプル２については検出できなかった（図１２のＢ２）。試験Ｃのｐｏｌ遺伝子を標的としたｄｄＰＣＲでは、サンプル２及びサンプル３については増幅を示すシグナルを検出できたが（図１２のＣ２及びＣ３）、サンプル１については検出できなかった（図１２のＣ１）。試験Ｄのｐｏｌ遺伝子及びｅｎｖ遺伝子を標的としたｄｄＰＣＲでは、サンプル１～３すべてについて増幅を示すシグナルを検出できた（図１２のＤ１、Ｄ２及びＤ３）。

上述した実施の形態は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。すなわち、本発明の範囲は、実施の形態ではなく、特許請求の範囲によって示される。そして、特許請求の範囲内及びそれと同等の発明の意義の範囲内で施される様々な変形が、本発明の範囲内とみなされる。

本発明は、家畜伝染病の防疫に好適である。

１ 提示部、２ 出力部、１０ 記憶部、１１ 農場データ、１２ 提示プログラム、２０ ＲＡＭ、３０ 入力装置、４０ 表示装置、５０ ＣＰＵ、６０ バス、１００ 防疫支援装置

Claims (7)

1. 牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示部を備え、
   前記農場に関する情報は、
   牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
   前記感染量を示すデータは、
   ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
   前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
   配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む、
   防疫支援装置。
2. 前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
   配列番号９に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号１０に塩基配列が示されるリバースプライマーをさらに含む、
   請求項１に記載の防疫支援装置。
3. 前記提示部は、
   前記牛個体の血中の前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに対する特異抗体の有無に基づいて前記防疫対策を提示する、
   請求項１又は２に記載の防疫支援装置。
4. 前記提示部は、
   前記牛個体の前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに対する感受性に基づいて防疫対策を提示する、
   請求項１から３のいずれか一項に記載の防疫支援装置。
5. 前記提示部は、
   前記牛個体が有する前記牛伝染性リンパ腫ウイルスの遺伝子配列を、前記牛個体以外の牛個体から検出された前記牛伝染性リンパ腫ウイルスの遺伝子配列と比較して、前記牛個体が前記牛伝染性リンパ腫ウイルスに感染した経路を推定するための情報を提示する、
   請求項１から４のいずれか一項に記載の防疫支援装置。
6. 牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示ステップを含み、
   前記農場に関する情報は、
   牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
   前記感染量を示すデータは、
   ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
   前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
   配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む、
   防疫支援方法。
7. コンピュータを、
   牛個体における牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染量を示すデータ及び前記牛個体が飼育されている農場に関する情報に基づいて防疫対策を提示する提示部として機能させ、
   前記農場に関する情報は、
   牛個体の淘汰又は更新の可否、隔離飼育の可否、つなぎ飼育の可否及び新生牛個体の隔離飼育の可否の少なくとも１つを含み、
   前記感染量を示すデータは、
   ドロップレットデジタルＰＣＲで定量されたプロウイルスのコピー数を含み、
   前記ドロップレットデジタルＰＣＲに使用するプライマーが、
   配列番号１に塩基配列が示されるフォワードプライマー及び配列番号２に塩基配列が示されるリバースプライマーを含む、
   プログラム。