JP7832142B2 - 変性エラスチンの分解低下の抑制剤、正常なエラスチン線維の維持剤、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤及びエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質のスクリーニング方法 - Google Patents
変性エラスチンの分解低下の抑制剤、正常なエラスチン線維の維持剤、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤及びエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質のスクリーニング方法Info
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Description
〔1〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を有効成分として含む変性エラスチンの分解低下の抑制剤。
〔2〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を有効成分として含む正常なエラスチン線維の維持剤。
〔3〕エラスチン-エラフィン複合体の形成を抑制する、上記〔1〕又は〔2〕に記載の剤。
〔4〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を有効成分として含むエラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤。
〔5〕エラスチン-エラフィン複合体形成を抑制することにより、エラスチン線維のターンオーバー促進のために使用される、上記〔4〕に記載のエラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤。
〔6〕上記植物抽出物が、パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物及びシロガラシ抽出物からなる群より選択される1以上である上記〔1〕~〔5〕のいずれかに記載の剤。
〔7〕上記〔1〕、〔3〕又は〔6〕に記載の変性エラスチンの分解低下の抑制剤を含む、変性エラスチンの分解低下の抑制用組成物。
〔8〕上記〔2〕、〔3〕又は〔6〕に記載の正常なエラスチン線維の維持剤を含む、正常なエラスチン線維の維持用組成物。
〔9〕上記〔4〕~〔6〕のいずれかに記載のエラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤を含む、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制用組成物。
〔10〕皮膚外用剤である上記〔7〕~〔9〕のいずれかに記載の組成物。
〔11〕化粧料である上記〔7〕~〔10〕のいずれかに記載の組成物。
〔12〕飲食品である上記〔7〕~〔9〕のいずれかに記載の組成物。
〔13〕被検物質の存在下及び非存在下で、エラフィンと固相化エラスチンとを接触させる工程(a)、上記被検物質の存在による、上記エラフィンと固相化エラスチンとの結合の阻害を検出する工程(b)、及び、上記被検物質の存在によりエラフィンと固相化エラスチンとの結合が阻害された場合に、上記被検物質をエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質として選択する工程(c)を含む、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質のスクリーニング方法。
〔14〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を投与する、エラスチン-エラフィン複合体の形成を抑制する方法。
〔15〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を投与する、変性エラスチンの分解低下を抑制する方法。
〔16〕パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を投与する、正常なエラスチン線維を維持する方法。
〔17〕エラスチン-エラフィン複合体の形成を抑制するための、パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物の使用。
〔18〕変性エラスチンの分解低下を抑制するための、パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物の使用。
〔19〕正常なエラスチン線維を維持するための、パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物の使用。
上記のように、エラスチン-エラフィン複合体の形成によりエラスチンの分解が低下する。エラスチン-エラフィン複合体の形成を抑制することにより、変性エラスチンの分解低下を抑制することができる。変性エラスチンの分解低下抑制により、エラスチン線維のターンオーバーが促進され、皮膚等の組織における変性エラスチンの蓄積が抑制又は改善されると期待される。また、正常なエラスチン線維の維持が可能になると期待される。
本発明において、単にエラスチンという場合、及び、エラスチン-エラフィン複合体におけるエラスチンは、エラスチン線維の元となるトロポエラスチン、エラスチン線維中に含まれるエラスチン、及び加齢又は刺激に伴い、一部構造の変化、分解又は断片化が見られたトロポエラスチンやエラスチン線維を含む。
正常なエラスチン線維の維持とは、正常なエラスチン線維の量、並びに本来の機能及び物性の低下を抑制することを意味する。正常なエラスチン線維の量、並びに本来の機能及び物性の低下抑制は、本発明において有効成分として使用される植物抽出物を使用しなかった場合と比較して、正常なエラスチン線維の量、並びにその本来の機能及び物性の低下が抑制されればよい。
パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を有効成分として含む変性エラスチンの分解低下の抑制剤及び正常なエラスチン線維の維持剤も、本発明に包含される。
トウキンセンカ抽出物は、トウキンセンカの花の抽出物が好ましい。シロガラシ抽出物は、シロガラシの種子の抽出物が好ましい。アルテア抽出物は、アルテアの根の抽出物が好ましい。セイヨウシロヤナギ抽出物は、セイヨウシロヤナギの樹皮の抽出物が好ましい。ショウブ抽出物は、ショウブの根茎の抽出物が好ましい。ダイズ抽出物は、ダイズの芽の抽出物が好ましい。
本発明における植物抽出物は、上記のような抽出方法で得られた各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮物又はその乾燥粉末、これらの精製物を含む。また、抽出物は、抽出溶媒とは異なる溶媒で希釈又は溶解させて用いることもできる。
本発明のエラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤、変性エラスチンの分解低下の抑制剤及び正常なエラスチン線維の維持剤は、それ自体をエラスチン-エラフィン複合体形成抑制剤、変性エラスチンの分解低下の抑制剤及び正常なエラスチン線維の維持剤として使用することができる。また、後述するエラスチン-エラフィン複合体形成抑制用組成物等に配合して使用することができる。本発明の複合体形成抑制剤等は、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制用組成物等の有効成分として好適に使用される。
本発明のエラスチン-エラフィン複合体形成抑制用組成物、変性エラスチンの分解低下の抑制用組成物及び正常なエラスチン線維の維持用組成物を、まとめて複合体形成抑制用組成物等ともいう。本発明の複合体形成抑制用組成物等は、上記の植物抽出物を有効成分として含有するものである。植物抽出物及びその好ましい態様は、上記の通りである。
本発明の複合体形成抑制剤等及び複合体形成抑制用組成物等は、例えば、皮膚におけるエラスチン-エラフィン複合体の形成抑制のため、皮膚における変性エラスチンの分解低下の抑制のため、又は、皮膚において正常なエラスチン線維を維持するために好適に使用することができる。
上記の植物抽出物を有効成分として含む本発明の複合体形成抑制剤等及び複合体形成抑制用組成物等は、例えば、エラスチン-エラフィン複合体形成抑制が所望される状態又は症状の予防又は改善に用いることができる。一態様において、本発明の複合体形成抑制剤等及び複合体形成抑制用組成物等は、例えば、エラスチン-エラフィン複合体形成を抑制することにより、日光弾性症等の予防又は改善に用いることができる。また、本発明の複合体形成抑制剤等及び複合体形成抑制用組成物等は、エラスチン-エラフィン複合体形成を抑制することにより、皮膚の弾性の維持、しわ及び/又はたるみの予防又は改善等の美容目的のためにも有用である。予防は、発症の防止、発症の遅延、発症率の低下等を包含する。改善は、症状の軽快、症状の好転、症状の進行抑制、症状の治癒等を包含する。
本発明の複合体形成抑制用組成物等は、皮膚外用剤以外の医薬品又は医薬部外品として使用することもできる。
別の実施態様においては、複合体形成抑制用組成物等を飲食品とすることもできる。本発明の複合体形成抑制用組成物等を化粧料、医薬品、医薬部外品等の皮膚外用剤、飲食品等とする場合について以下に説明する。
エラスチン-エラフィン複合体形成抑制のため、変性エラスチンの分解低下抑制のため、又は、正常なエラスチン線維を維持するための、パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物の使用。
パッションフルーツ抽出物、トウキンセンカ抽出物、シロガラシ抽出物、アルテア抽出物、セイヨウシロヤナギ抽出物、ショウブ抽出物、トウニン抽出物及びダイズ抽出物からなる群より選択される1以上の植物抽出物を投与する、エラスチン-エラフィン複合体形成を抑制する方法;上記植物抽出物を投与する、変性エラスチンの分解低下を抑制する方法;上記植物を投与する、正常なエラスチン線維を維持する方法。
上記植物抽出物は、好ましくは皮膚に適用され、皮膚におけるエラスチン-エラフィン複合体形成抑制のため、皮膚における変性エラスチンの分解低下抑制のため、又は、皮膚において正常なエラスチン線維を維持するために好適に使用される。
上記使用は、治療的使用であってもよく、非治療的使用であってもよい。上記方法は、治療的な方法であってもよく、非治療的な方法であってもよい。非治療的とは、医療行為、すなわち人間の手術、治療又は診断を含まない概念である。
本発明のエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質のスクリーニング方法は、被検物質の存在下及び非存在下で、エラフィンと固相化エラスチンとを接触させる工程(a)、上記被検物質の存在による、上記エラフィンと固相化エラスチンとの結合の阻害を検出する工程(b)、及び、上記被検物質の存在によりエラフィンと固相化エラスチンとの結合が阻害された場合に、上記被検物質をエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質として選択する工程(c)を含む。本発明スクリーニング方法は、インビトロのスクリーニング方法である。
エラスチンは、固相担体にあらかじめ固相化して使用する。固相化エラスチンを使用すると、洗浄等の操作が容易となる。
固相化するエラスチンには、トロポエラスチン、αエラスチン等を使用することが好ましい。特にヒトの上記エラスチンを使用することが好ましい。ヒト等のエラスチンは市販されており、市販品を使用することができる。エラスチンには、タグペプチドなどの修飾が付加されたものを使用しても良い。
固相担体は特に限定されず、例えば、マイクロプレート、マイクロチップ、スライドガラス等の形態のものを用いることができる。固相担体の材質は特に限定されず、プラスチック、ガラス、セラミックス、金属酸化物等の材質のものを使用することができる。
例えば、固相担体として、96ウェル等のマイクロプレートを用いる場合、エラスチンを緩衝液に溶解又は懸濁させたエラスチン溶液を、マイクロプレートの各ウェルに分注し、4~37℃で0.5~30時間放置することにより、エラスチンを固相化することができる。エラスチン溶液を調製するための緩衝液は特に限定されず、炭酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)等の緩衝液を使用することができる。エラスチン溶液中のエラスチンの濃度は、1~100μg/mLが好ましい。
固相化したエラスチン及び固相担体は、工程(a)を行う前にPBS等の緩衝液で洗浄し、結合しなかったエラスチンを除去することが好ましい。また、結合しなかったエラスチンを除去後、ブロッキング液(スキムミルク、アルブミン等を1~10%含有するPBS)を添加してブロッキングすることが好ましい。
被検物質は特に限定されず、例えば、植物抽出液、細胞抽出液、細胞培養上清、発酵生産物、タンパク質、ペプチド、ビタミン類、合成化合物等が挙げられる。これらは既知物質であってもよく、新規物質であってもよい。
工程(a)の後、工程(b)を行う前に、PBS等の緩衝液で洗浄し、未反応の被検物質やエラフィンを除去することが好ましい。
また、別の実施態様においては、工程(a)を経た固相化エラスチンに、HRP、AP等の酵素、又は、蛍光色素で標識された抗エラフィン抗体を反応させ、未反応の抗体を洗浄した後、抗体に結合していたHRP、AP等の酵素に対応した基質を反応させて発色又は発光を得て、又は、励起により蛍光を得て、該発色若しくは発光又は蛍光をプレートリーダー等を用いて定量することにより、固相化エラスチンに結合したエラフィンを定量することができる。
上記蛍光色素として、Alexa Fluor(登録商標)488、Alexa Fluor(登録商標)596(Thermo Fisher Scientific Inc.)等を使用することができる。
被検物質の存在下及び非存在下で固相化エラスチンに結合したエラフィンの量を比較し、被検物質が存在する方が、存在しない場合と比較して固相化エラスチンに結合したエラフィンの量が少ない場合、該被検物質は、エラフィンと固相化エラスチンとの結合を阻害したと評価される。
本発明のスクリーニング方法によれば、簡便に、効率よくエラスチン-エラフィン複合体形成抑制作用を有する物質のスクリーニングを行うことができる。
サンプルには、以下の植物抽出物を使用した。
(1)パッションフルーツ抽出物:パッションフルーツ(クダモノトケイソウの果実)の抽出物
(2)トウキンセンカ抽出物:トウキンセンカの花の抽出物
(3)シロガラシ抽出物:シロガラシの種子の抽出物
(4)アルテア抽出物:アルテアの根の抽出物
(5)セイヨウシロヤナギ抽出物:セイヨウシロヤナギの樹皮の抽出物
(6)ショウブ抽出物:ショウブの根茎の抽出物
(7)トウニン抽出物:モモの種子の抽出物
(8)ダイズ抽出物:ダイズ芽の抽出物
トロポエラスチン及び血清アルブミンを重炭酸バッファー(14mM 炭酸水素ナトリウム、6mM 炭酸ナトリウム)にて20μg/mLに希釈したものを、96穴プレートに100μLずつ添加した。
パラフィルムで蓋を密閉した後、4℃で24時間反応させた。反応液を除去し、各ウェルあたり150μLのウォッシュバッファー(0.5% Tween20 in PBS)を添加した後、ウォッシュバッファーを除去した。これを3回繰り返した。このステップを以下「洗浄」とする。次いで、各ウェルあたり100μLのブロッキングバッファー(5% スキムミルク in PBS)を添加した後、室温で1時間反応させた。ブロッキングバッファーの洗浄を行った後、複合体形成反応を行った。サンプルの複合体形成反応においては、各ウェルあたり50μLの複合体反応液(エラフィン(終濃度1μg/mL)、上記の植物抽出物(終濃度10μg/mL)及びDMSO(終濃度0.1%) in 希釈バッファー)を添加し、37℃で1時間反応させた。
複合体形成抑制率(%)=100-100×(Ab(S)-Ab(NC))/(Ab(PC)-Ab(NC))
Claims (6)
- トウキンセンカ抽出物を有効成分として含む、エラスチン-エラフィン複合体の形成抑制による日光弾性線維症の予防又は改善剤。
- 変性エラスチンの分解低下を抑制する、請求項1に記載の剤。
- 請求項1又は2に記載の日光弾性線維症の予防又は改善剤を含む、日光弾性線維症の予防又は改善用組成物。
- 皮膚外用剤である請求項3に記載の組成物。
- 化粧料である請求項3又は4に記載の組成物。
- 飲食品である請求項3に記載の組成物。
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