JPS5817763B2 - 可溶化シルクペプチドの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、絹繊維を処理して、分子量分布が一定（１５
００〜５０００又は５０００〜５００００）である、可
溶化されたシルクペプチドを、化粧料に応用することに
関するものである。

本発明の特徴は、まずその処理法（製造法）は、従来技
術をもとに、これを改良して、その結果、化粧料への配
合性を一段と向上し、さらにチロシナーゼ活性抑制作用
及び保湿作用を有した有利なものである。

すなわち、本発明は、可溶化されたシルクペプチドであ
って、その分子量分布状態が１５００〜５０００又は５
０００〜５００００に限定されたものを得て、これを化
粧料に用いることにあり、その結果、保湿性作用が向上
し、皮膚の乾燥防止効果を高めて、外傷などに対する皮
膚表皮組織の再生が促進される効果が期待できる。

又、本発明によるシルクペプチドの可溶化物は、チロシ
ナーゼ活性抑制作用により、皮膚の黒色メラニン色素の
生成を抑制し、これによって、肌を色白に保つなどの美
容的効果が期待できる。

又、化粧料への配合性は、従来のシルク分解物を用いる
ときは、その処方中に分散剤などの添加が必要であった
が、可溶化されているだめ、その添加が不用となり、こ
れがだめ、シルク自体の有する特有の肌ざわりが得られ
る。

つまり、肌に対する感触が、従来のシルクからの処理（
製造）物に比べ、一段と有利である。

従来の公知なシルクから得られるペプチドについてみれ
ば、わが国では古くから、その応用がなされていて、た
とえば［特公昭２５−３７３３Ｊ、［特公昭２６−４９
４７Ｊ、「特公昭２７−２９９」、［特公昭４Ｏ−２４
９０Ｊ、「特公昭４２−１７０３０Ｊなどがある。

最近では、本発明者らによる［特開昭５４−１３８１３
２Ｊがある。

上記した内、［特開昭５４−１３８１３２Ｊ以外では、
いずれも濃い酸液や石灰などを用いて苛酷な条件を採用
し、これによって絹繊維蛋白質を分解溶解させる方法が
利用されている。

いずれにしても、これまでのシルクペプチドの製造にお
いては、得られたペプチドは完全に溶解された状態にな
く、さらにペプチドの分子量停缶について、検討された
ものも見当らない。

又、分子量を制禦して得る方法もなかった。

つまり、本発明者らは、絹繊維の可溶化されたシルクペ
プチドを得るに当って、まず上記した公知技術をもとに
検討を加えてみだが、公知技術を大別すれは、（１）強
酸又は強アルカリによる処理法。

（２）銅・エチレンジアミン又は銅・アンモニアによる
溶解法があり、そこで本発明者らは（１）及び（２）の
方法をもとに検討を加えてみたわけである。

そして、実験の結果、（１）の方法では、強酸又は強ア
ルカリにて処理後、中和工程で、大量の沈殿物が発生し
、不溶性ペプチドが多く、可溶部（上層）に移行する量
は、こく微量であった。

これに対して、（２）の処理方法を応用すれば、必要に
応じた分子量分布状態の射的化シルクペプチドが得られ
やすいことが推定された。

つまり、銅・エチレンジアミン又は銅・アンモニアを絹
繊維の処理（溶解）剤として用いることの方が、分子量
停缶の状態を制禦して、広範囲なペプチドの内から一定
にコントロールして、製造できることが示された。

以下に、銅・エチレンジアミンを用いた実験結果につい
て、実験例により詳記する。

実験例 １ 絹繊維（たとえば平巻系本線り晒）を用いて、これを銅
・エチレンジアミン溶液に溶かし、希酢酸で中和し、濾
過を行ってから、流水中で三昼夜透析を行い、過剰の銅
・エチレンジアミンを流出させてから、次いで濾過して
得た濾液に陽イオン交換樹脂（たとえばＤｏｗｅｘ ５
０ ｗｘ −２）を加えて、３０分間攪拌を行い、これ
によって残留する銅・エチレンジアミンを除去する。

イオン交換樹脂による操作（攪拌）によって、不溶性と
なった物質を除去するために、！濾過を行う。

この濾過した濾液は、その才までは、一夜放置すれは凝
固してしまうので、直ちにＩＯＮ水酸化ナトリウム液を
力１えて、濾液が０１〜０．２Ｎ水酸化すトリウム液に
なるように調整する。

次いで８０〜９０°Ｃで５〜３０分間撹拌しながら、加
熱処理したのち、希鉱酸（たとえば希硫酸）又は無水コ
・・り酸を加えて、ｐＨ６，０〜７０へ戻し、濾過して
、可酸化シルクペプチドを得る。

この方法を用いる際の要部としては、力ロ熱温度として
９０°Ｃ前後での処理時間がポイントであり、これによ
って、次の表「表１」に示すごとく、１５００〜５００
０の分子量停年をもった状態のＥＴ［化シルクペプチド
か得られることがわかった。

実験例 ２ 絹繊維（たとえば平巻系本線り晒）を銅・エチレンジア
ミン溶液に溶かし、４０〜８０℃で１〜４時間加温処理
し、希酢酸で中和し、濾過したのち、流水中で約３昼夜
の透析を行い、過剰の銅・エチレンジアミンを流出して
から、濾過後、ソノ得られた濾液に、陽イオン交換樹脂
（たとえは、Ｄｏｗｅｘ ５０ ｗｘ −２） を力
ｎえて、１５〜３０分間程度攪拌させて、残留する銅・
エチレンジアミンを除去するが、イオン交換樹脂を加え
ること及び、攪拌操作による物理的な影響を受けて、不
溶性となった物質を除去するために、イオン交換樹脂処
理後に、さらに濾過を行う。

濾過後の液は、４０℃、又は５０°Ｃで１時間で力日温
処理したものは、これにＩＯＮ水酸化ナトリウム液をカ
ロえて、ｐＨ９〜１１にしてから、次に無水コノ・り酸
を加えて、３０分〜１時間攪拌俗解し、ｐＨ６〜７とす
る。

ｐＨか６〜７に至らないときは、希酢酸でｐＨを６〜７
に調整する。

上述した温度以外での高温下処理では、イオン交換樹脂
処理後、直にＩＯＮ水酸化す）−１，１ウム液を加えて
、即ｐＨを６〜７に調整しても良い。

つまり、４０〜５０℃の１時間の加温処理によって得ら
れるシルクペプチドは、その分子量が大きいことから、
これにともなって、経時的に凝固されるので、上述した
二段階ｐＨ操作を用いるとよいことがわかった。

このようにして得られたシルクペプチドの分子量分布状
態をみると、次表「表２」に示すととく１であった。

「表１１（実験例１による力１熱及び処理時間との関係
からみた、可鹸化シルクペプチドの分子量分布状態） （表１の注解） 表１中、検体Ａ１〜４は、銅・エチレンジアミン酵解後
、透析し、０、ＩＮ水酸化ナトリウム液にしてから、９
０℃で５〜３０分間加熱処理して得られた、可鹸化シル
クペプチドの分子量分布状態を示す。

表１中、検体Ａ５〜８は、銅・エチレンジアミン溶解後
、透析し、０゜２Ｎ水酸化ナトリウム液にしてから、９
０℃で５〜３０分間加熱処理して得られた、可酸化シル
クペプチドの分子量分布状態を示す。

「表２」（実験例２による加温及び処理時間との関係か
らみた、可溶化ンルクペプチドの分子量分布状態） 以上、実施例１〜２について、表１〜２に示した分子量
状態についての測定は、セファテックスＧ−２５、同一
５０又は同一７５を用い、ゲル濾過法により実施した。

又、その際に用いた標準物質としては、ブルーテキスト
リン（ＴＯＰ：分子量２００万）、ブラジキニン三酢酸
塩（ＢＫ：分子量１２４０）、グルタチオン（ＧＬＵＴ
：分子量３０７）、グリシルグリシン（ＧＧＧ：分子
量１８９）を用い行った。

測定条件としては、たとえば分子量１００〜５０００の
範囲では、セファデックスＧ−２５ｆｉｎｅ を用い、
カラムロ径：２、３ ｃｍ１長さ７８ｃｒＩＬｏセファ
テックスＧ−２５の容積２５０ｒｒＬｌ、流速は約３０
ｍｌ／ ｈｒ で実施した。

実験例 ３ 前述した、それぞれの方法で得られた、可溶化シルクペ
プチドを、その分子量分布状態で区分して、捷とめてみ
ると、「表３」のととくであった。

さらに、これについて分子量分布状態からみたメラニン
色素の生成抑制作用に関して実験した成績嘴秦結果は、
下表「表４」のごとくであった。

実験法は、チロシン又はドーパに、チロシナーゼを作用
させて、これによって生成される有色（黒色）メラニン
を、６４０ｎｍで、その吸収度から測定する方法を採用
した。

（反応系組成） Ｌ−チロシン ・・・・・・・・・・・・・
・・ ０．５ ｍｌリン酸緩衝液 ・・・・
・・・・・・・・・・・ ２．０ ｍｌ蒸留水又は検体
・・・・・・・・・・・・・・・ ２．０
ｍｌ銅イオン（１係溶液） ・・・・・・・・・・・
・・・・０．０５ｍ１チロシナーゼ（１ｒｒＩＪ？／ｍ
ｌ） 上表「表４」に示すととく、５Ｔ溶化シルクペプチドに
は、すべてにメラニン色素の生成抑制作用が認められ、
その内、とくに作用が強く示されるものは、分子量分布
状態からみて、比較的低分子化されたペプチドが有利で
あることが判明した。

次ニ、”Ｔ＠化シルクペプチドの保水性効果をみるため
に、前記した実施例１〜２で得られた検体のなかから２
〜３を選び出し、恒温恒湿機を用いて、その効果につい
て測定した。

実験方法は次に示す方法で行った。

（実験法） 実験例１〜２で得だ可溶化シルクペプチドのなかから、
検体Ａ２，４，６，８，１４を用いて、それぞれ約３ｇ
を秤量瓶に精秤し、恒温恒湿機を用いて、３０，５０，
７０の相対湿度（イ）条件下で、残留物が恒量になるま
で放置する。

残留物中に水分が、どの程度とり込まれるかを測定し、
各種の検体の濃度で割、吸収率（イ）を求める方法を採
用した。

その結果は、第１図に示すごとく、吸湿率がいずれも相
当高いことがわかった。

又、とくに吸湿率が高いものとしては、検体Ａ６や８，
４などの実施例１で示した、銅・エチレンジアミンを用
いた方法で、透析後に０．１〜０．２Ｎ水酸化ナトリウ
ムｍ液になるように調整し、８０〜９０℃の加熱処理し
て得られる、可溶化シルクペプチドの方が良いことがわ
かった。

つまり、銅・エチレンジアミンを用いる方法でも、実験
例２で示す処理法よりも、実験例１における処理法で得
られたところの可溶化シルクペプチドで、分子量分布状
態からは、１５００〜５０００程度にあるものが有利で
あることがわかった。

以上の実験結果から、これを基礎に最良の製法を検討し
た結果、メラニン色素生成抑制作用と共に吸湿性の高い
可溶化シルクペプチドを得ることで、しかも分子量の労
作状態が、高分子から低分子までの間で、一定の範囲で
コントロールして得る方法としては、次の実施例１〜２
が良いことがわかった。

実施例 １ （実験例１から検討した結果にもとすく製造法絹繊維（
たとえば平巻系本線り晒）６０ｇを、あらかじめエチレ
ンジアミン４８ｇ、水酸化第２銅３６ｇが溶は込んでい
る水溶液６００１ｒＬｌに入れ、ガラス棒で３０分間攪
拌を行い酵解させたのち、３Ｎ酢酸にてｐＨ６〜７に調
整して、次に綿栓−過を行い不醇物を除去させて、得ら
れた濾液をセルロースチューブＣ−６−５（、Ｖ ｉｓ
ｋｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）に入れて、流水中にて
１〜２昼夜の透析を行い、透析した溶液を吸引濾過して
、この得られた濾液に対し精製水を加えて２０００ｗＬ
ｌにメスアップしてから、強酸性陽イオン交換樹脂（た
とえば、Ｄｏｗｅｘ ５０ ｗｘ−２）約８０ｇ（湿体
状態のもの）を加え、スターンで、２０〜３０分間攪拌
して、吸引濾過により樹脂を除去する。

次に、この濾液にＩＯＮ水酸化す） ＩＪウム液を加え
、０．１〜０．２Ｎ水酸化ナトリウム液になるように調
整して、約９０℃で１０分間加熱処理を行い、次に希硫
酸又は無水コハク酸を加えて、ｐＨ６，０〜７．０に戻
してから、ケイソウ土を敷いたブフナー濾斗を用いて濾
過を行い、この濾液を約８０℃で１時間加熱滅菌して、
その収量が約６１の可溶性シルクペプチドｍ液が得られ
た。

この溶液の分子量分布は、１５００〜５０００にピーク
をもち、各種の化粧料中に配合できる。

実施例 ２ （実験例２から検索した結果にもとすく製造法）絹繊維
（たとえば、千巻系本線り晒）６０ｇを、あらかじめエ
チレンジアミン４８９、水酸化第２銅３６ｇが解は込ん
でいる水溶液６００ＴＬｌに入れ、ガラス棒で３０分間
攪拌を行い酵解させたのち、６０°Ｃで２時間加熱処理
して、次に３Ｎ酢酸でｐＨ６，０〜７．０に調整する。

調整したのち、綿栓濾過を行い、不溶物を除去して得ら
れた濾液を、セルロースチューブＣ−６５（Ｖｉｓｋｉ
ｎｇＣｏｍｐａｎｙ社製）に入れて、流水中で１〜２昼
夜の透析を行う。

透析した溶液を吸引濾過して、この濾液に対し、精製水
を加えて、２０００ｍ１にメスアップしてから、次に強
酸性陽イオン交換樹脂（たとえば、Ｄｏｗｅｘ ５０
ｗｘ −２）約８０ｇ（湿体状態にあるもの）を加えて
、スターラーにて２０〜３０分間攪拌して吸引濾過によ
り、樹脂を除去する。

この濾液に対して、ＩＮ水酸化す） ＩＪウム液を加え
て、ｐＨ６゜０〜７．０にｐＨを戻してから、ケイソウ
土を敷いたブフナー濾斗を用いて濾過して得る濾液を、
約８０℃で１時間加熱滅菌をして、その収量が約６１の
ＯＴ的化シルクペプチド溶液が得られた。

この溶液の分子量分布は、５０・００〜５００００にピ
ークをもち、各種の化粧料中に配合できる。

□上記した実施例１又ぽ２は、その分子量からすれば
、たとえば乳液やクリームなどの乳化を必要とするもの
に有利である。

参考処方例 １−乳液 実施例１又は２による 可溶性シルクペプチド溶液 ・・・・・・・・・ ５
．０％流動パラフィン ・・・・・・・・・
１２０係ラノリン ・・・・・・・
・・ ４．０〃オレイン酸 ・・・・
・・・・・ ３５〃トリエタノールアミン ・・
・・・・・・・ １．０〃オクチルドデシルミリステ
ート・・・・・・ ３．０〃防腐剤及び香料
・・・・・・・・・ 適 量精製水をもって全量
１００係とする。

参考処方例 ２−クリーム 実施例２又３による 可酸性シルクペプチド溶液 ・・・・・・・・・ ６
．０係ホリオキシエチレンオンイルエーテル ・・・・・・・・・ ２．０〃 ラノリン ・・・・・・・・・ ６
．０〃セタノール ・・・・・・・・
・ ２５〃ミツロウ ・・・・・・
・・・ ８．０〃流動パラフイン ・・・
・・・・・・ ８．０〃モノスアアリン酸グリセリン
・・・・・・・・・ ２０〃コメ胚芽油（オリザオイ
ルＳ−１） ・・・・・・・・・ ３．０〃 パルミチン酸イソプロピル ・・・・・・・・・ ＩＬ
Ｏ〃セレシン ・・・・・・・・・
３．Ｏ〃ホウ砂 ・−・・・・・・
・ １．０〃防腐剤及び香料 ・・・・−
・・・・ 適 量精製水をもって、全量１００係とす
る。

上記した各処方例に示した化粧料は、これを、皮膚や頭
髪に塗缶又は塗擦して用いれば、肌や髪に対して光沢（
艶）と張りを与え、張りの状態は、肌や髪が有すると同
様な柔軟性を有していて、保湿性に富む。

又、皮膚化粧料に用いる曲、皮膚外用軟膏剤や外用湿布
剤などに添加しやすく、配合したことによって、疾患部
の治療効果を促進する。

つまり、皮膚上皮層部の乾燥を防ぎ、外傷部への、主薬
剤の経皮吸収性が向上し、早期回復が期待できる。

したがって、鎮痛消炎・・ツブ剤やプラスターなどや、
亜鉛華軟膏、肝脂軟膏、チンク油、ホウ酸軟膏やあるい
は副腎皮質ホルモンや抗生物質などを含有した軟膏剤又
は坐剤、その曲、パン創膏類などにも配合することが出
来、それらに配合した製品自体の乾燥も防ぐことができ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、絹繊維から得られた可酸化シルクペプチドの
、処理操作別にみたときの吸湿率を示すグラフで、グラ
フ上の各数字は、実施例１〜２による処理操作で得られ
るものであって、表１と表２中に示しだ、各検体屋を示
すものである。 第２図は、本発明による可溶化シルクペプチドの、セフ
ァテックスＧ−２５を用いて行った、溶出パターンで、
分子量との関係を示したものである。 ａは、実施例１によって得られたもの。 ｂは、実施例２で得られたもの。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 絹繊維を、銅・エチレンジアミン溶液に溶かし、希
   酢酸にて中和したのち、１〜３昼夜透析し、吸引濾過し
   て得られた濾液を、強酸性陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅ
   ｘ ５０ ｗｘ −２）を加えて、よく攪拌してから、
   吸引濾過により、用いた樹脂を除去させて得られた濾液
   に灯し、ＩＯＮ水酸化ナトリウム液を加えて、０．１〜
   ０．２Ｎ水酸化ナトリウム液となるように調製してから
   、８０〜９０℃で５〜３０分間加熱処理し、その後で、
   希硫酸又は無水コハク酸にて、中性附近へｐＨを戻して
   から吸引濾過して得られる、分子量分布が１５００〜５
   ０００にピークをもった、可溶化シルクペプチドの製造
   法。 ２ 絹繊維を、銅・エチレンジアミン溶液に溶がし、４
   ０〜８０°Ｃで１〜４時間加熱処理し、次いで希酢酸に
   て中和してから、１〜３昼夜透析したのち、吸引濾過し
   て得た濾液に、強酸性陽イオン交換樹脂（ＤＯｗｅｘ
   ５０ ｗｘ −２）を加えて、よく攪拌してから、吸引
   濾過により、用いた樹脂を除去させて得られる濾液に対
   して、２Ｎ水酸化ナトリウム醇液を加えて、ｐＨ６，０
   〜７．０に調整してから吸引濾過して得られる、分子量
   分布が５０００〜５００００にピークをもった、可鹸化
   シルクペプチドの製造法。