JPS5822120B2 - ３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソ−ヤサポゲノ−ルＢ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は式 で表わされる新規な３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラ
ノシル）−ソーヤサポゲノールＢ及びその塩に係るもの
である。

本発明の化合物は抗補体活性作用を有し腎炎、リュウマ
チ、膠原病、自己免疫疾患等の治療薬として有用である
。

本発明化合物に関連する化合物としてはグリチルリチン
〔有脅康裕、須見洋行、高田由美子、高田明和、第１７
回プラスミン研究会プログラム講演抄録集、第６５頁（
１９７７年）；有本之嗣、峯田周幸、須見洋行、高田由
美子、高田明和、第１４回補体シンポジウム講演集、第
７９〜８２頁（１９７７年）参照〕、３−０−（６−０
−メチル−β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソーヤサ
ポゲノールＢ〔北用勲、吉川離遠、吉岡一部、Ｃｈｅｍ
、Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ、、第２２巻、第１３３９頁（
１９７４年）：同第２４巻、第１２１頁（１９７６年）
参照〕等が知られている。

前者の化合物はステロイド様構造を有してテロイド類似
の作用を有するものとされており、例えばプラスミン、
ウロキナーゼ、カリクレイン、トロンビン及び補体の抑
制作用を有するものである。

一方後者の化合物の生理活性作用については未だ報告が
なされていない。

これに対して本発明の化合物は後記薬理試験結果から明
らかな通りグリチルリチン及び３−Ｏ−（６−０−メチ
ル−β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソーヤサポゲノ
ールＢに比し之等の化合物からは全く予期し得ない顕著
に優れた抗補体活性作用を有するものである。

本発明の化合物は種々の方法により製造される。

例えば３−０−（β−Ｄ−グ゛ルクロノピラノシル）−
ソーヤサポゲノールを部分構造よして有する公知のサポ
ニン含有植物（例えば大豆）に化学的操作成いはこれに
物理的手段を適宜組み合わせた操作を施すことにより上
記式（Ｉ）で表わされる本発明化合物を容易に単離精製
し得る。

例えば大豆からソーヤサポニンを分離後２を後述する反
応行程式−１に従い処理することにより製造できる。

上記ソーヤサポニンの分離に際しては通常公知の分離手
段を広く適用でき、その方法として例えば加水分解、ア
ルコーリシス、エーテル化反応、アシル化反応等の化学
的操作、溶媒抽出法、溶媒稀釈法、液体クロマトグラフ
ィー、ガスクロマトグラフィー、再結晶法等の物理的手
段を挙げることができる。

より具体的には式（１）の本発明化合物は乳用等〔乳用
勲、吉川離遠、吉岡一部、Ｃ’ｈｅｍ、 Ｐｈａｒｍ、
Ｂｕｌｌ、 。

第２２巻、第１３３９頁（１９７４年）；同第２４巻、
第１２１頁（１９７６年）参照〕の方法により得られた
ソーヤサポニン（ＩＩ）を酸の存在下メタノール、エタ
ノール、フロパノール、イソプロパツール、ブタノール
、ペンタノール、ヘキサノール、等の低級アルコール類
中にてアルコーリシスすることにより一般式（Ｉｌ［）
で表わされる３−Ｏ−（６−０−アルキル−β−Ｄ−グ
ルクロノピラノシル）−ソーヤサポゲノールＢを得、次
いでこれを加水分解することにより製造される（反応行
程式−１）。

、反応行程式−１ （上式に於てＲは低級アルキル基を示す。

）ソーヤサポニン（Ｈ）のアルコーリシスに使用される
酸としては通常のアルコーリシスに使用される酸を広く
使用でき、具体的には塩化水素、臭化水素等のハロゲン
化水素、硫酸、硝酸等の無機強酸、トリクロル酢酸、ト
リフロル酢酸等の有機強酸、塩化アルミニウム、三弗化
硼素、四塩化チタン、四臭化チタン等のルイス酸等を例
示できる。

このアルコーリシスは通常室温〜１５０℃、好ましくは
５０〜１００℃にて行なうのがよく、反応時間は通常１
〜６時間程度である。

一般式（■）の化合物の加水分解には従来公知のエステ
ルの加水分解の反応条件を広く適用し得、触媒の存在下
不活性溶媒中にて通常行なわれる。

用いられる触媒としては慣用のものをいずれも使用でき
、具体的には塩酸、硫酸、硝酸等の鉱酸、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナト
リウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基
上化合物等を例示できる。

触媒吉して無機塩基性化合物を用いるのが好ましＧ）。

用いられる不活性溶媒としては慣用のものをいずれも使
用でき、具体的には水、メタノール、エタノール、プロ
パツール等の低級アルコール、ジオキサン、テトラヒド
ロフラン等のエーテル類、ジメチルスルホキシド、ジメ
チルホルムアミド又はこれらの混合溶媒等を例示できる
。

この加水分解は通常室温〜１５０°Ｃ１好ましくは５０
〜１１０℃にて行なうのがよく、反応時間は通常１〜６
時間程度である。

また式（１）の本発明化合物は、水又は上記溶媒と水と
の混合溶媒を溶媒として用い塩化水素、臭化水素等のハ
ロゲン化水素、硫酸、硝酸等の無機強酸、トリクロル酢
酸、トリフロル酢酸等の有機強酸等の強酸の存在下にソ
ーヤサポニン（ＩＩ）を部分加水分解して得られる反応
混合物から単離することによっても得られる。

部分加水分解は通常室温〜１５０°Ｃ１好ましくは５０
〜１１．０℃にて行なうのがよく、反応時間は通常１〜
６時間程度である。

また本発明化合物は、本発明者らが新たに分離収得した
微生物を利用しても製造することができる。

この微生物につき以下に詳述する。■ 採集地 徳島市の土壌より分離した。

■ 各種培養基上の注状 本菌株の肉眼的および顕微鏡的観察（第１図に示す）に
基づく各種培養基上の注状を次に記載する。

Ａ 肉眼的観察 １）麦芽エキス寒天培地 生育は速やかで、不規則な生育を示し裏面の色は、クン
（Ｔａｎ、３ ｉｅ）〜ダークブラウン（Ｄｒ Ｂｒｏ
ｗｎ 、３ ｐｎ ）。

集落は平坦で胞子形生は良好。

菌糸はビスケット（Ｂｉｓｃｕｉｔ 、 ２ ｅｃ）〜
クン（Ｔａｎ 、 ３ ｉｅ）を呈し、浸出液滴が認め
られる。

拡散性色素は産生じない。２）バレイショ ブドウ糖培
地 生育はきわめて速やかで、培養２７℃、３０日で７０ｍ
ｍに達する。

周辺部は樹木状に拡がり稀薄な白色の菌糸着生が認めら
れ、液滴も顕著である。

胞子形成はほとんどない。裏面はライトアンバー（Ｌｔ
Ａｍｂｅｒ 、 ３ ｉｅ）。

拡散性色素なし。

３）ツアペック寒天培地 生育不良 ４）合成ムコール寒天培地 生育不良 ５）オートミール寒天培地 きわめて生育良好で２週間でシャーレを覆う。

集落は薄く平坦で、培養初期からの菌糸の形成が豊富で
胞子形成も速やかである。

菌叢色は白色からダー゛クブラウン（Ｄｒ Ｂｒｏｗｎ
。

３ ｐｎ ）に培養の経過につれて変化する。

菌糸に多量の液滴を生ずる。

拡散性色素は産生じない。

■ 生理学的性質 本菌は好気性の菌で次に示す生理学的性質を有する。

ｐＨ温 度 生育し得る条件 ３．５〜１１．５１５〜３８℃最適生
育条件 ４５〜９．５ ２０〜３０℃■ 形態学的髄
質 第１図から次のことが明らかである。

即ち梗子柄は単純分枝をなして直立する。

その先端部でわずかにこん棒状に膨らむ。

しかし標準株スクキボトリスエチナク ＩＦＯ７５２５
および８８５６に観察される様な顕著な膨大はない。

梗子柄よりわずかに大きい菌子幅４．０〜４．５μを示
す。

栄養菌糸もしくは気菌糸から足細胞を有して直立に分枝
した梗子柄は、２〜３個の隔壁を有し４０〜８’ＯＸ３
．０〜３．５μの大きさを呈する。

梗子柄の細胞壁にはとげ状突起は観察されず、平滑であ
る。

梗子柄頂端膨大部から３〜６個の梗子を生じ、更にその
先端に求基的に４．３〜５．２Ｘ３．０〜４．２μの大
きさで１細胞のとげ状突起を有する球〜亜球形の梗子胞
子を連続的に生じ２４〜７０個の胞子鎖を形成する。

梗子は徳利型の形状を示し、大きさ６．９〜１０．’７
Ｘ ３．５〜４．７μである。

梗子柄および梗子は無色。

梗子はコーヒー（Ｃｏｆｆｅｅ＋ ３ｐｎ）〜黒色を呈
する。

上記の菌学的性質を有する本菌の分類学上の位置を検索
便覧［ザ ジエネラ オブ ハイフオミセテス フロム
ソイル（Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａ Ｏｆ Ｈｙｐｈ−ｏ
ｍｙｃｅｔｅｓ Ｆｒｏｍ Ｓｏｉ ｌ 、 Ｔｈｅ
Ｗｉ ｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉ １ｒｉ−ｎｓ Ｃｏ
ｍｐａｎｙ Ｖｏｌｔｉｍｏｒｅ 、 ＧＬＬ、
Ｂａｒｒｏｎ 、１９６８年）」および「ア マニュア
ル オブ ソイルフンジャイ（Ａ ＭＡＮＵＡＴ、ＯＦ
５ＯＩＬ ＦＵＮＧＩ。

Ｔｈｅ Ｉｏｗａ Ｓ ｔａｔｅ Ｕｕｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ Ｐｒｅｓｓ Ａｍｅｓ ＩｏｗａＵ Ｓ Ａ 、
Ｊ、Ｃ０Ｃｎ１ｒｎａｎ 、１９７１年）」および［ザ
ジエネラ オブ フンジャイ スポルレーチングイン
ピュア カルチャー（Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａ ｏｆ Ｆ
ｕ−ｎｇｉ Ｓｐｏｒｏｌａｔｉｎｇ ｉｎ Ｐｕｒｅ
Ｃｕ１ｔｕｒｅ 、 ＶＥＲＡＧＶＯＮ Ｊ、ＣＲＥ
ＭＥＲ３３０１ＬＥＨＲＥ、Ｊ、Ａ。

ＶＯＮ ＡＲＸ、１９７０年）」等により検索すると本
菌はスタキボトリス属（メンモニエラ属）ニ属すること
が判る。

即ち子のう果その他の有註注殖器管を有さず梗子から暗
褐色の梗子胞子を連続的に生じ、尚かつ生じた胞子が長
鎖となる注状を有する本菌株の注状は、スタキボトＩＪ
ス属（メンモニエラ属）のそれと一致する。

本菌の諸性状を前述の検索便覧およびズツクＲ０Ｋ（１
９４６、Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ、 ３８ ： ６９−７６
）およびスミスＣｒ、 （１９６２、Ｔｒａｎｓ Ｂ
ｒｉ ｔ、 Ｍｙｃ−ｏｌ、ｓｏｃ、、 ４５ ： ３
８７−３９４）の文献並びにＩＦＯ保存保存標準比較同
定したところ、本菌株が梗子から梗子胞子を求基的に連
続的に生じる性質は、ホーネル（Ｈｏｈｎａｌ ）によ
って命名されたメンモニエラ属 メンモニエラエチナタ
（Ｍｅｎｍｏｎｉ−ｅｌｌａ ｅｃｈｉｎａｔａ ）に
属すると判定される。

しかし上記のズックおよびスミスの報告から本菌株はス
タキボトリス エチナタに類縁の菌種と考えられるため
にスタキボトリス エチナクＩＦＯ７５２５および８８
５６の２株と比較検討した。

形態学的には本菌株では梗子柄の細胞壁が両標増株に特
異的なとげ状突起が観察されない。

また梗子柄先端部が標増株では梗子柄菌糸幅の２〜３倍
に膨大するのに比較して、本菌株は顕著な膨大が認めら
れない。

更に培地上の生育、殊にバレイジョブドウ糖寒天培地に
おいて標増株２株は良好な生育を示し円形のやや隆起し
た集落を形成しかつ菌糸を豊富に着生し、胞子形成も顕
著であるのに比して、本菌株は上述の如く樹木状の不規
則な生育を示しかつ菌糸形成、胞子形成が不良である。

以上の様な菌学的性状の差異から本菌株を新菌種と認め
スタキボトリス エスピー、Ｔ−７９１と命名した。

同色の表示記載は「カラー ハーモニー マニュアル（
Ｃｏ１１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ 、 １
９５８年、Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ） 」の表示法に従った。

上記した新菌株 スタキボトリス エスピー。

Ｔ−７９１は微工研に受託番号微工研菌寄第３８０３号
（ＦＥＲＭ ＰＡ３８０３）として受託される。

上記スタキボトリス属に属する微生物による本発明化合
物の製造は次の如くして行なわれる。

即ちまず上記微生物を通常の栄養物及び添加物を含有す
る培地で培養する。

培養基としては、例えば大豆粉、大豆油、コーンスチツ
プリカー、酵母エキス、乾燥酵母、オートミール、肉エ
キス、カゼイン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩等
の窒素源、及び例えばブドウ糖、グリセリン、麦芽糖、
デンプン、乳糖、ショ糖、糖蜜等の炭素源を例示できる
。

また培地に通常添加される添加物としては例えば炭酸カ
ルシウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、リン酸
等の無機塩を例示できる。

更に培地には必要に応じて鉄、銅、マンガン、亜鉛等の
金属の塩を微量含有させることができる。

培養は、上記培養基を含有する通常の水性培地で、表面
培養でも深部通気撹拌培養でも実施できるが、深部通気
撹拌培養を行なうのが好ましい。

培養条件は通常の通気条件下に、液性がｐＨ３，５〜１
１．５好ましくはｐＨ４，５〜９．５及び培養温度１５
〜３５℃好ましくは２０〜３２℃で通常３〜７日間で有
利に培養できる。

次いで上記培養後に培養液中に生産された物質を採取す
る。

採取法は特に制限されず生産された物質の理化学的性状
を利用した公知の各種方法がいずれも採用できる。

例えば不純物との溶解度の差、通常の吸着剤例えば活は
炭、ＸＡＤ−２、シリカゲル、イオン交換樹脂、セファ
デックス等に対する吸着親和力の差、二液相間の分配率
の差等を利用する方法及び２等方法の組み合せにより実
施できる。

以上のようにして得られる本発明化合物は医薬的に許容
される各種の塩基性化合物と塩を形成し得るものであり
、本発明はこの塩をも包含する。

上記塩形成に利用できる塩基性化合物としては、例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アルミニウ
ム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウ
ム等の無機塩基性化合物及びピペラジン、モルホリン、
ピペリジン、エチルアミン、ジメチルアミン、トリエチ
ルアミン等の有機塩基性化合物を例示できる。

本発明化合物は、これを例えば腎炎治療剤として使用す
るに際し、通常製剤担体と共に薬理組成物の形態とされ
る。

担体は使用形態に応じた薬剤を調製するのに通常使用さ
れる充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活
性剤、滑沢剤等の稀釈剤あるいは賦形剤を包含する。

本発明腎炎治療剤の投与単位形態は治療目的に応じて適
宜選択できる。

その代表的なものとしては錠剤、丸網、散剤、液剤、懸
濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤
、乳剤、懸濁剤等）等を例示できる。

錠剤の形態に形成するに際しては、担体として、公知の
例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、
デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース
、ケイ酸等の賦形剤；水、エク／−ル、プロパツール、
単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、
カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロ
ース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合
剤；乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末
、ラミナリア末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム
、ツウイン、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モ
ノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステ
アリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第
四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸
収促進剤ニゲルセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン
、乳糖、カオリン、ベントナイトコロイド状ケイ酸等の
吸着剤；精製クルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、マク
ロゴール、固体ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を
使用できる。

乳剤の形態に形成するに際しては、担体として、公知の
例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物
油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、ト
ラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナ
リア、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。

更に上記錠剤等は必要に応じ通常の剤皮を施し糖衣錠、
ゼラチン被包錠、腸溶破錠、フィルムコーティング錠あ
るいは二重錠。

多層錠とすることができる。

半開の形態に形成するに際しては、担体として公知の例
えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコー
ル、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グ
リセライド等を使用できる。

注射剤として用いられる液剤及び懸濁剤の形態に成形す
るのに際しては、稀釈剤として、慣用の例えば水、エチ
ルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イン
ステアリルアルコール、ポリオキシ化インステアリルア
ルコール、ポリオキシエチレンソルビット、ソルビタン
エステル等を使用できる。

また液剤等は殺菌し且つ血液と等張するのが好ましい。

この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブ
ドウ糖又はグリセリンを液剤中に含有せしめるか又は通
常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤、保存剤等を、更に
必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等
や他の医薬品を該治療剤中に含有せしめることができる
。

腎炎治療剤中に含有されるべき有効成分即ち本発明化合
物量は特に限定されず適宜選択できるが、通常全組成物
の１〜７０重量係、好ましくは５〜５０重量係とするの
が好ましい。

上記腎炎治療剤は各種形態に応じた方法で投与される。

例えば錠剤、乳剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカ
プセル剤の場合には経口投与を採用できる。

また注射剤の場合には筋肉内、皮肉、皮。下若しくは腹
腔内投与すればよい。

生薬の場合には直腸内投与される。

腎炎治療剤の投与量は使用目的、症状等により適宜選択
されるが、通常有効成分量を１日当り０．５〜２０■／
ｋｐ程度の範囲とすればよく、この。

範囲の使用で充分安全な治療効果を示す。

以下本発明をより明らかにするため本発明化合物の薬理
試験結果を掲げる。

１）供試化合物 Ａ、 ３−０−（β−Ｄグルクロノピラノシル）−ソ
ーヤサポゲノールＢ（本発明化合物） Ｂ、グルチルリチン（比較化合物） Ｃ，３−Ｏ−（６−０−メチル−β−Ｄ−グルクロノピ
ラノシル）−ソーヤサポゲノールＢ（比較化合物） ２）抗補体活性作用 抗補体活性は、「免疫化学」第８３０〜８３４頁（朝食
書店発行、山村雄−他編集、１９７３年）に記載の試験
法に従い測定及び確認される。

即ち試験管に供試化合物の水分散液０．５ ｍｌ！、１
×１０８セル／ｍｌの感作血球（ＥＡ）０．５ｍｌ、等
張ゼラチンを含むベロナール緩衝食塩水の５倍希釈液（
ＧｖＢ＋＋＋）１ｍｌ及びＧｖＢ＋＋十希釈液テ１５０
倍に希釈した補体血清（ｇ 、ｐ 、ｃ ） ０．５ｍ
ｌを採取し、３７℃で６０分間保１之に氷冷した生理食
塩水５ｍｌを加えて遠心分離し、次いで分離された上清
の吸光度を吸光計ＯＤ４１３で測定し、供試化合物によ
って感作血球がどれ程その溶血を抑制されるかを求める
ことにより測定される。

上記方法に従い測定された抗補体活性（５０％溶血阻止
活性値、ｒ／ｒＩＬｌ）を第１表に示す。

４）ネフロトキシン（Ｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｎ ）型腎
炎に対する治療効果 ラットネフロトキシン（以下ｒＮＴｌと略記）は次のよ
うにして得られる。

ねずみのキドニーコルテックス（ｒｉｄｎｅｙ ｃｏｒ
ｔｅｘ ）を等量の生理食塩水でホモジナイズし、その
ホモジネートをフレンド コンブレート アジュバント
（Ｆｒｅｕｎｄ＋ｓ ｃｏ−ｍｐｌａｔｅ ａｊｕｖａ
ｎｔ ＋ Ｄｉｆｃｏ社製）と１：１の比で混合し、得
られる混合物２ｍｌをウサギ（体重３１００ｇ）に筋肉
注射し免疫させる。

１．５ケ月後ウサギの心臓より血液を採取し血清を得る
。

得られた血清を５６℃、３０分間で非動化した後４０チ
飽和硫安により塩析して分画する。

イミノγ−グ冶プリン（ＩｇＧ）フラクションを採取し
てＮＴを得る。

試験には体重１５０〜１６０ｇのウィスター系（ｗｉｓ
ｔｅｒ）の雄ねずみを使用する。

本発明化合物をＮＴ投与の１時間前に投与した時を基準
として、２４時間毎に１日１回１匹当り３■の投与量で
３日前〜４日後まで腹腔内投与する。

またＮＴは１ｍｌをねずみの尾静脈より静注する。

対照区としては生理食塩水を使用する。

蛋白ウリア（Ｐｒｏｔｅｉｎｕｒｉａ ） （２４時間
で尿中に排泄される全量）を、スルホサリチル酸による
ボバインセリムアルブミン（Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ
Ａｌｂ−ｕｍｉｎ ）を対照とする濁度法により測定
する。

得られる結果を第２表に示す。

尚日数はＮＴ投与の１時間前に投与した時からの経過日
数である。

また蛋白ウリアの量はｒｗ１日で示した。

正常状態のねずみの蛋白ウリアは０．５〜５ダ／日であ
るが、この数値以上の場合は特に１０■／日以上の場合
には腎炎が発症しているとにいえる。

第２表から明らかなように対照区の場合には腎炎が発症
し、本発明化合物の場合には投与時〜１０日間の蛋白ウ
リアの量は正常状態のねずみとほぼ同じであり、−次反
応及び二次反応が抑制されていることがわかる。

５）バイマン（Ｈｅｙｍａｎｎ）型腎炎に対する治療効
果試験には体重１８０〜２０１のウィスター系の雄ねず
みを使用する。

ねずみのキドニー コルテックスを取り等量の生理食塩
水と伴にホモジナイズする。

そのホモジネートを１５００Ｇで１時間遠心分離し、そ
の上清をニドギントン等の方法（’Ｉ： Ｓ、Ｅｄｇｉ
ｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ 、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｅｘｐｅｒｊｍｅ−ｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｌ 、
１２７ 、５５５参照〕に従って精製したものと［フレ
ンド コンブレート アジュバント３７Ｒａｌ（Ｄｉｆ
ｃｏ社製）とを０．４：１の重量比で混合したものをア
ジュバントとして０．５ｍｌをねずみの腹腔内に注入す
る。

その後２週間毎に蛋白ウリアが１００■／日以上になる
までこのアジュバントを同量ずつ投与する（６〜８週間
）３斯くしてバイマン型腎炎を発症させたねずみ（体重
は約３００〜３５０ｇとなっている）に本発明化合物を
２４時間毎に１匹当り３■の投与量で７日間腹腔内投与
し、蛋白ウリアの量（Ｔｎ９／日）を上記と同様にして
測定する。

対照区として生理食塩水を用いて同様に試験した。

同一試験を３回繰返し得られた結果を第３表に示す。

実験開始から２〜３週間後のねずみの体重は４００〜５
００ｇとなり、正常な蛋白ウリアの量は５〜１５ｍｌ１
１７日と考えられる。

第３表から明らかなように、本発明化合物はバイマン型
腎炎を冶癒する作用を有することが判る。

以下本発明を一層間らかにするため本発明化合物の製造
例を実施例として、また本発明化合物を有効成分とする
腎炎治療剤の製造例を参考例として掲げる。

実施例 １ （ａ） ソーヤサポニン５００７１１９をメタノール
３０ｍ１に溶解し、１．５Ｎ−硫酸１．５ｍｌを加え３
．５時間還流する。

反応混合物に冷水を加え、生成した沈殿を集め充分水洗
する。

沈殿物をシリカゲルカラムに吸着させ、クロロホルム−
エタノール（２０：１ ２００ｍ１，１０：１ １５０
ｍ１１５：１ ２００ｍ１．２：１ ２００ｍ１容積比
）で展開して、３−Ｏ−（６−０−メチル−β−Ｄ−グ
ルクロノピラノシル）−ソーヤサポゲノールＢの７１■
を得る。

次いでこれをメタノール２ｍｌに溶解し、ｌＮ−Ｎａ
ＯＨ水水溶液２ｍ合加え２時間還流する。

反応混合物に冷水を加えｌＮ−ＨＣｌ水溶液でｐＨ約１
とし、ｎ−ブタノールで抽出する。

ｎ−ブタノール層を減圧下に濃縮乾固し、残渣をクロロ
ホルム−アセトン（１：１容積比）より結晶化して、３
−０− （β−Ｄ−グルクロノピラノシル）ソーヤサポ
ゲノールＢの５０■を得る。

Ｑ融点 ２３１〜２３２°Ｃ（分解） ○元素分析値 Ｃ３６Ｈ５８０，として 計算値（＠ ｃ６ｓ、１１、Ｈ９，２１ 実測値（１）Ｃ６７，８５、Ｈ９，０８ ０シリ力ゲル薄層クロマトグラフィー（［キーセルゲル
Ｆ２５４１メルク社製使用） ■、クロロホルムーメタノールー水（６５：３５：８容
積比） Ｒ、ｆ ＝ ０．３８２、インプロパノ−ルー
２Ｎアンモニア水（１００：１５容積比）Ｒｆ＝０．２
１ ０溶解殴 メタノール、エタノール、ｎ−プロパツ ール、ｎ−ブタノール、アルカリ水溶液、ピリジン、ジ
メチルスルホキシド、ジメチルホルムアミドに易溶で、
アセトン、酢酸エチル、メチルエチルケトンに可溶で、
ベンゼン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ｎ−ヘキ
サン、石油エーテルに難溶である６（ｂ） ソーヤサ
ポニン５００７７１１ｉｉ’を塩化水素を飽和したエタ
ノール３０ｍ１に溶解し、３時間還流する３反応混合物
に冷水を加え、生成した沈殿を集め水洗後シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（溶出液；クロロホルム−エタ
ノール（２０：１．１０：１．５：１．２：１容積比）
）で精製して、３−Ｏ−（６−０−エチル−β−Ｄ−グ
ルクロノピラノシル）−ソーヤサポゲノールＢの７５Ｔ
ｎ９を得る。

次いで得られる化合物をエタノール２ｍｌ及びＩＮ−Ｋ
ＯＨＯＨ水溶液２企ｌえ２時間還流する。

反応混合物に冷水を加え、ｌＮ−ＨＣ７水溶液でｐ Ｈ
を約１とし、ｎ−ブタノールで抽出する。

ｎ−ブタノール層を減圧下に濃縮乾固し、残渣をクロロ
ホルム−アセトン（１： １ 容積比） ヨり結晶化し
て、３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソー
ヤサポゲノールＢの４５ｍ９を得る。

融点２３１〜２３２°Ｃ（分解） 実施例 ２ ソーヤサポニン１ｇを蒸留水７０ｍ１！に溶解し、１５
Ｎ硫酸水溶液５ｍｌを加えて２．５時間還流する。

反応混合物をｎ−ブタノールで抽出し、ｎ−ブタノール
層を減圧下に濃縮乾固する。

残渣をシリカゲルカラムに吸着させ、クロロホルム−エ
タノール（２０：１．１０：１．５：１．２：１容積比
）で展開して、３−０〜（β−Ｄ−グルクロノピラノシ
ル）−ソーヤサポゲノールＢの３５０ｍ９を得る。

融点２３１〜２３２°Ｃ（分解） 実施例 ３ ５００ｍｌ容板目フラスコに下記組成（ｐＨを５．５に
調整）の培地１００ｍ１を入れ、ここでスタキボトリス
エスピー、’ｌ’−７９１を２５°Ｇで４日間往復振
とう培養する。

グリセリン ０．５係 デンプン １．０” ショ糖 ０．２１／ 大豆粉 ０，５／／ ペプトン ０．１〃 麦芽エキス ０，２１／ Ｍｇ５０４０．３〃 ＨＣｌ ０．０５１／ 前述で得られた種培養１本を３０１容、ジャーファメン
ターに２０１の上記組成の培地を入れ培養温度２８°Ｃ
１通気量１１／ｌ培地・分、撹拌数３００回転／分で５
日間培養を行なう。

得られた培養液を８０００回転／回転速心分離し菌体を
除去し、この上澄液を塩酸によりｐＨ約１とし、生じた
沈殿物を遠心分離し、これをメタノールで抽出する。

メタノール層を減圧下濃縮後、活性炭カラム（５００Ｔ
ｌｌ）に吸着させ、３０％及び５０％アセトン水で順次
溶出する。

５０係アセトン水溶山区分を集め、減圧下に濃縮乾固し
、残渣をシリカゲルカラムに吸着させ、クロロホルム−
アセトン（２：１．１：１容積比）を溶出液として展開
する。

３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソーヤサ
ポゲノールＢを含む画分〔「キーゲル”２５４Ｊ （メ
ルク社製）を用い、り四ロホルムーメタノールー水（６
５：３５：８容積比）を展開溶媒とする薄層クロマトグ
ラフィーにてＲｆ＝０．３８に相当する両分〕を集め、
減圧下濃縮乾固し、再度シリカゲルのカラムに吸着させ
、り四ロホルムーアセトン（２：１．１：１容積比）を
溶出液として展開し、上記と同一のシリカゲル薄層クロ
マトグラフィーに相当する画分を集め、減圧下に濃縮乾
固し、残渣をクロロホルム−アセトン（１：１容積比）
より結晶化して、３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノ
シル）−ソーヤサポゲノールＢの４６ｍ？を得る。

融点２３１〜２３２°Ｃ（分解） 参考例 １ 本発明化合物（Ｉ）のすｌ−ＩＪウム塩 ５００〜ブ
ドウ糖 ２５０〜注射用蒸
留水 適 量全 量
５ｍｌ 注射用蒸留水に本発明化合物及びブドウ糖を溶解させた
後５ｍｌのアンプルに注入する。

窒素で置換後１２１℃で１５分間加圧減菌を行ない、注
射剤を得る。

参考例 ２ 本発明化合物（１） ７５０Ｔｎ９
半合成グリセライド基剤 適 量全 量
２０００■半合成グリセライド基剤
に本発明化合物を加え、５０℃で混合、懸濁させた後成
形鋳型に流し込み、自然冷却したのち取り出し半開を得
る。

参考例 ３ 本発明化合物（Ｉ） １５ｏ ｇア
ビシェル（商標名、旭化成■製） ４０ｇコンスターチ
３１ステアリン酸マグネシウム
２ｇＴＣ−５（商標名、ヒドロキシプロ ピルメチルセルロース） １０ｇポリエチ
レングリコール−６０００３ｇ ヒマシ油 ４０ｇメタノー
ル ４０ｇ本発明化合物、ア
ビシェル、コンスターチ及びステアリン酸マグネシウム
を取り混合研摩後糖衣Ｒ１０ｍｍのキネで打錠する。

得られた錠剤をＴＣ−５、ポリエチレングリコール−６
０００、ヒマシ油及びメタノールからなるフィルムコー
ティング剤で被覆を行ないフィルムコーティング錠を製
造する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明化合物の製造に利用される微生物スタキ
ボトリス エスピー・Ｔ−７９１の顕微鏡写真である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １式 で表わされる３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル
   ）−ソーヤサポゲノールＢ及びその塩。 −