JPS5828867B2 - 新テトラペプチド誘導体類 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なテトラペプチド誘導体類に関しさらに詳
しくは数種のアミノペプチターゼに対して酵素阻害活性
を有する新規なテトラペプチド誘導体類に関する。

本発明者らは先にストレプｌ−ミセス属に属する菌株ス
トレプトミセス スピシーズ ※ ※（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ、） ＭＥ ９８
−Ｍ ３、微工研菌寄第３７２２号によって産生される
Ｎ−末端に文献末載のβ−アミノ酸残基を有する次の式
（ｎ）で示されるテトラペプチド、 式中Ｒはカルボキシメチルまたは２−ガルボキシエチル
基を表わす。

を初めて発見し、該テトラペプチドがアミノペプチダー
ゼＡの活性を阻害するばかりでなく、抗体産生増強活性
を有することを見出し、アマスタチンと命名した。

（特開昭５４−第２４８４５号公報、またはＡｇｒｉｃ
、Ｂ ｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ、 、４３ （３）、５
９１〜５９６ （１，９７９） ）本明細書においては
前記の文献末載のβ−アミノ酸、すなわち３アミノ−２
−ヒドロキシ−５−メチルヘキサン酸をＡＨＭＨＡと略
記し、その残基をＡＨＭＨＡと記載する。

★★ その後本発
明者らは上記アマスタチンに比しさらに強い阻害活性へ
らびに新たな生理活性の発現を期待し得る化合物の探索
を目的として上記ＡＨＭＨＡをベースとする種々のペプ
チド類の合成を行い、その生理活性を検討した結果、次
の式（Ｉ）で示されるペプチド類が前記の各アミノペプ
チダーゼに対する阻害活性を有するばかりでなく、新た
に生理活性としてトリアミノペプチダーゼを強力に阻害
することを見い出し本発明を完成するにいたった。

すなわち本発明は、 式Ｉ、 式中、Ｒ１及びＲ２はメチル、■−メチルエチル、２−
メチルプロピル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキ
シエチル、または４−アミノブチル基を表わし、 Ｙは匙ａ）又は（ｂ） （ｂ）式中、Ｒ３はメチル、■−メチルエチル、２メチ
ルプロピル、■−メチルプロピル、ヒドロキシメチル、
■−ヒドロキシエチル、カルボキシメチル、２−力ルボ
キシエチル、４−アミノブチル、３−グアニジノプロピ
ル、ベンジル又はｐヒドロキシベンジル基を表わす。

但し、Ｒ１及びＲ２が１−メチルエチルで、Ｙが（ｂ）
式の場合で、そのＲ３がカルボキシメチル又は２−カル
ボキシエチルの場合は除く。

で示され、かつ第１のβ−アミノ酸は２Ｓ・３Ｒ１第２
〜４のα−アミノ酸がＬ−配置を有する新テトラペプチ
ド誘導体類を要旨とするものである。

以下本発明を詳述するが、本明細書においてアミノ酸、
ペプチド並びにその他の略号は主としてＩＵＰＡＣ〜Ｉ
ＵＢ合同委員会による命名法（Ｂ ｉｏｃｈｅｍ １ｓ
ｔｒｙ ６．３６２（１９６７）、同Ｌ１．１７２６（
１９７２））による次の略号により、それ以外のものに
ついては初出の際にこれを括弧内で説明して爾後その略
号によることとした。

すなわちアミノ酸につ（・では例えば次のようにグリシ
ン Ｇｌｙ、アラニン Ａｌａ、バリアＶａｌ。

ロイシン Ｌｅｕ、イソロイシン ＩＬｅｕ１セリンＳ
ｅｒ、 ｔ□レオニン Ｔｈｒ、アスパラギン酸Ａｓ
ｐ、グルタミン酸Ｇｌｕ、 リジン Ｌｙｓ、アルギ
ニンＡｒｇ、フェニルアラニン Ｐｈｅ、チロシン Ｔ
ｙｒ、ヒスチジン Ｈｉｓ、トリフ” トファン Ｔｒ
ｙ、 ７’ロリン Ｐｒｏ、ヒドロキシフロリン Ｈｙ
Ｐｒｏ、シ「−コ スティン Ｃｙｓ、シスチン Ｃｙ−ｓＣｙ−ｓ、メチ
オニニン Ｍｅｔ、 で示し、その結合部位がアミノ基末端のときは向って左
側にカルボキシル末端のときは向って右側に、両端にあ
るときは両端にそれぞれ結合手を示した。

例えばグリシンを例にとればそれぞれ、Ｇｌｙ、Ｇｌｙ
−１−Ｇｌｙ−の如くした。

以下本発明の化合物について詳細に説明する。

上記酵素阻害活性を有するペプチドとしては、−上記し
た通り本発明者らによってストレプトミセス属に属する
菌株、ストレプトミセスｓｐ０ＭＥ９８−Ｍ３ （微工
研菌寄第３７２２号）の培養によって得られた式（ＩＩ
）の化合物があるが、本発明の式（Ｉ）で示される新規
ペプチドは式（ＩＩ）のペプチドに含まれるβ−アミノ
酸ＡＨＭＨＡをＮ末端として、蛋白質を構成する主要α
−アミノ酸；例エバクリシン、アラニン、バリン ロイ
シン、イソロイシン、セリン トレオニン、システィン
、シスチン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン
酸、リシン、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン
、ヒスチジン、トリプトファン、プロリン、ヒドロキシ
プロリン等とのペプチド結合形成反応によって得られる
ペプチド類を挙げることができる。

これらのペプチドを構成するＡＨＭＨＡは上記微生物の
培養によって得られるペプチドに含有される場合は（２
Ｓ・３Ｒ）の立体配置に特定されるが、後述するように
合成法によればその他の立体配置を有するＡＨＭＨＡを
得ることができ、それらを本発明の構成アミノ酸とする
ことも可能である。

しかし本発明には立体配置が（２Ｓ・３Ｒ）のＡＨＭＨ
Ａ並びにＬ型のα−アミノ酸に由来する立体配置を持つ
ペプチドが好適である。

さらに構成アミノ酸としては、Ｎ末端より、ＡＨＭＨＡ
、次に、第２及び３番目のα−アミノ酸としては、バリ
ン、アラニン、ロイシン、トレオニン、リジン等の中性
または塩基性アミノ酸が望ましく、第４番目即ちＣ−末
端アミノ酸としてはフリーのアミン基又はカルボキシル
基を有する場合は、対応する酸又はアルカリ付加塩とす
ることができるので、特に塩基性、酸性のように限定さ
れない公知のα−アミノ酸が用いられる。

これらのペプチドは、上記アミノ酸を用いたそれ自体公
知のペプチド合成法によって製造されるが、特に液相ペ
プチド合成法を用いるのが好適である。

以下、本発明で用いられる製造法の具体例について述べ
る。

まず、ＡＨＭＨＡはアマスタチン類を酸またはアルカリ
加水分解した後、各種クロマトグラフィー等のアミノ酸
単離に通常用いられる方法を適宜組み合わせることによ
って精製し、それぞれ対応するアミノ酸を得ることがで
きる。

因みに該方法によって得られるＡＨＭＨＡは、２Ｓ、３
Ｒの立体配置を有する。

さらに上記ＡＨＭＨＡの所望の立体異性体を得るには、
例えば前記Ａｇｒｉｃ 、 Ｂ ｉｏｌ 、 Ｃｈｅｍ
、 ±１（３）、５９１〜５９６ （１，９７９）に
詳しいが、第１に合成終了時に望ましい立体配置を持っ
α−アミノ酸（たとえばＤ−またはＬ−Ｌｅｕ）のアミ
ノ基をペプチド化学における公知の保護基により保護し
、ピラゾール類等の第２級アミンと結合させアミドとし
、これを０℃以下の低温下にエーテル類中で水素化リチ
ウムアルミニウム等で還元しアルデヒドとし、このアル
デヒドを一旦亜硫酸水素ナトリウムなどで付加物にかえ
、更にこの付加物に青酸塩を作用させてシアンヒドリン
即ちアミノ基を保護した３（ＲまたはＳ）−アミノ−２
（ＲまたはＳ）ヒドロキシニトリルを製造する。

このニトリルを加水分解し、対応する３（ＲまたはＳ）
アミノ−２（ＲまたはＳ）ヒドロキシカルボン酸を得る
ことができる。

ここで得られた２種のジアステレオマーはクロマトグラ
フィーまたは光学分割剤を使用することにより光学分割
することが出来る。

これらの具体例の１つを実１験例に示す。

なお、本明細書では次に示す保護基等に用いられる基は
次の略号によってこれを示す。

すなわちベンジロキシカルボニル Ｚ、ｔ−ブトキシカ
ルボニル Ｂｏｃ、ベンジル ＢＺ■、ベンジロキシ０
Ｂｚｌ、）シルＴｏｓ、メトキシ ＯＭｅ、 トリチル
Ｔｒｔ 実１験例 １ （２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡの合成 １−（１）Ｚ−Ｄ−Ｌｅｕの合成 り −Ｌｅｕ ５０ ？の２Ｎ水酸化ナトリウム水１９
１ ｍｌ溶液に水冷下ベンジロキシカルボニルクロライ
ド（以下Ｚ−ＣＩと略す）６５ｒ／Ｌｌ及び４Ｎ水酸化
ナトリウム水１１４Ｔｒｌｌを攪拌しながら同時に滴下
し、さらに１時間攪拌を続げた後反応混合物を蒸留水１
１に注加し、酢酸エチル（３００１ｎｌ×３）で洗浄し
、水層に水冷下４Ｎ塩酸水を加え、ｐＨ２とし、生成し
た油状物を酢酸エチルで抽出した。

有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、減圧下溶媒を留去して無色透明シロップ４４グを
得た。

■−（２）ｚ−Ｄ−Ｌｅｕ−（３・５）ジメチルピラシ
ライドの合成 Ｚ −Ｄ−Ｌｅｕ８７．８ ？ノ無水テトラヒドロフラ
ン（以下ＴＨＦと略す）９００ｒｎｌ溶液に氷冷下Ｎ
−Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド（以下ＤＣＣ
Ｄと略記する）６８．３？を添加し、２０分間攪拌した
後３・５−ジメチルピヒゾール３１．１’を添加し、さ
らに３時間攪拌した後、生成したＮ−Ｎ’−ジシクロへ
キシルウレア（以下ＤＣＵと略す）をろ別し、減圧下で
溶媒を留去し、残渣にベンゼン５ｏＯＩＴＬｌを加え不
溶物をろ別後、ろ液を無水硫酸すｌ−’Ｊウムで乾燥し
、減圧下で溶媒を留去して得られた淡黄色シロップにヘ
キサン５００ｍ１を加え一晩５０℃で静置し析出した結
晶をろ取、乾燥しＺ−Ｄ−Ｌｅｕ（３・５）ジメチルピ
ラシライド８９．６′？を得た。

１−（３） Ｚ−（）、−−ロイシナールの合成Ｚ−
Ｄ−Ｌｅｕ−（３・５）ジメチルピラシライド４３．３
１のＴＩ（Ｆ４．３３ＴＬｌ溶液に一２５℃で水素化リ
チウムアルミニウム２５グのＴＨＦ１６０１ｎｌ懸濁液
を１時間３０分かげて滴加し２時間攪拌した後、−７０
℃に冷却し、３Ｎ塩酸水を滴加し、ｐＨ２として減圧下
、室温でＴＨＦを留去し、残留塩酸溶液よりエーテルｘ
ｏｏｍＡで２回、５０ｒｆＬｌで１回抽出し、合わせた
有機層を１Ｎ塩酸水２０ｍ１飽和食塩水２０ｍ１で３回
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を
留去し、無色透明シロップＺＤ−ロイシナール２４．７
１を得た。

１−（４） （３Ｒ） −３−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ−２−ヒドロキシ−５−メチルエナントニト
リルの合成 Ｚ−Ｄ−ロイシナール２４．７．？を酢酸エチル５０Ｔ
Ｌｌに溶解し、次亜硫酸ナトリウム２２７グの水溶液１
００ｍ１を加え、１６時間攪拌した後、シアン化ナトリ
ウム５．３５？を添加し、３時間攪拌した後、酢酸エチ
ル５０ｍ１で３回抽出し、合わせた有機層を蒸留水２０
ｒｄ、飽和食塩水３０ＴＬｌで３回洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥後、減圧下、溶媒を留去して得たシロッ
プ２２．５Ｐをシリカゲルカラム（フコ−ゲルＣ２００
和光純薬剤１２５′？）に展開溶媒として、ベンゼン：
酢酸エチル＝１０：１混合液を用いたクロマトグラフィ
ーを行い、目的の（３Ｒ）３−ベンジルオキシカルボニ
ルアミノ−２ヒドロキシ−５−メチルエナントニトリル
のシロソプ１８．１グを得た。

Ｒｆ：０．２９（ベンセン：酢酸エチル＝１０：１、シ
リカゲル６０Ｆ２５４プレート（ニーメルク社製）〕 ｎ、ｍ、ｒ、δｐｐｍ（ＣＤＣｌ２）： ０．９ （６Ｈ，ｄ、Ｊ５Ｈｚ、−ＣＨ（Ｃ旦、）２）
１．３〜１−．７ （３Ｈ，ｍ、、 Ｈ−４−４’、Ｈ
−５）３．６〜４．２ （ＩＨ，ｍ、Ｈ−３） ４．４〜４．６ （Ｉ Ｈ，ｍ、 Ｈ−２）５．１ （
２Ｈ，ｓ、 −ＣＨ２Ｐｈ） ５．２〜５．５ （Ｌ Ｈ，ｍ、 −ＮＨ−）５．５〜
５．９ （Ｉ Ｈ，ｍ、−ＯＨ）７．３１ （５Ｈ，ｓ
、−ＣＨ２Ｐｈ） １−（５） （３Ｒ）ＡＨＭＨＡの合成（３Ｒ）−３
−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−
５−メチルエナントニトリル１８．ｌグをジオキサン１
６３ｒｒｌ１１アニソール７８ｍ、ｌ混合溶媒に溶解し
、濃塩酸１６３ｍ１を加え、１１５〜１２０℃の油浴中
で９時間攪拌加熱還流した後、減圧ｆ、溶媒を１００７
ｒｌｌまで濃縮した塩酸酸性溶液を酢酸エチル５０ｍ１
で２回洗浄した後、減圧下、溶媒を留去し、蒸留水２０
０ ｍ、ｌ！を加え再び濃縮乾固する。

上記操作を３〜４回繰返した後、ポリスチレン核スルホ
ン酸型イオン交換樹脂例えば、ダウエックス５０ＷＸ１
０（１４０ｍ１，２００〜４００メツシユ、ダウケミカ
ル社製）を充填したカラムに吸着させ３００ｍｇの蒸留
水で洗浄した後、０．３Ｎアンモニア水で溶出し、ニン
ヒドリン陽性の分画を集め、溶媒を減圧留去して得た固
体８．５１を熱水１００７ＩＬｌ−イソプロピルアルコ
ール２００ｍ１！より再結晶し、（３Ｒ）ＡＨＭＨＡ６
９ｇを得た。

Ｒｆ：０．３３（ブタンール：酢酸：水−４：１：ｌ、
前記プレー１− ） １−（６） （２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡの単離（３Ｒ
） −ＡＨＭＨＡの結晶２．０１を蒸留水１００ｒＩｌ
ｌに溶解しセルロース粉末２ＯＳ’を加え、減圧下、溶
媒を留去して得た粉末を同じくセルロース粉末１．８１
を展開溶媒（酢酸エチル：酢酸：ピリジン：水−５：１
：１：Ｉ混合液の上層）にて充填したカラムにチャージ
し、同展開溶媒で溶出させ（２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ７
５０■をそのジアステレオマーとの混合物より分離した
。

（２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ Ｒｆ：０．３１（上記カラムの展開溶媒に同じ、セルロ
ース薄層プレート、フナコシ薬品製）ｍｐ：２３１〜２
３２℃ 一鍋：−２８．４°（Ｃ＝０．５、ＣＨ３ＣＯ０Ｈ）（
２Ｒ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ Ｒｆ：０．２７（上記に同じ） ｍｐ：２３０−２３１°Ｇ −〕買： ＋２８．１０（Ｃ＝０．５、ＣＨ３ＣＯ０Ｈ
）１−（７）Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡの合成（２
Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ１２３．２ｒｒ１９及び炭酸水
素すｌ・リウム１９２．６ηをＴＨＦ ：蒸留水＝１：
１混合溶媒３．６ｒｒＬｌに懸濁させ、ＺＣｌＯ，１６
ｍ１を水冷下で滴加し、８時間攪拌した後、減圧下でＴ
ＨＦを留去し、残留アルカリ水溶液に蒸留水１ｏｍｌを
加え、ヘキサン２ ｍ、１．で２回、酢酸エチル２ｍｌ
で洗浄した後、６Ｎ塩酸水を滴加してｐＨ２として生じ
た油を酢酸エチル３ｍｌで４回抽出し、合わせた有機層
を飽和食塩水２ＴＬｌで２回洗浄し、無水・硫酸す）
ＩＪウムで乾燥の後、減圧下、溶媒を留去してＺ−（２
Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡの無水シロップ１５４．４ｍ９を
得、これをエーテル−ヘキサン混合溶媒より結晶化させ
１２０■を得た。

ｎ、ｍ、ｒ、δｐｐｍ（ＣＤＣ１３）： ０．９ （６Ｈ，ｄ、Ｊ５．６５Ｈｚ、 ＣＨ（Ｃ旦、）２） １．２〜１．８ （３Ｈ，ｍ、 Ｈ−４・４’、Ｈ−５
）３．９〜４．５ （２Ｈ，ｍ、 Ｈ−２、Ｈ−３）５
．０３ （２Ｈ，ｓ、＝Ｃ旦、、 ｐｈ ）５．２〜５
．８ （２Ｈ，ｍ、〜ＯＨ１−ＮＨ−）ｍ、ｐ、：８５
〜８７°Ｃ ■ Ｒ： ｖ ＫＢｒ −夏 。

Ｃ沼 。

ａＸ １００５（カルボキシルＣ＝Ｏ） １６４０（ウレタンＣ＝Ｏ） ３３１０（ウレタン−ＮＨ−） ３５２０（−ＯＨ） １−（８） Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ（ＯＺ）
の合成 （２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ３００■、 ＮａＨＣＯ３７８３■を用い１−（７）と同様に反応処
理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ（ＯＺ）のシロッ
プ２５４ｒＩＴＪ？を得た。

Ｒｆ：０．４（ベンゼン：酢酸エチル：イソプロピルア
ルコール＝３０：２０：５、前出シリカゲルプレー１・
） ｎ０ｍ、ｒ、δｐ ｐｍ （ＣＤＣｌ ３） ：０．９
（６Ｈ，ｄ、Ｊ５．６５Ｈｚ 、−ＣＨ（ＣＨ３）２
）１．２〜１．８ （３ＨＳｍ、 Ｈ−４・４’、Ｈ−
５）４、．１５〜４．７５ （ＩＨ，ｍ、 Ｈ−３）４
．９５ （Ｌ Ｈ，ｄ、 Ｊ ２．５Ｈｚ 、 Ｈ−２
）５．０５ （２Ｈ，ｓ、−ＣＨ２Ｐｈ） ５．１５ （２Ｈ，Ｓ、−ＣＨ２Ｐｈ） ７．２６（５Ｈ，ｓ、−ＣＨ２Ｐｈ） ７．３１ （５Ｈ，ｓ 、 −ＣＨ２Ｐｈ）８．０−９
．２ （２Ｈ，ｍ、−ＮＨ−−−ＣＯＯＨ）次に以上の
ようにして得たＡＨＭＨＡと、例えばＬ−バリン（Ｖａ
ｌ）ならびに式ｌの−Ｙとして示されるアミノ酸を結合
させて式■で表わされるテトラペプチド誘導体を得るに
はペプチド化学の分野で常用される液相ペプチド合成法
が好適である。

すなわち本発明のペプチド誘導体の製造にあたっては式
■を構成する任意のアミノ酸のα位のアミノ基ないしは
カルボキシル基に遂次隣接するアミノ酸またはペプチド
を、ペプチド結合生成反応を利用し、結合させペプチド
鎖の延長をはかつていく方法である。

この時先ず式■の−Ｙとして示されるアミノ酸を含むジ
ペプチドをはじめに合威し、遂次ペプチド鎖の延長をは
かる方法が好適に用いられ、この目的に沿った保護基の
採用が望ましい。

それらは一般的に次のように行われる。まず、式ＩのＹ
として選ばれた基の由来するアミノ基以外の官能基（た
とえば、カルボキシル基、水酸基、アミノ基またはチオ
ール基等）を種々の各々の官能基に適した保護基等によ
り保護した後、Ｌ−バリンのアミノ基を、式■の−Ｙと
して選ばれたアミノ酸の保護基に影響を与えないで脱離
させることの出来る保護基を使用して保護する。

これら２つの保護したアミノ酸をペプチド台底に常用さ
れる方法、たとえばＤＣＣＤ等を用いるカルボジイミド
法、クロル蟻酸エステル等を用いる混合酸無水物法、カ
ルボキシル基をアジド化して用いるアジド法、一旦Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミド等のエステルとして反応させ
る活性エステル法等のペプチド結合生成反応で縮合させ
、ジペプチドとし、さらに次の同様な保護基を持つ、も
ちろん最終段階のペプチド結合を生成させる場合の保護
基はどのようなものでもよいが最終段階で他の保護基を
脱離させる条件で脱離する保護基が望ましいがアミノ酸
を結合させるべくＬ−バリン部分のアミノ基の保護基の
みを脱離させる目的で、たとえば接触還元、トリフルオ
ロ酢酸（ＴＦＡ）処理、酢酸中の臭化水素または液体ア
ンモニア中のすｌ・リウムによる処理、アルカリによる
ケン化無水弗化水素等による処理等の方法による保護基
の除去法のうちから他の保護基に影響を与えないように
あらかじめ選んだ条件下に保護基を脱離せしめ、さらに
アミノ酸単位を伸張すべくペプチド結合生成反応保護基
の脱離反応を繰り返し最終的にすべての保護基を脱離さ
せて目的とするペプチド誘導体を得る。

本発明の上記によるテトラペプチド類は、アミノペプチ
ダーゼＡ（以下ＡＰ−Ａ）、アミノペプチダーゼＢ（以
下ＡＰ−Ｂ）、ロイシンアミノペプチダーゼ（以下Ｌｅ
ｕ−Ａｐ）、グリシル−プロピル−ロイシン）・リペプ
チジルアミノペプチダーゼ（以下Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅ
ｕ−Ａｐ）、グリシルヒスチジル−リジントリペプチジ
ルアミノペプチダーゼ（以下Ｇｌｙ −Ｈｌｓ −Ｌｙ
ｓ −Ａｐ ）の酵素群を強く阻害する。

以下にそれぞれの活性の測定法及び結果を示す。

（１）ＡＰ−Ａ（Ｅ、Ｃ，３・４・１１・７）活性の測
定は永津ら（１，ＮＡＧＡＴＳＵ、Ｔ。

ＮＡＧＡＴＳＵＳＴ、ＹＡＭＡＭＯＴＯ，Ｇ、Ｇ。

ＧＬＥＮＮＥＲ，ＢＩＯＣＨＩＭＩＣＡ ＥＴＢＩＯ
ＰＨＹＳＩＣＡ ＡＣＴＡ１９８２５５〜２７０、（
１９７０））記載の方法を改良して行った。

即ち、２ｍＭ Ｌ−α−グルタミル−β−す７チ＃７
ミド０．２５ｒｒＬｌ、０．ＩＭｌ・リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ０．５４ｒｒＬｌ、０．１Ｍ塩化カル
シウム０．０１Ｕｌ、検体を含む水溶液０．１ ｍｌを
加えた混合溶液を３７℃で３分間加温した後、永津らの
方法による酵素の精製法で硫安分画したＡＰ−Ａ溶液を
０．１ ＴＬｌ加え、３７℃で３０分間反応したのち、
１．０■／就の濃度にカーネツ）ＧＢＣ（オルトアミノ
アゾトルエン・ジアゾニウムンルト）を含み、１０％の
濃度にツウイーン２０ （Ｔｗｅｅｎ ２０米国アト
ラス社製）を含む１．０Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，２）１
ｍｌを加え、室温に１５分間放置後５３０ｎ７７１にお
ける吸光度（ａ）を測定した。

同時に検体を含まない緩衝液のみを用（・た盲検の吸光
度（ｂ）を測定し、アミノペプチダーゼＡ阻害率を〔（
ｂ−ａ）／ｂ）Ｘ１００により計算した。

（２）ＡＰ−Ｂ（Ｅ、Ｃ０３・４・１１・６）活性の測
定はホプスら（Ｖ、 Ｋ、 Ｈｏｐｓｕ 、 Ｋ、Ｋ。

Ｍａｋｉｎｅｎ 、 Ｇ、 Ｇ、 Ｇ １ｅｎｎｅｒ
： Ａｒｃｈｉｅｖｅ ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ 、 １１４．５５
７、（１−９６６） ）の方法を改良して行った。

即ち、２ｍＭ Ｌ−α−アルギニル−β−ナフチルアミ
ド０．２５ｍ１．０． ］、 Ｍ ）リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，０） ０．６３ｍ、ｌ、検体を含む水溶液０
． Ｉ ＴｒＬｌを加えた混合液を３７℃で３分間加温
した後、ホプスらの方法によりラット肝臓よりセファテ
ックス（、−１００（スウェーデン ファルマシア社製
、交さ結合テキストランゲル）で精製したＡＰ ＝Ｂ０
．０２ｍ１を加え、３７°Ｃで３０分間反応させる。

以下（１）と同様にして阻害率を求めた。

（３）Ｌｅｕ−ＡＰ（Ｅ、Ｃ，３−４１１１）活性の測
定は、２ｍＭ Ｌ−α−ロイシル−β−ナノチルアミ
ド０．２５ｍｌ、 ０．１ Ｍ ＋−リス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７，６） ０．６ｍｌ、検体を含む水溶液ｏ、
ｉ ｒｒｔｌを加えた混合液を３７℃、３分間加温した
後、０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，６）で２０倍
に希釈したＬｅｕ−ＡＰ（ベーリンガーマンハイム社製
）０．０５Ｔｌｌを加え、３７℃で３０分間反応させた
。

以下（１）と同様にして阻害率を求めた。

（４） Ｇ １ｙ−Ｐｒｏ −Ｌｅｕ −Ａ Ｐ活性
の測定は青柳ら（Ｔ、 Ａｏｙａｇｉ 、 ｅｔ ａｌ
： Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔＢ １ｏｐｈｓｉｃ
ａ Ａｃｔａ 、 ４５２．１３１〜１４３、（１９７
６））の方法によった。

例えば２ｍＭクリシル−Ｌ−α−プロリル−Ｌ−α−ロ
イシル−β−ナフチルアミド（バツケムファインケミカ
ル株製）０，２５ｒｒＬ１１ハンクス液（ｐＨ７，２）
０、６ ｍ、ｌ、検体を含む水溶液０．１ ｒｕｌを加
えた混合溶液を３７°Ｃで３分間加温した後、ラット肝
臓の細胞膜分画から精製したＧｌｙ −Ｐｒｏ −Ｌｅ
ｕ−ＡＰｏ、０５ｍ１を加え、３７°Ｃで３０分間反応
させる。

以下（１）と同様に阻害率を求めた。なお、上記のハン
クス液（Ｈａｎｋｓ ５ｏｌｕｔｉｏｎ ）は蒸留水１
１に、塩化ナトＩＪウム８．０１、塩化カリウム０．４
Ｐ、塩化カルシウム０． Ｉ−４Ｐ、塩化マグネシウ
ム０．１１’、りん酸−水素すトリウム０．０６？、り
ん酸二水素カリウム０．０６？、硫酸マグネシウム０．
１１’、ブドウ糖１．０１を溶かし、炭酸水素ナトリウ
ムを加えて（約３５０■）ｐＨ７，２に調整したもので
ある。

（５） Ｇｌｙ −Ｈｌｓ −Ｌｙｓ−ＡＰ活性の測
定は０、５ ｍＭグリシル＝Ｌ−α−ヒスチヂルーＬα
−リシルーβ−ナノチルアミド０．２５ ｍ、ｌ！、ハ
ンクス液（ｐＨ７，２） ０．６２ｍ、ｌ、検体を含む
水溶液０．１ ｍｌを加えた混合溶液を３７℃で３分間
加温した後、（４）に引用した文献の方法により、ＦＭ
３Ａ（マウス乳ガン由来の培養細胞）から精製したＧｌ
ｙ −Ｈｌｓ −Ｌｙｓ −ＡＰ Ｏ，０３ｍ、ｌを加
え、３７℃で３０分間反応させる。

以下（１）と同様にして阻害率を求めた。

なお、上記のうちのＧｌｙ −Ｈｌｓ ＝Ｌｙｓ−βナ
ノチルアミドの調製は次のごとく行った。

Ｇ ｌｙ −Ｈｉｓ −Ｌｙｓ−アセテート（バツケム
・ファインケミカル社製）１グの蒸留水６０ｍ１溶液に
炭酸水素ナトリウム３．０２を添加し、水冷下Ｚ−Ｃ１
２，１３ｍｌを温州し、３時間攪拌した後、参考例１−
（７）と同様に処理して得たＺ−誘導体６０５．８ｍ９
とβ−ナフチルアミン１１７ｍｇとを参考例１−（２）
と同様に縮合させて得た固体６００■を酢酸−水（１：
１）混合溶媒１０扉ｌに溶解しパラジウム−炭素３０ｍ
９と共に水素加圧下（４気圧）一晩振盪した後、触媒を
ろ別し、溶媒を減圧下装置し、目的物２００■を得た。

ｎ、ｍ、ｒ、δｐｐｍ（ＣＤ３０Ｄ）： １、４〜２．３ （６Ｈ，ｍ。

ＮＨ−ＣＭ （ＣＨ２）３ ） ２．９〜３．２ （４Ｈ，ｍ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ
２、＞ＣＨ−ＣＨ，Ｃ＝ＣＨ） ３．７〜３．９ （２Ｈ，ｍ、ＮＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−
）６．９〜８．３ （９Ｈ，ｍ、 ａｒｏｍａｔｉｃ
）ｍ、ｐ、：１１５〜１１６℃（３ＨＣｌ ５ａｌｔ
）（ロ）〒 −１７，５°（Ｃ＝０．Ｌ Ｈ２Ｏ）（
３ＨＣ１５ａｌｔ ） 以上の測定法による本発明のペプチド及び関連ペプチド
類の各酵素に対する阻害活性を第１表に示す。

このように本発明による化合物群はＧｌｙ −Ｐｒ。

Ｌｅｕ−ＡＰ及びＧｌｙ −Ｈｉｓ −Ｌｙｓ −Ａ
Ｐなるトリペプチジルアミノペプチターゼを強力に阻害
する点にある。

現在、腫瘍細胞の増殖因子としては Ｓｈｌｅｓｉｎｇｅｒら（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ３
２ ３２４〜３２５（１９７７））により、Ｇｌｙ −
Ｈｌｓ −Ｌｙｓなるトリペプチドが単離されており、
このトリペプチドは生体内でトリペプチターゼにより産
生されていることが示唆されている。

従って、アマスタチン群及び本発明による誘導体類を投
与することにより哨乳動物の腫瘍細胞の増殖抑制効果が
期待できる。

かくして、本発明は試験管内又は生体内試験に於てアミ
ノペプチダーゼおよびトリペプチジルアミノペプチター
ゼに対し阻害活性を示し、抗腫瘍剤としての使用も期待
できる新規ペプチド誘導体を提供するものである。

実施例 １ （２Ｓ ・３ Ｒ） −ＡＨＭＨＡ −Ｖａｌ −Ｌｙ
ｓＡｓｐの合成 １−（１）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ） −Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）２の合成りｏｃ −Ｌｙｓ （Ｚ ） １．０３ ？
、Ａｓｐ （ＯＢｚ ｌ ）２ ・ＴｏｓＯＨ１，３１
Ｓ’及びＨＯＢｔ４３７ｍ９の無水テトラヒドロフラン
（以下ＴＨＦと略す）懸濁液にＤＣＣＤ６１２１ｎ９を
添加し、５分間攪拌した後、無水トリエチルアミン０．
４１４ｒｒＬｌを滴下し、８時間攪拌した後、生成した
ＤＣＵを：ｆ−コ別し、減圧下溶媒を溜去して得たシロ
ップ４．８１をシリカゲル（ワコーゲルＣ−２００，５
０グ、和光紬薬製）を充填したカラムに展開溶媒として
ベンゼン：酢酸エチル−５：ｌの混合溶媒を用いたカラ
ムクロマトグラフィーを行い、目的物の結晶１．７４ｆ
を得た。

Ｒｆ：０．１２（ベンゼン：酢酸エチル−５：ｌ、シリ
カゲル６０Ｆ２５４プレート、ニー・メルク社製） Ｂｏｃ −Ｌｙｓ （Ｚ） −Ａｓｐ （ＯＢｚ ）
１．１４ ′？の塩化メチレン１１ｍ１溶液に水冷下で
トリフルオロ酢酸０．６ ｒｎｌを滴下し、室温にもど
して３時間後、減圧下溶媒を溜去し、残渣を酢酸エチル
２０ｒｕｌに溶解し、冷飽和炭酸水素すｌ・リウム５Ｔ
Ｌｌで３回、飽和食塩水５ｍＡで２回洗浄後、無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を溜去して得た遊離ア
ミン８７３ｍ９をＢｏｃ −Ｖａｌ ３１４． ｍ９
．１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下ＨＯＢｔと
略記）２３４ｍ９と共に無水ＴＨＦ１７献に溶解し、氷
冷下ＤＣＣＤ３２８１ｎＩ？を添加し、室温にもどして
４時間攪拌した後、生成したＤＣＵを戸別し減圧下溶媒
を溜去し、残渣をシリカゲル（４０Ｓ’、前出の担体に
同じ）を充填したシリカゲルカラムに展開溶媒としてベ
ンゼン：酢酸エチル：クロロホルム＝２ ： ｔ ：
１混合物を用い、クロマトグラフィーを行い、９０６■
のＢｏｃ−■Ｉ−Ｌｙｓ（Ｚ） Ａ ｓｐ （ＯＢ ｚ ｌ ）２の結晶を得た。

Ｒｆ：０．５４（ベンゼン：酢酸エチル：クロロ５０３
ｍｇの塩化メチレン４ＴＬｌ溶液に水冷下、トリフルオ
ロ酢酸ＩＴｒＬｌを滴下し、室温で２時間放置した後、
減圧下溶媒を溜去し、残渣を酢酸エチル２０ｍ、１．に
溶解し、冷飽和炭酸水素ナトリウム２１ｎｌで３回、飽
和食塩水２ｍｌで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥の後減圧下溶媒を溜去して得た遊離アミン３５０■を
Ｚ−（２Ｓ・３ Ｒ−ＡＨＭＨＡ （Ｚ ） １．５７
ｍ９、ＨＯＢｔｌＯ７ｍｌ？と共に無水ＴＨＦ１３ｍｌ
に溶解し、水冷下ＤＣＣＤ１５０■を添加し、５時間攪
拌した後生成したＤＣＵを１別し、減圧下溶媒を溜去し
て得た固体５０２ｒｎＪ？をシリカケルカラム（２０ｙ
、前出の担体に同じ）に展開溶媒としてベンゼン：クロ
ロホルム：アセトン（１： ］：Ｉ）混合溶液を用いた
カラムクロマトグラフィーを行い、３８７ｍ９のｚ−（
２Ｓ−３Ｒ）ＡＨＭＨＡ（Ｚ）−■ａ１−Ｌｙｓ（Ｚ）
Ａ ｓｐ （ＯＢｚ ｌ ）２の結晶を得た。

ジオキサン：蒸留水の混合液（混合比１１：２：１）１
３ｍｌに溶解し、１０％パラジウム−炭素３８１ｎ９を
添加し、３．５ ｋｇ／ｃｙｓｔ水素加圧下、水素量圧
下し、Ｐｄ−Ｃを１刑した後、減圧下溶媒を溜去し、蒸
留水１ｏｍｌに溶解し、さらに減圧下で溶媒を溜去する
。

上操作を３〜４繰返した後、蒸留水５ｍ１−イソプロピ
ルアルコール１０ｍ１より再結晶し、（２Ｓ −３Ｒ）
−ＡＨＭＨＡ−Ｖａｔ −Ｌｙｓ −Ａｓｐ １５２
ｍ９を得た。

Ｂｏｃ −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ａｓｐ （ＯＢｚ
ｌ ）２１．５９ ？を実施例１−（２）と同様にトリ
フルオロ酢酸で処理し、Ｂｏｃ −Ｖａｌ ５６９ ｍ
ｔ；ｔと縮合させ、１．６４１のＢｏｃ −Ｖａｌ −
Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）２の
結晶を得た。

６７６．５■を実施例１−（３）と同様にトリフルオロ
酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ） ＡＨＭＨＡ２８３■と縮合させ、５５５１ｎ９（７）表
記の化合物を得た。

Ｔｈｒ−Ａｓｐの合成 Ｚ−（２Ｓ ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ ＝ＶａｌＴｈｒ（
Ｂｚｌ）−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）２４６８１７２９を、酢
酸−ジオキサン−蒸留水の混合液（混合比１１：２ ：
１ ） ３．０ｍｌに溶解し、１０％パラジウム炭素
４６ｒｒＩ９を添加して３．６ ｋｇ／ｃｒｉｔ水素加
圧下２６時間振盪し、触媒を１別した後、減圧下で溶媒
を溜去し、蒸留水１０ｍ１に溶解し、さらに減圧下で溶
媒を溜去する。

上操作を３〜４回繰返して表記の化合物２５０ηを得た
。

実施例 ３ （２Ｓ ・３ Ｒ） −ＡＨＭＨＡ −Ｖａｌ −Ｌｅ
ｕＡｓｐの合成 ３−（１） Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ （ＯＢｚｌ
）２の合成りｏｃ −Ｌｅｕ １．０４９と Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）２・ＴｏｓＯＨ２，１９？を実
施例１（１）と同様に縮合させ、シリカゲルカラム（５
０グ、前出の担体と同じ）及びベンゼン：酢酸エチル混
合液（混合比１０：１）の展開溶媒のカラムクロマトグ
ラフィーを行い、２．３９９の表記の化合物をシロップ
状で得た。

Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ （ＯＢｚ ｌ ）２ １．８
０ ？を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で
処理し、Ｂｏｃ−Ｖａｌ ６５１■と縮合させ、シリカ
ゲルカラム（５０１、前出の担体と同じ）およびベンゼ
ン−酢酸エチル混合液（混合比５：ｌ）でのカラムクロ
マトグラフィーな行い、１．５．ｌ’の表記化合物の結
晶を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｌｅｕ−Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）
２７００１１１Ｊｉ／を実施例１−（３）と同様に）・
リフルオロ酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭ
ＨＡ２８１即と縮合させ、酢酸エチル−ヘキサンより再
結晶し、４１７Ｔｎ９の表記化合物を結晶で得た。

ＨＭＨＡ Ｖａｌ Ｌｅｕ ５ｐ ２２３■を得 （１）と同様に縮合させ、シリカゲルカラム（５０グ、
前出の担体に同じ）およびベンゼン−酢酸エチル混合液
（混合比１０：１）を展開溶媒のカラムクロマトグラフ
ィーを行い、エーテルヘキザン混合液より再結晶し、１
．７．１の表記化合物を結晶で得た。

１．６：ｌを実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢
酸で処理し、Ｂｏｃ −Ｖａｌ ５５９ｍ９と縮合さ
せ、シリカゲルカラム（２０グ、前出の担体に同じ）に
ベンゼン：酢酸エチル＝３：１を展開系として用いたカ
ラムクロマトグラフィーを行い １．３８？の表記化合
物を結晶で得た。

Ａｓｐ （ＯＢｚ ｌ ）２７０７１１ｕｉ／を実施例
１−（３）と同様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｚ−（
２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ２８０■と縮合させ、クロロ
ホルム−エーテル混合液から再結晶し、３４３■の表記
化合物を結晶で得た。

Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ−ＶａｌＧｌｕ （Ｏ
Ｂｚ ｌ ）−Ａｓｐ （ＯＢｚ ｌ ）２３４１．
ｍ９を実施例１−（４，）と同様に加水素分解し、２４
７ｍ９の表記化合物を結晶で得た。

Ａｓｐの合成 ５−（１） Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ａｓｐ （ＯＢｚ
ｌ ）２の合成Ｂｏｃ −Ｖａｌ ４．０ ？とＡｓ
ｐ （ＯＢｚ １． ）２８．９４１を実施例１−（１
）と同様に縮合させ、シリカゲルカラム（ｉｏｏｙ、前
出の担体に同じ）にベンゼン：酢酸エチル−５：１を展
開溶媒として用いたカラムクロマトグラフィーを行い、
クロロホルム−ヘキサンより再結晶して８．７７１の表
記化合物を結晶で得た。

Ｂｏｃ−■ａｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）２１．０？を実施
例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｂｏ
ｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ ） ５３５１ｎｇと縮合させ、シ
リカゲルカラム（２５グ、前出の担体に同じ）にベンゼ
ン：酢酸エチル＝１０：１を展開溶媒として用いたカラ
ムクロマトグラフィーを行い、エーテル−ヘキサン混合
液より再結晶し、６１１■の表記化合物を得た。

Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ｖａｌ−Ａｓｐ （ＯＢＺＩ
）２の台底Ｂｏｃ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ） −Ｖａｌ
−Ａｓｐ （ＯＢＺＩ ）２５２０１Ｆ＆？を実施例
１−（２）同様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｚ−（２
８・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡｌ ８７ｍ９と縮合させ、シリ
カゲルカラム（３０ダ、前出の担体に同じ）にベンゼン
：酢酸エチル−３：１を展開溶媒として用いたカラムク
ロマトグラフィーを行い、エーテル−ヘキサン混合液よ
り再結晶し３８６■の表記化合物の結晶を得た。

Ｔｈｒ（ＢＺｌ）−ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＢＺｌ）２３８
６ｒｎ９を１０％パラジウム−炭素を用い、実施例１（
４）と同様に加水素分解し、表記の化合物２００■を得
た。

実施例５−（１）と同様の方法で合成して得られたＢｏ
ｃ −Ｖａｌ −Ａｓｐ （ＯＢＺＩ ）２ ７０８
ｍ９を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で処
理し、Ｂｏｃ −Ｌｅｕ ３９７■と縮合させ、シリ
カゲルカラム（３ｏｚ、前出の担体に同じ）にベンゼン
：酢酸エチル−３：２）を展開溶媒として用いたカラム
クロマトグラフィーを行い、６７３■の表記の化合物を
結晶で得た。

Ｂｏｃ −Ｌｅｕ −Ｖａｌ −Ａｓｐ （ＯＢｚｌ
）２５０９■を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ
酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ（Ｚ）
２８５■と縮合させ、シリカゲルカラム（３０？、前出
の担体に同じ）にベンゼン：酢酸エチル−３：ｌを展開
溶媒としたカラムクロマトグラフィーを行い、４９０■
の表記化合物を得た。

Ｒｆ：０．４５（ベンゼン：酢酸エチル−２：１、前出
シリカゲルプレート） Ｚ−（２Ｓ −３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ（Ｚ）Ｌｅｕ −Ｖ
ａｌ −Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）２２００ ｍ９を実施
例１−（４）と同様に加水素分解し、表記の化合物７２
ｍＩ？を得た。

実施例５−（１）と同様の方法で合成して得られたＢｏ
ｃ −Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）２１．Ｏｆを実施例
１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｂｏｃ
−Ｌｙｓ （Ｚ ）と縮合させ、シリカカラム（３０
１、前出の担体に同じ）にベンゼン：酢酸エチル−３：
２を展開溶媒としたカラムクロマトクラフィーを行い、
８６６■の表記化合物を結晶で得た。

Ｂｏｃ −Ｌｙｓ （Ｚ ） −Ｖａｌ −Ａｓｐ （
ＯＢｚｌ ）２５３４．４７％を実施例１−（３）と同
様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ） ＡＨＭＨＡ （Ｚ ） ２５８ＴｎＪ？と縮合させ、−
７’）−ｊ−Ｊカラム（３０グ、前出の担体に同じ）に
ベンゼン：酢酸エチル−２：１を展開溶媒としたカラム
クロマトグラフィーを行い ５１０ｒｎ９の表記化合物
を得た。

実施例１−（４）と同様に加水素分解し、表記の化合物
８４ｍ９を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）２１．０
’ｉ？を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸
で処理し、Ｂｏｃ −Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ ）と縮合さ
せ、シリカカラム（３０グ、前出の担体に同じ）にベン
ゼン：酢酸エチル−３：１を展開溶媒としたカラムクロ
マトグラフィーを行い、７８０■の表記化合物を得た。

５１０ｒｎｇを実施例１−（２）と同様にトリフルオロ
酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ） ＡＨＭＨＡ（Ｚ）２７０■と縮合させ、シリカカラム（
３０グ、前出の担体に同じ）にベンゼン：酢酸エチル−
２：１を展開溶媒としたカラムクロマトグラフィーを行
い、５００■の表記化合物を得た。

Ｚ−（２Ｓ ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ（Ｚ ）Ｇｌｕ （
ＯＢｚｌ ） −Ｖａｌ −Ａｓｐ （ＯＢｚｌ ）２
１．９０■を実施例１−（４−）と同様に加水素分解し
、表記の化合物６５ｍ９を得た。

Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ） ２．’ｌ’オヨびＰｈｅ
（ＯＢｚｌ ） ・ＴｏｓＯＨ４，０？を用い、実施例
１−（１）と同様に縮合させ、・シリカカラム（５０グ
、キーゼルゲル６０、ニー・メルク社製）にベンゼン：
酢酸エチル−１０：１を展開溶媒としたカラムクロマト
グラフィーを行い ４．８１の表記化合物を得た。

Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ）の合成 りｏｃ −Ｔｈｒ （ＯＢｚｌ、 ）−Ｐｈｅ （ＯＢ
ｚｌ ） ４．．８ ？を実施例１．−（２）と同様
に１− ’Ｊフルオロ酢酸で処理し、Ｂ ｏｃ −Ｖａ
ｌ １．９ ？と縮合させ、シリカカラム（６０？、
キーゼルゲル６０）にベンゼン：酢酸エチル−５：１を
展開溶媒としたカラムクロマトグラフィーを行い、４．
８１の表記化合物を得た。

Ｔｈｒ （ＯＢｚｌ ） −Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ）の
合成Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｔｈｒ （ＯＢｚｌ ） −
Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ）６００■を実施例１−（３）と
同様にトリフルオロ酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）
−ＡＨＭＨＡ２５９ｍ９と縮合させ、クロロホルム−ヘ
キサンより結晶化させ、６５０１ｎ９の表記化合物を得
た。

Ｔｈｒ−Ｐｈｅの合成 Ｚ −（２Ｓ −３Ｒ） −ＡＨＭＨＡ −ＶａｌＴｈ
ｒ（ＯＢｚｌ ） −Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ） ３００
ｍ９を実施例２−（４）と同様に加水素分解し、（２Ｓ
・３Ｒ）ＡＨＭＨＡ −Ｖａｌ −Ｔｈｒ −Ｐｈｅ
１００７％’を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ １．１ ？およびＶａｌＯＢｚｌ
・ＴｏｓＯＨ２，０？を用い、実施例１−（１）と同様
に縮合させ、キーゼルゲル６０を充填させたシリカカラ
ム（５０グ、キーゼルゲル６０）にベンゼン：酢酸エチ
ル混合液（混合比１０：ｌ）を展開溶媒としたカラムク
ロマトグラフィーを行い ２０グの表記化合物を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｖａｌ （ＯＢｚｌ ） １．４
９を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で処理
し、Ｂｏｃ −Ｌｙｓ （Ｚ） ］、、 ３ ？と縮合
させ、シリカカラム（６１’、キーゼルゲル６０）にベ
ンゼン酢酸エチル混合液（混合比４：１）を展開溶媒と
したカラムクロマトグラフィーを行（・、２０グの表記
化合物を得た。

Ｂｏｃ−Ｌｙｓ （Ｚ ）−Ｖａｌ −Ｖａｌ （ＯＢ
ｚｌ ）６００■を実施例１−（３）と同様にトリフル
オロ酢酸で処理し、Ｚ−（２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ２
２２ｍｇと縮合させ、クロロホルム−ヘキサンより結晶
化させ、５００■を得た。

Ｚ−（２Ｓ ・３Ｒ） −ＡＨＭＨＡ−Ｌｙｓ（Ｚ）−
Ｖａｌ −Ｖａｌ （ＯＢｚｌ ） ３００ ｍｇを実
施例１−（４）と同様に加水素分解し、１０９ｍ９の（
２Ｓ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｔを
得た。

Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）ＯＢｚｌ 半シュウ酸塩４．０６
．４７Ｑを酢酸エチル５０ｍ１に溶解し、４％炭酸水素
ナトリウム水溶液２０ｍ、ｌで３回洗浄後、飽和食塩水
２０ｍ１で２回洗浄、適当の無水硫酸ナトリウムで乾燥
後、乾燥剤を１去し、酢酸エチルを減圧下留去してＴｈ
ｒ （Ｂｚｌ ）ＯＢｚｌ とした。

上記で得られたＴｈｒ （Ｂｚｌ ）ＯＢｚｌとＢｏｃ
−Ｖａ１２１７．３ｍ９、ＨＯＢｔ ］ ４ Ｂ、
６ｍ９をＴＨＦＩＯｒｎｌに溶解し氷冷した。

次いでＤＣＣＤ２２７Ｔ／ｌｌを加え水冷下２時間、室
温で１時間反応させ、析出したＤＣＵの沈殿を１別し、
溶媒を減圧下留去した。

残渣を酢酸エチル５０Ｔｒｔｌに溶解し、１０％クエン
酸水溶液２０１ｒＬｌで３回、４％炭酸水素ナトリウム
水溶液２０ｍ１で３回洗浄飽和食塩水２０ｍ、ｌで２回
洗浄後、適量の無水硫酸ナトリウム乾燥後、酢酸エチル
を減圧下留去した。

残渣をシリカゲル（１１’、キーゼルゲル６０．７０〜
２３０メツシユ、ニー・メルク社製）を用い、クロロホ
ルム：メタノール−４０：１を展開溶媒としたカラムク
ロマトグラフィーを行い、目的物３０５ｍ９を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）ＯＢｚｌ
３０５ ｍ９を実施例１−（２）と同様にトリフルオ
ロ酢酸で処理して遊離アミンとし、これをＢｏｃ −Ｖ
ａ１１６８■と縮合させ、目的物結晶４３８■を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｔ −Ｖａｌ −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）
ＯＢｚ１４１８■を実施例１−（３）と同様にトリフル
オロ酢酸で処理して遊離アミンを得、これを２−（２Ｓ
・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ１６１゜８ｒ／１９と縮合させ２
４．６．１１Ｎ？の目的物を得た。

Ｖａｌ−Ｔｈｒ （Ｂｚｌ ）ＯＢｚｌ ２４６．１
ｍ９と５％パラジウム−炭素触媒５０ｍｌ１をメタノ
ール：酢酸：水−４：２：１の混合液に溶解し、室温下
、水素を用いて接触還元を行った。

乾燥を１去した後、水を加えつつ全量を減圧下蒸発乾固
させ目的物１３７．４ｍｇを得た。

実施例１０−（１）と同様の方法で合威し得られたＢｏ
ｃ −Ｖａｔ −Ｖａｔ （ＯＢｚｌ ） ２．０９を
ブタノール５０ｒｎｌに溶解し、３００■の１０％パラ
ジウム−炭素を加え一夜接触還元を行℃・、後、触媒を
ａｊ去し、全量を減圧乾固して目的物１．５３Ｓ’を得
た。

Ｐｒｏ（ＯＢｚｌ）・ＨＣｌ １．１７Ｐ、ＮＭＲ５
４０μｌをジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦと略す）
４０ｍ−１，ＴＨＦ ２０ｍｌの混合液に溶解し、次
いでＢｏｃ −Ｖａ、１−Ｖａｔ １．５３ ？、ＨＯ
ＢｔＯ，７２グを加え氷冷した。

水冷下ＤＣＣＤ１．１０？を加え、２時間、さらに室温
で１時間反応させた。

析出するＤＣＵをｆコ過後、ｐ液を蒸発乾固、残渣を酢
酸エチル３７０ ｍ、ｌに溶解し、１０％クエン酸水溶
液、４％炭酸水素すｌ−リウム水溶液、それぞれ１００
ｒ／ｌｌにて３回ずつ洗浄し、さらに飽和食塩水８０
ｍｌにて２回洗浄した。

無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤をｄ−ｊ去、溶媒
を減圧下留去して目的物１．１６ ？を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｖａｌ −Ｐｒｏ （ＯＢｚｌ
） １．１６ ’ｉｔを実施例１−（３）と同様にトリ
フルオロ酢酸で処理して得られたＶａｌ −Ｖａｌ −
Ｐｒｏ （ＯＢｚｌ ）７１７■をＺ−（２Ｓ・３Ｒ）
−ＡＨＭＨＡ５２５■と縮合させ、表記の化合物５６８
ｍ９を得た。

Ｖａｌ 酢酸： し、■ 流側１ 得た。

（２Ｓ −３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ−Ｖａｌ Ｐｒｏ （ＯＢｚｌ ） ２０４ ｍ９をメタノール：
水−４：２：Ｉの混合溶媒３０ＴＬｌに溶か０％パラジ
ウム−炭素５０ｍ９を加えて実−（４）と同様に処理し
、目的物１２８１ｖをＰｈｅ（ＯＢｚｌ）−ＴｏｓＯＨ
４２７ｍ９とＮ−メチルモルホリン（以下ＮＭＭと略記
）■１０μｌをＴＨＦ２０ｒＩＬｌに溶かし、Ｂｏｃ
−Ｖａｌ ２１−７■、ＨＯＢｔ １４８ ｍｌそ
してＤＣＣＤ２２７ｍ９を用いて実施例１−（１）と同
様に反応処理し４３０■の目的物を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ） ５３０
ｍ９を実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢酸で
処理して得られたＶａｌ −Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ）
４８４ ｍｔｉをＢｏｃ −Ｖａｌ ２９６ｍ９と縮
合させ、４６９■の目的物を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ−Ｖａｌ −Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ）
３４２ ｍ９を実施例１−（３）と同様にトリフルオロ
酢酸で処理して得られた、Ｖａｌ −Ｖａｔ −Ｐｈｅ
（ＯＢｚｌ ）２７０Ｔｎ９をＺ−（２Ｓ −３Ｒ）
−ＡＨＭＨＡｌ ６３ｒｒＵ？と縮合させ３４３ｍ９の
目的物を得た。

Ｚ−（２Ｓ ・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ−ＶａｌＶａｌ −
Ｐｈｅ （ＯＢｚｌ ） ３２０ ｍ９を１０％パラ
ジウム−炭素８０＃／、メタノール−酢酸−水（４：２
：１）の混合溶媒１６１ｎｌに溶解し、実施例１−（４
）と同様に処理し、目的物２１３■を得た。

実施例１２−（１）と同様の方法で合威し得られたＢｏ
ｃ −Ｖａｌ −Ｖａｌ ３９５ ｍ９とＶａｌＯＢ
Ｚｌ−ＴｏｓＯＨ４７４ｍｙとを実施例１−（２）と同
様に縮合、後処理し、目的物６０５■を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｖａｌ −Ｖａｌ （ＯＢｚｌ
） ２７８ ｍ９を実施例１−（３）と同様にトリフル
オロ酢酸で処理して遊離アミンを得、これとＺ−（２Ｓ
・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡＩ ２９すと縮合させて２５０■
の結晶を得た。

Ｚ−（２Ｓ ・３Ｒ） −ＡＨＭＨＡ−ＶａｌＶａｔ
−Ｖａｌ （ＯＢ ｚｌ ） ２４６ ｍ９をメタノー
ル：酢酸：水−８：２：１の混合溶媒１５ＴｆＬｌに溶
解し、１０％パラジウム−炭素５０ｍ９を添加し、実施
例１−（４）と同様に処理して表記の化合物１１４．８
ｍ９を得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ ２１７．３ｍｇ、Ｌｙｓ（Ｚ）Ｏ
Ｂｚｌ−ＨＣｌを４−０７ｍ１；１用い、実施例１−（
１）と同様に反応、処理し、目的物６１３ｒｎｆ／を得
た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｌｙｓ（Ｚ）−０Ｂｚｌ −Ｔｏ
ｓＯＨ３６２■を実施例１−（２）と同様にしてトリフ
ルオロ酢酸で処理して遊離アミンとし、ＢｏｃＶａｌ１
２２■と縮合させて目的物２８６ｍｇを得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ −Ｖａｌ −Ｌｙｓ （Ｚ ） −
０Ｂｚ１２８６ｒｒｙを実施例１−（３）と同様にトリ
フルオロ酢酸で処理して、遊離アミンとし、Ｚ−（２Ｓ
・３Ｒ）−ＡＨＭＨＡｌ ２４ｍｇと縮合サセテｌ−’
４的物１７７ｍ９を得た。

Ｚ−（２Ｓ −３Ｒ）−ＡＨＭＨＡ−ＶａｌＶａｌ −
Ｌｙｓ （Ｚ ） −０Ｂｚｌ １７５ ｍｙをメタ
ノール：酢酸：水（４：２：１）の混合溶媒３０ｍ１に
溶解し、実施例２−（４）と同様に加水素分解して目的
物７７．１ｍｇを得た。

Ｂｏｃ −Ｖａｌ ０．４３９ ？、Ａ ｒｇ （Ｎｏ
２ ）ＯＢｚｌ ・２ＴｏｓＯＨ］、、 ３０７ ？
を用い、実施例１−（１）と同様に反応、処理し、目的
物Ｑ、９６８？を得た。

Ｂｏａ −Ｖａｌ −Ａｒｇ（ＮＯ２〕−０Ｂｚｌ Ｏ
，９６０グを実施例１−（２）と同様にトリフルオロ酢
酸で処理して遊離アミンとし、これとＢｏｃ −Ｖａｌ
Ｏ，３０４Ｐと縮合させて目的物０．６０５Ｐを得た。

Ｂｏｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＡｒｇＣＮＯ２〕−〇Ｂｚ１
１４３■を実施例１−（３）と同様にトリフルオロ酢酸
で処理して、遊離アミンとし、これにＺ（２Ｓ・３Ｒ）
−ＡＨＭＨＡ８１．６■と縮合させて、目的物１５２■
を得た。

Ｚ （２Ｓ ・３Ｒ） −ＡＨＭＨＡ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ −Ａｒｇ （ＮＯ２） −０Ｂｚｌ １１４ ｍ９
をメタノール：酢酸：水＝４：２：１の混合溶媒３０Ｔ
ｌｌに溶解し、実施例１−（４）と同様に加水素分解し
て表記の化合物４８．７７Ｑを得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式Ｉ 式中、Ｒ１及びＲ２は１−メチルエチル、２メチルプロ
   ピル、■−ヒドロキシエチルまたは４アミノブチル基を
   表わし、 Ｙは式 ％式％ ここで、Ｒ３は１−メチルエチル、■−ヒドロキシエチ
   ル、カルボキシメチル、４−アミノフチル、３−グアニ
   ジノグロビル又はベンジル基を表わす、 但し、Ｒ１及びＲ２が共に１−メチルエチルであり、Ｙ
   が式（ｂ）の基を表わし且つＲ３がカルボキシメチルを
   表わす場合は除く、 で示され、そして第１のβ−アミノ酸が２８−１３Ｒ−
   立体配置を有し且つ第２〜４のα−アミノ酸がＬ−配置
   を有することを特徴とする新規なテトラペプチド誘導体
   。