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JPS5840143B2 - 標識用補助剤 - Google Patents
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JPS5840143B2 - 標識用補助剤 - Google Patents

標識用補助剤

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JPS5840143B2
JPS5840143B2 JP49111332A JP11133274A JPS5840143B2 JP S5840143 B2 JPS5840143 B2 JP S5840143B2 JP 49111332 A JP49111332 A JP 49111332A JP 11133274 A JP11133274 A JP 11133274A JP S5840143 B2 JPS5840143 B2 JP S5840143B2
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫グロブリンまたはそのＦｅ−フラグメント
を１個または２個以上の分析上検出しうる基で標識付け
する方法に関する。
この方法における免疫グロ７゛リンまたはそのＦｃ−フ
ラグメントは遊離の形または結合した形であり、上記の
分析上検出しうる基で標識付けされたポリペプチドを遊
離の形または結合した形の免疫グロブリンまたはそのＦ
ｃ−フラグメントに接触させることによってえられる。
本明細書で用いられる「ポリペプチド」なる語はタンパ
ク質も含む。
上記のような方法は知られている。
すなわち、標識抗体をポリペプチドとして用いることは
知られている。
抗体の調製法は複雑である。さらに抗体は種々の結合能
力を有する不均質な物質である。
免疫グロブリンに対する抗体を調製すると、例えば、ウ
サギの免疫グロブリンに対する抗体をやぎで調製すると
、そのような抗体はウサギからの免疫グロブリンとは結
合するが、一般的には他の動物からの免疫グロブリンと
は結合しない。
個々の免疫グロブリンに標識を付けるには、当該免疫グ
ロブリンと反応しうる特定の抗体を調製することが必要
である。
その上、たいていの場合には、検出しうる基で抗体に標
識を付けると免疫活性が失われることになる。
本発明の一つの目的はこのような欠点を少なくとも実質
的に取除くことである。
本発明の主たる特徴は上述した方法において、免疫グロ
ブリンがＩｇＧクラスに属し用いられるポリペプチドが
微生物から得られたものでありそして免疫グロブリンの
Ｆｃ部分に結合しうるものであり、しかもこのポリペプ
チドは分析上検出しうる基としての１個または２個以上
の螢光または酵素的活性を有する基で標識付けされるこ
とにある。
微生物から得られかつ上記の性質を有するポリペプチド
は比較的容易に得られそして螢光または酵素的活性を有
する基によって好収率で標識付けできる。
上記の性質を有する標震ポリペプチドによって得られる
重要な利点は、それを免疫グ吊プリンの標識付けに用い
た場合それが種々の動物からの免疫グロブリンの免疫グ
ロブリンのＦｃ部分において結合することができ、その
結果Ｆａｂ部分が遊離の状態にされそして抗原およびハ
プテンを結合するのに利用できるということである。
免疫グロブリンのＦｃ部分に対する抗体に標識を付ける
従来法は当該免疫グロブリンのＦｃ−フラグメントを純
粋にすること（これは困難な処理である）を必要としそ
れに伴ない動物の個々の種類に対応する個々の免疫グロ
ブリンの上記Ｆｃ−フラグメントで動物を免疫化するこ
とを必要とする。
標識法により得られる他の利点は、抗体とは異なり、当
該のポリペプチドは当該の免疫グロブリンに均一かつ所
定の方法で結合できる均質な物質であるということであ
る。
螢光性基でポリペプチドを標識化する方法は文献に詳し
く記載されておりそして本発明における微生物からのポ
リペプチドに適用できる。
ポリペプチドを標識化する簡便な方法の１つとしては螢
光性基を導入すること、例えば、フルオレセインインチ
オシアナートの助けをかりて導入することである。
酵素（例えばペルオキシダーゼまたは例えばフォスファ
ターゼのようなヒドラーゼ）はＣＮＢｒまたはゲルター
ルアルデヒドによってまたは文献に開示されている方法
でポリペプチドに結合できる。
ポリペプチドに標識付けしかくして免疫グロブリン（ま
たはそのＦｃ−フラグメント）にも標識付けされる螢光
性または酵素的活性を有する基は本目的のために慣用的
に使用される方法で容易に検出しかつ測定することがで
きる。
本発明で用いられる微生物からのポリペプチドは、スタ
フイロコツ力スオウレアス（Ｓ ｔａｐｈｙｌ ｏｃｏ
ｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）からのいわゆるタンパク質Ａま
たはそのタンパク質のフラグメントであってもよく、前
記フラグメントはポリペプチドの性質がありそして少な
くとも１つの免疫グロブリンをそのＦｃ部分において結
合する能力を有していることである。
上記ポリペプチドすなわちＳ、オウレアスから誘導され
たタンパク質Ａおよびそのフラグメントは、ＩｇＧ−ク
ラスに属する免疫グロブリンをそれらのＦｃ一部分にお
いて結合できる。
螢光性または酵素的活性を有する基で標識化されたポリ
ペプチドによる免疫グロブリンまたはそのＦｃ−フラグ
メントの標識付けは、免疫グロブリンまたはそのＦｃ−
フラグメントまたは抗原またはハプテンを定性的にまた
は定量的に検出するのに有利に使用できるものであって
、前記抗原またはハプテンは免疫グロブリンＦａｂ部分
に結合しているかまたは結合しうるものである。
螢光性または酵素的活性を有する基で標識化したポリペ
プチドによる免疫グロブリン（またはそのＦｃ−フラグ
メント）の標識付けは、標識ポリペプチドが溶解する液
体環境（好ましくは水性液体）において、ポリペプチド
が免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する条件下で好適に
行なわれる。
かくして、ｐＨは中性点付近例えばｐＨ５〜９の範囲例
えばｐＨ６〜８の範囲内で適宜選択される。
所望により、標識免疫グロブリン（またはそのＦｃ−フ
ラグメント）は上記免庶グロブリンカ溶液のときはゲル
ｐ過または特定の吸着によって精製される。
また、不溶の形のとき、例えば不溶のまたは不溶化され
た抗原またはハプテンと結合しているときまたは不溶性
ポリマーと直接的または間接的に結合しているときは洗
浄によって精製される。
余分な遊離の標識ポリペプチドは上記の精製操作の間に
除去できる。
また、本発明は１個または２個以上の分析上検出しうる
基で遊離の形または結合した形の免疫グロブリンまたは
そのＦｃ−フラグメントを標識付けするための補助剤で
あって、分析上検出しうる基で標識化されたポリペプチ
ドからなるかまたはそれを含有する補助剤に関する。
上記補助剤の特徴は、ポリペプチドが微生物から得られ
たものでありかつ免疫グロブリンのＦｃ部分に結合でき
るものであって、前記ポリペプチドは分析上検出しうる
基としての１個または２個以上の螢光性または酵素的活
性を有する基で標識化されている。
補助剤は上記標識法に有利に使用できる。
補助剤は溶液（好ましくは水溶液）の形であってもよい
。
また、それは固体の形例えば凍結乾燥した形であっても
よく、かくしてそれを使用時に容易に溶液とすることが
できる。
本発明の標識法は、遊離の形または結合した形の免疫グ
ログリンの定性的または定量的測定において、例えば免
疫グロブリンが例えば抗原またはハプテンと結合してい
るかまたは結合しうる免疫化学的反応と共に、重要なス
テップとなりうる。
また、本発明の標識法は、遊離の形または結合した形の
抗原またはハプテンを定性的または定量的に検出するた
めの試薬を調製するのに使用できる。
このような試薬は１個または２個以上の分析上検出しう
る基で標識化されたポリペプチドと免疫グロブリンとの
反応生成物からなるかまたはそれを含有していてもよい
。
本発明によれば、この試薬の特徴は、ポリペプチドが微
生物から得られたものでありそして免疫グロブリンのＦ
ｃ部分に結合することができ、その結果免疫グロブリン
の抗体活性を有するＦａｂ部分が抗原またはハプテンに
結合でき、しかも上記ポリペプチドは、分析上検出しう
る基としての１個または２個以上の螢光性または酵素的
活性を有する基で標識化されていることにある。
試薬は溶液（好ましくは水溶液）であってもよい。
また、それは固体の形例えば凍結乾燥した形のものであ
ってもよく、それによって使用時に容易に溶液とするこ
とができる。
試薬は、免疫グロブリンの抗体活性を有するＦａｂ一部
分が抗原またはハプテンに結合できる条件下では、液体
（好ましくは水性液体）の存在下に好適に使用される。
抗原またはハプテンは遊離の形または結合した形、例え
ば細胞の表面にまたはポリマーたとえば不溶性ポリマー
に結合した形であってもよい。
また、抗原は別の抗体に結合していてもよい。
以下、本発明を実施例によって説明する。
例１ 標識化のためのＳ・オウレアスからのタンパク質Ａの調
製 Ａ Ｓ、オウレアスからのタンパク質Ａの粗抽出物の
調製 Ｓ、オウレアス、菌株コワン（Ｃｏｗａｎ ） ｌをヨ
ーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ 、Ｂｉｏｃｈｅｍ）、第２９巻
（１９７２）、５７２頁（スエキスト５ｊｏｑｕｉｓｔ
）に記載されている指針に従って培養した。
タンパク質Ａを酵素製剤リゾスタフィン （ｌｙｓｏｓｔａｐｈｉｍ）によってバクテリアから分
離した。
不溶性物質を遠心分離によって除き、液相を回収した。
ＨＣＪ’を用いてｐＨを３．５に調整し、不溶性物質を
遠心分離により除き、液体を回収した後ｐＨをＮａＯＨ
を用いて７．０に調整した。
すべての操作は上記参照文献に従って行なった。
このようにして得た液体はタンパク質Ａを不純物との混
合物の形で含有している粗製の抽出物からなっている。
Ｂ、ＩｇＯを結合したアガロースの調製 アガロースは商業的に入手できる製剤セファロス（Ｓｅ
ｐｈａｒｏｓｅ ）■４Ｂ（ファルマシ７’−７アイソ
・ケミカルス（Ｐ ｈａｒｍａｃ ｉａ Ｆ ｉｎｅＣ
ｈｅｍｉｃａｌｓ ） ＡＢウプサラ、スエーデン）を
この目的に用いた。
アガロースは水で膨潤させた小さな粒子形態（４０〜１
９０μｍ）で用いた。
粒状体は４重量％のアガロースを含有した。
粒状体は先づ水で洗浄した。
粒状体１００ｒＩＬｌに５０ｍの水を加え、これに水５
０ｄ中にＣＮＢｒ １０ ｇを含んだ溶液を２０℃にお
いてかきまぜながら加えて混合し、５規定のＮａＯＨを
加えてｐＨ１０〜１１に保った。
１０分後に粒状体を氷水で十分洗浄し次いで水中の０，
２Ｍの炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ９，０，温度４℃）を用いて洗浄した。
臭化シアンで活性化した粒状体を人のＩｇＧ（カビ（Ｋ
ａｂｉ ）ＡＢストックホルム、スエーデンから得たも
の）３ｇを含有するｐＨ９，０の上記緩衝液１２０ｍ１
を用いて４℃においてかきまぜながらスラリ化した。
４時間後、粒状体をｐ別しｐＨ９，０の上記緩衝液で洗
浄し、次いで粒状体を０．０５Ｍ２−アミノ−エタノー
ルと０．２Ｍ炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウムを含
有する水溶液（ｐＨ９，０） １．５１中に懸濁し、４
℃において１８時間かきまぜを行った。
次いで、粒状体を４Ｍ尿素を含有する水中の０．１ Ｍ
ＩＪン酸ナトＩＪウム緩衝液（ｐＨ６，０）を用いて
水中の０．１ Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０
）を用いて洗浄液の０Ｄ２８０ナノメータ（ｎｍ）が０
．０１以下になるまで洗浄した。
次いで、ゲル状物を水中の０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ緩
衝液（ｐＨ３，０）で洗浄し、次に上記０．１ Ｍリン
酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）を用いて再度洗浄し
た。
このようにして得た生成物は粒状体１ｍｌ当り約３０ｒ
ｖの結合ＩｇＧを含有した。
Ｃ，Ｓ、オウレアスの粗抽出物からのタンパク質Ａの分
離 上記Ｂ項からのｐＨ７，０のＩｇＯを結合した粒状体の
塊１００Ｗｌｌをクロマトグラフィーカラムに充填した
。
上記Ａからのタンパク質Ａを含有するｐＨ７，０の粗抽
出物５００ｒＩＬｌを２０℃において粒状体を充填した
塔に通した。
その時の流速を毎時５０ｄに調整した。
次に、カラム中の粒状体をｐＨ７，０の水中の０．１
Ｍ リン酸ナトリウム緩衝液を用いて洗浄液のＯＤ ２
８０ ｎｍが０．０２以下になるまで注意して洗浄した
。
このようにして得た生成物は、粒状体の塊ＩＭ当り約３
■の結合タンパク質Ａを含有した。
Ｄ１粒状体からのタンパク質Ａの分離 上記Ｃからの粒状体に結合したタンパク質Ａを水中の０
．１Ｍグリシン−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ３，０）１００Ｉ
ＩＬｌを用いた酸性側のｐＨにする塔を溶離することに
よって粒状体から分離した。
グリシン−ＨＣｌ緩衝液を含有する集められたタンパク
質Ａを蒸留水に対して透析し、その後、タンパク質Ａを
凍結乾燥によって固体の形で得た。
約２５０■のタンパク質Ａを純粋の形で得た（別法とし
て、透析の代りにゲルろ過によって脱塩を行なうことが
できる）。
タンパク質Ａが不純物の含まれていないことが免疫学試
験などによって確認された。
得られたタンパク質Ａは１個または２個以上の螢光性基
（例えば、フルオレセインインチオシアナートの助けに
よって）または酵素（下記参照）で標識付けするために
用いることができる。
例２ 標識付けの目的でＳ、オウレアスからのタンパク質Ａの
ポリペプチドフラグメントの調製Ａ、Ｓ、オウレアスか
らのタンパク質Ａのポリペプチドフラグメントの粗抽出
物の調製 Ｓ、オウレアス、菌株コラワン（Ｃｏｗａｎ） Ｉはヨ
ーロツピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミカトリー
第２９巻（１９７２）、５７２頁（スエキスト（Ｓｊｉ
ｕｉｓｔ）ら）に記載されている指針に従って培養した
。
バクテリアを遠心分離で取除きそして水中の０．９％Ｎ
ａＣｌ溶液で洗浄した。
バクテリア１００ｇ（湿潤重量）を普通の生理食塩水１
５０１７２Ａ！に混ぜスラリ化した。
このスラリに１０１１１ｇのトリプシン（キモトリプシ
ンを含まない）を加えた。
ｐＨは７．２であった。
酵素処理は３０℃、ｐＨ７，２において３０分行ない、
その後大豆から得られるトリプシン阻止剤を２０■を加
えた。
次に、懸濁液を遠心分離機にかけ上澄液を回収しそして
ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ）フィルターに通して
それを滅菌した。
滅菌流過された液体は挾雑物の混合物であってポリペプ
チドの性質を有するタンパク質Ａのフラグメントを含有
していた。
ＩｇＧ分子のＦｃ部分に結合するフラグメントを精製す
るために、前記フラグメントはＩｇＧを結合しているア
ガロースの助けによって分離された。
Ｂ、ＩｇＧを結合しているアガロースの調製ＩｇＧと結
合しているアガロースは例１８項と同様に調製した。
得られた生成物は粒状休風の１ｒｆｌｌ当り約３０■の
結合ＩｇＧを含有していた。
Ｃ，Ｓ、オウレアスからのタンパク質Ａのポリペプチド
フラグメントの分離 Ｂ項で得られたｐＨ７，０の粒状休風１００１ｒ１１！
をクロマトグラフィカラムにつめた。
Ａ項で得たタンパク質Ａからのポリペプチドフラグメン
トを含有するｐＨ７，０の粗抽出物１００ｒＬｌを２０
℃において、粒状体の入ったカラムに毎時５０ＷＬｌの
割合の流速でゆっくり通した。
次いで、カラム中の粒状体を水中の０．１ Ｍ ＩＪン
酸ナナトリウム緩衝液ｐＨ７，０）を用いて洗浄液のＯ
Ｄ２８０ｎｍが０．０２以下になるまで十分に洗浄した
。
このようにして得た生成物は粒状体塊１ｒｆＬｌ当り約
１■の結合ポリペプチドを含有した。
Ｄ００粒状からのタンパク質Ａのポリペプチドフラグメ
ントの分離 上記Ｃ項によって得た粒状体に結合しているポリペプチ
ドを水中の０．１ Ｍグリシン−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ３
，０）１００ｍＪを用い酸性側（７）ｐＨにするカラム
を溶離することによって粒状体から分離した。
ＩｇＧＪＡ−子のＦｃ部分を結合することのできるグリ
シン−ＨＣｌ緩衝液含有スラリー化ポリペプチドを、セ
ファデックスＧ２５■（エピクロルヒドリンで架橋され
たデキストランの粒子）を用いて、ゲル流過によって脱
塩させた。
分子量が約７０００のポリペプチド約１００■を凍結乾
燥によって単離した。
ポリペプチドフラクションは数種類の極めて似かよった
ポリペプチドを含んでおりそしてそのすべてがＩｇＧ分
子のＦｃ部分を結合できることがクロマトグラフイによ
って判った。
とりわけ、ポリペプチドフラクションは挾雑物を含んで
いないことが免疫試験によって判明した。
ＩｇＧ分子のＦｃ部分を結合することのできるポリペプ
チドフラグメントはスエーデン特許出願１４３２９／７
２に従ってまずタンパク質Ａを単離し次いでタンパク質
Ａを溶液中において処理して（例えば、上述に類似した
ようなｐＨ８，２でトリプシンを用いる処理を行なう）
単離することができ、その後関連する性質を有するポリ
ペプチドフラグメントは上記具体例と同じようにＩｇＧ
を結合しているアガロースに結合させ次にポリペプチド
フラグメントを分離することによって分離した。
ポリペプチド生成物は標識付けの目的のために用いるこ
とができる。
例３ 螢光性基による標識付は 得られたポリペプチド生成物（例１または例２によるも
の）は、螢光性基で標識付けできる。
得られたポリペプチド生成物（例２によるもの）および
タンパク質Ａ（例１によるもの）はプルオレセインイン
チオシアナートを用い慣用の方法で標識付けできる。
フルオレセインインチオシアナートで標識化された生成
物は、■ｇＧクラスに属する免疫グロブリン（またはそ
のＦｃフラグメント）を標識付けするために有利に用い
ることができる。
このものは免疫グロブリンのＦａｂ部分に結合している
または結合しようとしている免疫グロブリン（またはそ
のＦｃフラグメント）または抗原またはハプテンを定性
的または定量的に検出するのに用いることができる。
フルオレセインインチオシアネートによる標識付けは、
例えば次のようにして行なわれた。
０．４５％ＮａＣｌを含有する、０．２５Ｍ炭酸ナトリ
ウム−炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，０）１ｍ中
に溶解された１０■のポリペプチド生成物に、１■のフ
ルオレセインインチオシアナートを混ぜた後、混合物を
数時間振とうしそして４℃において１２″時間放置する
。
次に、混合物を遠心分離にかけそして未反応のフルオレ
セインインチオシアナートからの標識ポリペプチドで溶
液を精製するために、混合物を０．９％Ｎａ（Ｊ’水溶
液で膨潤させたエピクロルヒドリンで架橋されているデ
キストラン（セファデックスＧ２５＠）を含むゲル粒子
で満たされたカラム中でゲル流過されそして同じ溶液で
溶離される。
標識ポリペプチドを含む溶離フラクションを回収しそし
てｐＨを７，０に調整する。
溶液を凍結状態で保存する。
生成物を凍結乾燥することができる。
生成物は紫外線で螢光を示す。また、標識付けは、例え
ばテトラメチルローダミンインチオシアナートを用いて
同じように行なうことができる。
標識ポリペプチドはＩｇＧ分子の１０部分に結合するこ
とができる。
このことは、例えば細胞上にあるＩｇＧｔ−標識化し検
出される下記の試験で証明された。
ＩｇＧを付着しているリムフオイド（Ｌｙｍｐｈｏｉｄ
）細胞（セラフイナ（Ｓ ｅ ｒａｐｈｉｎａ ）細
胞）はｐＨ７，２のリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ緩衝液と称
す）の１ｒＩＬｌ当り５Ｘ１０６個の細胞を含んでいる
濃度における試験に用いられた。
細胞の懸濁液５０ ｐＨに、ＰＢＳ緩衝液のフルオルセ
イン標識化タンパク質Ａ溶液（１ｒＩＬｌ中に０．６■
の標識タンパク質Ａを含む）５０μｌを加えた。
１時間後、細胞を４℃で冷ＰＢＳ緩衝液（４℃）により
３回洗浄した。
その後、これらの細胞を紫外線顕微鏡で観察することに
より、フルオレセインイソチオシアナートで標識化され
たタンパク質Ａが細胞上のＩｇＧに結合していることが
判明した（細胞表面にＩｇＧが付着していない細胞につ
いて同様な試験を行いまたはトリプリン処理によってＩ
ｇＧを除去した場合または標識化していないタンパク質
ＡでＩｇＧのＦｃ部分をブロックしておいた場合には、
細胞表面からはなんら螢光は得られなかった）。
例４ ペルオキシダーゼで標識化したタンパク質Ａペルオキシ
ダーゼは下記の方法により例１のＳ・オウレアスからの
タンパク質Ａに結合した。
１５■のペルオキシダーゼ（西洋ワサビから得たもの、
シグマ社製）を０．１ Ｍ ＩＪン酸ナナトリウム水溶
液 ｐＨ６，８）中の１．２５％グルタルアルデヒド溶
液０．２ｒ１１！！に溶解した。
溶液を２０℃において１８時間放置した。
次に、この溶液をエピクロルヒドリン架橋のデキストラ
ン（セファデックスＧ−２５＠フアルマシア・ファイン
・ケミカルＡＢ・ウプサラ、スエーデン）の膨潤粒子と
０．１Ｍリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ６，８）とを充
填したカラム（長さ５０ＣＩＩ１１直径１ ｃｒｒｔ
）に通した。
同じリン酸塩緩衝液はカラムの溶液に用いられた。
空隙で溶離された着色フラクションはゲルクロマトグラ
フィの間で回収された。
集められた着色フラクションは限外流過（ＰＭ−１０メ
ンブレン、分子量約１０．０００以上のものは通過しな
い）により１ｒＩＬｌまで濃縮した。
上記リン酸塩緩衝液ｌ就中に溶解された５■のタンパク
質Ａをペルオキシダーゼのゲルタールアルデヒドで活性
化された溶液（ＩＭ）に加えた。
次に、０．２１Ｌｌの１Ｍ炭酸ナトリウム−炭酸水素ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ９，５）を加えた。
混合物を４℃で２４時間放置した。
次に、０．２ｒｆＬｌの０．２ Ｍ ＩＪジン水溶液を
加えた。
リジンの水溶液のｐＨは５ Ｍ ＮａＯＨ水溶液であら
かじめ７．０に調整しておく。
リジン水溶液を添加した後、混合物を２０℃において２
時間放置した。
この溶液を膨潤したＩｇＧアガロース粒子と０．１ Ｍ
リン酸ナトリウム溶液（ｐＨ６，８）を充填したカラム
（長さ１０ｃＩｒＬ１直径１ ｃｒｎ ）に通した（Ｉ
ｇＧアガロースは例１と同様にして調製した）。
ペルオキシダーゼを結合したタンパク質Ａはアガロース
粒子上でＩｇＧに付着した。
０．１Ｍリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ６，８）をカラ
ムに通して結合していない物質を洗い流した。
次に、カラムをｐＨ３，０の０．１Ｍグリシン−ＨＣ１
緩衝液（水中の）で溶離した。
着色フラクションを回収して一緒にした。
溶液を５Ｍ ＮａＯＨ水溶液で中和した。
次いで、溶液を限外流過（ＵＭ−２メンブレン、分子量
２０００以上の分子は通過しない）によって１ｒｆＬｌ
に濃縮した。
溶液をｐＨ７，２の緩衝液に対して１２時間透析した（
この緩衝液は水中に溶液１１当り８ｇのＮａＣ１１１０
，２＆のＫＣｌ、 １．１ｓｇのＮａ２ＨＰＯ４および
０．２．９のＫＨ２ＰＯ４を溶解して調製したものであ
る）。
ペルオキシダーゼで標識化したタンパク質Ａの溶液をミ
リポアフィルタ−（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ｆｉｌｔｅｒ
）に通して滅菌することができる。
溶液は４℃で好適に保存される。
ペルオキシダーゼを結合したタンパク質Ａは本発明の方
法に用いられ、ペルオキシダーゼ活性は慣用の方法によ
って測定された。
ペルオキシダーゼを結合した上記のタンパク質Ａが細胞
表面にあるＩｇＧに結合したことは、ペルオキシダーゼ
の存在を検出することにより、上記例３と同様にして判
明した。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ 遊離の形または結合した形の、■ｇＧクラスに属す
    る免疫グロブリンまたはそのＦｃフラグメントを１個ま
    たは２個以上の分析上検出しうる基で標識付けするため
    の補助剤であって、前記補助剤が分析上検出しうる基で
    標識化されたポリペプチドからなるかまたはそれを含有
    するものであり、さらにポリペプチドはスタフィロコッ
    カス・オウレアスからのタンパク質Ａまたはそのタンパ
    ク質のポリペプチド性質のフラグメントであり且つ免疫
    グロブリンのＦｃ部分に結合しうるものでありしかも前
    記タンパク質Ａまたはそのフラグメントが分析上検出し
    うる基としての１個または２個以上の螢光性または酵素
    的活性を有する基で標識化されていることを特徴とする
    補助剤。
JP49111332A 1973-06-28 1974-09-28 標識用補助剤 Expired JPS5840143B2 (ja)

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SE7402350 1974-02-22
SE7402350A SE7402350L (sv) 1974-02-22 1974-02-22 Forfarande for merkning av immunglobulin eller dess fc-fragment jemte hjelpmedel for anvendning vid forfarandet.

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