JPS5842202B2 - ジビニルエ−テル − ムスイマレインサンカンシキキヨウジユウゴウタイソセイブツ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はジビニルエーテルと無水マレイン酸の環式共重
合体及びそれらの製造に関する。

ジビニルエーテルと無水マレイン酸との共重合体は従来
からよく知られており、ある種の悪性腫瘍の増殖の遅延
（米国特許第３，２２４，９４３号明細書参照）及び口
締疫病ビールスの処置（米国特許第３，６２４，２１８
号明細書参照）に用いるものとして記載されている。

先行技術として知られた共重合体はある種の腫瘍及びビ
ールスの治療に有効である一方、ある種の望ましからぬ
副作用があるため治療薬として市販されるに到っていな
い。

本発明の目的の一つ目腫瘍抑制及び抗ビールス活性につ
いて有用な性質を有すると同時に、ある種の副作用、す
なわち急性毒性、エンドトキシンに対する過敏化、貧血
の発現及び代謝抑制の水準が低下した、ジビニルエーテ
ルと無水マレイン酸との改良された固体環式共重合体の
提供にある。

本発明により、ある範囲の分子量を有しかつｌ：２の比
のジビニルエーテル及び無水マレイン酸から導かれた単
位を含有する組成物をなし、約５．０００〜３０，００
０の数平均分子量及び１．０〜３．０の窯÷比を有する
ことを特徴とするジビニルエーテルと無水マレイン酸と
の固体環式共重合体が提供される。

更に本発明自、ある範囲の分子量を有し、ｌ：２の比の
ジビニルエーテルと無水マレイン酸から導かれた単位を
含有する組成物の形において、ジビニルエーテルと無水
マレイン酸との固体環式共重合体を製造するにあたり、
該共重合体を選択的に処理して低分子量共重合体と高分
子量共重合体とを区別させ、それによって該共重合体分
子中の単位の数を選択し、そして該選択を５，０００〜
３０．０００の数平均分子量及び１．０〜３．０の窯士
比を有する生成物が得られるように行なうことを特徴と
する前記固体環状共重合体の製造方法にも及ぶものであ
る。

すなわち本発明は狭い範囲の分子量及び狭い範囲の分子
量分布を有する物質を選択することにより、これら特定
の共重合体の性質が著しく高められるという発見に存す
る。

前述の特許を含めた先行技術において述べられる共重合
体（ま全て固有的に、極めて低分子量の液体又（１半固
体共重合体乃至極めて高分子量の固体共重合体にわたる
広い分子量分布を有する混合物である。

これら広い範囲の混合物は、その分子量が、低く（１数
千乃至高くＣ１数十万に及ぶ個々の共重合体を含有する
こともＭｗ ある。

そのＭｎ比Ｃ″ｉ、７又はそれ以上の高比である。

本発明の共重合体（Ｊ１エールリッヒ固形腫瘍及び斜め
筋炎ビールスの治療においては、同等もしくζま一層優
れた作用を示すと共に急性毒性、内毒素に対する過敏化
、貧血の発現、血清グルタミンピルベートトランスアミ
ナーゼレベル、及びアミノピレン代謝の抑制に全て低下
する。

前述の劇的変化の外に、本発明の均一な共重合体の場合
ζま、全体重減少、及び臓器腫（％に肝臓、肺及び肝臓
に関して）の度合が小さく、また食作用の抑制の度合も
低下する。

好ましく（１、数平均分子量１１ＪＩＯ，０００〜ｗ ２５．０００である。

好ましく（ｉ、■Ｔ比は、１．５〜２．５である。

好まし引１、平均分子量が高くなるほどその分布はより
狭くするのがよい。

本発明の共重合体ζま加水分解後、水に可溶である。

本明細書にいう数平均分子量は、溶媒としてテトラヒド
ロフランを用いかつ脱アセチル化アセチルセルロース膜
を用いる高速膜浸透圧計にて膜浸透圧法を３０℃にて行
なうことにより測定されるＪ前記ト比は分子量分布の尺
度と認められるがここでＭｗは重量平均分子量、Ｍｎは
数平均分子量であり、共にその重合体のメチルエステル
誘導体について実施されるゲル透過クロマトグラフィー
により測定される志木明細書に記載されているこの比の
測定にあたっては、そのメチルエステル試料をテトラヒ
ドロフランに溶解し、ｌＯμのフィルターを通して、種
々の孔径をもつ四つのスチロゲル（ｓｔｙｒｏｇｅｌ
）カラムの層を備えたゲル透過クロマトグラフ中に注入
した。

操作手順及び計算はＪ 、Ｃｈｅｍ −Ｂｄ 、±３．
Ａ３７６゜Ａ６２５（１９６６）に記載された通りであ
る。

Ｍｗ この「比については、ビルマイヤー著テクトスブツクオ
ブポリマーサイエンスの７ページ（１９６６年インター
サイエンスパプリツシャー社発行）を参照されたい。

先行技術によりジビニルエーテル−無水７ Ｌ／イン酸
共重合体が、ジビニルエーテルと無水マレイン酸とを芳
香族希釈剤巾約１：２のモル比で、遊離基開始剤〔例え
ば過酸化ベンゾイル、アゾビス（インブチロニ） ＩＪ
ル）など〕を用いて共重合させることにより製造できる
（重合体（１その形成と共に溶媒から析出する）ことが
知られる。

これらの共重合体は環式であるとされ、次のように図示
することができる。

実際上はこれら従来方法による共重合体（ま常に極めて
低い分子量から極めて高い分子量にわたる個々の共重合
体分子の広範な混合物である。

従来のジビニルエーテルと無水マレイン酸の共重合方法
ではいかなる場合も、狭い分子量範囲内で狭い分子量分
布を有する均一な共重合体を得ることは不可能である。

本発明の均一共重合体は前記の環状構造を有するもので
あるが、その特定の分子量および狭い分子量を得るには
ジビニルエーテルと無水マレイン酸とをｌ：少くとも２
のモル比で溶液重合させそして次いで分別による選択を
行なう。

分別による選択にはいくつかの方法があるが、例えば得
られた共重合生成物を例えばサンドカラム分別、ゲル透
過クロマトグラフィー、限外流過、分別結晶、溶媒洗浄
などによって分別することができ、あるいはその共重合
体を熱またＣ１薬品により分解することもできる。

ジビニルエーテルと無水マレイン酸トのｌ：少くとも２
のモル比での溶液重合は当業者には既知の重合体用溶媒
を使用して常法により達成できる。

以下の実施例は本発明の共重合体を説明するためのもの
である。

実施例 １ 本実施例で（１、ジビニルエーテルと無水マレイン酸を
、先行技術に示された方法で共重合させ次いでサンドカ
ラム分別によりフラクションに分別する。

重合反応容器にｌ００３部の無水マレイン酸、２００部
の乾燥ベンゼン及び７４５部の四塩化炭素を仕込む。

前記無水マレイン酸の溶解後、その溶液を窒素でスパー
ジし、６０部ベンゼン中の３．７部の用時蒸留したジビ
ニルエーテルを添加する。

その反応溶液を８０℃に加熱し、そしてベンゼン５．６
部に過酸化ベンゾイル０．０７３部を溶解した溶液を攪
拌下に添加する。

その反応系を８０〜９０’Ｃの温度に４時間維持し、次
に得られるスラリーを２５〜３０℃に冷却し、その膨潤
した共重合体を除去する。

その生成物を７．５部のベンゼンと１０部のヘキサンと
の混合液で繰返し抽出し、流過し、真空乾燥する。

その得られる生成物自、約３５，６００数平均分子量及
び７．６４の善ｆ比を有スる環式、ジビニルエーテル−
無水マレイン酸共重合体の広範な混合物である。

前記の共重合体は、「ポリマーフラクショネーションＪ
Ｍ、Ｊ 、Ｒ，カンドウ編、第８２章、６７〜９３頁
にューヨーク在アカデミツクプレス社、１９６７年発行
）に記載の一般的手順に従ってサンドカラムで分別する
。

４６０部のメチルエチルケトン及び１０５部のメチルイ
ソブチルケトンの混合物に２８．７部の上記共重合体混
合物を溶解する。

得られる溶液を室温にてジャケット付サンドカラムに江
別し、その共重合体溶液がカラム上を進行する間に、更
に６０部のメチルエチルケトン−メチルイソブチルケト
ン混合溶媒を添加する。

次にそのカラムを６９℃に加熱し、この温度に１時間放
置する。

次に熱ベンゼンを、カラム中を流過させてメチルエチル
ケトン−メチルイソブチルケトン混合溶媒を除く。

そのカラムを室温にまで放冷し、次いでテトラヒドロフ
ラン−〇−ヘキサン混合溶媒を用いて共重合体を分別す
る。

その工程を通してｎ−ヘキサンに対するテトラヒドロフ
ランの割合を、変化させる。

すなわちテトラヒドロフラン７０条、ｎ−へキサン３０
％をもって開始し、その分別中スツトテトラヒドロフラ
ンの割合を高めていき、該分別の終点では純粋なテトラ
ヒドロフランが使用されているようにする。

各々約２リツトルに達する８フラクシヨンを得る。

各フラクションを一部蒸発し、共重合体を乾燥ベンゼン
の添加によって析出させる。

数平均分子量及びフラクションの暑士比を次に表記する
。

実施例 ２ 本実施例では実施例１からのフラクションの試料及び不
均一のもとの共重合体の試料を試験して腫瘍抑制率を測
定した。

各試験において、■Ｏ匹の雄、白色スイスマウスにｐ
Ｈ７，２に調節した等張生理食塩水の共重合体（濃度２
．５ ｍ９／ｒｒｔｌ’）を静脈注射する。

２４時間後２回目の注射を施す。

各注射液は、２５ｍｇ／ｋｙ体重を含有する。

前記第２回目の共重合体注射後約４８時間して、各マウ
スに生理食塩水中の１０７個のエールリッヒ腺癌固形腫
瘍細胞を皮下注射する。

その腫瘍を１０日後に取出し秤量する。腫瘍抑制率Ｃ１
共重合体処理マウスから取出した腫瘍の平均重量を、共
重合体処理を除いては全く同様に処理された１０匹の対
照用マウス群から取出した腫瘍の平均重量と比較するこ
とにより測定する。

上記より、すべてのフラクション及びもとの共重合体が
腫瘍抑制において活性を示すことがわかる。

実施例 ３ 本実施例でＧ１．実施例１からのフラクションの試料及
びもとの共重合体の試料の抗ビールス活性を試験する。

各試験において、１０匹の雄、白色スイスマウスに、実
施例２に記載したものと同様の等張生理食塩水中の共重
合体を１回静脈内注射する。

２４時間後、各マウスを、斜め筋炎ビールスのＬＤ５゜
の約５０倍の静脈内注射に挑ませる。

該ビールスによる挑戦後１３日日日死亡率を測定する。

以下その結果を表記する。

上記表から、全てのフラクション及びもとの共重合体が
抗ビールス活性を示すことがわかる。

実施例 ４ 本実施例は、実施例１からのフラクション及びもとの共
重合体の試料の全体重及び種々の体内臓器の重量に対す
る作用を例示する。

全体重についての試験においてＧマ、各１０匹の雄、白
色スイスマウスの群を各試験に用い対照にｌ′ｉ１０匹
のマウスを用いる。

肝腫（肝臓拡大）、牌腫（肝臓拡大）、肺重量及び胸腺
重量についての試験においては１０匹の雄、白色、スイ
スマウスを用い各対照には１０匹のマウスを用いる。

共重合体は実施例２に記載した如く２５■共重合体／１
ｋｇ体重を１回静脈内注射により投与する。

全体重の試験では、共重合体処理後１週間して各群の平
均重量を、処理剤の各群の平均重量と比較する。

肝腫及び牌腫、肺臓重量及び胸腺重量についての試験に
おいては各群の器官の平均重量を各群の平均全重量と比
較することによって測定する。

その結果を以下表記する。

上記の表から分子量の高い方の共重合体及びもとの共重
合体が全体重及び胸腺重量の著しい低下を惹起しかつ肝
臓、肝臓及び肺臓の重量の著しい増加を惹起することが
わかる。

これに対し本発明の共重合体は全体重又（１臓器重量の
変化をほとんど惹起しない。

実施例 ５ 本実施例では実施例１からのフラクションの試料及びも
との共重合体の試料について急性毒性を試験する。

静脈注射によるＬＤ、。

を決めるための標準試験を、白色雄スイスマウスに対し
て行なう。

「Ｌ Ｉ）！ｔｏ Ｊなる用語は供試動物の５０％に対
する致死量を意味する。

体重１ｋｇあたりの共重合体の■数で表わした結果を以
下表記する。

前記の表から、分子量の高い方の共重合体及びもとの共
重合体か本発明の共重合体より毒性が高いことがわかる
。

実施例 ６ 本実施例では実施例１からのフラクション及びもとの共
重合体の試料について貧血誘因性を試験する。

各試験において５匹の雄、白色、スイスマウスに実施例
２に記載したのと全く同じの生理食塩水中の共重合体を
１回静脈注射する（２５■／ｋｇ体重）。

対照群の２５匹の雄、白色、スイスマウスを、前記共重
合体注射液に代えて生理食塩水を用いる他は全く同様に
処理する。

１週間後、血液試料を採取し、血液１００ｍ１あたりの
ヘモグロビンのグラム数を測定する。

ヘモグロビンのグラム優として表わした結果を以下の表
に記す。

上記の表から、本発明の共重合体の分子量を越える分子
量を有する共重合体は前記もとの共重合体も含め全てヘ
モグロビンレベルを著シ＜減少すせることがわかる。

実施例 ７ 本実施例では実施例１からのフラクション及びもとの共
重合体の試料の肝機能に対する作用を示す。

二つの試験を行なう。

第一の試験は、共重合体の静脈注射（共重合体２５■／
体重１ ｋｇ）後２４時間における血清中グルタミンビ
ルベートトランスアミナーセ゛レベルを測定するための
ものである。

各群には５匹の白色、雄、スイスマウスを用い対照には
８匹用いる。

その測定ζ１、シグマテクニカルブレティン／１６．５
０５（１９７１年３月改訂）（ミズーリ州セントルイス
在シグマケミカル社発行）に記載の比色試験である。

シグマ−フランケル単位（シグマテクニカルプレティン
に記載された）で表わした結果を後記の表に掲載する。

約１００又はそれ以上への単位数の増加は肝臓の壊死を
示唆する。

第二の試験は共重合体の静脈注射（共重合体２５■／体
重１ ｋｙ ’）後２４時間における肝ミクロソーム酵
素活性を測定するためのものである。

各群には、５匹の白色、雄、スイスマウスを用い、対照
には５匹用いる。

共重合体を注射後２４時間して肝臓を取出し重力の９，
０００倍にて遠心分離し、その上澄液を集める。

その上澄液はアミノピレンをホルムアルデヒドに変える
能力を有する酵素を含有する。

その酵素の抑制は肝臓損傷を示唆する。

アミノピレン代謝の抑！１律として結果を示す。

上記の表から本発明のレベルを越えた分子量を有する共
重合体０１全て肝臓に対し悪影響を及ぼすことがわかる
。

実施例 ８ 本実施例では、実施例１からのフラクション及び不均一
なもとの共重合体がエンドトキシンに対する過敏化誘発
に及ぼす作用を示す。

２５匹又はそれ以上の雄、白色、スイスマウスの群に、
共重合体を１回静脈注射しく共重合体２５■／体重１ｋ
ｇ）、２４時間後、各５匹のマウスから戊る細分群に種
々の濃度の腸チフス菌エンドトキシンを挑戦させＬｌ）
、ｏ（５０％致死量）を決める。

エンドトキシンに対して生ずる過敏化を、腸チフス菌エ
ンドトキシン■／体重１ｋｙとしてのＬＤ、。

とじて次に表記する。上記の表から３０，０００より高
い分子量を有する共重合体の場合にはエンドトキシンに
対する過敏化が（ＬＤ５０の低下により示されるように
）著しく増大することがわかる。

実施例 ９ 本実施例では共重合体試料の分子量及び分子量分布が種
々の生物学的活性に及ぼす作用を示す。

ｗ 次に示す分子量及びＭＴ比を有する８種の共重合体試料
について試験する。

共重合体試料 これら試料０１次のようにして製造する。

共重合体試料 Ａ 直接溶液重合 Ｂ 米国特許第３，２２４，９４３号明細書に記載の一
般的手順を用いた直接共重合 Ｃ直接溶液重合８１ Ｄ サンドカラム分別８２ Ｅ 米国特許第３，２２４，９４３号明細書に記載の一
般的手順による直接共重合 Ｆ サンドカラム分別 Ｇ 米国特許第３，２２４，９４３号明細書に記載の一
般的手順による直接共重合 ※ｌ 重合反応容器に１４．８部の無水マレイン酸及び
１６０部のテトラヒドロフランを仕込む。

その溶液を窒素でスパージし、１７．７部のテトラヒド
ロフラン中の５．３部のジビニルエーテルを添加する。

反応溶液を１５°Ｃに冷却し、窒素で覆い、太陽灯（Ｕ
、Ｖ、及び可視光の両方）で９０分照射する一方、温度
を１５〜２０℃に保つ。

その９０分の経時に、１３２部のｎ−ヘキサンをその溶
液に添加して共重合体を析出させる。

その共重合体を遠心分離及び傾瀉することにより分取し
、ベンゼンとｎ−ヘキサンの３．３：１混合物で繰返し
洗浄し、濾過し、窒素流下に乾燥する。

※２ 実施例１に記載した通りである。

各試料について、抗腫瘍活性、抗ビールス活性、急性毒
性、エンドトキシンに対する感度、血清フランケル単位
、ヘモグロビンレベル、市原、及び肝腫に対するその作
用を測定するために前記諸実施例に記載の手順に従って
試験する。

その他日血球数を測定する。

この試験では、各群にマウス５匹を用い、対照に（１２
５匹用いる。

共重合体を１回静脈注射してから１週間後血液試料を採
取し１立法ミリメートルあたりの白血球数を測定する。

その結果を次に表記する。

実施例 １０ 重合容器に３２１．４部の無水マレイン酸、１．５８２
部のアセトンおよび１，３３２部のテトラヒドロフラン
を仕込む。

溶液を窒素でスパージし、そして７９．１部のアセトン
中の１１４．２部のジビニルエーテルを加え、７９．１
部のアセトンですすぐ。

窒素でガスシールした反応溶液を４５℃まで加熱する。

３９．６部のアセトン中の８．０４部のアゾビス（イン
ブチロニトリル）の溶液を加えそして７．９１部のアセ
トンですすぐ。

反応混合物を攪拌しながら４５℃に６．５時間維持する
。

この時間の終りに、２，７０２部のヘキサンを加えて共
重合体を沈殿させる。

共重合体を濾過により分離し、１．２部のアセトンと１
部のヘキサンとからなる洗浄溶媒で繰返し洗浄しそして
最初ｃ１窒素の流れの下で室温で次に５０℃で真空下で
乾燥する。

生成物（変換率６９．７％）は５，８００の数平均分子
量と１．８のＭｗ／Ｍｎを有する。

実施例 １１ 重合容器に３２０部の無水マレイン酸、２，００９部の
アセトンおよび８７０部のテトラヒドロフランを仕込む
。

溶液を窒素でスパージしそして７９．１部のアセトン中
の１１４．８部のジビニルエーテルを加えそして７９．
１部のアセトンですすぐ。

反応溶液を窒素でガスシールして４５℃まで加熱する。

２７．７部のアセトン中の８．０４部のアゾビス（イン
ブチロニトリル）の溶液を加え、３．９６部のアセトン
ですすぐ。

反応混合物を攪拌しながら４５℃に８時間維持する。

この時間の終りに２，７０２部のへキサンを加えて共重
合体を沈殿させる。

共重合体を沢過により分離し、１．２部のアセトンと１
部のヘキサンとからなる洗浄溶媒で繰返み洗浄しそして
実施例１におけるようにして乾燥する。

生成物（変換率６７％）は７．８００の数平均分子量と
１．９のＭｗ／Ｍｎを有する。

実施例 １２ 重合容器に３２１．２部の無水マレイン酸、２．４０９
部のアセトンおよび４．０４部のテトラヒドロフランを
仕込む。

溶液を窒素でスパージしそして７９．１部のアセトン中
の１１４．１部のジビニルエーテルを加えそして７９．
１部のアセトンですすぐ。

反応溶液を窒素でガスシールして４５℃まで加熱する。

３９．６部のアセトン中の８．０４部のアゾビス（イソ
ブチロニトリル）の溶液を加え、７．９１部のアセトン
ですすぐ。

反応混合物を攪拌しながら４５℃に７時間維持する。

この時間の終りに、２，７０２部のヘキサンを加えて共
重合体を沈殿させる。

共重合体を濾過により分離し、２．４部の第３アルコー
ルと１部のへキサンとからなる洗浄溶媒で繰返し洗浄し
そして実施例１におけるようにして乾燥する。

生成物（変換率７３％）は１２，６００の数平均分子量
と２，９のＭｗ／Ｍｎを有する。

実施例 １３ 重合容器に８．１部の無水マレイン酸、４９部のアセト
ンおよび７．ｌ゛部のテトラヒドロフランを仕込む。

溶液を窒素でスパージしそして３．９６部のアセトン中
の２．９部のジビニルエーテルを加えそして３．９６部
のアセトンですすぐ。

反応混合物を窒素でガスシールして５℃まで冷却し、攪
拌しそして紫外光を３時間照射する。

この時間の終りに、５３部のへキサンを加えて共重合体
を沈殿させる。

共重合体を遠心沢過により分離し、３．３部のベンゼン
と１部のへキサンとからなる洗浄溶媒で繰返し洗浄しそ
して実施例１におけるようにして乾燥する。

生成物（変換率９０％）？！２５，９００の数平均分子
量と２．９のＭｗ／Ｍｎを有する。

実施例 １４ 重合容器に７．９７部の無水マレイン酸を仕込む。

反応器を窒素で清掃する。

それに７９．１部のアセトン、８部のテトラヒドロフラ
ン、次に４．７５部のアセトン中の２．８５部のジビニ
ルエーテルを加えそして３．９６部のアセトンですすぐ
（溶媒はすべて使用前に窒素でスパージしておく）。

反応溶液を窒素でガスシールして５５℃まで加熱する。

０．７９部のアセトン中の０．１６４部のアゾビス（イ
ンブチロニトリル）の溶液を加える。

反応混合物を攪拌しながら５５℃に４時間維持する。

この時間の終りに、７９．１部のヘキサンを加えて共重
合体を沈殿させる。

共重合体を遠心濾過により分離し、３．５部のトルエン
と１部のヘキサンとからなる洗浄溶液で繰返し洗浄しそ
して実施例１におけるようにして乾燥する。

生成物（変換率４１％）は１７，０００の数平均分子量
と１．８のＭｗ／Ｍｎを有する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ジビニルエーテルと無水マレイン酸とを前者ｌに対
   し後者少くとも２のモル比で溶液重合に付し、そして分
   別による選択を行ない、それにより５．０００〜３０，
   ０００の数平均分子量および１．０ｗ 〜３．０の冨〒比を有するジビニルエーテ／、−ｍ水マ
   レイン酸固体環式共重合体を回収することからなる、腫
   瘍治療効果を示すと共にその際急性毒性が低くしかも副
   作用の少ないジビニルエーテル−無水マレイン酸固体環
   式共重合体の製法。