JPS5844082B2 - ヘパリンの製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、動物体の腸を加工する際に生じる塩蔵液（腸
塩蔵液）からヘパリンを取得する方法に関する。

長い間、ヘパリンが医学では天然産生抗凝固剤として使
われ、この凝固剤は現代医学でも従来と同様に不可欠で
ありかつ常に広い分野で使用される。

この数年、肺臓、肝臓のようなヘパリン含有動物体組織
からかつ最近では殊に豚、牛及び羊の腸粘液（粘膜）か
ら作用物質ヘパリンを絶えず注意深い方法で単離するこ
とを目的とする一連の方法が公知になった（英国特許第
７５４８８５号、西ドイツ国特許第１２２８２４１号明
細書、米国特許第３０５８８３４号、西ドイツ国特許第
１２５３８６８号明細書）。

この種の原料はその易腐敗性性故に、限定された貯蔵性
という欠点を有しており、これは凍結により延長するこ
とはできるが、高い技術的なロスと共に著しいコスト高
をももたらす。

後処理の際に、作業員もその付近の住民も、それによっ
てもたらされる悪臭のために予測し得ない問題に直面す
るのは稀ではない。

西ドイツ国特許第１２５３８６８号明細書には、いくつ
かの通常の方法に代わるヘパリンの取得法が総括的に記
載されている。

それによると、開始段階で動物体組織を熱い塩水溶液と
接触させてヘパリンを細胞から溶出させる。

その際に生じる媒質のヘパリンの割合は著しく低い。

ところで、屠殺場及びソーセージ工場で生じる塩蔵液中
にヘパリンが含まれていることが判明した。

この塩蔵液は、予め腸粘液を除いた動物の腸に、保存及
び脱水するために固体食塩を撒漬けする場合に生じる○ それ故、西ドイツ国特許第１２５３８６８号から見て、
動物体の腸を単に塩蔵する際に生じる塩蔵液が多量のヘ
パリンを含有することは全く特記すべきことである。

また、このヘパリンが化学的に類縁の副生成物を殆んど
完全に含まずに、それ故従来はまだ環境汚染廃棄物とし
て知られていた塩蔵液が、原料の不足によって全く僅少
であったヘパリンに対する新しい原料であるということ
を予測することもできなかった。

不純物が著しく少ないので、粗製ヘパリンの後処理は特
に節約して行なうことができかつそれ故従来の技術水準
で公知のロスの多い単離法（米国特許第３４５１９９６
号及び英国特許第１２２１７８４号参照）を省くことが
できる。

最終的には、市販されているヘパリン製剤においては全
く達成されないヘパリン品質が得られる。

本発明により原料として使用する腸塩蔵液から知られて
いる後処理法により単離した粗製ヘパ１カンは、引続く
精製により２００ＵＳＰ単位／ｍ９をはるかに越えるヘ
パリンが得られるような純度で既に存在する。

一般に、従来市販されていたヘパリン製剤はヘパリン品
質１５０ＵＳＰ単位／■、数例でば１５５ＵＳＰ単位／
■を有する。

その際に、ＵＳＰ単位／■とは、保存羊血漿の小凝塊形
成の阻止を測定するＵ、Ｓ、Ｐ、 分析から明らかに
なる比活性を表わす。

ＩＵＳＰ単位は約１．１国際単位（ＵＪ）に相当する。

市販のヘパリン製剤の活性値は数多く方法改良されたに
もかかわらず極めて不満足なものであるので、例えばＵ
ＳＰはヘパリン製剤（腸粘液から）は少なくとも１４０
ＵＳＰ単位を含有すべきであると規定している。

単に実験室で、Ｌ、Ｗ、 Ｋａｎａｎａｇｈ及びり、Ｂ
、 Ｊ ａｑｕｅｓｌ’：“Ａｒｚｎｅ ｉ ｍ ｉ
ｔ ｔｅ ｌ ｆｏｒ ｓ−ｃｈｕｎｇ（Ｄｒｕｇ Ｒ
ｅ５−）”、２４，１２巻り１９４２頁（１９７４年）
〕がバリウム塩として繰返し結晶化することにより最高
１７５ＵＳＰ単位／■を有するヘパリンを単離すること
に成功した。

本発明で原料として腸塩蔵液を使用することにより、ヘ
パリンを工業的規模で、それが殆んど無色の物質として
存在する純度で単離することに成功した。

これに対し、今日まで他の原料から得られたすべての粗
製ヘパリンは、経費のかかるかつ損失の多い水沫によっ
て初めて脱色しなければならない（米国特許第３１７９
５６６号）。

更に、塩蔵液は貯蔵性で、殆んど無臭の原料であり、こ
れは長時間の貯蔵により品質が損なわれることはない。

それ故、化学的な及び他の保存法を適用する必要がない
。

従って、本発明はヘパリンの原料として塩蔵液を使用す
ることでありかつ公知方法で動物体組織の塩溶液から特
に純粋なヘパリンを単離する方法に関し、これは出発物
質とじて腸塩蔵液を使用することを特徴とする。

更に、本発明方法により腸塩蔵液から得られたヘパリン
が比較的狭い分子量範囲と高い分子量を有することが実
験より明らかとなった。

例１ 塩蔵液６００１に１５００１−攪拌機中室温で攪拌下に
３０分間でメタノール６００１を加えた。

３０分間後攪拌し、その後で混合物を約１時間放置した
。

次に、混濁している上澄みを第２容器中にデカンテーシ
ョン処理しかつ沈澱した塩ケーキを残留させた。

得られた懸濁液を２日間放置した。その後、再びカンチ
ージョンし、上澄みを廃棄しかつ沈澱を遠心分離により
単離した。

真空中で乾燥後、１１ＵＳＰ単位／■を有する生成物１
．６８ｋｇが得られた。

それは約６０％が食塩から成っている。例２ 英国特許第７５４８８５号により、塩蔵液３１を攪拌下
に酢酸でｐＨ３，１〜３．２の酸性にした（約５０ｍ０
ｏ数時間後にデカンテーションしかつ残分を遠心分離し
た。

沈澱を廃棄し、−緒にした溶液をカセイソーダで中和し
た。

同容量のメタノールを攪拌下に徐々に加えた。

４５分後に析出した食塩をデカンテーションした。

この懸濁液を数時間放置し、上澄みをデカンテーション
しかつ残分を遠心分離した。

沈澱物を真空中で乾燥させた。２３ＵＳＰ単位／■の３
．７６ｇが得られた。

例３ 塩蔵液３１を水１４１で稀釈した。

その後、珪藻土５０ｇと水１００ＴＬｌ中のペンゼトニ
ウムクロリ ド （＝Ｈｙａｍｉｎ １ ６
２ ２ 、 Ｒｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ社）７
ｇの溶液を添加した。

数時間後にデカンテーションしかつ残分を吸引済過した
。

水洗浄後、なお湿っている沈澱を西ドイツ国特許第 １２２８２４１号明細書からの方法により１回当り２モ
ル−食塩溶液２００ｍ１で３回抽出した。

−緒にした抽出液をメタノール２容量部で沈澱させた。

単離しかつ乾燥させた沈澱は５６０ｍ９でありかつ活性
１６３ＵＳＰ単位／■を有していた。

例４ 塩蔵液３１を攪拌下に酢酸でｐｉ−１３，１〜３．２に
した。

数時間後にデカンテーションしかつ残分を遠心分離した
。

−緒にした溶液を水で１５．５１に稀釈しかつ珪藻土４
０ｇと水１００ｍ１中のベンゼトニウムクロリド（Ｈｙ
ａｍｉｎ ］、 ６２２ ） ７ ｊｉを加えた。

数時間後に沈澱を例３と同様に単離しかつ更に後処理し
た。

最終的に１０５ＵＳＰ単位／■のもの７９６■が得られ
た。

例５ 塩蔵液３１を水１３１で稀釈した（西ドイツ国特許第１
１５６９３８号明細書参照）。

その後、酢酸（約５０ｍＡりでｐＨ３，２の酸性にした
。

数時間後に、沈澱は沈積し、これを澄明な上澄みのデカ
ンテーション後に遠心分離した。

乾燥後に５．５ＵＳＰ単位／■を有する粗製ヘパリン１
６．６．９が得られた。

例６ 塩蔵液１（ｌを水５０１で稀釈した。

この溶液を済過器により直径２６皿及び長さ３８０ｍｍ
を有するイオン交換体カラムを介してポンプ処理した（
約３１／時間）。

中程度塩基性のＣ１−型の巨大孔アニオン交換樹脂を使
用した（レヴアチット（Ｌｅｗａｔｉｔ ） ＣＡ
９２４９ ）ｏ他のアニオン交換樹脂、例えば西ドイ
ツ国特許第 １２５３８６８号明細書に記載されているＤｏｗｅｘ
１−Ｘ−１を使用することもできる。

引続いて、樹脂をカラムから除去し、０．９モル−食塩
液５００ｍ１を用いて２回洗浄しかつ２モル食塩液４０
０ｍ１を用いて４０℃で攪拌下に５時間で溶離した。

この溶液をメタノール１．５容量部で沈澱させた。

単離しかつ乾燥した沈澱は１．５ｇでありかつ１５２Ｕ
ＳＰ単位／■を有していた。

例７ ４２５０００ＵＳＰ単位もしくは３８．６５ｇに相当す
る例１からの粗製ヘパリンを１回当り２００ｍ１の２モ
ル−食塩液を用いて３回抽出し、その際にその都度６０
’Ｃで１時間攪拌した。

−緒にした抽出液を、溶液が塩素イオン約０．９モル／
ｌを含有するまで水で稀釈した。

クロリド型のアニオン交換体（Ｌｅｗａｔｉｔ ＣＡ
９２４９ ）２００ｍｌを添加しかつ１時間攪拌し
た。

引続いて吸引涙過しかつ０．９モル−食塩液約２ｏｏ１
ｒＬｌで後洗浄した。

次に、イオン交換体を２モル−食塩液と共に５時間４０
℃で攪拌しかつその後で吸引済過しかつ２モル−食塩液
で後洗浄した。

溶離液を洗浄液と一緒にしかつ１．５倍容量のメタノー
ルで沈澱させた。

沈澱を遠心分離し、最初は水／メタ／ −、ＩＬ’（１
＋１．５容量部）約５０ＴＬｌで、次にメタノール約５
０１１Ｌｌで後洗浄しかつ乾燥させた。

２０２ＵＳＰ単位／■を有するＮａ−ヘパリネート１．
９１ｇが得られた。

例８ 例７で得られた約２００ＵＳＰ単位／■を有するナトリ
ウムヘパリネート１５ｇを２モル−食塩液２００ｍ１中
に溶解した。

溶液を吸引漏斗を介して吸引しかつ残渣を初めに２モル
−食塩液３０１ｒＬｌで、その後で完全脱塩水的２５０
１ｎｌで洗った。

合した溶液を完全脱塩水でクロリドモル規定０．９にし
た。

例７と同様に、レヴアチツ１−ＣＡ９２４９１１による
精製を繰返した。

合した溶離−及び洗浄溶液を前記と同様に更に処理した
。

沈澱の洗浄及び乾燥後にナトリウムヘパリネ−１−１１
，１ｇが得られ、これは活性２５４ＵＳＰ単位／■を有
していた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 特に純粋なヘパリンを、公知方法で動物体組織の塩
   溶液から単離するに当り、出発物質として腸塩蔵液を使
   用するヘパリンの製法。