JPS5928865B2 - 安定化された血小板因子4免疫分析標準液 - Google Patents
安定化された血小板因子4免疫分析標準液Info
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- JPS5928865B2 JPS5928865B2 JP54077589A JP7758979A JPS5928865B2 JP S5928865 B2 JPS5928865 B2 JP S5928865B2 JP 54077589 A JP54077589 A JP 54077589A JP 7758979 A JP7758979 A JP 7758979A JP S5928865 B2 JPS5928865 B2 JP S5928865B2
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定化された血小板因子4免疫分析標準液に関
する。
する。
血小板因子4(PF4)は細胞が放出反応をうけた時血
小板のα一粒子から分離される小分子量蛋白質である。
小板のα一粒子から分離される小分子量蛋白質である。
この現象は血小板が内皮下組織およびトロンビン、AD
Pおよびエピネフリンの様な種々の生理学的薬剤との接
触によつて活性化された場合に起る。血小板因子4は正
統放射免疫分析法、ThrombosisResear
ch且、51−58(1976)およびThrombo
sisResearch11、673−686、(19
77)を使用して定量される。血小板因子4(PF4)
は放射性ラベルをつけられていてもいなくても特定抗血
清と結合する。
Pおよびエピネフリンの様な種々の生理学的薬剤との接
触によつて活性化された場合に起る。血小板因子4は正
統放射免疫分析法、ThrombosisResear
ch且、51−58(1976)およびThrombo
sisResearch11、673−686、(19
77)を使用して定量される。血小板因子4(PF4)
は放射性ラベルをつけられていてもいなくても特定抗血
清と結合する。
ラベル付きおよびラベルなし(1251−PF4および
PF4)蛋白質の混合物中で各々は混合物中の濃度の割
合で抗血清の一定量に結合する。血漿、血清又は標準液
からのPF4が1251−PF4およびPF4抗血清と
平衡した場合抗血清に結合している1251−PF4の
量は試料又は標準液中にある非一放射性PF4量に逆比
例する。非結合PF4から抗血清複合物を分離し複合物
に結合した1251−PF4の放射能を測定することに
より加えたPF4濃度を結合1251−PF4のパーセ
ントに対しプロツトできる。次いで患者の試料中のPF
4量決定に標準曲線を使用できる。安定な標準試料が血
小板因子4の信頼できる測定に重要である。意外なこと
にヘパリン(メルク索引9版4510)またはヘパリン
活性をもつ化合物が血小板因子4標準試料およびラベル
付き試薬を安定化することが発見されたのである。ヘパ
リンは特殊の非凝固性をもつ高度硫酸塩化した右旋性粘
多糖類である。それはD−グルコサミンおよびD−グル
クロン酸残基より成り約20,000の分子量をもつ。
ヘパリン酸、生理学的に適当するアルカリ金属およびア
ルカリ土金属、例えばナトリウム、カリウム、リチウム
、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウムの陽イ
オン性塩類、並びにヘパリンの様な活性をもつ硫酸塩化
ぺクチン類およびデキストリン類の様な硫酸塩化多糖類
は本発明の実施においてヘパリン活性を有する化合物の
適当な例である。血小板因子4はヘパリンを中和する活
性をもつ血小板特殊蛋白質で、それはヘパリントロンビ
ン固化時間試験(ThrombosisResearc
h8,51−58(1976))により測定の際血小板
放出反応中遊離する。本発明は血小板因子4 10乃至
100n9/ml1抗血清中の抗体に結合している血小
板因子4と共沈澱しうる蛋白質(以下共沈澱性蛋白質と
呼ぶ)および有効安定化量のヘパリンを含む水溶液より
成る安定化された血小板因子4免疫分析標準液を包含す
る。
PF4)蛋白質の混合物中で各々は混合物中の濃度の割
合で抗血清の一定量に結合する。血漿、血清又は標準液
からのPF4が1251−PF4およびPF4抗血清と
平衡した場合抗血清に結合している1251−PF4の
量は試料又は標準液中にある非一放射性PF4量に逆比
例する。非結合PF4から抗血清複合物を分離し複合物
に結合した1251−PF4の放射能を測定することに
より加えたPF4濃度を結合1251−PF4のパーセ
ントに対しプロツトできる。次いで患者の試料中のPF
4量決定に標準曲線を使用できる。安定な標準試料が血
小板因子4の信頼できる測定に重要である。意外なこと
にヘパリン(メルク索引9版4510)またはヘパリン
活性をもつ化合物が血小板因子4標準試料およびラベル
付き試薬を安定化することが発見されたのである。ヘパ
リンは特殊の非凝固性をもつ高度硫酸塩化した右旋性粘
多糖類である。それはD−グルコサミンおよびD−グル
クロン酸残基より成り約20,000の分子量をもつ。
ヘパリン酸、生理学的に適当するアルカリ金属およびア
ルカリ土金属、例えばナトリウム、カリウム、リチウム
、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウムの陽イ
オン性塩類、並びにヘパリンの様な活性をもつ硫酸塩化
ぺクチン類およびデキストリン類の様な硫酸塩化多糖類
は本発明の実施においてヘパリン活性を有する化合物の
適当な例である。血小板因子4はヘパリンを中和する活
性をもつ血小板特殊蛋白質で、それはヘパリントロンビ
ン固化時間試験(ThrombosisResearc
h8,51−58(1976))により測定の際血小板
放出反応中遊離する。本発明は血小板因子4 10乃至
100n9/ml1抗血清中の抗体に結合している血小
板因子4と共沈澱しうる蛋白質(以下共沈澱性蛋白質と
呼ぶ)および有効安定化量のヘパリンを含む水溶液より
成る安定化された血小板因子4免疫分析標準液を包含す
る。
同様に本発明はまた血小板因子41251ラベルをつけ
られた安定化試薬並びにこの試薬を用いる試験用具およ
び試験方法を包含する。血小板因子4の0乃至100n
gノiの生理学的濃度に対応する一組の標準液は例えば
O,10,30,50,100ngノdである。これら
標準液は抗体一抗原沈澱の分離を助けまた試薬および試
験びん壁に付着する血小板因子4の量を減少する為の共
沈澱性蛋白質を含む。共沈澱性蛋白質の一部は抗血清中
の抗体に結合しているラベル付きおよびラベルなし血小
板因子4と共沈澱する。水溶液は約5−10の範囲の生
理学的に適合するpHに緩衝されるとよい。例えば0.
15M塩化ナトリウム中のO.O1Mトリス緩衝液、…
約8.2が好ましい稀釈緩衝液である。0.05−20
%(重量/容量)で約半分アルブミンで半分ガンマグロ
ブリンである共沈澱性蛋白質は有効に抗体一抗原を沈澱
させ試験試料の試料管壁に付着するのを減少する共沈澱
性蛋白質の有効量である。
られた安定化試薬並びにこの試薬を用いる試験用具およ
び試験方法を包含する。血小板因子4の0乃至100n
gノiの生理学的濃度に対応する一組の標準液は例えば
O,10,30,50,100ngノdである。これら
標準液は抗体一抗原沈澱の分離を助けまた試薬および試
験びん壁に付着する血小板因子4の量を減少する為の共
沈澱性蛋白質を含む。共沈澱性蛋白質の一部は抗血清中
の抗体に結合しているラベル付きおよびラベルなし血小
板因子4と共沈澱する。水溶液は約5−10の範囲の生
理学的に適合するpHに緩衝されるとよい。例えば0.
15M塩化ナトリウム中のO.O1Mトリス緩衝液、…
約8.2が好ましい稀釈緩衝液である。0.05−20
%(重量/容量)で約半分アルブミンで半分ガンマグロ
ブリンである共沈澱性蛋白質は有効に抗体一抗原を沈澱
させ試験試料の試料管壁に付着するのを減少する共沈澱
性蛋白質の有効量である。
共沈澱性蛋白質の好ましい量は約0.2%の牛の血清ア
ルブミンと1.5Tflg/TILI,の牛のガンマグ
ロブリンである。ナトリウムアジ化物又はチメロサルの
様な抗菌姓貯蔵剤は標準液内の細菌成長を防ぐのに望ま
しい。
ルブミンと1.5Tflg/TILI,の牛のガンマグ
ロブリンである。ナトリウムアジ化物又はチメロサルの
様な抗菌姓貯蔵剤は標準液内の細菌成長を防ぐのに望ま
しい。
O.02%のアジ化ナトリウムは抗菌性貯蔵剤の好まし
い有効量である。試薬および免疫分析の知識ある者は緩
衝液、蛋白質、貯蔵剤および適当する稀釈緩衝液および
共沈澱性蛋白質有効量および抗菌性貯蔵剤有効量を得る
為の種々な量の相互交換性を認めるであろう。ヘパリン
の有効安定化量は血小板因子4ng当りヘパリン活性約
3乃至10−5単位である。
い有効量である。試薬および免疫分析の知識ある者は緩
衝液、蛋白質、貯蔵剤および適当する稀釈緩衝液および
共沈澱性蛋白質有効量および抗菌性貯蔵剤有効量を得る
為の種々な量の相互交換性を認めるであろう。ヘパリン
の有効安定化量は血小板因子4ng当りヘパリン活性約
3乃至10−5単位である。
好ましい量は約10−1乃至10−2単位/n9である
。如何なる場合も少なくも約10−5単位/nf!なけ
ればならない。血小板因子4、10,30,50および
100n9をそれぞれ含む緩衝稀釈液ml当りヘパリン
活性1単位は非常に有効な一組の標準液を与える。代表
的ナトリウムヘパリン調合物は約170単位/〜を含む
。米国薬局フアーマキヤピアーヘパリン1単位の定義−
ヘパリン1単位はO.8mlの塩溶液に溶解しまた再石
灰化した羊血漿(0.2ml塩化カルシウム溶液、10
1/2)1mlを加えた場合混合物が少なくも1時間液
体のままでいる量である。本発明は抗菌性貯蔵剤、共沈
澱性蛋白質およびヘパリンの有効安定化量を含む水溶液
中の1251−ラベル付き試薬をも包含する。
。如何なる場合も少なくも約10−5単位/nf!なけ
ればならない。血小板因子4、10,30,50および
100n9をそれぞれ含む緩衝稀釈液ml当りヘパリン
活性1単位は非常に有効な一組の標準液を与える。代表
的ナトリウムヘパリン調合物は約170単位/〜を含む
。米国薬局フアーマキヤピアーヘパリン1単位の定義−
ヘパリン1単位はO.8mlの塩溶液に溶解しまた再石
灰化した羊血漿(0.2ml塩化カルシウム溶液、10
1/2)1mlを加えた場合混合物が少なくも1時間液
体のままでいる量である。本発明は抗菌性貯蔵剤、共沈
澱性蛋白質およびヘパリンの有効安定化量を含む水溶液
中の1251−ラベル付き試薬をも包含する。
その放94目ま一般に検出用放射能有効量として0.5
μCi/dより小さく、好ましくはO.2−0.45μ
Ci/dの範囲である。本発明のヘパリン試薬は血小板
因子4測定用分析用具に普通組合わされる。
μCi/dより小さく、好ましくはO.2−0.45μ
Ci/dの範囲である。本発明のヘパリン試薬は血小板
因子4測定用分析用具に普通組合わされる。
次の実施例は本発明を例証するものであつて本発明の真
意又は範囲を限定するつもりはない。実施例 1 標準静脈穿刺法によつて血液試料をとり冷却し遠心分離
した。
意又は範囲を限定するつもりはない。実施例 1 標準静脈穿刺法によつて血液試料をとり冷却し遠心分離
した。
血漿をとり50μ2を未知試料として試験管に入れた。
1.5T!19/Tnlの牛のガンマグロブリツ、0.
2%の牛の血清アルブミン、1μ/mlのナトリウムヘ
パリンおよび0.02%のアジ化ナトリウムを含む0.
15M塩化ナトリウム中に0.01Mトリス緩衝剤(2
−アミノ−2−ヒドロオキシメチル−1,3−プロパン
ジオールHCI)溶液中0,10,30,50および1
00n9/mlの血小板因子4を含む標準液50μlを
標準試料として試験管に入れた。
1.5T!19/Tnlの牛のガンマグロブリツ、0.
2%の牛の血清アルブミン、1μ/mlのナトリウムヘ
パリンおよび0.02%のアジ化ナトリウムを含む0.
15M塩化ナトリウム中に0.01Mトリス緩衝剤(2
−アミノ−2−ヒドロオキシメチル−1,3−プロパン
ジオールHCI)溶液中0,10,30,50および1
00n9/mlの血小板因子4を含む標準液50μlを
標準試料として試験管に入れた。
稀釈緩衝液300μlを非特定結合性試料として試験管
にピペツトでとつた。
にピペツトでとつた。
上記試料すべてに0.2%牛血清アルブミン、1.5w
9/ml牛ガンマグロブリン、2.2μ/dナトリウム
ヘパリンおよび0.02%アジ化ナトリウムを含む0.
15M塩化ナトリウム中0.01Mトリス緩衝液中の放
射能0.45μCi/ml又はそれ以下の1251−ラ
ベル付き血小板因子4溶液2501t1を加えた。
9/ml牛ガンマグロブリン、2.2μ/dナトリウム
ヘパリンおよび0.02%アジ化ナトリウムを含む0.
15M塩化ナトリウム中0.01Mトリス緩衝液中の放
射能0.45μCi/ml又はそれ以下の1251−ラ
ベル付き血小板因子4溶液2501t1を加えた。
次いで未知および標準試料に更に0.2%牛血清アルブ
ミン、1.5〜/d牛ガンマグロブリンおよび0.02
%アジ化ナトリウムを含む0.15M塩化ナトリウム中
0.01Mトリス緩衝液中の山羊血小板因子4抗血清2
50It1を加えた。
ミン、1.5〜/d牛ガンマグロブリンおよび0.02
%アジ化ナトリウムを含む0.15M塩化ナトリウム中
0.01Mトリス緩衝液中の山羊血小板因子4抗血清2
50It1を加えた。
別の管に1251−ラベル付き血小板因子4を250μ
′ピペツトでとり全カウント管をつくつた。
′ピペツトでとり全カウント管をつくつた。
試験管を全部22−25℃で約2時間培養した。全カウ
ント管(TCT)を除く各管に硫酸アンモニウム(73
%飽和)1WLIを加えた後管を混合し、20分間10
00xgで遠心分離し、上澄液を流し、沈澱した硫酸ア
ンモニウム蛋白質中の放射能をシンチレーシヨンウエル
計数管で測定した。結果2.各PF4標準液平均結合%
を垂直Y軸上にとりそれに対応する各びんのラベル濃度
を水平X軸上にとり図示する。
ント管(TCT)を除く各管に硫酸アンモニウム(73
%飽和)1WLIを加えた後管を混合し、20分間10
00xgで遠心分離し、上澄液を流し、沈澱した硫酸ア
ンモニウム蛋白質中の放射能をシンチレーシヨンウエル
計数管で測定した。結果2.各PF4標準液平均結合%
を垂直Y軸上にとりそれに対応する各びんのラベル濃度
を水平X軸上にとり図示する。
5点をつかつてなめらかな曲線を画がく。
3.未知試料中のPF4濃度決定の為Y軸上に求めた計
算結合率%から水平線を曲線に引く。
算結合率%から水平線を曲線に引く。
交叉点から垂直線をX軸に引いて未知試料に対応するP
F4値を読む。代表的臨床結果は通常血漿中10nf!
/d以下である。
F4値を読む。代表的臨床結果は通常血漿中10nf!
/d以下である。
実施例
1群を除きすべての点で同じ標準液はヘパリン1μ/m
lを含んでいた。
lを含んでいた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 血小板因子4を10乃至100ng/ml、抗血清
中の抗体に結合している血小板因子4と共沈澱しうる蛋
白質および有効安定化量のヘパリンまたはヘパリン活性
を有する化合物を含む水溶液より成ることを特徴とする
安定化された血小板因子4免疫分析標準液。 2 血小板因子4を10乃至100ng/ml、抗血清
中の抗体に結合している血小板因子4と共沈澱しうる蛋
白質、有効抗菌量の貯蔵剤および有効安定化量のヘパリ
ンまたはヘパリン活性を有する化合物を含む緩衝稀釈液
より成ることを特徴とする安定化された血小板因子4免
疫分析標準液。 3 0.45μCi/ml迄の放射能をもつ^1^2^
5I−ラベル付き血小板因子4、抗血清中の抗体に結合
している血小板因子4と共沈澱しうる蛋白質および有効
安定化量のヘパリンまたはヘパリン活性を有する化合物
を含む水溶液より成ることを特徴とする安定化された^
1^2^5I−ラベル付き血小板因子4免疫分析標準液
。 4 0.45μCi/ml迄の放射能をもつ^1^2^
5I−ラベル付き血小板因子4、抗血清中の抗体に結合
している血小板因子4と共沈澱しうる蛋白質、有効抗菌
量の貯蔵剤および有効安定化量のヘパリンまたはヘパリ
ン活性を有する化合物を含む緩衝稀釈液より成ることを
特徴とする安定化された^1^2^5I−ラベル付血小
板因子4免疫分析標準液。 5 ^1^2^5I−ラベル付き血小板因子4と試験試
料からの血小板因子4を血小板因子4抗血清と競合結合
させた後沈澱させかつ結合した^1^2^5I−ラベル
付き血小板因子4を測定することにより血漿中の血小板
因子4の濃度を求める為に標準液中の血小板因子4濃度
を用いる血漿中の血小板因子4の放射免疫分析法におい
て、ヘパリンで安定化した血小板因子4標準液およびヘ
パリンで安定化した^1^2^5I−ラベル付き血小板
因子4を用いることを特徴とする改良法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US000000922135 | 1978-07-05 | ||
| US05/922,135 US4195072A (en) | 1978-07-05 | 1978-07-05 | Stabilized platelet factor 4 immunoassay standards |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5510598A JPS5510598A (en) | 1980-01-25 |
| JPS5928865B2 true JPS5928865B2 (ja) | 1984-07-16 |
Family
ID=25446555
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54077589A Expired JPS5928865B2 (ja) | 1978-07-05 | 1979-06-21 | 安定化された血小板因子4免疫分析標準液 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4195072A (ja) |
| EP (1) | EP0007163B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5928865B2 (ja) |
| AT (1) | ATE336T1 (ja) |
| AU (1) | AU525406B2 (ja) |
| CA (1) | CA1116078A (ja) |
| DE (1) | DE2961056D1 (ja) |
| ES (1) | ES482215A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA792524B (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2903701C2 (de) * | 1979-01-31 | 1980-10-16 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Kontrollreagens für die Bestimmung der Heparinaktivität |
| US4311482A (en) * | 1979-10-09 | 1982-01-19 | Abbott Laboratories | Method and apparatus for collecting blood samples |
| DE3019612A1 (de) * | 1980-05-22 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes thrombinpraeparat |
| FR2585836B1 (fr) * | 1985-08-02 | 1987-11-27 | Commissariat Energie Atomique | Procede homogene de detection et/ou de determination par luminescence d'un analyte dans un milieu susceptible de le contenir |
| US5166078A (en) * | 1986-08-19 | 1992-11-24 | Idexx Laboratories, Inc. | Hapten-macromolecule conjugates useful in hapten assays |
| AU639457B2 (en) * | 1989-06-02 | 1993-07-29 | Abbott Laboratories | Hiv p24 quantitation panel |
| IL95641A0 (en) * | 1989-09-15 | 1991-06-30 | Curative Tech Inc | Preparation of a platelet releasate product |
| US5599558A (en) * | 1989-09-15 | 1997-02-04 | Curative Technologies, Inc. | Selecting amounts of platelet releasate for efficacious treatment of tissue |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3960492A (en) * | 1974-05-31 | 1976-06-01 | Nuclear Diagnostics, Inc. | Method for determining an index of binding protein content of blood |
| US4105650A (en) * | 1975-04-11 | 1978-08-08 | Edward Shanbrom, Inc. | Method of preserving blood plasma i |
| US3985618A (en) * | 1975-05-02 | 1976-10-12 | Irving Innerfield | Method for detection of thrombosis and prethrombosis |
| DE2601372C3 (de) * | 1976-01-15 | 1980-03-27 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Bestimmung von Antithrombin III |
| US4097238A (en) * | 1977-06-03 | 1978-06-27 | Ashley Sheldon J | Method of analyzing blood plasma clotting |
-
1978
- 1978-07-05 US US05/922,135 patent/US4195072A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-05-18 DE DE7979300880T patent/DE2961056D1/de not_active Expired
- 1979-05-18 EP EP79300880A patent/EP0007163B1/en not_active Expired
- 1979-05-18 AT AT79300880T patent/ATE336T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-05-23 CA CA328,170A patent/CA1116078A/en not_active Expired
- 1979-05-23 ZA ZA792524A patent/ZA792524B/xx unknown
- 1979-05-24 AU AU47389/79A patent/AU525406B2/en not_active Expired
- 1979-06-21 JP JP54077589A patent/JPS5928865B2/ja not_active Expired
- 1979-07-04 ES ES482215A patent/ES482215A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4195072A (en) | 1980-03-25 |
| DE2961056D1 (en) | 1981-12-24 |
| AU525406B2 (en) | 1982-11-04 |
| EP0007163B1 (en) | 1981-10-21 |
| ES482215A1 (es) | 1980-08-16 |
| CA1116078A (en) | 1982-01-12 |
| ZA792524B (en) | 1980-06-25 |
| ATE336T1 (de) | 1981-11-15 |
| EP0007163A1 (en) | 1980-01-23 |
| JPS5510598A (en) | 1980-01-25 |
| AU4738979A (en) | 1980-01-31 |
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