JPS593180B2 - マイコトキシン類の抽出法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は植物から得られた塊状物、粉末およびたんぽ（
質濃縮物からマイコトキシン類（菌類の毒素）を抽出す
る方法に係わる。

食品または飼料のマイコトキシン類による汚染は、この
ような物質の使用を危険なものとしている。

事実、菌類の代謝物は急性あるいは慢性毒性における広
いスペクトルを有し、中でも発癌性および催奇性が著し
い。

各種の病原菌から単離された各種の毒素の中でも、１９
６０年に発見されたアフラトキシン類は生物活性が高い
ため特に危険である。

アフラトキシン類毒素はアスペルギルス・フラブス （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ ）の培養基
から単離された。

この分岐菌類は、落花生、小麦、トウモロコシ、ひまわ
り、なたね等の各種の植物の種子を汚染する危険な菌類
である。

アフラトキシン類の種類は化学的に類似する多数の物質
があり、特定の場合には１０ないし１２に達する。

アフラトキシンＢ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２の４種類の化合
物は常に存在する。

代謝物Ｂ１およびＧ１はシフランクマリン誘導体であり
、一方Ｂ２およびＧ２はそれぞれジヒドロ誘導体である
。

アフラトキシンＢ１は最も毒性の強い化合物であり、混
合物中の主成分でもある（約４５％）。

このような物質を汚染生成物から除去または非活性する
ための方法は多くの研究者によって開発されているが、
これらの方法では粉体の栄養としての作用を低下させる
ものであった（イー・ケー・ガードーナー（Ｅ 、 Ｋ
、 Ｇａｒｄｎｅｒ ）等、ジャーナル・オブ・アメ
リカン・オイル・ソサエティー（Ｊ。

Ａｍｅｒ 、 Ｏｉ ｌ Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ 、 ）
４８、（２）、７０〜７３（１９７１）参照）。

本発明は、アフラトキシン類および類似構造を有するか
あるいはたんぽ（質を変性しない条件下で使用する溶媒
混合物に可溶性のすべてのマイコトキシン類を除去でき
る新規な方法に係わる。

このように本発明の方法は、すでに汚染されて毒性を有
する塊状物、粉体およびたんばく質濃縮物を食物および
飼料として使用できるように浄化できる。

該方法は少なくとも１つの極性基を有する有機溶媒を使
用する。

この溶媒は、有機または無機酸およびその酸性塩の中か
ら選ばれる電解質を含有する水溶液で飽和される。

電解質は塩酸溶液中におけるマイコトキシン類の溶解性
を増加させ、その除去を容易なものとする。

抽出操作は４℃ないしたんばく質の変性を生じ始める温
度の温度範囲において比溶質／溶媒凶ないし１１５０、
ｐＨ２，０ないし６．０の抽出溶液を還流しながら実施
する。

該方法を詳述するために、搾油工程から得られる落花生
粉末からのアフラトキシンＢ□およびＢ２の抽出操作を
参照して述べる。

該方法はアフラトキシン類あるいは類似の構造を有する
かあるいは本発明方法で使用する溶媒混合物に可溶性の
他のマイコトキシン類、たとえばアスペルギルスオクラ
セウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｃｈｒａｃｅｕｓ
）およびペニシリウムビリデイカチウム（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍｖｉｒｉｄｉｃａｔｕｍ）の代謝物である
オクラトキシン類、によって汚染された他の植物の粉体
からの抽出にも有利に応用できる。

他の詳細については、本発明を限定することな（本発明
をさらに理解されうるように例示する以下の実施例にお
いて明確になるであろう。

実施例では以下の物質を使用し、以下の如く処理した。

物質 アフラトキシンＢ１およびＢ２はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ
社のものを使用した。

薄層クロマト用に使用したシリカゲルはＭＮ−シリカゲ
ル、Ｇ−ＨＲ （Ｍａｃｈｅｒｅｙ 、 Ｎａｇｅｌ ＆ Ｃｏ 、
）であった。

使用しり展開液はクロロホルム−アセトン（９０：１０
）であった。

ノルマル−ブチルアルコールおよびノルマル−ヘキサン
はＲＰＥ溶媒としてＣａｒｌ。

Ｅｒｂａ社のものを使用した（Ｅｒｂａ Ｐｕｒｅ Ｒ
ｅｇａｎｔ ）塩酸はＭｅｒｃｋ社のものである。

方法 アフラトキシンＢ１およびＢ２の検索はＡＯＡＣ法２６
．００１−２６．０２０１１版（１９７０）（Ａｓｓｏ
ｃｉａｔｉｏｎ ０ｆｆｉｃｉａｌ Ａｎａｌｙｔｉｃ
ａｌＣｈｅｍｉｓｔｓ ）に従って行なった。

アフラトキシンＢ１およびＢ２の確認は、エル、エム・
サイン（Ｌ、Ｍ、 ５ｅｉｔｚ ）およびエイチ、イー
・モール（Ｈ，Ｅ 、 Ｍｏｈｒ ）による方法（セリ
アル・ケミストリー（Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ） ５１（４）、４８７、（１９７４））に従って行
なった。

アフラトキシンＢ１およびＢ２に係わる薄層プレート上
のスポットおよび標準品に係わるスポットの螢光による
検索は長波長の紫外線照射を使用するクトマトーバエ（
Ｃｈｒｏｍａｔｏ −Ｖｕｅ ） （Ｕｌ ｔｒａ −
ｖｉｏｌｅｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）を使用して行なっ
た。

マイコトキシン類の抽出溶媒は塩酸（０，５Ｘ１０−２
規定、ｐＨ２，５０）をノルマル−ブチルアルコールに
対して１：９（容量／容量）で加えて調製した。

この割合比は限定的なものではな（、ｐＨを関数として
電解質を含有する水溶液により溶媒が飽和されるまで変
化できる。

油を抽出する工業的規模の装置からの落花生粉末をピー
ラ−ミルで粉砕しく３級）、これを溶媒混合物に１／１
４（重量／容量）の割合で加え、室温で１５分間攪拌し
た。

懸濁物をワットマン沢紙Ａ３を使用してビヒネルロート
で沢過した。

上記の如（して残渣についてさらに溶媒混合物により数
回抽出を行なった。

抽出後、粉末を窒素流中で少な（とも３時間乾燥させ、
この試料について上記サインおよびモール民法に従って
アフラトキシンＢ１およびＢ２の検索を行なった。

さらにアフラトキシン類の測定を上記ＡＯＡＣ２６，０
０１−２６，０２０法に従って行なった。

実施例 １ サインおよびモール民法による落花生粉末の搾油かすか
らアフラトキシンＢ□およびＢ２の抽出搾油用落花生粉
末の初期組成 粉末１００？をフラスコ中で溶媒混合物１５００ｍｌと
混合し、室温において１５分間激しく攪拌した。

フィルタポンプにより沢過を行ない、残渣について新た
な溶媒混合物１５０ Ｑｌｎｌを加えて抽出を繰返し行
なった。

この処理を繰返し抽出を合計７回行なった。

ついで最終残渣を窒素流中で３時間乾燥した。

毒素を除去した粉末５０ｆ？をアフラトキシン類を検索
するためにサインおよびモール民法により処理した。

また同量の未処理の落花生粉末を上記の如（同様に処理
した。

薄層クロマトプレート上に、処理前の落花生粉末、処理
後の粉末およびそれぞれアフラトキシンＢ１およびＢ２
を１０，２０．３０およびｓｏｐ：ｐ、ｂ。

）量で含有する４種類のアフラトキシン標準品のベンゼ
ン−アセトン（９８：２）溶液２５ミクロｌをプロット
した。

標準品の調製はアフラトキシンＢ１およびＢ２（等級Ａ
）を最終濃度が約１ミクロ？／１１Ｌｌとなるようにベ
ンゼン−アセトニトリル（９８：２）溶液で希釈するこ
とにより行なった。

ついで実際の濃度をＡＯＡＣ２６，０１１に従って分光
光度法により測定した。

上記薄層プレートをクロロホルム−アセトン（９０：１
０）中で１０分間展開し、ついで長波長の紫外線ランプ
のもとで検索した。

該プレートの検索において、原料試料については、アフ
ラトキシンＢ１およびＢ２の標準品とＲｆ値が一致する
青色螢光を発する２つの特性スポットがあった。

未処理試料に関するスポットは最も濃度の濃い標準品の
ものよりもさらに高い強度を有しており、一方溶媒混合
物で抽出処理したもののスポットは標準品溶液の最も濃
度の低いものに等しい強度、すなわち１０ｐ、ｐ、ｂ、
に等しい螢光強度を示した。

実施例 ２ 搾油工業から得られた落花生粉末試料からのアフラトキ
シンＢ１およびＢ２の抽出およびＡＯＡＣ２６，００１
−２６，０２０法による測定実施例１に示した組成を有
する落花生粉末１００１をフラスコ中で溶媒混合物と混
合し、室温で１５分間激しく攪拌した。

フィルタポンプにより沢過し、残渣について新たな溶媒
１５００ｒｆＬｌで抽出を繰返し行なった。

この処理を繰返し、抽出を合計７回行なった。

実施例１に示した組成を有する毒素を除去したのちの粉
末５０１をアフラトキシン類の測定を行なうためＡＯＡ
Ｃ２６，００１−２６，０２０法に従って処理し、抽出
したのちベンゼン−アセトニトリル溶液（９８：２）０
．５７ｄに溶解した。

同量の未処理落花生粉末を上記のＡＯＡＣ法に従って処
理した。

ＭＮ−シリカゲルＧ−ＨＲＯ，３ｍｍを付着したプレー
トに以下の試料をプロットした。

１、アフラトキシンで汚染した試料 汚染した落花生試料のベンゼン−アセトニトリル混合液
（９８：２）の溶液３，５および７ミクロｌをプロット
し、さらに汚染した試料５ミクロｌとともにアフラトキ
シンＢ□の標準品溶液５ミクロｌをプロットした。

２、標準品 アフラトキシンＢ０の標準品溶液（１ミクロｆ／ｍ１）
３．５および７ミクロｌをプロットした。

３、毒素を除去した試料 毒素を除去した落花生試料のベンゼン−アセトニトリル
混合液（９８：２）の溶液５．１０および１５ミクロｌ
をプロットし、非汚染試料５ミクロｌとともにアフラト
キシンＢ１の標準溶液５ミクロｌをプロットした。

クロマトグラフィに使用した展開液はクロロホルム−ア
セトン（９０：１０）であり、展開時間は４０分であり
、その間に溶液の上昇は１２（１７７２であった。

長波長の紫外線ランプにより薄層クロマトプレートを検
索したところ以下の結果が得られた。

１、アフラトキシン類により汚染された試料５倍に希釈
した上記試料の３ミクロｌに相当する青色螢光スポット
はアフラトキシンＢ１標準品溶液５ミクロｌのものと同
じ強度およびＲｆ値を有していた。

上記試料中に含まれるアフラトキシＢ０の量（ｐ、ｐ、
ｂ、）を算出するためにＡＯＡＣ２６，０２０法による
次式を利用した。

５＝Ｂ１標準品ミクロ１ Ｙ＝Ｂ１標準品の濃度 ■＝希釈した試料ミクロ１ Ｘ＝Ｂ１標準品と同じ螢光強度を与えた試料ミクロｌ Ｗ＝分析に使用した粉末試料Ｖ この式によれば次の通りである。

２、毒素を除去した試料 毒素を除去した試料１５ミクロｌに相当する青色螢光ス
ポットはアフラトキシンＢ□標準品３ミクロｌのものと
同じ強度およびＲｆ値を有していた。

毒素を除去した落花生粉末中になお残留するアフラトキ
シンＢ１の量（１）、ｐ、ｂ、 ）を算出するために上
記の式を利用した。

この結果、残留するアフラトキシン含量は初期の値の２
．５％であった。

同様にアフラトキシンＢ２標準品についても測定したと
ころ、Ｂ２ の残留含量は初期の値の２．５％であった
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 植物粉体からマイコトキシン類を抽出する方法にお
   いて該粉体または該粉体から得られる生成物を、電解質
   水溶液と混合した、少な（とも１つの極性基を含有する
   有機溶媒で処理する工程を包含することを特徴とする、
   マイコトキシン類の抽出法。 ２ 前記処理を比溶質／溶媒ｌ：２ないし１：５０で行
   なうことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の抽出
   法。 ３ 電解質水溶液のｐＨは２．０ないし６．０であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載
   の抽出法。 ４ 前記処理を温度４℃ないしたんばく質の変性温度で
   行なうことを特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第
   ３項のいずれか１項記載の抽出法。 ５ 有機溶媒はノルマル−ブチルアルコールであること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項ないし第４項のいず
   れか１項記載の抽出法。 ６ 電解質は無機酸であることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項ないし第５項のいずれか１項記載の抽出法。 ７ 上記無機酸は塩酸であることを特徴とする特許請求
   の範囲第６項記載の抽出法。 ８ 上記生成物は落花生粉末である特許請求の範囲第１
   項ないし第７項のいずれか１項記載の抽出法。 ９ 前記落花生粉末は落花生油を工業的に抽出する工程
   から得られたものである特許請求の範囲第８項記載の抽
   出法。