JPS5949239B2 - 高純度プロタミンの簡易な精製方法 - Google Patents
高純度プロタミンの簡易な精製方法Info
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- JPS5949239B2 JPS5949239B2 JP53074132A JP7413278A JPS5949239B2 JP S5949239 B2 JPS5949239 B2 JP S5949239B2 JP 53074132 A JP53074132 A JP 53074132A JP 7413278 A JP7413278 A JP 7413278A JP S5949239 B2 JPS5949239 B2 JP S5949239B2
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Landscapes
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、高純度プロタミンの簡易な精製方法に関する
ものである。
ものである。
プロタミンはサケ、マス、ニシン、サバ等の精子核中に
デオキシリボ核酸と結合したヌクレオプロタミンとして
存在する比較的分子量の小さい、高アルギニン含量の強
塩基性タンパク質である。
デオキシリボ核酸と結合したヌクレオプロタミンとして
存在する比較的分子量の小さい、高アルギニン含量の強
塩基性タンパク質である。
プロタミンは古くより、インシュリンとの複合体である
効力持続性インシュリン製剤や抗へパリン剤であるプロ
タミン注射液が臨床薬剤として使用されていると同時に
、生化学研究および生化学工業において分離、精製用薬
剤としても利用されているが、近時、ある種の酵素の安
定剤や抗性物質等の活性剤または助剤としても不可欠の
物質となりつゝある。従来、プロタミンの製造には、前
記魚の成熟白子の精子核より希鉱酸でプロタミンを抽出
するか、あるいは濃食塩水でヌクレオプロタミンを抽出
しそれからプロタミンを分離する方法がとられてきた。
効力持続性インシュリン製剤や抗へパリン剤であるプロ
タミン注射液が臨床薬剤として使用されていると同時に
、生化学研究および生化学工業において分離、精製用薬
剤としても利用されているが、近時、ある種の酵素の安
定剤や抗性物質等の活性剤または助剤としても不可欠の
物質となりつゝある。従来、プロタミンの製造には、前
記魚の成熟白子の精子核より希鉱酸でプロタミンを抽出
するか、あるいは濃食塩水でヌクレオプロタミンを抽出
しそれからプロタミンを分離する方法がとられてきた。
しかし、これらの抽出物中には、プロタミン以外のタン
パク質、ペプチド類、アミノ酸類、核酸分解生成物、脂
質およびその分解生成物等が混在しているので、これか
ら適切な沈澱剤により単離したプロタミン鉱酸塩はかな
りの精製を要する。従来とられたプロタミンの精製法と
しては、（１）硫酸塩としてアルコールによる再沈澱の
反覆によるか、（２）ピクリン酸塩を経る処理で精製す
るか、（３）その他一般のタンパク沈澱剤（塩化白金、
タングステン酸、メタ燐酸、フェロシアン化水素酸、ス
ルホサルチル酸等）を利用するか、（４）イオン交換樹
脂により分離精製するのが一般的である、またヌクレオ
プロタミンとして抽出する場合は、（１）食塩濃度を下
げて再沈澱精製した後に希鉱酸でプロタミンを分離する
か、（２）ヌクレオプロタミンの塩類溶液からブロタミ
ンを塩析して分離精製するか、（３）硫酸銅もしくは塩
化銅で核酸銅塩として除去してプロタミン鉱酸塩を得る
等の諸方法が行われている。いずれにしても、これら従
来の精製法は操作が煩雑であるか、または高価な幅資材
を必要とするかして、大量生産には不適当であるのみか
、臨床薬剤用としては精製も不充分であり、純度の向上
を望めばブロタミンの収量を著しく減するという犠牲が
伴い、経済的に著しく不利である。
パク質、ペプチド類、アミノ酸類、核酸分解生成物、脂
質およびその分解生成物等が混在しているので、これか
ら適切な沈澱剤により単離したプロタミン鉱酸塩はかな
りの精製を要する。従来とられたプロタミンの精製法と
しては、（１）硫酸塩としてアルコールによる再沈澱の
反覆によるか、（２）ピクリン酸塩を経る処理で精製す
るか、（３）その他一般のタンパク沈澱剤（塩化白金、
タングステン酸、メタ燐酸、フェロシアン化水素酸、ス
ルホサルチル酸等）を利用するか、（４）イオン交換樹
脂により分離精製するのが一般的である、またヌクレオ
プロタミンとして抽出する場合は、（１）食塩濃度を下
げて再沈澱精製した後に希鉱酸でプロタミンを分離する
か、（２）ヌクレオプロタミンの塩類溶液からブロタミ
ンを塩析して分離精製するか、（３）硫酸銅もしくは塩
化銅で核酸銅塩として除去してプロタミン鉱酸塩を得る
等の諸方法が行われている。いずれにしても、これら従
来の精製法は操作が煩雑であるか、または高価な幅資材
を必要とするかして、大量生産には不適当であるのみか
、臨床薬剤用としては精製も不充分であり、純度の向上
を望めばブロタミンの収量を著しく減するという犠牲が
伴い、経済的に著しく不利である。
本発明の特徴は、プロタミンを含む白子より常法により
抽出分離して、前記不純物の混在するプロタミン鉱酸塩
を酸性の希薄水溶液中で吸着剤により、処理した後、必
要最少限量の有機溶剤で分別沈澱させることにより、臨
床薬剤としても充分に適応しうる高純度プロタミンを極
めて簡易に精製できることである。
抽出分離して、前記不純物の混在するプロタミン鉱酸塩
を酸性の希薄水溶液中で吸着剤により、処理した後、必
要最少限量の有機溶剤で分別沈澱させることにより、臨
床薬剤としても充分に適応しうる高純度プロタミンを極
めて簡易に精製できることである。
プロタミン以外のタンパク質とその分解生成物、核酸分
解生成物、脂質とその分解生成物等の不純物の相対量は
、原料白子、抽出条件、分離条件等により必ずしも画一
的ではなく、そのために、それぞれの不純物を除去する
原理に基いて、それぞれに目標を定めて、最適の除去精
製処理を施すことは実際上困難であり、それ故に最大公
約数的な条件の下で複数の操作の巧妙な組合せを必要と
する。
解生成物、脂質とその分解生成物等の不純物の相対量は
、原料白子、抽出条件、分離条件等により必ずしも画一
的ではなく、そのために、それぞれの不純物を除去する
原理に基いて、それぞれに目標を定めて、最適の除去精
製処理を施すことは実際上困難であり、それ故に最大公
約数的な条件の下で複数の操作の巧妙な組合せを必要と
する。
プロタミン鉱酸塩の酸性希薄水溶液中では、上記の不純
物とプロタミンとの化学結合士物理的付着はほとんど切
れるか、または離れた状態で溶解していること、および
プロタミン以外のものは吸着剤に著しい親和性があると
いう新知見を得て、高純度プロタミンを極めて簡易に精
製できる本発明を確立したのである。
物とプロタミンとの化学結合士物理的付着はほとんど切
れるか、または離れた状態で溶解していること、および
プロタミン以外のものは吸着剤に著しい親和性があると
いう新知見を得て、高純度プロタミンを極めて簡易に精
製できる本発明を確立したのである。
もちろん吸着されない性質のものであつて、当然溶液中
に残存するために、沈澱操作に使用する有機溶剤の使用
量は、必要最少限量であることが重要である。
に残存するために、沈澱操作に使用する有機溶剤の使用
量は、必要最少限量であることが重要である。
プロタミン水溶液の濃度は希薄であるほど好ましいが、
１〜１０％内で自由に選択できる。酸性度は強いほど不
純物の溶解性は良く、通常は声３以下が望ましい。一般
の吸着剤（活性炭、活性アルミナ、シリカゲル、ベント
ナイト、酸性白土、ケイソウ土、骨炭等）はいずれも使
用することができ、主とする目的により適当に選択しう
る。使用量は何れも１〜１０ｑ６程度でよい。温度条件
は熱時、冷時いずれでもよく、処理時間は長時間ほど好
結果が得られる。有機溶剤もアルコール類、アセトン等
何れでもよく、使用量は当容以下が望ましい。以下、実
施例、参考例をあげる。
１〜１０％内で自由に選択できる。酸性度は強いほど不
純物の溶解性は良く、通常は声３以下が望ましい。一般
の吸着剤（活性炭、活性アルミナ、シリカゲル、ベント
ナイト、酸性白土、ケイソウ土、骨炭等）はいずれも使
用することができ、主とする目的により適当に選択しう
る。使用量は何れも１〜１０ｑ６程度でよい。温度条件
は熱時、冷時いずれでもよく、処理時間は長時間ほど好
結果が得られる。有機溶剤もアルコール類、アセトン等
何れでもよく、使用量は当容以下が望ましい。以下、実
施例、参考例をあげる。
参考例
ニシンの成熟白子２５ｋｇに０．５Ｎ塩酸６０１を加え
、常温で液の循環下に５時間抽出する。
、常温で液の循環下に５時間抽出する。
分離した抽出液をアンモニア水でＰｌ｛３〜４に調整し
、これに６００９のメタ燐酸ナトリウムの水溶液を攪拌
しつＸ添加して一夜放置する。上澄液を傾瀉してアメ状
のプロタミンメタ燐酸塩１．９ｋ９を４１の２モル硫酸
アンモニウムに加温溶解して一夜放置する。下層の油状
プロタミン硫酸塩をアルコールで脱水固化、乾燥して１
．０ｋｇの硫酸プロタミンの白色粉末を得る。実施例 参考例で作製した硫酸プロタミン１ｋ９を２０１の水に
加温溶解し、希硫酸でず１．５に調整する。
、これに６００９のメタ燐酸ナトリウムの水溶液を攪拌
しつＸ添加して一夜放置する。上澄液を傾瀉してアメ状
のプロタミンメタ燐酸塩１．９ｋ９を４１の２モル硫酸
アンモニウムに加温溶解して一夜放置する。下層の油状
プロタミン硫酸塩をアルコールで脱水固化、乾燥して１
．０ｋｇの硫酸プロタミンの白色粉末を得る。実施例 参考例で作製した硫酸プロタミン１ｋ９を２０１の水に
加温溶解し、希硫酸でず１．５に調整する。
５０ｇの活性炭を加えて１時間攪拌後、淵別する。
無色透明な硫酸プロタミン水溶液に攪拌下５１１のメタ
ノールを加え、一夜放置する。上澄液を傾瀉、アメ状プ
ロタミン硫酸塩を５！のメタノールで脱水固化し乾燥す
る。純白色の高純度硫酸プロタミンの結晶体８５０９が
得られる。モル％は全アミノ酸のモル数に対する各アミ
ノ酸のモル百分率を示す。
ノールを加え、一夜放置する。上澄液を傾瀉、アメ状プ
ロタミン硫酸塩を５！のメタノールで脱水固化し乾燥す
る。純白色の高純度硫酸プロタミンの結晶体８５０９が
得られる。モル％は全アミノ酸のモル数に対する各アミ
ノ酸のモル百分率を示す。
Ｂ紫外吸収
Claims (1)
- １ プロタミンを含む魚の白子より抽出、分離して得た
プロタミン鉱酸塩の酸性希薄水溶液を吸着剤で処理した
後に、必要最少限量の有機溶剤で分別沈澱させることを
特徴とする高級度プロタミンの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53074132A JPS5949239B2 (ja) | 1978-06-21 | 1978-06-21 | 高純度プロタミンの簡易な精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53074132A JPS5949239B2 (ja) | 1978-06-21 | 1978-06-21 | 高純度プロタミンの簡易な精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS552612A JPS552612A (en) | 1980-01-10 |
| JPS5949239B2 true JPS5949239B2 (ja) | 1984-12-01 |
Family
ID=13538350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53074132A Expired JPS5949239B2 (ja) | 1978-06-21 | 1978-06-21 | 高純度プロタミンの簡易な精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5949239B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103509098A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 徐州万邦金桥制药有限公司 | 鱼精蛋白的纯化工艺 |
-
1978
- 1978-06-21 JP JP53074132A patent/JPS5949239B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103509098A (zh) * | 2012-06-20 | 2014-01-15 | 徐州万邦金桥制药有限公司 | 鱼精蛋白的纯化工艺 |
| CN103509098B (zh) * | 2012-06-20 | 2016-03-30 | 徐州万邦金桥制药有限公司 | 鱼精蛋白的纯化工艺 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS552612A (en) | 1980-01-10 |
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