JPS5953833B2 - 培養方法及び培地 - Google Patents
培養方法及び培地Info
- Publication number
- JPS5953833B2 JPS5953833B2 JP16347781A JP16347781A JPS5953833B2 JP S5953833 B2 JPS5953833 B2 JP S5953833B2 JP 16347781 A JP16347781 A JP 16347781A JP 16347781 A JP16347781 A JP 16347781A JP S5953833 B2 JPS5953833 B2 JP S5953833B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- cyclodextrin
- bordetella
- culturing
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、病原性菌として知られているボルデテラ（Ｂ
ｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属に属する微生物の培養方法と、
その際に使用される培地に関する。
ｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属に属する微生物の培養方法と、
その際に使用される培地に関する。
ボルデテラ属に属する微生物としては、百日咳菌、パラ
百日咳菌、気管支敗血症菌等があり、特に百日咳菌は、
１００日つづくといわれる特有の咳を伴う、気管、気管
支、および小気管支がおかされる急性の感染症である百
日咳の主たる病原菌と；して知られている。
百日咳菌、気管支敗血症菌等があり、特に百日咳菌は、
１００日つづくといわれる特有の咳を伴う、気管、気管
支、および小気管支がおかされる急性の感染症である百
日咳の主たる病原菌と；して知られている。
従って、臨床上は、かかる百日咳菌等の迅速・確実な検
出が望まれており、そのためには臨床分離菌の生育を促
進するような培地が必要である。
出が望まれており、そのためには臨床分離菌の生育を促
進するような培地が必要である。
また、百日咳の予防のために百日咳ワクチンが用いられ
ているが、通常菌浮遊液の形で調整されるワクチンを効
率良く生産するためにも、百日咳菌の生育を促進するよ
うな培地が望ましい。
ているが、通常菌浮遊液の形で調整されるワクチンを効
率良く生産するためにも、百日咳菌の生育を促進するよ
うな培地が望ましい。
かかる目的のためには、従来、ボルナ・ジャングー培地
（ＢＧ培地）やステイナー・ショルテ（ＳＳ培地）培地
が用いられているが、かかる培地を用いた場合でも、百
日咳菌等は培地上で変異をおこし易く安定した培養が難
しく、特に、菌の接種数が少ない場合（１０３コロニー
のオーダー以下）には、生育が非常に不安定であるとい
う問題点があった。
（ＢＧ培地）やステイナー・ショルテ（ＳＳ培地）培地
が用いられているが、かかる培地を用いた場合でも、百
日咳菌等は培地上で変異をおこし易く安定した培養が難
しく、特に、菌の接種数が少ない場合（１０３コロニー
のオーダー以下）には、生育が非常に不安定であるとい
う問題点があった。
本発明者らは、従来技術の欠点を改良し、ボルデテラ属
に属する微生物を安定にかつ効率良く培養する方法につ
き鋭意研究の結果、本発明に到達した。
に属する微生物を安定にかつ効率良く培養する方法につ
き鋭意研究の結果、本発明に到達した。
□ 即ち、本発明は、ボルデテラ属に属する微生物を培
養するに際し、培地中にシクロデキストリン又はその誘
導体を加えることを特徴とする、ボルデテラ属に属する
微生物の培養方法と、その際に使用される培地である。
養するに際し、培地中にシクロデキストリン又はその誘
導体を加えることを特徴とする、ボルデテラ属に属する
微生物の培養方法と、その際に使用される培地である。
゛ 本発明におけるボルデテラ属に属する微生物とは、
百日咳菌、パラ百日咳菌、気管支敗血症菌等をいう。
百日咳菌、パラ百日咳菌、気管支敗血症菌等をいう。
ボルデテラ属に属する微生物の菌学的性質及び培養条件
等に関しては、Ｂｅｒｇｙ’ ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ、第８版、１９７４年、Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ ＆ Ｗｉｌｌｋｉｎｓ Ｃｏ０発行やＪ、 Ｅ
ｘｐ、 Ｍｅｄ、 １２９巻、第５２３−５５０頁、１
９６９年あるいは細菌学実習提要、第３版、第８０頁以
下、昭和４７年、丸首発行等があり、すでに公知である
。
等に関しては、Ｂｅｒｇｙ’ ｓ Ｍａｎｕａｌ
ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ、第８版、１９７４年、Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍ
ｓ ＆ Ｗｉｌｌｋｉｎｓ Ｃｏ０発行やＪ、 Ｅ
ｘｐ、 Ｍｅｄ、 １２９巻、第５２３−５５０頁、１
９６９年あるいは細菌学実習提要、第３版、第８０頁以
下、昭和４７年、丸首発行等があり、すでに公知である
。
シクロデキストリンは、でん粉あるいはでん粉の加水分
解物にＢａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓなどのａｍ
ｙｌａｓｅを作用させて得られる、Ｄ−グリコピラノー
ス基が６〜１０個α−１，４グルコシド結合によって環
状に結合した王冠状の分子である。
解物にＢａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓなどのａｍ
ｙｌａｓｅを作用させて得られる、Ｄ−グリコピラノー
ス基が６〜１０個α−１，４グルコシド結合によって環
状に結合した王冠状の分子である。
そのうち主なものは、６，７または８個のＤ−グリコピ
ラノース基からなり、それぞれα−５β−５γ−シクロ
デキストリンと呼ばれている。
ラノース基からなり、それぞれα−５β−５γ−シクロ
デキストリンと呼ばれている。
本発明におけるシクロテ゛キスＩ・リンとは、前記α、
β、γ等のシクロデキストリン又はそれらの混合物をい
う。
β、γ等のシクロデキストリン又はそれらの混合物をい
う。
シフロブキス１ヘ９フ分子は多数の１級及び２級水酸基
を有するので、単糖類に広く用いられている反応を適用
して種々の誘導体が得られる。
を有するので、単糖類に広く用いられている反応を適用
して種々の誘導体が得られる。
本発明におけるシクロデキストリン誘導体とはかかる方
法で得られる誘導体を意味し、例えば、アミノシクロテ
゛キストリンやアミノテ゛オキシシクロデキストリンの
如きアミン化誘導体、アセチルシクロデキストリンやニ
トロシクロデキストリンの如きエステル化誘導体、メチ
ルシクロテ゛キストリン、エチルシクロテ゛キストリン
、プロピルシクロデキストリン、カルボキシメチルシク
ロテ゛キストリンの如きエーテル化誘導体（エーテル化
シクロデキストリン）がある。
法で得られる誘導体を意味し、例えば、アミノシクロテ
゛キストリンやアミノテ゛オキシシクロデキストリンの
如きアミン化誘導体、アセチルシクロデキストリンやニ
トロシクロデキストリンの如きエステル化誘導体、メチ
ルシクロテ゛キストリン、エチルシクロテ゛キストリン
、プロピルシクロデキストリン、カルボキシメチルシク
ロテ゛キストリンの如きエーテル化誘導体（エーテル化
シクロデキストリン）がある。
本発明において好ましいのはエーテル化シクロテ゛キス
トリンで゛あり、中で゛も、ヘキサキス（２，６−０−
ジメチル）α−シクロデキストリンやヘプタキス（２，
６−０−ジメチル）β−シクロデキストリン等のメチル
デキストリンが特に好ましい。
トリンで゛あり、中で゛も、ヘキサキス（２，６−０−
ジメチル）α−シクロデキストリンやヘプタキス（２，
６−０−ジメチル）β−シクロデキストリン等のメチル
デキストリンが特に好ましい。
本発明において培地とは、ブイヨンやペプトン水などの
従来公知の液状培地、あるいは液状培地に寒天、ゼラチ
ン、卵白、血清などを加えて固形にした従来公知の固形
培地を意味するが、好ましいのはＳＳ培地、及びこれに
寒天を１〜２％（Ｗ／Ｖ）程度添加し固化したＳＳ培地
である。
従来公知の液状培地、あるいは液状培地に寒天、ゼラチ
ン、卵白、血清などを加えて固形にした従来公知の固形
培地を意味するが、好ましいのはＳＳ培地、及びこれに
寒天を１〜２％（Ｗ／Ｖ）程度添加し固化したＳＳ培地
である。
ＳＳ培地は、１１あたり、グルタミン酸ナトリウム、１
−プロリン、塩化ナトリウム、リン酸２水素カリウム、
塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ト
リスヒドロキシメチルアミノメタンを、それぞれ１０，
７．０，２４．２，５．０，５゜０．２．０，１．０，
０２．１，５２５ｇを含む水溶液を濃塩酸で世７．６に
調整した後、１２１℃で１５分間オートクレーブで滅菌
して得られる基礎培地に、■−シスチン、硫酸第１鉄、
アスコルビン酸、ニアシン、還元型グルタチオンを１１
あたり、それぞれ４゜１、 ２．０，４． Ｌｏｇ含む
溶液をミリポアフィルタ−（０，４５μ）で除菌して得
られる補液を、基礎培地に対しでて１．０％（Ｖ／Ｖ）
の割合で加えて得られる。
−プロリン、塩化ナトリウム、リン酸２水素カリウム、
塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ト
リスヒドロキシメチルアミノメタンを、それぞれ１０，
７．０，２４．２，５．０，５゜０．２．０，１．０，
０２．１，５２５ｇを含む水溶液を濃塩酸で世７．６に
調整した後、１２１℃で１５分間オートクレーブで滅菌
して得られる基礎培地に、■−シスチン、硫酸第１鉄、
アスコルビン酸、ニアシン、還元型グルタチオンを１１
あたり、それぞれ４゜１、 ２．０，４． Ｌｏｇ含む
溶液をミリポアフィルタ−（０，４５μ）で除菌して得
られる補液を、基礎培地に対しでて１．０％（Ｖ／Ｖ）
の割合で加えて得られる。
本発明において、前記培地に添加混合されるシクロデキ
ストリン又はその誘導体の量は、接種される菌の量に依
存するが、例えば、接種される菌が１０３のコロニーの
場合には２００〜５０００μｇ ／ｍｌ。
ストリン又はその誘導体の量は、接種される菌の量に依
存するが、例えば、接種される菌が１０３のコロニーの
場合には２００〜５０００μｇ ／ｍｌ。
１０６コロロ二−の場合には１〜５００μｇ ／ｍｌが
適当である。
適当である。
かかる培地を用いたボルテ゛テラ属に属する微生物の培
養方法及び条件は特に限定されるものではなく、従来公
知の方法及び条件を採用できるが、静置培養よりは振と
う培養の方が好ましく、培養温度は３５℃前後、培養時
間は１０〜１００時間が適当である。
養方法及び条件は特に限定されるものではなく、従来公
知の方法及び条件を採用できるが、静置培養よりは振と
う培養の方が好ましく、培養温度は３５℃前後、培養時
間は１０〜１００時間が適当である。
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例 １
ボルデテラパタシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕ
ｓｓｉｓ ）（百日咳菌）東浜株Ｉ相菌の凍結乾燥菌体
を１％カザミノ酸溶液に懸濁させ、脱繊維馬血液を２０
％含むボルナ・シャングー（Ｂｎｒｄｅｔ −Ｇｅｎｇ
ｏｕ）培地（以下ＢＧ培地という）で３５℃、３日間培
養した。
ｓｓｉｓ ）（百日咳菌）東浜株Ｉ相菌の凍結乾燥菌体
を１％カザミノ酸溶液に懸濁させ、脱繊維馬血液を２０
％含むボルナ・シャングー（Ｂｎｒｄｅｔ −Ｇｅｎｇ
ｏｕ）培地（以下ＢＧ培地という）で３５℃、３日間培
養した。
この菌を１白金耳かき取り、更にＢＧ培地で２４時間リ
フレッシュした菌をＳＳ培地に懸濁し、５×１０３コロ
ニー／ｍｌの接種菌懸濁液を得た。
フレッシュした菌をＳＳ培地に懸濁し、５×１０３コロ
ニー／ｍｌの接種菌懸濁液を得た。
予め所定の終濃度（μｇ ／ｍｌ）となるように、シク
ロデキストリン又はその誘導体を含む１．２％寒天濃度
の固型ＳＳ培地を調製しておき、１プレート当りの菌数
が１０３コロニーとなるようにスプレッドした。
ロデキストリン又はその誘導体を含む１．２％寒天濃度
の固型ＳＳ培地を調製しておき、１プレート当りの菌数
が１０３コロニーとなるようにスプレッドした。
３５℃で４日間培養後の菌生育状態（コロニー数）を第
１表に示した。
１表に示した。
なお、用いたエーテル化シクロテ゛キストリンは 、
Ｈ，５ｃｈｌｅｎｋ ら の 方 法（Ａｂ
ｓｔｒ、Ｐａｐ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、５ｏｃ０、１４
９、 ｌＩＣ１１９６５参照）に準拠して合成された。
Ｈ，５ｃｈｌｅｎｋ ら の 方 法（Ａｂ
ｓｔｒ、Ｐａｐ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ、５ｏｃ０、１４
９、 ｌＩＣ１１９６５参照）に準拠して合成された。
以下、α−シクロデキストリンをα−ＣＤ、そのメチル
化物（ヘキサキス（２，６−０−ジメチル）α−シクロ
テ゛キストリン）をＭｅα−ＣＤ、エチル化物をＥｔα
−ＣＤ、β−シクロテ゛キストリンをβ−ＣＤ、そのメ
チル化物をＭｅβ−ＣＤ （ヘプタキス（２，６−０−
ジメチル）β−シクロデキストリン）、エチル化物をＥ
ｔβ−ＣＤと略記する。
化物（ヘキサキス（２，６−０−ジメチル）α−シクロ
テ゛キストリン）をＭｅα−ＣＤ、エチル化物をＥｔα
−ＣＤ、β−シクロテ゛キストリンをβ−ＣＤ、そのメ
チル化物をＭｅβ−ＣＤ （ヘプタキス（２，６−０−
ジメチル）β−シクロデキストリン）、エチル化物をＥ
ｔβ−ＣＤと略記する。
第１表から明らかな如く、シクロデキストリン又はその
誘導体を培地に添加することにより、百日咳菌の生育が
促進されている。
誘導体を培地に添加することにより、百日咳菌の生育が
促進されている。
また、その効果はα−ＣＤ又はβ−ＣＤよりもそれらの
メチル化物又はエチル化物の方が優れており、α体より
もβ体の方がより優れていることがわかる。
メチル化物又はエチル化物の方が優れており、α体より
もβ体の方がより優れていることがわかる。
実施例 ２
実施例１と同様の方法で得られた接種菌懸濁液を、所定
濃度のＭｅβ−ＣＤを含むＳＳ液体培地１０ｍ１に接種
サイズが１０６コロニーとなるように接種し、Ｌ字型試
験管で往復振とうしながら３５℃で培養した。
濃度のＭｅβ−ＣＤを含むＳＳ液体培地１０ｍ１に接種
サイズが１０６コロニーとなるように接種し、Ｌ字型試
験管で往復振とうしながら３５℃で培養した。
得られた培地の濁度（ＯＤ６５０ｍμ）の経時変化は第
２表の通であった。
２表の通であった。
第２表より、Ｍｅβ−ＣＤを培地に１〜５００μｇ／ｍ
ｌの範囲で添加すると、添加量の増大と共に培地の濁度
が増大、即ち菌の生育が促進されていることがわかる。
ｌの範囲で添加すると、添加量の増大と共に培地の濁度
が増大、即ち菌の生育が促進されていることがわかる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属に属する微
生物を培養するに際し、培地中にシクロデキストリン又
はその誘導体を加えることを特徴とする、ボルデテラ属
に属する微生物の培養方法。 ２ シクロデキストリンの誘導体がエーテル化シクロデ
キストリンである、特許請求の範囲第１項記載の培養方
法。 ３ エーテル化シクロデキストリンがメチルシクロデキ
ストリンである、特許請求の範囲第２項記載の培養方法
。 ４ ボルデテラ属に属する微生物を培養するための、シ
クロデキストリン又はその誘導体を含有する培地。 ５ シクロデキストリン又はその誘導体を１〜５０００
μｇ ／ｍｌの割合で含有する、特許請求の範囲第４項
記載の培地。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16347781A JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
| US06/427,039 US4500639A (en) | 1981-10-15 | 1982-09-29 | Culturing Bordetella in media containing etherified cyclodextrin |
| AU89192/82A AU554066B2 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-07 | Cyclodextrin additive to bordetella culture medium |
| CA000413002A CA1198702A (en) | 1981-10-15 | 1982-10-07 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| ES516507A ES8404407A1 (es) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Un metodo para el cultivo estable y eficaz de microbios del ginero bordetella. |
| DE8282305465T DE3279841D1 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| AT82305465T ATE44979T1 (de) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Verfahren zur zuechtung von mikroben der gattung bordetella und naehrboden. |
| EP82305465A EP0077646B1 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| SU823505901A SU1384206A3 (ru) | 1981-10-15 | 1982-10-15 | Способ культивировани бактерий ВоRDетеLLа реRтUSSIS |
| KR8204639A KR870001650B1 (ko) | 1981-10-15 | 1982-10-15 | 보르데텔라 속에 속하는 미생물의 배양방법 및 배양배지 |
| MYPI87000101A MY100052A (en) | 1981-10-15 | 1987-02-05 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16347781A JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5867182A JPS5867182A (ja) | 1983-04-21 |
| JPS5953833B2 true JPS5953833B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=15774613
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16347781A Expired JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5953833B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0147685B1 (de) * | 1983-12-17 | 1989-04-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Ether des beta-Cyclodextrins und ein Verfahren zu ihrer Herstellung |
| JPS61271986A (ja) * | 1985-05-27 | 1986-12-02 | Agency Of Ind Science & Technol | リンパ系細胞用培地 |
| GB201316351D0 (ja) * | 2013-09-13 | 2013-10-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa |
-
1981
- 1981-10-15 JP JP16347781A patent/JPS5953833B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5867182A (ja) | 1983-04-21 |
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