JPS6012039B2 - 新規抗生物質その製法および抗菌性および抗カビ性組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な水に不溶性の抗生物質パプラカンジンの
特定の成分に関するものである。

この物質は主成分ＡおよびＢならびに成分Ｃ，Ｄおよび
Ｂを含む多くの副成分またはこれらの成分の２種以上の
混合物の形で存在する。これらの混合物は便宜上以下“
パプラカンジン”〔抗生物質Ａ ３２２８３〕と呼ばれ
る。

そして本発明はこの新規抗生物質の特定の成分およびそ
の誘導体ならびにこれらの化合物を含む製剤およびこれ
らの物質の製法に関するものである。このパプラカンジ
ンという抗生物質は、本発明者の研究室でＡ ３２２８
３という記号で保管されている新規な微生物を培養する
ときに生成されるものである。

このＡ３２２８針珠は以前アルトリニウムヘソスベルム
ム（コルダ）エリス〔〜ｔｈｒｉｎｉｕｍｐｈａｅＳＯ
Ｓｐｅ皿ｕｍ（Ｃｏｒｄａ）ＥＩＩｉＳ〕と呼ばれたパ
プラリア スヘロスベルマ（ベルス）へ‐ネル〔Ｐａｐ
ｕｌａｒｉａ ｓｐｈａｅｒｏｓｐｅ肌ａ（Ｐｅｒｓ．
）Ｈ″ｏｈｎｅｌ〕種に属すべきものである。

この 種 は Ｅｍｓ の 著 書 “ Ｄｅｍａｔｉ
ｏｎｓＨｙｐｈｏｍｙｃｅｌｅｓ”（１９７１）の第５
６９頁にアルトリニウム ヘソスベルムムの所に詳しく
記載されている。Ａ３２２８３株は米国農務省の北方地
区研究所（イリノイ州べオリア在）にＮＲＲＬ８０８６
号として寄託され、また日本国工業技術院に微生物工業
技術研究所に徴工研菌寄第３４７９号ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎ
ｏ．３４７９として寄託されている。抗生物質パプラカ
ンジンはパプラリア スヘロスベルマ種特にＮＲＲＬ８
０８母珠を培養したときに作られる。

パプラカンジンを作るにはパプラリアスヘロスベルマま
たはパプラカンジンを生成する突然変異体を炭素源と窒
素源と無機塩類とを含有する水性の栄養夜中で、この栄
養液が本質的な抗生作用を示すまで好気的に培養し、こ
こで抗生物質のパプラカンジンを分離する。抗生物質は
パプラカンジンを生成する突然変異体は紫外線またはＸ
線の作用あるいはナイトロジェン マスタード油の作用
で得られ、ＮＲＲＬ８０８６（Ａ ３２２８３）株を使
うのが好ましい。炭素源としては次のものがあげられる
。

すなわち同化できる含水炭素例えばぶどう糖、庶糖、乳
糖、マンニツト、でん粉、グリセリンさらにはィノシッ
ト。窒素を含む栄養物としては次のものが挙げられる。
アミノ酸、ベプチドおよびたん白質ならびにその分解生
成物であるべプトンやトリプトン、さらには肉エキスや
とうもろこし、麦のような穀粒、アルコール製造の蒸留
残分、酵母、豆特に大豆、種子例えば綿実などの水熔性
部分である。しかしアンモニウム塩や硝酸塩も使える。
栄養液はその他の無機塩類の中では例えばアルカリまた
はアルカリ士金属マグネシウム、鉄、亜鉛およびマンガ
ンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩、りん酸塩を含むことがで
きる。培養は好気的に例えば静かな表面培養法で行なう
かあるいは有利には空気または酸素でふりまぜもしくは
かきまぜながら液内培養法をふりまぜ容器中でまたは公
知の醗酵器中で行なう。

温度としては１８〜４０ｑＣが適当でありことに約２ｙ
Ｃがよい。一般に１．５〜５日後に培養液に本質的な抗
菌作用が示される。培養を多段式に行なうのが好ましい
。すなわち先ず液体の栄養媒質中で１つあるいはそれ以
上の予備培養を作り、次にそれを例えば１：２０の割合
で本来の生産媒質に接種するのである。予備培養は例え
ば固体栄養塔地上に約１４日間生長させることによって
得られる胞子のついたミセル（菌糸体）を液体煤質中に
接種しそして４即時間生育させることによって得られる
。抗生物質を培養煤質から分離するのは抗生物質の化学
的・物理的および生物学的性質を考慮しつつ公知の方法
で行なう。

こうして抗生物質は例えば未ろ過の培養液から水と少し
しか混じらない有機溶媒例えば酢酸ェステル（以下、酢
酸エチルを意味する）で抽出される。

このいわゆる“全培養液法”（‘‘ｗｈｏｌｅ−ｂｒｏ
比ｐｒＭｅｓｓ’’）は、抗生物質がミセル中にも培養
ろ液中にも存在するから特にこれが利用される。抗生物
質は含水有機相例えば酢酸ェステル中に集まりそしてこ
の相は抽出の終った培養液とスラッジ（抽出の終ったミ
セルと培養液中の固体成分）から分離される。抽出残分
は同じかまたは別の溶媒を使って１回あるいはそれ以上
新たに抽出にかけられる。例えばろ過助剤でろ過された
ミセルまたは培養ろ液をそれだけで抽出することもでき
る。

水洗されたミセル（ろ過助剤もいつしよに）を水と混じ
ることができる有機溶媒で抽出することが好ましい。そ
のような溶媒は例えば１〜４個の炭素原子をもつ低級ア
ルカノール例えばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、イソプロパノール、さらにはジメチルスルホキシド
、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、メチルアセタ
ミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトンまた
はこれらの溶媒と水との混合物ことに含水メタノールで
ある。培養ろ液は水と混じらない溶媒例えば酢酸ェステ
ルや水と混じらないアルコール例えばｎーブタノール、
高級脂肪族ケトン例えばメチルィソプロピル ケトンで
抽出される。溶媒を蟹去した後に得られる粗生成物の精
製には、抽出、沈降、混じらない２つの溶媒の間におけ
る分配または吸着が利用されるが何よりもよいのはクロ
マトグラフィーの利用である。

そこで溶解したまたは乾燥した粗生成物を抗生物質が溶
けない溶媒で連続式の単純な抽出によって、粗生成物例
えば培養スラッジの酢酸ェステル抽出物から不耗物質の
かなりの部分が分離される。抗生物質が溶けないそのよ
うな溶媒としては、石油エーテル、シクロヘキサンのよ
うな炭化水素または塩化メチレン、クロロホルム、四塩
化炭素のような無水のハロゲン化炭化水素である。また
粗生成物を例えばメタノールに溶かし、そして活性炭、
シリカゲル、けし、酸マグネシウム、酸化アルミニウム
あるいはそれらの混合物のような吸着助剤または吸着樹
脂例えば“セフアヂックス”（Ｆａ．Ｐｈａｒ−ｍａｃ
ｉａＦｉ肥Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｕｐｐｓａｌａ製品）
のような交差結合したデキストランで同伴物質から分離
することもできる。例えばシリカゲルを使い、なるべく
少量の活性炭を添加した力ラムクロマトグラフィを繰返
すことによって粗生成物の精製ができる。抗生物質はク
ロロホルムまたは四塩化炭素およびメタノールを使って
傾斜法により溶離され、そのとき極性の強い溶媒の含有
率％は階段的に上昇する。培養スラッジの抽出で得られ
た抽出液を、シリカゲルと例えば５重量％の活性炭との
混合物でそして例えばクロロホルム／メタノールを熔離
液としてクロマトグラフにかけると、培養スラッジから
抽出された抗生物質の全量がメタノール濃度５〜２０％
熔出液にほとんど分配されていることがわかる。混合し
ない溶媒間の上記の分配はＣｒａｉｇの装置で向流分配
として行なうこともできる。

溶媒系としては例えば酢酸ェステル、シクロヘキサン、
メタノールおよび水の混合物が使える。抗生物質の個個
の単位成分を得るには、その分離は例えば予備薄層クロ
マトグラフィーの方法により分析的証明のために書かれ
ている条件で行なうことができる。

分離はカラムクロマトグラフイーによるのが有利であり
、その際吸着剤としては例えばシリカゲル（１〜５％の
活性炭含有）を便し、そして港離はクロロホルムとメタ
ノールで傾斜法によって行なうのが好ましい。樋性溶媒
の濃度の上昇はなるべく小さい％の段階で行なう（例え
ばメタノール５〜２０％）かまたは連続的な傾斜済雛法
で行なうのがよい。抗生物質はメタノール濃度１０％で
溶離するのが好都合である。精製法は場合によっては繰
返し行なうことができる。シリカゲル（例えば溶雛剤と
してクロロホルムーメタノールまたは酢酸ェステルーア
セトン−水）上の薄層クロマトグラフィーおよびカンジ
タアルピカンス（Ｃａｎｄｉ船ａｌｂｉｃａｎｓ）のバ
イオオートグラフィーでは少なくとも５つの抗生活性成
分を分離することができる。

シリカゲル上の薄層クロマトグラフィーでのそれらのＲ
ｆ−値は表１に示されている。系１はクロロホルムーメ
タ／−ル（４：１）２回展開、系２は酢酸ェステルーア
セトン−水（７２：２４：４）２回展開である。表 １
抗生物質はその約７５％は主成分であるＢからなり、約
１０％は成分Ａから成る。

成分ＡとＢに対してはカンジタ アルピカンスを試験微
生物として使って系列希釈試験で最少生育抑止濃度（Ｍ
ＩＣ）は０．００６ｒ／の‘と０．１ｒ／の‘の間であ
ることがわかった。

培養煤質においてもまた個別の分離段階においても抗生
作用を検定するには試験微生物としてカンジタ アルピ
カンスは特に適している。

この抗生物質は主成分Ａ，Ｂ，ＤおよびＥの元素分析に
よれば元素としてＣ，日および○とからだけでできてい
る。

抗生物質パプラカンジンＢは次のような化学的および物
理的性質をもっている。

弱酸性の白色粉状で、アルコール例えばメタノール、エ
タノール、ｎープロパノールのような低級ァルカノール
ならびにケトン例えばアセトン、メチルィソブチルケト
ンのようなジー低級アルキルケトンさらにはジメチルホ
ルムアミドやジメチルスルホキシドなどに可溶である。

酢酸ェステルや塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭
素のような塩素化された炭化水素には鍵溶（１０〜１０
０地／夕）であり、水、石油エーテル、エーテル、へキ
サンには実質的に不溶である。融点１９３〜１９７℃（
分解）元 素 分 析（Ｃ４７日鼠○，７として計算）
Ｃ（計算） ６２．５％ （測定値） ６１．２
８％日（計算） ７．１６％ （測定値） ７．
１８％〔Ｑ〕色。

＝５０‐〇十１０（Ｃ＝○‐４６メタノール中）紫外ス
ペクトル（エタノール中） ＾ｍ瓜２３初ｍ （ごニ４２０００）
２４Ｍｍ （ごニ４２４００）２６袖
ｍ （ごニ４４８００）３０肌ｍ
（ごニ３１２００）赤外スペクトル（ＫＢ
ｒ中）は後記例３参照。

１００ＭＨｚの核磁気共鳴（ＮＭ旧）スペクトルは添付
図面１参照アセチル誘導体について蒸気圧浸透法で分子
量を測定した結果から分子量は９００〜９５０と見るこ
とができる。

この抗生物質は遊離のカルボキシル基とメトキシ基はは
もっていない。質量スペクトルでは比較的小さい断片が
認められるだけである。分子イオンのピークは認められ
ない。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでは４５〜４８個のＣ
原子のシグナルが確認される。

パプラカンジンの元素分析と分解研究の結果をいつしよ
にしてＣ４７日６４０，７という実験式が計算される。
無水酢酸とピリジンで多くあるヒドロキシル基（その中
の２つはフェノール性）はアセチル化される。

アセチル基の数はスペクトルでは評価することが困難で
ある。１００ＭＨｚ−ＮＭ旧スペクトルでは約２肌に多
くのアセチル基のシグナルが認められる。

分解研究に基づいての９個のアセチル基が存在すると考
えられる。分子量は浸透圧法で１２６７に定まった。ア
セチル誘導体に対しては次の物理化学的データが得られ
た。元 素 分 析（Ｃ６５日解０２６として計算）Ｃ
：計算 ６１．０２％ 測定 ６０．７４％
Ｈ：計算 ６．４６％ 測定 ６．５０％
紫外スペクトル（エタノール中）入ｍ松 ２１６ｎｍ
（ご：２３２００）２４かｍ （ご
ニ２５６００）２６桝ｍ （ごニ２７６
００）２９則ｍ （肩）赤外スペ
クトル 後記例６参照 〔Ｑ〕色０＝−６±１０（Ｃ＝０．７６５クロロホルム
中）パプラカンジンＢを水素添加すると７モルの水素が
吸収される。

この水素添加生成物の′Ｈ−ＮＭ旧スペクトルではオレ
フィン性プロトンのシグナルはすべて消失している。

６．３脚における２つの芳香族性プロトンはなお認めら
れる。

赤外スペクトル（ＫＢｒ中）は例７に記載されている。
水素添加物には次のような物理化学的データが示される
。元 素 分 析（Ｃ４７日柊○，７として計算）Ｃ：
計算 ６１．６９％ 測定 ６０．９４％Ｈ
：計算 ８．５９％ 測定 ８．５６％０
：計算 ２９．７２％ 測定 ３０．１０％
融点 １２５〜１３０℃紫外スペクトル（エタノール
中） 入ｍ町 ２７肌ｍ（ごニ３１００） 〔Ｑ〕谷＝７±ｌｏ（ｃ＝０．２１４メタノール中）抗
生物質プラカンジンの成分Ａは次のような化学的、物理
的性質を示す。

弱酸性で結晶状の白色物質であり、成分Ｂと同様の溶解
性をもっている。融点１７１〜１７３℃（分解）元素分
析 Ｃ： 測定 ６１．８８％ Ｈ： 測定 ７．３４％ 紫外スペクトル（エタノール中） ＾ｍ松 ２３かｍ 肩 ２４２ｎｍ（Ｅｍ松ニ４２５） ２６則ｍ（Ｅｍ松ニ５２０） 赤外スペクトル（ＫＢｒ中）は例３に記載してある。

〔は〕律＝十３０±ｌｏ（ｃ＝０．４１９メタノール中
）添付の図２は１００ＭＨｚ−ＮＭ旧スペクトルを示す
。

パプラカンジンＡは遊離のカルボキシル基とメトキシ基
はもたない。質量スペクトルでは比較的４・さし、断片
が認められるだけである。分子イオンは見られない。実
験式は恐らくＣ５ｏ〜５３日７２〜花○，？〜，９であ
る。無水酢酸とピリジンで種種のヒドロキシル基をアセ
チル化することができた。

アセチル誘導体の赤外スペクトル（塩化メチレン中）は
例９に与えられている。アセチル基の数は評価困難であ
るが、９〜１１と推測される。パプラカンジンＡのアセ
チル誘導体は次の物理化的性質をもつ。元素分析 Ｃ： 測定 ６１．９１％Ｈ： 測
定 ７．２２％０： 測定
３０．８１％紫外スペクトル（エタノ
ール中）〔入〕ｍ松 ２４瓜ｍ（ＢｍａＸニ２７０）２
６幻伽（Ｅｍ泌ニ３３０）（Ｑ〕色０＝一１５±１０（
ｃ：０．２４９クロロホルム中）パプラカンジンＡをミ
クロで水素添加すると７モルの水素が吸収される。

抗生物質パプラカンジン成分Ｄは次のような化学的、物
理的性質をもつ。

弱酸性で粉状の白色物質であり、成分Ｂと同様の溶解性
をもつ、融点１２７〜１３０つ○。元素分析 Ｃ： 測定 ６２．３２％Ｈ： 測
定 ７．５９％紫外スペクトル（
エタノール中）〔入〕ｍ勘 ２３仇ｍ（ＥｍａＸ＝３４
０）２３則ｍ（肩）２６１ｎｍ（Ｅｍ奴二３２０） 〔Ｑ〕色０＝十７±ｌｏ（ｃ＝０．２５０クロロホルム
中）赤外スペクトル（ＫＢｒ中）は例５に記載されてい
る。

抗生物質パプラカンジンの成分Ｅは次のような化学的、
物理的性質をもつている。弱酸性の白色粉状物質で成分
Ｂと以た溶解性をもつ。元素分析 Ｃ： 測定 ６４．７１％Ｈ： 測
定 ８．４３％紫外スペクトル（
エタノール中）＾ｍ似 ２３仇ｍ（ＥＭＸニ２７０） ２３７ｎｍ （肩） ２６７ｎｍ（Ｅｍ泌；３００） ２９かｍ（肩） 赤外スペクトル（塩化メチレン中）は例５に記載されて
いる。

バプラカンジンＢの構造解明 ０．州のメタノール性水酸化カリウム溶液中でパプラカ
ンジンＢのアルカリ性加水分解を行なうと３つの都片が
分離される。

図式 １ パプラカンジンＢのアルカリ性加水分解７−
ヒドロキシ−／ナー１，３，５−ト リェンーカルボン酸 １ ６ーヒドロキシ−７，１３ージメチルーベンタデカ
ー１，３，７，９ーテトラーエンーカルポン酸ーメチル
ェステルこの化合物は反応液をｐＨ７．５で酢酸ェステ
ルで抽出し次いでジアゾメタンでェステル化することに
よって得られる。

この二重結合４つをもつ不飽和Ｃ−１６一脂肪酸の構造
は次の図式２のように証明される。

図式２：６−ヒドロキシ−７，１３−ジメチルーベンタ
デカ一１，３，７，９ーテトラーェンーカルボン酸ーメ
チルェステルの分 解 メチルェステルｌｂのアセチル化によって質量３４８を
もつモノアセテート５ができた。

メチル基の１３一位置は５の１３Ｃ−ＮＭ旧スペクトル
の解釈から明らかとなった。５の水素添加生成物である
６な質量スペクトルにおいてｍ′ｅ３５６に１つの分子
イオンを示した。

メチルヱステルｌｂの水素添加は他方において７−ヒド
ロキシ−８，１４−ジメチルーパルミチン酸−メチルェ
ステル７を生じてその分子イオンが質量スベクトルでｍ
／ｅ３１４に見出された。それのモノアセテートは再び
上記の化合物６と同じであった。この脂肪族基の求める
べき構造は次にメチルェステルｌｂのオゾン分解によっ
て証明された。その際反応混合物からしゆう酸ジメチル
ェステル８と４ーメチルカプロン酸ーメチルェステル９
を真正の物とガスクロマトグラフィ‐で比較することに
より証明することができた。２ ７ーヒドロキシーノナ
ー１，３，５−トリエンーカルボソ酸メチルェステルこ
の化合物は風２．５で酢酸ェステルで反応液を抽出し次
でジアゾメタンでェステル化することによって得られた
。

このメチルェステルの紫外、赤外スペクトルおよび高分
解能の質量スペクトル、ＮＭＲースベクトル（二重共鳴
試験で）によって＊上記の求める構造が確立された。こ
の二重結合３個をもつ不飽和脂肪酸の構造はメチルェス
テルをＣの３（ジョーンズ試薬）で酸化することによっ
て相当するケトン４になることが確証された。

このケトンの質量スペクトルではｍ／ｅｌ９４に分子イ
オンが存在する。

ＮＭＲースベクトルでは７−位置でプロトンが消失して
いる。３ 糖部分Ｃ，９日２６０，３ この部分は反応液をセフアデツクス−ＬＨ−２０のクロ
マトグラフィーでｐＨ７．５に中和した後に残る反応液
から得られる。

このァセテ−ト１０ａの質量スペクトル、１０仙川ｚお
よび３６■ＭＨｚのＮＭＲ−スペクトルおよび１３Ｃ−
ＮＭＲ−スペクトル（非共鳴−脱カップリング）の解釈
は図式３を参照すると提示された構造の正しいことが証
明される。

図式 ３：糖部片の分解 アセテート１０ａの質量スペクトルではｍ／ｅ８４０に
分子イオンが見出される。

ジューテロ無水酢酸でアセチル化すると１０ｂができる
がその分子イオンは質量スペクトルではｍ′ｅ８６７に
見出される。したがって９個のアセチル基の存在が証明
される。３のメタノール分解では何も満足な成果は得ら
れない。

なかんずく芳香族部片は分離することができなかった。
したがって３はジアゾメタンでジメチル誘導体１１に変
えられ、これはアセチル化後ｍ／ｅ７８４にＭ十をもっ
たへクタアセテート１２を与えた。１１のメタノール分
解はそのとき３つの部片を生じ、すなわちメチル−ａ−
Ｄ−ガラクトピラノシド１３ａ，少量のメチル−８一Ｄ
ーガラクトピラノシド１３ｂ（そのテトラアセテート１
４ａと１４ｂは真正品と同じであった）および化合物１
５（これは質量スペクトルでｍ／ｅ３２８に分子イオン
を生じそれは高分解能でＣ，５日２。

０８）である。

１５のアセチル化によってｍ′ｅ４９６にＭ＋をもつテ
トラアセテート１６ができる。

最後に１５を過よう素酸で過よう素酸塩分解すると化合
物１７を生じ、これは質量スペクトルでｍ／ｅｌ９４に
分子イオンを示した。１ ０ａの３６０一ＭＨｚ−ＮＭ
旧−スペクトルの解釈に基づいて見るとガラクトース残
基は分子の残りの部分と３−グリコシド状に結合してい
る。

２つの脂肪酸はェステル状に糠部片に結合しているとい
う仮定のもとに見出された３つの都片の実験式を合計す
るとパプラカンジンＢに対してはＣ４７日６４０，７（
分子量９００）とう実験式に到達する。

この式は元素分析の結果と一致する。上記の構造解析の
結果から、成分Ｂの構造は以下の式で表わされることが
判明した。

同様にして、成分Ａ，成分Ｃおよび成分Ｄの機、も以下
の式で表わされることが判明した。

成分Ａ： 成分Ｃ： 成分Ｄ： 従って、本発明に係る抗生物質パプラカンジンの特定の
成分Ａ，Ｂ，ＣまたはＤは一般式（式中Ｒは式 で表わされる基、式 で表わされる基、式 で表わされる基および水素原子から成る群から選ぶもの
とする）で表わされる化合物である。

この抗生物質の譲導体というときには前述のように次の
ようなェステルとエーテルならびに水素添加生成物およ
びそのェステルとエーテルをいうものと解されたい。

ェステルは例えばアルコール性のヒドロキシル基が炭素
原子数１〜２０のカルボン酸またはチオカルポン酸でェ
ステル化されているようなものを指す。このような酸は
とりわけぎ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバリン酸のよう
なそして場合によって置換されていることもある低級ァ
ルカン酸、さらには安息香酸、チオ安息香酸、ナフトェ
酸、フェニル酢酸、フェニルプロピオン酸のようなフェ
ニル低級アルカン酸のような単環式または二環式芳香族
もしくは芳香脂肪族の酸である。これらの酸の置換基は
例えばふつ素、塩素、臭素、よう素のようなハロゲン原
子、ニトロ基、遊離またはェステル化もしくはエーテル
化されたヒドロキシル基例えばアセトキシ基のような低
級アルカノィルオキシ基、メトキシ基のような低級アル
コキシ基、メチルメルカプト基のような低級アルキルメ
ルカプト基、遊離のまたは官能性に変えられたカルボキ
シル基例えばメトキシカルボニル基のような低級アルコ
キシカルボニル基、カルバモィル基、シアン基、置換さ
れていてもよいアミノ基例えばモノ−またはジー低級ア
ルキル化されたもしくはＮ−アシル化されたアミノ基、
例えばメチルアミノ基、ジメチルアミノ基、低級アルカ
ノィルアミノ基例えばアセチルアミノ基があげられる。
エーテルはことに一方または両方のフェノール性ヒドロ
キシル基が、アルコールとして先ず第一に低級アルカノ
ールなかんづくメタノールでエーテル化された化合物で
ある。

抗生物質パプラカンジンおよびその誘導体は叢生菌（Ｈ
ｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅ）例えばＴｒにｈｏｄｅ皿ａｍｅ
ｎね−ｇｒｏｐｈれｅに対して抗菌作用をもつ外、カン
ジダアルピカンス、Ｔｏｍｌｏｐｓｊｓ 舷ｔｔｉｌａ
，Ｔｏｒ山ｏｐｓｉｓ ｆａｍａｔａおよびＨａｎｓｅ
ｎ山ａ ａ皿ｍａｌａのような酵母種の様様のカビ（ｆ
肌ｇｉ），にとりわけ非常に良好な特殊な作用をもって
いる。

臨床的に現われてくる約２の蚤類のカンジダ ァルピカ
ンスの株に対して傾斜プレートテスト〔Ｗ．Ｓｚｉ舷ｌ
ｓｋｉ．Ｓｃｉｅｎｃｅｌ１６，４６（１９５２）参照
〕で試験したところ最少抑止濃度｛ＭＩＣ）は０．００
６〜０．１ｙ／奴‘であった。パプラカンジンは公知の
抗菌性物質に比し嚢性が非常に少ないことですぐれてい
る。この新規の抗生物質およびその議導体はしたがつて
前記した菌ことにカンジダ アルピカンスによって起る
伝染病の防疫または殺菌消毒剤として使うことができる
。抗生物質パプラカンジンおよびその誘導体は医療剤と
して前述したように例えば医薬製剤の型で使用すること
ができる。

これは局所用、経口用または非経口用に適した医療用有
機もしくは無機の担体との混合物中に前記の化合物を含
む。それにはこの新規化合物と反応しない例えばゼラチ
ン、乳糖、でん粉、ステアリン酸マグネシウム、植物油
、ベンジルアルコールのような物質またはその他の医療
用担体物質が考えられる。この医薬製剤は錠剤、糖衣錠
、粉末、坐薬または溶液、懸濁液、乳剤、クリーム、軟
こうとして作られる。これらは場合によっては滅菌され
そして（または）保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤
のような助剤を含めることもある。またこれらは他の治
療価値ある物質を含むこともできる。本発明を以下の実
施例で詳しく説明するが温度は。

０を意味する。

例１ パプラリア スヘロスベルマＡ ３２２８孫朱のよく生
えた額斜寒天管を０．２モルのりん酸塩緩衝液５の‘で
ｐＨ７とした。

水道水１〆当り大豆粉２０夕とマンニット２０夕を含み
そしてそのｐＨを滅菌前にＩＮの水酸化ナトリウム溶液
でｐＨ８．５にした栄養液それぞれ１００の‘の入った
１つの邪魔板のあるェルレンマィャーフラスコ３個にパ
プラリアの懸濁液それぞれ５泌を接種し、これを４劉時
間回転式の振とう器で毎分２５の副転とし２３ｑ○で保
温した。こうしてできた溶媒液それぞれ２５の‘を４つ
の邪魔板のある６個の２そのェルレンマイャーフラスコ
に上記の栄養液５００肌‘を入れたものに接種した。こ
のフラスコを次に毎分１２０回転の振とう器で２３午○
，４錨時間保温した。２そのフラスコから培養液１．５
そを、上記栄養液３０そを含む５０〆醗酵機に移し４報
時間２３ｏ に保温した。

次に培養液１５〆を上記栄養液３００夕を入れた醗酵機
に移した。この醗酵機は全容量５００そでそして６枚羽
根のタービンかきまぜ機と４つの邪摩板をもつ。醗酵機
内の培養条件は、１気圧、毎分４５０回転、温度２３℃
，空気吹込１夕／Ｖ／Ｖ／分である。この条件は亜硫酸
塩液中で測った酸素吸収率２００ｈＭＱ／夕／時に相当
する。抗生物質Ａ ３松８３の最適の生成は約６畑時間
培養した後に得られる。そのとき培養液はｐＨ６．７を
示す。カンジダ アルピカンスで、径６柳のホアツトマ
ンＡの円板を使って寒天拡散テストを行った場合１０〜
１２肋の菌の生育阻止帯を与へる活性を示す。例２ 例１で得た培養液６００夕に過助剤デカラィト〔Ｄｅｃ
ａｌｉｔｅ（けいそう士）〕２％を加えてろ過する。

このろ液５６０そを水酸化ナトリウム溶液でｐＨ８．６
とし、連続式抽出機で酢酸ェステル２：１の割合で２回
抽出する。不活性の水性精製液は捨てる。酢酸ェステル
相６００夕は減圧で濃縮し４５その濃縮物とする。上記
のろ過により分離した９１ｋ９のミセルを１回目はメタ
ノール２００夕，２回目は１００夕を加えてかきまぜそ
の都度ろ過する。

不活性のミセルは捨てる。メタノール抽出物３００そを
減圧で濃縮する。水性ミセル抽出液３３のこなりそれは
水酸化ナトリウムでＰＨ８．４とし、そして酢酸ェステ
ル６６夕ずつで２回抽出する。不活性の水性精製液は捨
てる。ミセル−酢酸ェステル抽出液１２０そを上記の培
養液ろ液−酢酸ェステル抽出液４５夕といつしよにして
減圧で濃縮する。酢酸ェステル抽出濃縮液１．８５そと
なり、これは８５％のメタノール２そを加えられそして
石油エーテル２でずつで３回抽出する。不活性の石油エ
ーテル相は捨てそしてメタ／ール相を減圧で蒸発乾燥す
る。ねばねばした黒かつ色の残分５１夕が得られ、これ
を８５％のメタ／−ル２００地に溶かしそしてへブタン
３００の【ずつで２回抽出する。不活性のへブタン相は
捨て、メタノール相を濃縮して高真空で乾燥すると抽出
務分４１．８夕が得られる。例３ 例２で得た抽出残分から１８夕をメルク社製粒径０．０
５〜０．２肌のシリカゲル１０００夕と活性炭（登録商
標Ｎｏｒｉｔ）５０夕と９５：５重量比の混合物から成
る径５．４ｃｍ，高さ１４０狐のカラムクロマトグラフ
イーにかける。

シリカゲル−活性炭の混合物はあらかじめメタノールで
３回、次でクロロホルムで３回どろどろにまぜられた後
にろ過された。この抽出残分１２．３夕をメタノ−ル５
０の‘に溶かし、シリカゲル５０夕を泥ぜそして蒸発乾
燥する。この乾いた粉状の残分をカラムに入れる。溶雛
はメタノールの濃度を階段的に上げながらクロロホルム
ーメタノール混合液で行ないそれぞれ１〆ずつのフラク
ションとする。メタノール含量４％で始めて５０％に至
って止める。流速は５００私／時である。フラクション
は減圧で蒸発され残分は高真空で乾燥される。次に各フ
ラクションは薄層クロマトグラフィーとバイオオートグ
ラフィーの試験に基づいて集められる。１〜１６のフラ
クション（１〜４％メチタノールで溶出のもの）はごく
弱い活性なので捨てる。１７〜２３のフラクシヨン（４
〜７％メタノールで港出のもの）はパプラカンジンＤと
Ｅ（さらに精製することは例５に記載あり）を含有する
。

２４〜２７のフラクション（７％メタノールで熔出のも
の）はパプラカンジンＡを含有する。

２８のフラクション（１０％メタノールで熔出のもの）
はパプラカンジンＡとＢとの混合物を含有している。

２９〜３１のフラクション（１０％メタノールで熔出の
もの）はパプラカンジンＢを含有する。

３２〜３６のフラクション（１０〜２０％メタノールで
綾出のもの）はパプラカンジンＢの外に比較的小さいＲ
Ｆ値をもつパプラカンジンＣも含有する。

残りのフラクション（２０〜５０％メタノールで溶出の
もの）もなお少量ながらさらに活性物質を含有する。パ
プラカンジンＢを分解するには２９〜３１のフラクショ
ンの残分（１．８６夕）をアセトン／エーテルから沈で
んさせる。

融点１９３〜１９７００（分解）の無色の粉末として１
．５夕の純パプラカンジンＢが得られる。純パプラカン
ジンＡを分離するには２４〜２７のフラクションの残分
（１．５夕）をアセトン／エーテルから晶出させる。融
点１７１〜１７３℃の無色の粉末として１．２夕の純パ
プラカンジンＡが得られる。／ぐプラカンジンＢ 元素分析の結果はＣ＝６０．４５％，Ｈ＝６．９９％，
０＝３２．６２％であり、この抗生物質は赤外スペクト
ル（ＫＢｒ中）３４５０，２９７５，２９２５ ２８７
５，１６９０，１６４０（肩）、１６１５，１４６５，
１３８０，１３４５，１３００，１２６０，１１８０，
１１５０，１０７０，１０３５，１００５，９７０，８
６５，８４５伽‐１に吸収帯がある。

紫外スペクトル（ェタ／ール中）は入ｍａｘ２３かｍ（
ど＝４２０００）、２４仇ｍ（どニ４２４００）、２６
紬ｍ（ごニ４４８００）、３０仇血（ど＝３１２００）
であり、〔Ｑ〕客こ十５０十ｌｏ（ｃ＝０．４５８メタ
ノール中）、実験式はＣ４７日６４０，７となる。ＩＨ
−ＮＭＲースベクトル（ＣＤ３０Ｄ中）は添付図面１に
記載。

クロロホルムーメタノール（４：１）系、シリカゲル（
メルク社Ｆ濁４）の薄層クロマトグラフィーではＲｆ−
値＝０．４（３回展開）。証明は紫外スペクトル、よう
素または濃硫酸および加熱による。水素添加では７当量
の水素が消費される。パプラカンジン Ａ 元素分析結果はＣ＝６２．９８％，Ｈ＝７．４５％，０
＝２９．０９％、この抗生物質は赤外スペクトル（ＫＢ
ｒ中）は３４５０，２９５０，２８７０，１６９０，１
６３０，１６１０、１４６５，１４１０，１３８０，１
３４０，１３００，１２６５，１１５５，１０７５，１
０３５，１０１０，９７５，８６０，８４５Ｃの‐１に
吸収帯がある。

紫外スペクトル（エタノール中）は入ｍａＸ（Ｅ機）：
２３かｍ（肩）、２４かｍ（Ｅ＝４２５）および２６５
ｎｍ（Ｅ＝５２０）。ＩＨ−ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤ
３０Ｄ中）は添付図面２に記載。〔Ｑ〕啓＝十３１十１
０（ｃ＝０．４５１メタノール中）、クロロホルムーメ
タノール（４：１）の系、シリカゲル（メルク社Ｆ既４
）の薄層クロマトグラフィーでＲｆ−値＝０．５０（３
回展開）。証明は紫外スペクトル、よう素または濃硫酸
および加熱による。水素添加では６〜７当量の水素が消
費される。実験式は大体Ｃ５ｏ〜５３日７２〜７８０．
７〜，９となる。例４例３で得たフラクション６７〜７
０にはパプラカンジンＢが含まれ、これを２．１夕とり
セフアデックス−ＬＨ−２０を５．５〆詰めた座４弧，
高さ５０肌のカラムでクロマトグラフィーにかける。

セフアデツクス−ＬＨ−２０はアルキル化され交差結合
されたデキストランであるが、これはあらかじめ４時間
メタノール中で膨潤させる。パプラカンジンＲ２．１夕
をメタノール５の【に溶かしてカラムに入れる。２２机
のフラクションになるようにメタノールで溶酸を１時間
当り９０のとの速度で行なう。

各フラクションは減圧で溶媒から分離し、残分を高真空
で乾燥する。１〜１５のフラクション（１２０の９）は
弱い活性しかなくこれは捨てる。

１６〜２７のフラクションは純パプラカンジンＢの１．
９夕に相当し、これをアセトン／エーテルから枕でんさ
せる。

その性質は例３に記載のとおりである。例５パプラカン
ジンＤとＥとを少量含有する例３で得られた１７〜２３
のフラクション（１．５夕）をアセトソに溶かす。

０００に長時間静暦した後に不活性の物質が晶出する。

母液にはパプラカンジン○とＥが濃厚になって含まれる
。酢酸ェステルーアセトンー水（７２：２４：４）の系
、シリカ板（１００仇×２０肌，層厚１側）の厚層クロ
マトグラフィーによってＤとＥの成分は互いに分離され
る。パプラカンジン○とＥはアセトン／エーテル／へキ
サンから原色の物質として枕でんする。パプラカンジン
Ｄ 赤外スペクトルは特に３５００，２９５０，２８７０，
１７０５，１６７５，１６４０，１６２０，１４６５，
１３８５，１３５０，１３００．１２６０，１２０５，
１１５０，１０７０，１０３５，１００５，９７５肌‐
１に吸収帯がある。

その他の物理化学的性質は今までの記載のとおりである
。／ぐフ。

ラカンジンＥ赤外スペクトルはなかんずく次の帯が認め
られる。

３５００，２９５０，２８７０，１７１０，１６４０（
肩）、１６１５，１４６５，１３８５，１３５０，１３
００，１２４０，１１８５（肩）、１１５０，１０７０
，１０４０，１０１０，９７５ｃｍ‐１。

その他の物理化学的性質は既述のとおりである。例６パ
プラカンジンＢは次のようにアセチル化される。

パプラカンジンＢ２５０双９をピリジンと無水酢酸それ
ぞれ２の‘といつしよにして室温で３時間静贋する。次
に反応混合物を減圧で蒸発しそしてメタノール１％を含
むクロロホルム、シリカゲル３０タ上のクロマトグラフ
ィーにかける。無色非晶質のアセテート３００の９力ミ
得られ、これはエーテルとへキサンで２回枕でんさせる
。アセチル誘導体の赤外スペクトル（塩化メチレン中）
には次の吸収帯がある。２９７０，２８７０，１７５５
，１６４５，１６２０，１４２５，１３７５，１２２５
，１１９５，１１２５，１０８０，１０５０，１０１５
，９７０，８９０伽‐１。

紫外スペクトル（エタノール中）の＾ｍａｘは２１肋ｍ
（ご＝２３２００）、２４かｍ（ご ＝２５６００）、
２６＆ｍ（ご ＝２７６００）、２９則ｍ（肩）。元素
分析結果は、Ｃ＝６０．７４％，Ｈ＝６．５１％，浸透
法で分子量１２５０が知られる。例７ パプラカンジンＢは次のように水素添加される。

水素添加装置中のエタノール１５肌に入れてあらかじめ
水素添加された酸化白金５０の９にパプラカンジンＢ２
５０雌を加えて行なう。６．８当量に相当する４４泌の
水素が吸収される。

ろ過しそしてろ液を蒸発させた後無色の残分２４３の９
が得られる。それをメタノール８％を含むクロロホルム
とシリカゲル５０タ上のクロマトグラフィーにかける。
純水素添加生成物１０６の９が得られる。赤外スペクト
ル（ＫＢｒ中）の吸収帯は３５００，２９５０，２８６
０，１７２０，１６１０，１４６５，１総５，１２５０
，１１８５，１１５０，１０９５，１０７０，１０３０
，１００５，滋０肌‐１。

ＩＨ−ＮＭＲスペクトルでは成分Ｂのオレフィン性ブロ
トンのシグナルは消失している。その他の物理学化学的
性質は既述のとおりである。

例８ パプラカンジンＢは次のようにメチル化される。

成分Ｂ２００雌をメタノール２机とに溶かし、エーテル
に溶かしたジアゾメタンの溶液といつしよにして０℃で
静瞳する。蒸発後に２１０の２の残分が得られる。メチ
ルエーテル誘導体は、クロロホルムーメタノール（５：
１）の系でシリカゲル一厚層板の予備薄層クロマトグラ
フィーによって得られる。無色非晶質のパプラカンジン
Ｂーモノメチルェーテル１０６の９が得られ、それはア
セトン／エーテル／へキサンから沈でんさせる。赤外ス
ペクトル（ＫＢｒ中）には次の吸収帯が存在する。３４
５０，２９５０，１７００，１６４０（肩），１６１０
，１４６０，１４４０，１３４５，１３００，１２６０
，１１５５，１０７０，１０３０，１０１０ｃｍ‐１。

紫外スペクトル（エタノール中）の＾ｍ批（ごｍ町）は
２３５ｎｍくご＝３７６００＞、２６７ｎｍ（ご；３９
０００）、２９５ｎｍ（肩）。ＩＨ−ＮＭ収 スペクト
ルによればフェノール性メチル基が存在する。その他の
生成物としてパプラカンジンＲ−ジメチルェーテルも得
られるが、それはＩＨ−ＮＭＲ スペクトルによればそ
の２つのフェノール性ヒドロキシ基がメチル化されてい
る。例９ パブラカンジンＡは次のようにアセチル化される。

パプラカンジンＡＩＯＯの９をピリジソと無水酢酸それ
ぞれ１泌といつしよにして室温で３時間静瞳させる。次
いで反応混合物を真空中蒸発させそしてメタノール１％
を含むクロロホルムとシリカゲル２０夕のクロマトグラ
フィーにかける。無色非晶質のアセテート７５の９が得
られそれをエーテルとへキサンから２回次でんさせる。
アセチル譲導体の赤外スペクトル（塩化メチレン中）に
は次の吸収帯が見られる。２９２０，２８６０，１７５
５，１６９０，１６４０，１６０５，１５１０，１４６
０，１３７０，１２２５，１１７５，１１２５，１０４
０，９６５肌‐１。

紫外スペクトル（エタノール中）は２４かｍ（Ｅ手孫＝
２４ｏ）と２６２（Ｅ主務＝３７０）に極大がある。ア
セチル基の数は明白には決定されない。ＩＨ−ＮＭＲス
ペクトルによれば９〜１１のアセチル基が認められる。
以上本発明を詳細に説明したが、本発明の構成の具体例
を要約すると次のようである。

【１｝，実施例に記載された、新規な抗生活性な化合物
である、前記特許請求の範囲１｝に記載の抗生物質およ
びその謙導体。

｛２） 実施例に記載された抗生物質パプラカンジンお
よび（または）その成分および誘導体を製造する、前記
特許請求の範囲のに記載の方法。

｛３｝ 抗生物質パプラカンジンを殺菌剤として使用す
ること。

【図面の簡単な説明】

第１図は重水素をもつメタノールＣＤ３０Ｄ中のパプラ
カンジンＢのＩＨ−ＮＭＲスペクトルを示す綾図であり
、第２図はＣＤ３０Ｄ中のパプラカンジンＡのＩＨ−Ｎ
ＭＲスペクトルを示す線図である。 Ｆｉｇ．ｌＦｉ９，２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基および水素原子から成る群から選ぶもの
   とする）で表わされるパプラカンジン化合物およびその
   誘導体。 ２ 式（１）においてＲが式▲数式、化学式、表等があ
   ります▼ で表わされる基である前項１に記載の化合物およびその
   誘導体。 ３ 式（１）においてＲが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である前項１に記載の化合物およびその
   誘導体。 ４ 式（１）においてＲが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である前項１に記載の化合物およびその
   誘導体。 ５ 式（１）においてＲが水素原子である前項１に記載
   の化合物およびその誘導体。 ６ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基および水素原子から成る群から選ぶもの
   とする）で表わされるパプラカンジン化合物およびその
   誘導体を製造するにあたり、 パプラリア スヘロスパ
   ルマ（ペルス）ヘーネル〔Ｐａｐｕｌａｒｉａ ｓｐｈ
   ａｅｒｏｓｐｅｒｍａ（ｅｒｓ）Ｈｏ″ｈｎｅｌ〕また
   は前記式（１）で表わされるパプラカンジン化合物を生
   成する突然変異体を、炭素源、窒素源ならびに無機塩類
   を含有する水性の栄養液中で、この液が本質的な抗生作
   用をもつまで好気的に培養し、前記式（１）で表わされ
   るパプラカンジン化合物に精製し、そして所望によりそ
   の誘導体に変えることを特徴とする、前記式（１）で表
   わされるパプラカンジン化合物およびその誘導体の製法
   。 ７ パプラリア スヘロスパルマ（ペルス）ヘーネルＨ
   ＲＲＬ８０８６（Ａ ３２２８３）株を培養する前項６
   に記載の方法。 ８ 抗生作用の存在を試験するためにカンジダアルビカ
   ンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）を使う前項
   ６に記載の方法。 ９ 式（１）で表わされる化合物の混合物を単離し、続
   いてその混合物を式（１）で表わされる化合物に分離す
   ることにより式（１）で表わされる化合物の精製を行う
   前項６〜８のいずれかに記載の方法。 １０ 培養ろ液を、水とわずかしか混合することができ
   ない溶媒で抽出する前項６または７のいずれかに記載の
   方法。 １１ 培養ろ液を酢酸エチルで抽出する前項６〜８のい
   ずれかに記載の方法。 １２ ミセル（菌糸体）を、水と混合できる有機溶媒ま
   たはそれと水との混合物で抽出する前項６または７のい
   ずれかに記載の方法。 １３ ミセルを水性メタノールで抽出する前項１２に記
   載の方法。 １４ 前記混合物への単離工程で、クロマトグラフイー
   を使用する前項９〜１３のいずれかに記載の方法。 １５ 前記混合物への単離工程で、活性炭と混合してい
   ることのあるシリカゲル上のクロマトグラフイーを使用
   する前項９〜１４のいずれかに記載の方法。 １６ 前記混合物への単離工程で、吸着樹脂上のクロマ
   トグラフイーを使用する前項９〜１５のいずれかに記載
   の方法。 １７ 前記混合物への単離工程で、交差結合したデキス
   トラン上のクロマトグラフイーを使用する前項９〜１６
   のいずれかに記載の方法。 １８ 前記混合物を、クロロホルムとメタノールとの混
   合物で溶離する前項１４〜１７のいずれかに記載の方法
   。 １９ 前記式（１）で表わされる化合物への分離工程で
   、活性炭を混合していることのあるシリカゲル上のクロ
   マトグラフイーを使用する前項９〜１８のいずれかに記
   載の方法。 ２０ 式（１）においてＲが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である化合物およびその誘導体を製造す
   る前項６〜１９のいずれかに記載の方法。 ２１ 式（１）においてＲが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である化合物およびその誘導体を製造す
   る前項６〜１９のいずれかに記載の方法。 ２２ 式（１）においてＲが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基である化合物およびその誘導体を製造す
   る前項６〜１９のいずれかに記載の方法。 ２３ 式（１）においてＲが水素原子である化合物およ
   びその誘導体を製造する前項６〜１９のいずれかに記載
   の方法。 ２４ 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒは式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる基および水素原子から成る群から選ぶもの
   とする）で表わされるパプラカンジン化合物またはその
   誘導体を含有する抗菌性および抗カビ性組成物。