JPS6016407B2 - 静注用ガンマグロブリン製造の改良方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はガンマ・グロブリンに関するものである。

本発明は特に静脈内注射によって投与する場合に適した
ガンマ・グロブリン製剤と同製剤の製造法に関するもの
である。混合血酸から得た免疫グロブリンＧは多くのヴ
ィールスやバクテリアに対する抗体を含有している。

免疫グロブリンは種々さまざまな病状の臨床的管理に関
して効果を有する。

例えば｛１１ 先天性および後天的抗体欠損状態にある
人の特に、ブドウ球菌、肺炎球菌、連鎖球菌、Ｈ型イン
フルエンザによる感染の予防および治療【２｝ 免疫グ
ロプリンレベルが正常な患者に対するウイルス性感染（
例えば、肝炎、ポリオ、麻疹、風疹、狂犬病、庖疹や耳
下腺炎）の予防、破傷風およびＲｈ不適合の予防【３｝
細菌性重症感染症の治療、例えばブドウ球菌、大腸菌
、緑膿菌による敗血症や、帯状海損のようなウイルス性
感梁症の治療に用いられる。

免疫グロブリンＧの秘めている臨床面におけるすべての
能力は、次のような理由により、いまだ完全に明らかに
はされていない。

すなわち、筋肉内投与が主体であったし、静洋用製剤と
いえども極度に分解されたものであり、かつ投与量も低
いま）であった。人ガンマグロブリンの中の主なる抗菌
性抗体は、上気道や皮ふや胃腸管にすくう微‘性物に対
するものである。

生体内の実験的感染症を制圧するに必要なガンマ・グロ
ブリン量は接種した菌体の個数に比例する。このことは
、緑膿菌、大腸菌、プロテウス菌、黄色ブドウ球菌につ
いて証明される。

必要なガンマグロプリン量は製剤中の特異抗体価のレベ
ルにも比例する。

クロラムフェニコールとは相乗作用があるが他の抗生物
質とは単に相加効果しかない。人免疫グロブリンは１９
４３王〜５位王の間にハーバードのＦＪ．コーンの研究
室で初めて大規模に分離された。

時を経ずして、これらの製剤は静脈内投与によって患者
にショック反応を生じせしめることが観察され、引き続
いて１ｇ０製剤の抗補体活性がショック反応の元凶であ
るということも立証された。この抗補体活性は分画工程
中に生じた１ｇ０分子の凝集に基づくものである。免疫
グロブリンの静脈内投与に伴うこれらのショック反応を
考慮して、治療面で有用なこれらの物質は静脈内に代え
て筋肉内に投与された。

しかしながら免疫グロブリンの筋肉内投与には下記の如
き多くの制約がある。ａ 痛いこと、 ｂ 投与できる童に制限があること、 ｃ 注射部位で生じる蛋白分解作用が投与した１ｇＧ量
を減暮寄せしめること、ｄ 投与３日もしくは４日後で
なければ、血中の最高濃度に到達しないこと。

このことは投与後直ちに高レベルの１亀濃度を必要とす
る症例にとって重大な障害となる。これに反し、免疫グ
ロブリンの静脈内投与は、注射部位における分解も受け
ず、投与量全体が直ちに血流中に入ること、およびかな
りの高い皿中濃度が得られることなどの理由からより広
範囲な臨床応用面をもっている。

このような考えが静脈内投与に通した低抗補体活性をも
つ１ｇＧの製造法の開発を促してきた。現在までに開発
されている方法は、凝集分子の抗補体作用を減ずるため
の蛋白分解または化学的処理に基づくものである。これ
らの製造法によって得られる製剤を例示すると下記の如
くである。１ ペプシン処理免疫グロブリン この製剤においては、蛋白は抗体の分屑 （＄、Ｆ（ａｂ′）２）となるまで大中に分解されてい
る。

短時間に（血中から）消失するため（変化を受けていな
い１ｇＣが２０〜３０日間であるのに比して３加持間と
短い）この製剤の細菌感染と浩抗する効力には制約があ
る。抗原と結合したのち、＄分肩は補体を固定しない。
この製剤は予防目的に適用できない。２ プラスミン処
理免疫グロブリン この製剤においては、グロプリンの６０％以上がＦａｂ
およびＦｃ分暦に分解されている。

残存するおグロブリンは、正常な半減期（３〜４週間）
を保持しているが、抗体のスベクトラムは限られている
。３ ｐＨ４処理グロブリン この製剤は、貯蔵中に抗補体作用をもつようになる鏡向
がある。

従ってその適合性は制限され、大量を投与することはで
きない。半減期は若干減少しており（１２〜１４日）、
抗細菌活性は測定できない程度までに減弱している。４
８ープロピオラクトン処理グロブリン分子は大中に変
化し、新しい抗原性を生じている可能性がある。

半減期は約１０日である。溶菌活性は減少している。１
ｇＧの４つの亜型は、蛋白分解作用に対してそれぞれ異
なる感受性を有している。

従ってペプシン、プラスミンおよびｐＨ４（ペプシン共
存）処理製剤は、それぞれ１ｇＣ亜型の分布量に関して
未処理１ｇＧとは、非常に異なったものである。上記の
如く、１ｇＧの静脈内投与によってひきおこされるショ
ック反応の元凶である望ましくない抗補体作用は１ｇＧ
中の分子の凝集によるものでありそれは分画工程中に生
成されるものである。上記の製剤は、凝集が生成したの
ちのものを、主として化学的および酵素的作用によって
分解せしめる方法を用いて得たものである。しかし、こ
のような分解処理は、必然的に活性の損失を伴った１ｇ
Ｇの分解をも生じせしめることになる。その結果、上述
の如き製剤は期待する活性を保持していない。凝集の生
成を阻止し、本質的に抗補体作用のない１や製剤をつく
り出す方法の開発は現在まで殆んどなされていない。ご
く最近１９７４一６−６発行の西独公開特許第２，３５
７，８０ぴ号で静脈内投与に適するガンマ・グロブリン
製剤の製法が発表された。

この他に発表されているガンマ・グロブリン調製法と同
機、この方法は比較的純度の高いガンマ・グロブリン分
画を原料としているところによりどころがある。しかし
ながら非常に重要な点は、上記特許方法によって得たガ
ンマ・グロブリンもなお静脈内投与には過大な抗補体作
用を有していることである。フラクションロから静脈内
投与に適した物質を得る方法も提案されている（アメリ
カ合衆国特許第３，７脇 １３５号）。しかし本発明に
よる方法のほうがはるかに収量が多く得られたものには
、抗補体作用物質がはるかに少し、。筋佐用ガンマ・グ
ロブリンについてはＦＤＡの基準があるが、静注用ガン
マ・グロブリンにはそれがない。

感受性の高に人体に静脈内投与した場合、ショック様反
応をひきおこすガンマ・グロブリンとそのような反応を
引き出すことのないガンマ・グロプリンとを明確に区別
するために同様の基準が必要である。過去１３年間に、
抗橘体活性が十分に低いレベルのガンマ・グロブリンな
らば、たとえ高い感受性を有する患者においても何らの
臨床的症状も認められないことが立証されている。

ＳｔａｎｄａｒｄＮｂｙｅｒ ２ 皿ｉｔ ａｓｓａ
ｙ（ Ｅｘｐｅｎｍｅｎｔａｌ 、ｌｍｍｕｍ×ｈｅ‐
ｍｉｓｔひ，Ｅ．ＡＫａＭｔ，Ｍ．Ｍ．Ｍａｙｅｒ共著
第２版、Ｐ１３３．Ｔｈｏｍａｓ，Ｓｐｎｎｇｆｉｅｌ
ｄ社、１９６１年）による単位で云えば安全なしベルと
して免疫グロブリンＧの１の９当り抗補体作用物質は０
．０４から０．０２単位又はそれ以下でるあが、０．０
４よりも若千高いかも知れない。但し地当り０．６単位
のレベルでは反応は常時認められるようになる。臨床上
の幅作用がないことに重点を置き、ガンマ・グロブリン
製剤を静任用に適すると指適するには、抗補体活性が特
異的に低いレベルにあるか杏かにか）つている。更に臨
床的に安全かつ有効な製剤を供孫給するためには生理学
的な抗体活性ならびに特異性を保持する必要がある。本
特許申請の方法は正常なガンマ・グロプリン分子の性質
を維持し、本質的に分子の凝集とそれによる抗補体活性
が全くなく、それ故に静注用として安全かつ有効ならし
めるような製剤を得ることを目論んできた。

従って本発明の目的とするところは； ‘１１ 静注に適したガンマ・グロブリン製剤を供給す
ると、（２｝ 生体外において、本質的に抗補体活性の
ない静注用ガンマ・グロブリン製剤を供給すること、糊
３乃至４週間の生物学的半減期を有する静任用ガンマ
・グロブリン製剤を供給すること、（４｝ 対応する抗
原と結合した場合、補体を固定する能力を持ち、出発原
料の混合皿酸およびコーンの古典的血酸エタノール分画
法によって得た標準ガンマ・グロブリンに存在する抗体
の種類としベルとの比較において、これと本質的に変ら
ない抗体スベクトラムを有する静注用ガンマ・グロブリ
ン製剤を供給すること、【５ー 齢柱用ガンマ・グロブ
リン製剤の調製法を規定すること、‘６１ 容易に入手
できる皿酸蛋白分画より静任用ガンマ・グロブリン製剤
を調製する方法を規定すること【７１ 本質的に分子の
凝集が発生しないような方法で静任用ガンマ・グロブリ
ン製剤の調製法を規定することである。

本発明者は前に抗補体物質が極度に少くそして静注に適
したものが製造出釆る発明を完成し、袴願昭５１一９３
９３５として出願している。

本発明の方法は、前記出願の方法よりも、抗補体物質を
さらに低いレベルにおとし、事実通常の分析方法では計
れないほど低いレベルを示すものを提供する改良する方
法である。本発明の一つの態様に従えば、長期保存が可
能であり、容易に溶解出来る凍結乾燥砧品が製造される
。

本発明の一つの態様に従えば、このガンマ・グロブリン
はＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ比．斑，４５９一４７５（１
９７６）に記載のコーンらの方法による分画ｎ十ｍから
容易に得られる。

他の爽雑蛋白と共に猪んどすべての免疫グロブリンを含
むこの分画は、本発明の分画技術で処理されれば、従来
の技術では分画処理中に生じていた分子の凝集生成を阻
止して、本質的に抗補体活性のない静脈内投与に通した
活性ガンマ・グロブリンを産する。もう一つの有用な原
料源は、人血清グロブリンとして容易に入手できる分画
０である。

このものは経済的かつ、凍結乾燥粉末では安定であり肝
炎ウイルスを含まない。このものは、分画０十ｍと同じ
方法で処理することができる。さらに、もう一つの有用
な出発原料は相応する分画を含む胎盤抽出液である。

本発明の好ましい実施態様を以下に説明する。

血数蛋白分画０またはＤ十虹のベイストをおよそ４．９
より６．政仔ましくはおよそ５．１のｐＨにおいて水で
抽出する。蛋白質含量が約２５なし、し３０％のベイス
トｋｇ当り約２５なし、し４５夕、好ましくは３０その
発熱性物質を含まない水を使用する。

毒性のない薬剤学的に容認できる酷酸、乳酸、クエン酸
、塩酸、硫酸のような有機または無機酸がｐＨの調整に
用いられる。水に不熔の物質は分離され、そして炉過液
は、まず最初にポリエチレングライコールが４Ｗ／Ｖ％
の濃度で、次にエタノールが４〜１２Ｗ／Ｖ％の濃度で
、好ましくは６Ｗ／Ｖ％、最後にポリエチレングライコ
ールが１２Ｗ／Ｖ％の濃度で分別沈殿される。最後のス
テップにおけるＰＨは約８．０である。最初の２つの分
別沈殿では不純物は除去され、そして最後の沈殿により
本発明のガンマ・グロブリンが得られる。望ましいポリ
エチレングライコールの分子量は約４，０００から１２
，０００である。毒性のない薬剤学的に容認される無機
酸の塩がｐＨをおよそ８．０に調整するために用いられ
る。操作はおよそ００から２０ｏｏの温度で実施され得
るが、一６０乃至５℃の低温が好ましい。操作の詳細を
実施例に記述する。

これらの実施例は例証を記述するものであって、これり
よって限定されるものではない。

実施例 １蛋白質舎量が約２５なし、し３０％のコーン
分画ロ十ｍベィストをｌｋ９当り３０その発熱怪物質を
含まない蒸留水に懸濁する（処理温度０〜５００）。

この場合、ベィストｋ９当り２０夕〜５０その中で懸濁
してもよい。懸濁液のｐＨは希酢酸（前述のものと同様
の酸でもよい）で、ｐＨ５．１（４．９〜６．０の間な
らよい）に調整する。次に、懸濁液は０〜５℃の処理温
度中で炉過または遠心分離され、沈殿は除去する。炉液
は４Ｗ／Ｖ％のポリエチレングラィコ−ル４０００（Ｐ
ＥＧ４０００）で分画する（ＰＥＧ６０００，１２００
０も異る濃度で用いることが出来る）。１時間で形成さ
れた沈殿は、前段階におけるのと同様に除去する。

炉液は次に−２℃（０℃〜一６℃の間で）の条件下で、
６Ｗ／Ｖ％濃度のエタノールを注意深く加える。沈殿は
、再び１〜２独時間後（好ましくは２時間）に除去する
。次いで溶液に塩化ナトリウムを０．０１Ｍ添加し、ｐ
Ｈは１％水酸化ナトリウムで８．０（７〜８．２の間）
に調整する。

２５Ｗ／Ｖ％エタノールを加えるか、または１０〜１２
Ｗ／Ｖ％（好ましくは１２Ｗ／Ｖ％）のＰＥＧ４０００
を加えることによって形成された沈殿は、連続高速、通
過式遠心分離によって除去される。

得られたペーストは、次の溶液に溶解される。加熱人血
清ァルブミン ５〜２５〃秋 好ましくは５〜１０の２
〆地酢酸ナトリウム ０．０２５Ｍ グリシン ０．１５Ｍ マンニトール １〜２※ 好ましくは２※これらは
全て、酢酸でｐＨ５．１に調整される。

マンニトールのかわりにラクトースでもよい。５〜６％
の１ｇＧを含む得られた溶液は、凍結乾燥することも出
釆るし、又、１ぴ０以下で液状で貯蔵することもできる
。

もし液状で貯蔵するなら溶解液からマンニトールを除去
しておく。溶液は次のような方法で凍結乾燥することが
出来る。ｐＨを１％水酸化ナトリウムで６．４〜６．６
に調整する。次に、所望の量の分注後溶液は急速に円筒
凍結される。

凍結乾燥は、水が除かれたのち熱をかけすぎないよう注
意しながら通常の方法で行なう。凍結乾燥されたなら、
次にガンマグロブリン５〜６％溶液になるよう再溶解さ
れる。この溶液は、凍結又は１００○で少くとも１年、
そして凍結乾燥粉末では、少くとも２年は安定である。

得られた製剤の純度は、少くとも９７％であり、唯一の
検知できる不純物はアルブミンである。

抗補体活性は、ガンマグロプリンの双９当り０．０２単
位（０．００〜０．０１山単位）以下である。単位は前
述のＭａｙｅｒのｔｗｏ‐伽ｉｔａｓｓａｙによって測
定された。実施例 ２ コーンの分画０のペーストもしくは粉末はの‘当り２の
９（１〜１０）のヒトアルブミソと２％のＰＥＧを含有
する０〜５℃の発熱性物質のない蒸留水で１〜５％（好
ましくは２％）に溶解される。

ｐＨを５．１に調整し（４．９〜６政守まし〈は５．０
〜５．８）１時間後に形成された沈殿は炉過又は遠心分
離により除去する。淀液のＰＥＧ濃度を５０％ＰＥＧ４
０００の溶液又は、乾燥ＰＥＧ４０００粉末で４％にあ
げる。

１時間で形成された沈殿は除去する。

次に、エタノールを２℃以上の温度にならないようにし
ながら除々に６％まで加える。形成された沈殿は１〜１
幼時間後好ましくは１２時間後に除去する。次にｐＨを
８．０（６．８〜８．１）に上げる。エタノール濃度を
２５％にあげた後、得られた沈殿は遠心分離により集め
、そして実施例１と同じ条件下で溶解する。得られた製
品は、溶解液にアルブミンを添加する前に計ると、９９
％以上のガンマグロブリンを含有する。ガンマーグロブ
リンの５０奴ｏ／の【（５％溶液）を標準Ｎ燈ｙｅｒ分
析法で分析した時、溶血の阻害は検出されないが、１ｇ
Ｇの取り当０．０１単位以下である。最終溶液は添加さ
れたアルブミンのみを含有する。このアルブミンは、す
べてのＢ型肝炎ウイルスを不活化するため通常の方法に
よって前もって加熱されている。セルロースアセテート
電気泳動法や、免疫電気泳動法や免疫拡散法のような通
常の技術では他の蛋白質は検出されない。

実施例 ３ 通常の方法により分離されれたタィバン由来ガンマーグ
ロブリンは実施例２と同様に処理される。

通常の方法によって分離されたダィバン由来ガンマーグ
ロブリンは他の血糠蛋白を不純物として極少量含むので
、各処理段階ですべての不溶性物質、特に最初の段階お
よび他のすべての段階でｐＨが調整される前に浮遊性の
不溶性物質を除去する注意が必要である。６％エタノー
ルの炉液は実施例１と同様に塩化ナトリウムを０．０１
Ｍ添加す。

他の処理工程は実施例２と同様である。得られた製品の
純度は、実施例２と同様の方法で（５〜１０の９／泌の
アルブミンを含む溶解液を添加する前に）測定された時
少くとも９８％のガンマグロブリンを含む。実施例１と
同じ溶解液を使用できるが、もし製品が液状であること
が望まれ、凍結乾燥されないなら実施例１と同様に溶解
液からマンニトールは除去される。実施例 ４ 免疫グロブリンＧのペースト又は分画０又はタィバン由
釆の乾燥分画０の粉末は次のような処理によって高度精
製ができ、静注用途に適した製品を製造するために使用
出釆る。

（１） ２％ポリエチレングライコール４０００（ＰＥ
Ｇ２０００，６０００，８０００，１２０００の平均分
子量のものも使用出来る）と、０．２％の加熱人アルブ
ミンを含有する水に１％濃度（０．３〜５％）にペース
ト又は粉末を懸濁すること。

処理温度１℃（０〜５℃の範囲）。不溶性の浮遊性物質
はすくいとり（ｓｋｉｍｍｉｎｇ）により除かれる。■
次に−を酢酸、塩酸、クエン酸および他の酸によって
５．１（範囲４．９〜６．０）に調整する。沈殿は１時
間後、処理温度１℃で炉過又は遠心分離によって除去さ
れる。剛 次にポリエチレングラィコール４０００の濃
度を４％に上げる。

浮遊性物質を再び除く。ついで、沈殿を炉過又は遠心分
離によって除く。‘４｝ 次にエタノールを０％（範囲
−２〜一１５）の条件下で除々に６％まで（範囲２〜１
２％）添加する。‘５｝ 沈殿物と浮遊物質は前工程と
同様に除く。

｛６｝ 塩化ナトリウムを０．０１規定に加える（０．
０３〜０．０５の範囲）。‘７１ 次にｐＨを８．０（
範囲７〜８）に上げる。

‘８｝ アルコールを−６℃の条件下で除々に最終濃度
２５％まで添加する。‘９’沈殿は遠心分離によって集
める。

００ 沈殿をペーストの既知重量および次のような溶液
の幹知量にもとづいて５〜６％の終濃度に溶解する。

０．５％加熱人アルブミン（範囲０．３〜５％）酢酸ナ
トリウム（０．０１２５又は０．０２州）グリシン
０．１８Ｍ酢酸でｐＨ５．１とする。

溶解されたペーストのｐＨは、１％の水酸化ナトリウム
、水酸化カリウム、トリス（ハイドロキシメチル）アミ
ノメタンのようなアルカリで６．６に調整する。

（１１）もし、溶液を凍結乾燥するなら２％にマンニト
ールを加える（範囲１〜３％）。

（１２）得られた溶液または凍結乾燥粉末は何らの判明
しうる不純物をも含まない。

そしてＭａｙｅｒのｔｗｏ 皿ｉｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅ
ｎｔ ａｓｓａｙではかるとき０．０２単位より少ない
抗補体活性を有する。（１３）もし、工程‘９｝からの
沈殿を分析すると９８％以山のガンマグロブリンを含有
する。本発明のガンマ・グロブリンは直ちに静注用製剤
として実用化しうるものである。

製剤の処方において、ガンマ・グロブリンはグリシン、
アルブミンおよび非イオン系界面活性剤を含むｐＨ５．
４〜６．７の緩衝液に溶解せしめる。調合液のｐＨはｐ
Ｈ５．４〜６７の間の望む値に調整し、ガンマ・グロブ
リン濃度は５％に調節する。適当な緩衝液としては、リ
ン酸および硝酸ナトリウム−酷酸系がある。溶液の場合
、液体−空気又は液体−固体界面で生じる製剤の変性を
防止又は減ずるために、製剤組成に界面活性剤を添加す
ると都合がよい。

好ま０しい界面活性剤としては、プルロニック６８（ポ
ロキサマー１総）の如きプｏピレンおよびェテレンオキ
サイドのブロック・コポリマー、ソルビトールのエステ
ルあるいはＣＴＦＡ Ｃｏｓｍｅｔｉｃｌｎ餌ｅｄｉｅ
ｎｔ Ｄｉｃｔｉｏ雌ｒｙ（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉ
ｌｅｔｒｙタａｎｄＦｒａｇａＭｅ笛ｓｏｃｉａｔｉｏ
ｎ編、１９７３主度版）に記載の水溶性物質であるＴｗ
ｅｅｎ２０，４０，６０，８０，８５（Ｐｏｌｙｓｏｒ
ｂａｔｅ２０，４０，６０，８０，９５）の如き最鎖脂
肪酸のポリオキシェチレンオキサィドおよびゐｎｙＩ
ＦＳＡ、ＦＳＢ、ＦＳＣ、ＦＳＮの如きフッひ素系界面
活性剤などの非イオン系界面活性剤がある。これらの非
イオン系界面活性剤は界面変性に対して蛋白質を安定化
させるとともに蛋白質に影響を及ぼしたり変性せしめる
ような化学反応基を分子構造の中にまったく含んでいな
い。５ 本発明による薬剤組成のもとで貯蔵した場合、
本発明のガンマ・グロブリンは、現在販売されている他
のガンマ・グロブリン製剤よりも長い半減期を有する。

ガンマ・グロブリンの静脈内投与に伴って通常０発生す
る好ましくない幅作用ないこ静注が望まれているあらゆ
る場合又はどんな条件下でも、本発明のガンマ・グロブ
リンは静脈内投与用として有用なものであることが証明
されている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 蛋白質含量が約２５〜３０％の血漿蛋白分画II＋I
   IIペイスト、分画IIペイストおよびこれらの分画を含む
   胎盤抽出液より選択した原料から本質的に抗補体活性の
   全くない、静脈内投与に適したガンマグロブリンを製造
   する方法において、ａ上記原料を水に懸濁し、ｐＨ約４
   ．９ないし６．０において約３００×１０＾−＾６ｃｍ
   ＾−＾１ｏｈｍ＾−＾１の電導度を有する低イオン強度
   の溶液をつくり、沈澱と濾液を得、ｂ 分子量約４，０
   ００〜６，０００のポリエチレングライコールを約４Ｗ
   ／Ｖ％となるように加えることにより操作ａの濾液から
   不純物を沈澱させ、濾液を得、ｃ つづいて終濃度４〜
   １２％となるようにエタノールを加えることにより、操
   作ｂの濾液より不純物を沈澱させ、濾液を得、ｄ ｐＨ
   ７〜８．２において（好ましくはｐＨ８．０）、分子量
   約４，０００〜６，０００のポリエチレングライコール
   を約１０〜１２Ｗ／Ｖ％の濃度となるように加えるか、
   又は、エタノールを２０〜３０Ｖ／Ｖ％、好ましくは２
   ５％の濃度となるように加えることにより操作ｃの濾液
   よりガンマグロブリンを沈澱させることよりなり、そし
   て上記操作を約０°〜−６℃の温度で行うことを特徴と
   する上記ガンマグロブリンの製造方法。 ２ ペイストが抽出されるｐＨを、約５．１とする特許
   請求の範囲１に記載の方法。 ３ 操作温度を、約−２℃とする特許請求の範囲１に記
   載の方法。 ４ 出発原料を胎盤抽出液とするとき操作ａ，ｂ及びｃ
   の溶液をスキミング操作にかけ、浮遊物をすくいとり、
   除去することを特徴とする特許請求の範囲１に記載の方
   法。 ５ 最初の懸濁操作には約２％のポリエチレングライコ
   ールと約０．２％のアルブミンとを含有する水を用いる
   ことを特徴とする特許請求の範囲１に記載の方法。