JPS6129717B2 - - Google Patents
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- JPS6129717B2 JPS6129717B2 JP53024513A JP2451378A JPS6129717B2 JP S6129717 B2 JPS6129717 B2 JP S6129717B2 JP 53024513 A JP53024513 A JP 53024513A JP 2451378 A JP2451378 A JP 2451378A JP S6129717 B2 JPS6129717 B2 JP S6129717B2
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- Japan
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- neoenactin
- follows
- absorption spectrum
- reaction
- phosphoric acid
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は抗真菌性物質ネオエナクチンおよびそ
の製造法に関する。更に詳述すれば抗真菌剤ネオ
エナクチンおよびスレプトバーテシリウム属に属
する菌を好気的に培養し、抗真菌性物質ネオエナ
クチンを分離、精製する方法に関する。真菌によ
る疾患は一般に難治とされ、近年この真菌粧が急
速に増加する傾向がある。ポリエン系抗生物質は
深在性真菌症に対する治療剤として現在よく用い
られている。しかし、効果のある用量と毒性を示
す用量の間が狭く安全性に難点がある。そこで本
発明者等はポリエン系抗生物質（例えばトリコマ
イシン）とコレステロールの拮抗を利用した新し
いスクリーニング方法〔ケミカル アンド フア
ーマセテイカル ブリチン（Chemical and
pharmaceutical Bulletin）第21巻、2057頁、
1973〕を考案し、非ポリエン系抗生物質で抗真菌
効果を有する物質、またはポリエン系抗生物質の
作用を増強する物質の探索を行なつた。この方法
により本発明者等はストレプトミセス ロゼオビ
リデイス（Streptomyces roseoviridis）Ｈ 646
−SY3がエナクチン〔ジヤーナル オブ アンチ
バイオテイツクス（Journal of antibiotics）第30
巻、182頁、1977〕を生産している事を発見し
た。エナクチンは、それ自身は真菌に対し強い抗
菌力を有していないが、トリコマイシンまたはア
ンホテリシンＢの抗菌力を著しく増強する事を認
めた。 更に、本スクリーニング方法を用い微生物培養
液の検索を行なつたところストレプトバーテシリ
ウム（Streptoverticillium）に属する一菌株が強
い抗真菌作用を有する新物質ネオエナクチンを生
産している事を発見した。本発明のネオエナクチ
ンは有用な抗真菌株であり、例えば真菌であるカ
ンジダ アルビカンス Yu−1200に対し最小発
育阻止濃度0.313μｇ/mlを示し、ポリエン系抗真
菌剤トリコマイシンの抗菌力を増強する。また、
ポリエン系の抗真菌剤の抗菌剤と弱めるとされて
いるコレステロールの存在下においてもトリコマ
イシンの抗真菌力を増強する。 本発明はネオエナクチンまたはその官能性誘導
体ならびにそれらの塩類を提供する事にある。 また、本発明はストレプトバーテシリウム属に
属する菌株、例えばストレプトバーテシリウム
オリボレテイキユーリ サブエスピー ネオエナ
クテイカス H829−MY10（Streptoverticillium
olivoreticuli subsp.neoenacticus）を培養して培
養液および菌体より抗真菌物質ネオエナクチンま
たはその構成因子を分離、精製する方法を提供す
ることにある。 ネオエナクチンは白色の無定形粉末であつて、
融点60.5〜64.5℃を示す。ネオエナクチンは低級
アルコール、酢酸エチル、エーテル、クロロホル
ムに可溶で、水、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに
不溶である。エナクチンの元素分析による百分率
組成（平均値）は次の通りである。 Ｃ、63.47％、Ｈ、10.04％、Ｎ、7.44％、 （０、19.05％） ハロゲンおよびイオウは検出されなかつた。 ネオエナクチンのメタノール溶液、0.1N塩酸
−メタノール溶液、0.1N 苛性ソーダーメタノ
ール溶液中における紫外部吸収を添付図１に示
す。 メタノール溶液中 208nｍ（Ｅ１％１cm＝166） 0.1N 塩酸メタノール溶液208nｍ（Ｅ１％cm＝
161） 0.1N、苛性ソーダーメタノール溶液中 240nｍ（Ｅ１％cm＝138） ネオエナクチン臭化カリウム錠中における赤外
吸収スペクトルを添付図２に示す。 比旋光度 〔α〕２０ Ｄ＝−14.2゜（Ｃ＝３％、メタノール中） ネオエナクチンの呈色反応 ニンヒドリン反応 ＋ ナフトレゾルシノール−リン酸反応 ＋ KMnO4 ＋ アンスロン−リン酸反応 − α−ナフトール−リン酸反応 − ネオエナクチンの構成成分 ネオエナクチンを1N塩酸で110℃、17時間加水
分解し、加水分解物をエーテルつづいて酢酸エチ
ル抽出した。水層を蒸発乾固し、水に溶解後、ア
ンバーライト IR−45を通し、通過液を集め減
圧下蒸発させ容量を小さくした後エタノールを加
えた。得られた白色沈澱はペーパークロマトグラ
フイーおよび赤外吸収スペクトルよりＬ−セリン
と同定できた。 ネオエナクチンおよびエナクチンのペーパーク
ロマトグラフイーとシリカゲルＧ薄層クロマトグ
ラフイー 検出微生物としてカンジダ アルビカンス
Yu−1200を使用する種々のペーパークロマトグ
ラフイーとシリカゲルＧ薄層クロマトグラフイー
の結果を表１および２に示した。検出には補助的
にニンヒドリン反応および40％硫酸を噴霧し加熱
する方法を用いた。
の製造法に関する。更に詳述すれば抗真菌剤ネオ
エナクチンおよびスレプトバーテシリウム属に属
する菌を好気的に培養し、抗真菌性物質ネオエナ
クチンを分離、精製する方法に関する。真菌によ
る疾患は一般に難治とされ、近年この真菌粧が急
速に増加する傾向がある。ポリエン系抗生物質は
深在性真菌症に対する治療剤として現在よく用い
られている。しかし、効果のある用量と毒性を示
す用量の間が狭く安全性に難点がある。そこで本
発明者等はポリエン系抗生物質（例えばトリコマ
イシン）とコレステロールの拮抗を利用した新し
いスクリーニング方法〔ケミカル アンド フア
ーマセテイカル ブリチン（Chemical and
pharmaceutical Bulletin）第21巻、2057頁、
1973〕を考案し、非ポリエン系抗生物質で抗真菌
効果を有する物質、またはポリエン系抗生物質の
作用を増強する物質の探索を行なつた。この方法
により本発明者等はストレプトミセス ロゼオビ
リデイス（Streptomyces roseoviridis）Ｈ 646
−SY3がエナクチン〔ジヤーナル オブ アンチ
バイオテイツクス（Journal of antibiotics）第30
巻、182頁、1977〕を生産している事を発見し
た。エナクチンは、それ自身は真菌に対し強い抗
菌力を有していないが、トリコマイシンまたはア
ンホテリシンＢの抗菌力を著しく増強する事を認
めた。 更に、本スクリーニング方法を用い微生物培養
液の検索を行なつたところストレプトバーテシリ
ウム（Streptoverticillium）に属する一菌株が強
い抗真菌作用を有する新物質ネオエナクチンを生
産している事を発見した。本発明のネオエナクチ
ンは有用な抗真菌株であり、例えば真菌であるカ
ンジダ アルビカンス Yu−1200に対し最小発
育阻止濃度0.313μｇ/mlを示し、ポリエン系抗真
菌剤トリコマイシンの抗菌力を増強する。また、
ポリエン系の抗真菌剤の抗菌剤と弱めるとされて
いるコレステロールの存在下においてもトリコマ
イシンの抗真菌力を増強する。 本発明はネオエナクチンまたはその官能性誘導
体ならびにそれらの塩類を提供する事にある。 また、本発明はストレプトバーテシリウム属に
属する菌株、例えばストレプトバーテシリウム
オリボレテイキユーリ サブエスピー ネオエナ
クテイカス H829−MY10（Streptoverticillium
olivoreticuli subsp.neoenacticus）を培養して培
養液および菌体より抗真菌物質ネオエナクチンま
たはその構成因子を分離、精製する方法を提供す
ることにある。 ネオエナクチンは白色の無定形粉末であつて、
融点60.5〜64.5℃を示す。ネオエナクチンは低級
アルコール、酢酸エチル、エーテル、クロロホル
ムに可溶で、水、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに
不溶である。エナクチンの元素分析による百分率
組成（平均値）は次の通りである。 Ｃ、63.47％、Ｈ、10.04％、Ｎ、7.44％、 （０、19.05％） ハロゲンおよびイオウは検出されなかつた。 ネオエナクチンのメタノール溶液、0.1N塩酸
−メタノール溶液、0.1N 苛性ソーダーメタノ
ール溶液中における紫外部吸収を添付図１に示
す。 メタノール溶液中 208nｍ（Ｅ１％１cm＝166） 0.1N 塩酸メタノール溶液208nｍ（Ｅ１％cm＝
161） 0.1N、苛性ソーダーメタノール溶液中 240nｍ（Ｅ１％cm＝138） ネオエナクチン臭化カリウム錠中における赤外
吸収スペクトルを添付図２に示す。 比旋光度 〔α〕２０ Ｄ＝−14.2゜（Ｃ＝３％、メタノール中） ネオエナクチンの呈色反応 ニンヒドリン反応 ＋ ナフトレゾルシノール−リン酸反応 ＋ KMnO4 ＋ アンスロン−リン酸反応 − α−ナフトール−リン酸反応 − ネオエナクチンの構成成分 ネオエナクチンを1N塩酸で110℃、17時間加水
分解し、加水分解物をエーテルつづいて酢酸エチ
ル抽出した。水層を蒸発乾固し、水に溶解後、ア
ンバーライト IR−45を通し、通過液を集め減
圧下蒸発させ容量を小さくした後エタノールを加
えた。得られた白色沈澱はペーパークロマトグラ
フイーおよび赤外吸収スペクトルよりＬ−セリン
と同定できた。 ネオエナクチンおよびエナクチンのペーパーク
ロマトグラフイーとシリカゲルＧ薄層クロマトグ
ラフイー 検出微生物としてカンジダ アルビカンス
Yu−1200を使用する種々のペーパークロマトグ
ラフイーとシリカゲルＧ薄層クロマトグラフイー
の結果を表１および２に示した。検出には補助的
にニンヒドリン反応および40％硫酸を噴霧し加熱
する方法を用いた。
【表】
【表】
【表】
生産微生物の具体例としては例えばストレプト
バーテシリウム属に属するストレプトバーテシリ
ウム オリボレテイキユリ サブエスピーネオエ
ナテイカス H829−MY10がある。 この菌株は本発明者等が長崎県の土壌より分離
した菌株でその菌学的性質は次の通りである。 (1) 形態； 本菌株は顕微鏡下でよく分枝した基生菌糸を
形成するが、気菌糸の成長は遅く、ほとんどの
合成培地または有機培地上で気菌糸は作られな
いか、もし作つても非常に貧弱である。胞子体
は、ほとんどがまつすぐで、第一次輪生枝また
はまれに第二次輪生枝を生成する。 胞子の形態は円筒一指骨様であり大きさは１
〜1.2ミクロン位で胞子の表面は平滑である。 ストレプトミセス ルテオカラー
（Streptomyces luteocolor）またはストレプト
バーテシリウム バーテイシラス
（Streptoverticillium verticillus）に見られる
球状構造体（Ball−like body）が時として胞
子体の先端に確認される。 (2) 各種培地上の生育状態；
バーテシリウム属に属するストレプトバーテシリ
ウム オリボレテイキユリ サブエスピーネオエ
ナテイカス H829−MY10がある。 この菌株は本発明者等が長崎県の土壌より分離
した菌株でその菌学的性質は次の通りである。 (1) 形態； 本菌株は顕微鏡下でよく分枝した基生菌糸を
形成するが、気菌糸の成長は遅く、ほとんどの
合成培地または有機培地上で気菌糸は作られな
いか、もし作つても非常に貧弱である。胞子体
は、ほとんどがまつすぐで、第一次輪生枝また
はまれに第二次輪生枝を生成する。 胞子の形態は円筒一指骨様であり大きさは１
〜1.2ミクロン位で胞子の表面は平滑である。 ストレプトミセス ルテオカラー
（Streptomyces luteocolor）またはストレプト
バーテシリウム バーテイシラス
（Streptoverticillium verticillus）に見られる
球状構造体（Ball−like body）が時として胞
子体の先端に確認される。 (2) 各種培地上の生育状態；
【表】
【表】
(3) 生理的性質
(i) 生育温度範囲；マルトース−酵母エキス寒
天培地において20〜37℃の温度範囲において
良好な生育をする。 (ii) ゼラチンの液化；中等度の液化能を有す
る。 (iii) デンプンの加水分解；陰性 (iv) 脱脂乳の凝固；陽性 脱脂乳のペプトン化；陽性 (v) メラニン色素の生成；陰性 (4) 炭素源の利用性（プリドハム、ゴツドリープ
寒天培地） (i) 利用する；メフーイノシトール、Ｄ−ガラ
クトース、デキストリシ、マルトース、グリ
セロール (ii) 利用が疑わしい；Ｌ−アラビノース、Ｄ−
フラクトース、フライノース、Ｄ−トレハロ
ース (iii) 利用しない；Ｄ−キシロース、シユークロ
ース、Ｄ−マンニトール、ラクトース H829−MY10株の菌学的性質を要約すると、輪
生枝の生成、うす黄茶色の生育、白色の気菌糸そ
して可溶性色素非生産性が挙げられる。 H829−MY10株のこのような性状はストレプト
バーテシリウム属のストレプトバーテシリウム
オリボレテイキユリ（Streptoverticillium
olivoreticuli）の性状とよく一致する。すなわち
ストレプトバーテシリウム オリボレテイキユリ
は第一次、第二次輪生枝を生成し、うす黄茶色の
基生菌糸を伸ばし、生理機能不明の球状構造体を
生成する。しかしストレプトバーテシリウム オ
リボレテイキユリはクロモジエニツクな型に属す
る事、イノシトールをほとんど利用しない事より
H829−MY10株とは異る。以上の事よりH829−
MY10株はストレプトバーテシリウム オリボレ
テイキユリのサブエスピーと考えられ本発明者等
はネオエナクチン生産菌という事よりストレプト
バーテシリウム オリボレテイキユリ、サブエス
ピーネオエナクテイカス オオタニ ニト ナカ
ムラ（Streptoverticillium olivoreticuli subsp.
neoenacticus）と命名した。 H829−MY10株は他のストレプバーテリシウム
属またはストレプトミセス属の場合にみられるよ
うに、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、
エツクス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人
工的手段で変異しうるものであり、このような変
異株であつてもネオエナクチンまたはネオエナク
チン構成成分の生産能を有するものは全て本発明
の方法を使用する事が出来る。なお、本菌株は通
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されており、その微工研受託番号は微工研菌寄第
4376号（FERM−P4376）である。本発明の方法
では、上記菌株を通常微生物が利用し得る栄養物
を含有する培地で培養する。 栄養源としては従来ストレプトミセス属の菌の
培養に利用されている公知のものが利用できる。
例えば炭素源としてはゲルコース、デンプン、グ
リセリン、デキストリン、シユークロース、水あ
め、糖みつ、大豆油等を使用し得る。 また窒素源としてソーヤミール、乾燥乾母、コ
ーンステイープリカー、小麦胚芽、コツトンシー
ドミール、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ等を使
用し得る。その他必要に応じて炭酸カルシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリ、リン酸塩、塩化マン
ガン、硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛等の無機塩
を添加するほか、菌の発育を助けネオエナクチン
の生産を促進する有機および無機物を適当に添加
する事が出来る。培養法としては一般に抗生物質
生産の方法と同じく液体培養が適している。培養
は好気的条件下で行なわれ、培養に適当な温度は
25〜35℃であるが、多くの場合28℃付近で培養す
る。 ネオエナクチンの生産は振盪培養、タンク培養
共に１〜３日で最高に達する。以上述べた培養条
件は使用する生産菌株の特性に応じてそれぞれの
最適条件を選択して適用する事が出来る、ネオエ
ナクチンは菌体および培養液の両方に含まれる
ので両者から抽出を行なう事が可能である。一例
を示すと培養液からはPH８において酢酸エチル
抽出を行なう、または培養液からアンバーライ
トXAD−に吸着させ、含水メタノールで溶出
される。 また菌体からはメタノール抽出を行ない、減圧
下でメタノールを留去後PH８で酢酸エチル抽出を
行なう。両酢酸エチル抽出フラクシヨンに含まれ
るネオエナクチンはPH２において水層に逆転移で
きる。水層に移行したネオエナクチンはPH８で再
び酢酸エチルフラクシヨンに抽出される。この酢
酸エチル抽出フラクシヨンを減圧下、濃縮する事
により粘性の高い油状物質を得る。油状物質を1/
２０Ｍリン酸緩衝液（PH8.0）を飽和した酢酸エチ
ルに溶解し、1/20Ｍリン酸緩衝液（PH8.0）に浸
し風乾したセルロース粉末を同様な酢酸エチルを
用いて調整したカラムで展開する。ネオエナクチ
ンを含むフラクシヨンを集め少量の水で水洗し、
減圧下蒸発乾固し1/20Ｍリン酸緩衝液を飽和した
酢酸エチルに溶解する。これを再び同様なセルロ
ース粉末のカラムに展開する。 ネオエナクチンを含むフラクシヨンを集め松量
の水で水洗し、減圧下蒸発乾固し、ネオエナクチ
ンの粉末を得る。ネオエナクチンの各種微生物に
対する抗菌スペクトルは表４および５に示す通り
である。最小発育阻止濃度は37℃でグルコース入
り普通寒天培地上で求めた。
天培地において20〜37℃の温度範囲において
良好な生育をする。 (ii) ゼラチンの液化；中等度の液化能を有す
る。 (iii) デンプンの加水分解；陰性 (iv) 脱脂乳の凝固；陽性 脱脂乳のペプトン化；陽性 (v) メラニン色素の生成；陰性 (4) 炭素源の利用性（プリドハム、ゴツドリープ
寒天培地） (i) 利用する；メフーイノシトール、Ｄ−ガラ
クトース、デキストリシ、マルトース、グリ
セロール (ii) 利用が疑わしい；Ｌ−アラビノース、Ｄ−
フラクトース、フライノース、Ｄ−トレハロ
ース (iii) 利用しない；Ｄ−キシロース、シユークロ
ース、Ｄ−マンニトール、ラクトース H829−MY10株の菌学的性質を要約すると、輪
生枝の生成、うす黄茶色の生育、白色の気菌糸そ
して可溶性色素非生産性が挙げられる。 H829−MY10株のこのような性状はストレプト
バーテシリウム属のストレプトバーテシリウム
オリボレテイキユリ（Streptoverticillium
olivoreticuli）の性状とよく一致する。すなわち
ストレプトバーテシリウム オリボレテイキユリ
は第一次、第二次輪生枝を生成し、うす黄茶色の
基生菌糸を伸ばし、生理機能不明の球状構造体を
生成する。しかしストレプトバーテシリウム オ
リボレテイキユリはクロモジエニツクな型に属す
る事、イノシトールをほとんど利用しない事より
H829−MY10株とは異る。以上の事よりH829−
MY10株はストレプトバーテシリウム オリボレ
テイキユリのサブエスピーと考えられ本発明者等
はネオエナクチン生産菌という事よりストレプト
バーテシリウム オリボレテイキユリ、サブエス
ピーネオエナクテイカス オオタニ ニト ナカ
ムラ（Streptoverticillium olivoreticuli subsp.
neoenacticus）と命名した。 H829−MY10株は他のストレプバーテリシウム
属またはストレプトミセス属の場合にみられるよ
うに、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、
エツクス線、高周波、放射線、薬品等を用いる人
工的手段で変異しうるものであり、このような変
異株であつてもネオエナクチンまたはネオエナク
チン構成成分の生産能を有するものは全て本発明
の方法を使用する事が出来る。なお、本菌株は通
商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されており、その微工研受託番号は微工研菌寄第
4376号（FERM−P4376）である。本発明の方法
では、上記菌株を通常微生物が利用し得る栄養物
を含有する培地で培養する。 栄養源としては従来ストレプトミセス属の菌の
培養に利用されている公知のものが利用できる。
例えば炭素源としてはゲルコース、デンプン、グ
リセリン、デキストリン、シユークロース、水あ
め、糖みつ、大豆油等を使用し得る。 また窒素源としてソーヤミール、乾燥乾母、コ
ーンステイープリカー、小麦胚芽、コツトンシー
ドミール、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ等を使
用し得る。その他必要に応じて炭酸カルシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリ、リン酸塩、塩化マン
ガン、硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸亜鉛等の無機塩
を添加するほか、菌の発育を助けネオエナクチン
の生産を促進する有機および無機物を適当に添加
する事が出来る。培養法としては一般に抗生物質
生産の方法と同じく液体培養が適している。培養
は好気的条件下で行なわれ、培養に適当な温度は
25〜35℃であるが、多くの場合28℃付近で培養す
る。 ネオエナクチンの生産は振盪培養、タンク培養
共に１〜３日で最高に達する。以上述べた培養条
件は使用する生産菌株の特性に応じてそれぞれの
最適条件を選択して適用する事が出来る、ネオエ
ナクチンは菌体および培養液の両方に含まれる
ので両者から抽出を行なう事が可能である。一例
を示すと培養液からはPH８において酢酸エチル
抽出を行なう、または培養液からアンバーライ
トXAD−に吸着させ、含水メタノールで溶出
される。 また菌体からはメタノール抽出を行ない、減圧
下でメタノールを留去後PH８で酢酸エチル抽出を
行なう。両酢酸エチル抽出フラクシヨンに含まれ
るネオエナクチンはPH２において水層に逆転移で
きる。水層に移行したネオエナクチンはPH８で再
び酢酸エチルフラクシヨンに抽出される。この酢
酸エチル抽出フラクシヨンを減圧下、濃縮する事
により粘性の高い油状物質を得る。油状物質を1/
２０Ｍリン酸緩衝液（PH8.0）を飽和した酢酸エチ
ルに溶解し、1/20Ｍリン酸緩衝液（PH8.0）に浸
し風乾したセルロース粉末を同様な酢酸エチルを
用いて調整したカラムで展開する。ネオエナクチ
ンを含むフラクシヨンを集め少量の水で水洗し、
減圧下蒸発乾固し1/20Ｍリン酸緩衝液を飽和した
酢酸エチルに溶解する。これを再び同様なセルロ
ース粉末のカラムに展開する。 ネオエナクチンを含むフラクシヨンを集め松量
の水で水洗し、減圧下蒸発乾固し、ネオエナクチ
ンの粉末を得る。ネオエナクチンの各種微生物に
対する抗菌スペクトルは表４および５に示す通り
である。最小発育阻止濃度は37℃でグルコース入
り普通寒天培地上で求めた。
【表】
【表】
【表】
【表】
上表より明らかなようにネオエナクチンは細菌
に対しほとんど抗菌力を示さないが、酵母および
カビに対し抗菌力を示す特性を有している。また
既知のポリエン系抗生物質、トリコマイシン、ア
ンホテリシンＢの抗菌力をコレステロールの存
在、非存在下において増強する。以上のような理
化学的性質および理物的性質を有するものは他の
既知物質に該当するものがなく、特異な性質をも
つた新抗生物質と認められる。また、ネオエナク
チンは酵母およびカビに対する作用だけではな
く、ガン細胞（例えばエールリツヒ腹水ガン細
胞）に対し、３H−チミジンまたは３H−ロイシン
のとり込みを抑制し、抗腫瘍作用を示す。 実施例 １ ストレプトバーテシリウム オリボレテイキユ
リ サブエスピー ネオエナクテイカスH829−
MY10の保存用斜面寒天より菌１エーゼを１％マ
ルトース、0.2％酵母エキス、0.2％ポリペプトン
を含む液体培地（PH7.0）100mlに接種27℃、24時
間振盪培養したものを種菌とした。30容のジヤ
ーフアーメンターに1.5％可溶性デンプン、１％
グルコース、２％ソーヤミール、0.5％エビオ
ス、0.25％ NaCl、0.3％ CaCO3、0.0008％
MnCl2・4H2O、0.0007％ CuSO4・5H2O、
0.0002％ ZnSO4・7H2O、0.0001％ FeSO4・
7H2Oを含む培地（PH7.6、減菌前）15を仕込み
常法により培地を滅菌した。種菌300mlを移殖
し、通気量毎分10、撹拌数250rpm、27℃で36
時間通気撹拌培養して培養菌体１Kgを得た。菌体
を２倍容のメタノールで３度抽出し、抽出液を合
わせ、減圧乾固しシロツプとした。シロツプをPH
８にして等量の酢酸エチルで抽出を行なつた。酢
酸エチル層に抽出したネオエナクチンはPH2.0の
水200mlで逆抽出した。この水層を再びPH８とし
等量の酢酸エチルで抽出を行ない、酢酸エチル層
を水洗した後、減圧下蒸発乾固した。粗エナクチ
ン量は804mgであつた。 実施例 ２ 粗ネオエナクチン500mgを1/20Ｍリン酸緩衝液
（PH8.0）に浸した後風乾し1/20Ｍリン酸緩衝液
（PH8.0）で飽和した酢酸エチル（以下と略す）
を用いて調整したセルロース粉末のカラム（56×
２cm）に展開し、活性フラクシヨンを分取した。
活性フラクシヨンを水洗し、減圧下濃縮乾固し
93.6mgのネオエナクチンを得た。このネオエナク
チンを再び同様なセルロース粉末のカラム（87×
1.5cm）に展開し、活性フラクシヨンを分取し、
水洗後、減圧下濃縮乾固した。収量は43.3mgであ
つた。
に対しほとんど抗菌力を示さないが、酵母および
カビに対し抗菌力を示す特性を有している。また
既知のポリエン系抗生物質、トリコマイシン、ア
ンホテリシンＢの抗菌力をコレステロールの存
在、非存在下において増強する。以上のような理
化学的性質および理物的性質を有するものは他の
既知物質に該当するものがなく、特異な性質をも
つた新抗生物質と認められる。また、ネオエナク
チンは酵母およびカビに対する作用だけではな
く、ガン細胞（例えばエールリツヒ腹水ガン細
胞）に対し、３H−チミジンまたは３H−ロイシン
のとり込みを抑制し、抗腫瘍作用を示す。 実施例 １ ストレプトバーテシリウム オリボレテイキユ
リ サブエスピー ネオエナクテイカスH829−
MY10の保存用斜面寒天より菌１エーゼを１％マ
ルトース、0.2％酵母エキス、0.2％ポリペプトン
を含む液体培地（PH7.0）100mlに接種27℃、24時
間振盪培養したものを種菌とした。30容のジヤ
ーフアーメンターに1.5％可溶性デンプン、１％
グルコース、２％ソーヤミール、0.5％エビオ
ス、0.25％ NaCl、0.3％ CaCO3、0.0008％
MnCl2・4H2O、0.0007％ CuSO4・5H2O、
0.0002％ ZnSO4・7H2O、0.0001％ FeSO4・
7H2Oを含む培地（PH7.6、減菌前）15を仕込み
常法により培地を滅菌した。種菌300mlを移殖
し、通気量毎分10、撹拌数250rpm、27℃で36
時間通気撹拌培養して培養菌体１Kgを得た。菌体
を２倍容のメタノールで３度抽出し、抽出液を合
わせ、減圧乾固しシロツプとした。シロツプをPH
８にして等量の酢酸エチルで抽出を行なつた。酢
酸エチル層に抽出したネオエナクチンはPH2.0の
水200mlで逆抽出した。この水層を再びPH８とし
等量の酢酸エチルで抽出を行ない、酢酸エチル層
を水洗した後、減圧下蒸発乾固した。粗エナクチ
ン量は804mgであつた。 実施例 ２ 粗ネオエナクチン500mgを1/20Ｍリン酸緩衝液
（PH8.0）に浸した後風乾し1/20Ｍリン酸緩衝液
（PH8.0）で飽和した酢酸エチル（以下と略す）
を用いて調整したセルロース粉末のカラム（56×
２cm）に展開し、活性フラクシヨンを分取した。
活性フラクシヨンを水洗し、減圧下濃縮乾固し
93.6mgのネオエナクチンを得た。このネオエナク
チンを再び同様なセルロース粉末のカラム（87×
1.5cm）に展開し、活性フラクシヨンを分取し、
水洗後、減圧下濃縮乾固した。収量は43.3mgであ
つた。
第１図はネオエナクチンのUV吸収を示す。第
２図はネオエナクチンのIR吸収を示す。
２図はネオエナクチンのIR吸収を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性状を有する抗真菌性物質ネオ
エナクチンおよびその官能性誘導体ならびにそれ
らの塩類。 (a) 元素分析値 ネオエナクチンの元素分析値（元素分析によ
る百分率組成（平均値）％は下記の通りであ
る。 Ｃ：63.47 Ｈ：10.04 Ｎ：7.44 （Ｏ：19.05） 但し、ハロゲン元素および硫黄は検出されな
い。 (b) 融点 ネオエナクチンの融点は、60.5乃至64.5℃で
ある。 (c) 紫外部吸収スペクトル ネオエナクチンの紫外部吸収スペクトルは第
１図に示す通りである。また、各溶液中におけ
る吸収極大およびＥ１％１cmの値は以下の通りであ
る。 【表】 (d) 赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法で測定したネオエナクチ
ンの赤外部吸収スペクトルは第２図に示す通り
である。 (e) 比旋光度 ネオエナクチンのメタノール中に於ける比旋
光度は下記の通りである。 ［α］１２ Ｄ＝−14.2゜（Ｃ＝３％） (f) 溶剤に対する溶解性 ネオエナクチンの溶解性は下記の通りであ
る。 可溶：低級アルコール、酢酸エチル、エーテ
ル、クロロホルム 不溶：水、Ｎ−ヘキサン、石油エーテル (g) 呈色反応 ネオエナクチンの呈色反応は下記の通りであ
る。 ニンヒドリン反応 ＋ ナフトレゾルシノール−リン酸反応 ＋ KMnO4 ＋ アンスロンーリン酸反応 − α−ナフトール−リン酸反応 − (h) Rf値 ネオエナクチンのペーパークロマトグラフイ
ーおよびシリカゲルＧ薄層クロマトグラフイー
で各種展開溶媒で得られる単一スポツトのRf
値は以下の通りである。 () ペーパークロマトグラフイー 【表】 () シリカゲルＧ薄層クロマトグラフイー 【表】 (i) 外観 ネオエナクチンの外観は白色無定形の粉末で
ある。 (j) 酸、アルカリに対する安定性 ネオエナクチンをPH9.0、100℃で５分間加熱
すると、ネオエナクチンの80％が失活する。し
かしながら、ネオエナクチンをPH2.6 100℃で
５分間加熱してもネオエナクチンのほぼ90％の
活性が保持される。 ２ ストレプトバーテシリウム属に属するネオエ
ナクチン生産菌を培養し、その培養液および菌体
より抗真菌性物質ネオエナクチンまたはその構成
因子を採取することを特徴とする抗真菌性物質ネ
オエナクチンまたはその構成因子の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2451378A JPS54117401A (en) | 1978-03-06 | 1978-03-06 | Antifungal agent neoenactin and preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2451378A JPS54117401A (en) | 1978-03-06 | 1978-03-06 | Antifungal agent neoenactin and preparation thereof |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60164045A Division JPS6183196A (ja) | 1985-07-26 | 1985-07-26 | 抗真菌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS54117401A JPS54117401A (en) | 1979-09-12 |
| JPS6129717B2 true JPS6129717B2 (ja) | 1986-07-08 |
Family
ID=12140243
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2451378A Granted JPS54117401A (en) | 1978-03-06 | 1978-03-06 | Antifungal agent neoenactin and preparation thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS54117401A (ja) |
-
1978
- 1978-03-06 JP JP2451378A patent/JPS54117401A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS54117401A (en) | 1979-09-12 |
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