JPS6133556B2

JPS6133556B2 -

Info

Publication number: JPS6133556B2
Application number: JP54042725A
Authority: JP
Inventors: Akihiro Sakimae; Hisao Oonishi
Original assignee: Mitsubishi Rayon Co Ltd
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1979-04-09
Filing date: 1979-04-09
Publication date: 1986-08-02
Also published as: FR2453899B1; JPS55135591A; GB2046271A; US4276381A; GB2046271B; DE2930859A1; FR2453899A1; CA1119539A; DE2930859C2

Description

【発明の詳細な説明】本発明は固定化微生物の製造法に関する。更に
詳しくは、生きた微生物を水不溶性高分子物質で
包括することからなる固定化微生物の製造法に関
する。

今日、微生物は食品工業、医薬品工業などの幅
広い分野で利用されており、その重要性が増々認
識されつつある。しかしながら従来の微生物の利
用形態は水に懸濁して反応を行なわしめる場合を
常とし、反応終了後は反応液からの回収が容易で
ないため使用したら廃棄しており、このため微生
物反応の工程は回分式にならざるを得ず、微生物
の利用効率は極めて低いという欠点があつた。そ
こで近年微生物を生きたままで回収が容易な大き
さに成型して反復あるいは連続反応に供しようと
する固定化微生物の研究が盛んに行なわれるよう
になつた。

従来、固定化微生物の製造法に関して、有機あ
るいは無機の水不溶性物質に微生物を共有結合、
イオン結合、あるいは吸着等により担持させて固
定化する方法、二官能性試薬等で微生物どうしを
共有結合して固定化する方法、微生物を水不溶性
高分子物質で包括して固定化する方法（以下この
方法を包括法と略記する。）などに大別される各
種各様の固定化法が報告されている。包括法に関
しては、例えばアクリルアミド、ビニルピロリド
ン、ハイドロオキシエチルアクリレート、アクリ
ル酸塩等の水溶性単量体、ポリビニルアルコー
ル、ポリアクリルアミド等の水溶性高分子物質、
Ｎ・N′−メチレンビスアクリルアミド等の水溶
性架橋剤などを微生物とともに水に溶解せしめた
のちこれを過硫酸カリ等の重合触媒あるいはγ線
等の放射線で重合を起こさせると同時に架橋構造
を与え生成した水不溶性高分子ゲル中に微生物を
包括する方法とか水不溶性単量体が溶解している
有機溶媒中に微生物を含有する水溶液を微小な水
滴として分散せしめたのち重合を行なわしめた
り、あるいは水不溶性高分子物質を溶解している
有機溶媒中に微生物を含有する水溶液を水滴とし
て分散せしめた後有機溶媒を除去したりして微小
な水滴を水不溶性高分子物質で包括する方法など
が知られている。

微生物は一般に水中においては比較的安定であ
るが、有機溶媒中では不安定であり、従つて従来
の方法では包括に使用される材料は水溶性のもの
が多い。水溶性の材料を用いる場合には重合又は
架橋などによつて不溶性にする操作が必要であ
り、それらの操作によつて微生物の変質は免れな
い。また包括材料として水不溶性高分子物質を用
いようとすると、これを溶解するために有機溶媒
を用いる必要があり、微生物が有機溶媒により変
質する場合が多い。

そこで本発明者らは、微生物が包括操作中に変
質しない方法を見い出すべく鋭意研究の結果微生
物をあらかじめ氷塊の中に包括しておくことによ
つて有機溶媒中で長時間取り扱つても安定に保た
れ、しかもこの氷塊を高分子膜で容易に包括でき
ることを見い出し本発明に至つた。

即ち本発明は、微生物を含有する氷塊を水不溶
性高分子物質を溶解した有機溶媒中に分散させ、
ついで有機溶媒を除去することにより該氷塊を水
不溶性高分子物質で包括せしめることを特徴とす
る固定化微生物の製造法である。

本発明で使用される微生物はカビ、酵母、細
菌、放線菌、不完全菌に分類される微生物であ
り、その種類は特に制限されないが、例えば
Aspergillus層としてはA.niger、A.oryzae、A.
terreus、A.itaconicus、A.flavusなど、
Penicilium属としては、P.chrysogenum、P.
janthinellum、P.purpurogenumなど、Mucor属
としてはM.rouxii、M.mandshuricusなど、
Rhizopus属としてはR.nigricans、R.japonicusな
ど、Monascus属としてはM.major、M.anka、M.
rubiginosusなど、Saccharomyces属としてはS.
cerevisie、S.rouxii、S.ludwigiiなど、
Schizosaccharomyces属としてはS.pombeなど、
Hansenula属としてはH.misoなど、Pichia属とし
てはP.monobranaefacieus、P.glabrateなど、
Candina属としてはC.utilisなど、Pseudomonas
属としてはP.ovalis、P.stutzeri、P.
denitrificans、P.aeruginosa、P.gravolens、P.
fluorescensなど、Escherichia属としてはE.coli
など、Aerobacter属としてはA.aerogenesなど、
Corynebacterium属としてはC.glutamicus、C.
acetophilum、C.hydrocarboclastusなど、
Bacillus属としてはB.subtilis、B.megaterium、
B.brevis、B.coagulans、B.licheniformisなど、
Brevibacterium属としてはB.flavum、B.
thiogenitalesなど、Microbacterium属としては
M.ammoniaphulumなど、Serratia属としてはS.
marcescensなど、Alcaligenes属としてはA.
marshalliiなど、Acetobacter属としてはA.
aceti、A.melanogenum、A.suboxydansなど、
Nitrosomonas属としてはN.europaea、N.
monocellaなど、Nitrosococcus属としてはN.
nitrosusなど、Nitrosopia属としてはN.
breviensis、N.antarcticaなど、Nitrosocystis属
としてはN.javanensisなど、Thiobacillus属とし
てはT.dentrificansなど、Lactobacillus属として
はL.bulgaricus、L.casei、L.brevis、L.
arabinosus、L.homohiochi、L.delbruckiiなど、
Streptomyces属としてはS.olivochromogenus、
S.kitazawaensis、S.archidaceus、S.
garyphalus、S.lavenduluae、S.
roseochromogenus、S.griseus、S.bikiniensis、
S.mashuensis、S.ruber、S.albus、S.
antibioticus、S.fradiae、S.erythraeus、S.
alboniger、S.chrysomallus、S.noursei、S.
Rachijoensis、S.venezuelae、S.
phaeochromogenus var chloromyceticus、S.
thioluteus、S.celluflavusなど、Fusarium属とし
てはF.liniなどに代表される。本発明において
は、これらの微生物は栄養培地で生育せしめられ
たのち生きた状態で使用される。ここに生きた状
態とは微生物が自己再生能力を有することを意味
し、その確認は微生物の生育に適する環境下にそ
の微生物を存在せしめることによりなされる。微
生物の生育に適する環境は個々の微生物により異
なり、それは実験的に求められる。

本発明で使用される微生物を含有する氷塊と
は、微生物を含有する水溶液を深冷された雰囲気
中で凍結し、氷塊の内部に微生物を包含せしめた
ものである。深冷された雰囲気としては冷却され
たガスあるいは液のいずれでもよいが、好ましく
は液状の冷却媒体を用いるのがよい。液状の冷却
媒体としては凝固点が０℃以下の液状物の中から
選ばれ、例えばメタノール、エタノール、アセト
ン、酢酸エチル、二塩化メチレン、クロロホル
ム、四塩化炭素、エチルエーテル、テトラヒドロ
フラン、トルエン、ｎ−ヘキサン、石油エーテ
ル、液体窒素などであり、これらを冷却するには
蒸発熱を利用したりドライアイス等を投入して直
接冷却するか、又は冷凍機などにより間接に冷却
する方法などがとられる。

微生物を含有する水溶液を液状の冷却媒体を用
いて凍結するに際しては、微生物を含有する水溶
液を容器等に入れて間接的に凍結してもよく、又
液状の冷却媒体中で直接凍結させてもよい。冷却
媒体中で直接凍結する場合においては冷却媒体に
よる微生物の死滅を極力抑えるために、冷却媒体
の冷却温度をできるだけ低温にし更に水溶液を噴
霧器などを用いて微小水滴化して急速凍結するこ
とが望ましい。

ひとたび氷塊の内部に包含された微生物は氷が
融解する温度以下ならば各種の有機溶媒中に放置
されても安定である。

更に又、本発明においては微生物の保護を目的
として各種の共含物を使用することができる。た
とえばポリビニルアルコール、ポリエチレングリ
コール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルア
ミド、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンイミン、
カルボキシメチルセルロース、タンパク質、核
酸、多糖等の水溶性高分子物質あるいはグリセリ
ン、エチレングリコール等の多価アルコール類、
あるいはジメチルスルホオキサイド、ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジオキサン
等の極性有機溶媒、あるいはシヨ糖、乳糖、麦芽
糖などの少糖類、グルタミン酸、アスパラギン酸
等のアミノ酸類、α−ケトグルタル酸、リンゴ酸
等の有機酸類、マグネシウム、マンガン、コバル
ト、カルシウム等の金属塩類などを微生物を含有
する水溶液に共含せしめたのち、これを冷却され
た雰囲気中で急速凍結することにより氷塊中に共
含せしめることができる。

本発明で使用される水不溶性高分子物質とは有
機溶媒に溶解し水に不溶な高分子量の重合体であ
り、０℃以下の有機溶媒にわずかでも溶解するも
のならばすべて本発明に使用できるが、好ましく
は０℃以下の有機溶媒に0.1重量％以上溶解する
水不溶性高分子物質が適当である。ここで水不溶
性高分子物質が有機溶媒に溶解するとは水不溶性
高分子物質が有機溶媒と相分離を起こさない濃度
で有機溶媒と均一に混合していることである。

本発明で使用される代表的な水不溶性高分子物
質としてはポリアクリロニトリル、ポリアクリル
酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリス
チレン、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリ
カーポネートなどのホモポリマーまたはこれらホ
モポリマーを構成する単量体を成分とするような
コポリマー、あるいは酢酸セルロース、エチルセ
ルロースのようなセルロース誘導体などである
が、もちろんこれだけに限定されるものではな
い。

これらの水不溶性高分子物質を０℃以下で0.1
重量％以上溶解する有機溶媒は０℃以下で液体で
存在するもののなかから選ばれ、例えばメタノー
ル、エタノール、プロパノール、アセトン、メチ
ルエチルケトン、酢酸エチル、二塩化メチレン、
クロロホルム、四塩化炭素、エチルエーテル、ト
ルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、石油エーテ
ル、テトラヒドロフラン、シクロヘキセン、Ｎ・
N′−ジメチルホルムアミド、γ−ブチロラクト
ン、アセトニトリルなどがよく使用されるが、も
ちろんこれらに限定されるものではない。水不溶
性高分子物質はこれらの有機溶媒に溶解せしめら
れたのち、０℃以下に冷却された状態で使用され
る。

また有機溶媒を除去して微生物を含有する氷塊
を水不溶性高分子物質で包括するとは、氷塊を水
不溶性高分子物質を溶解した０℃以下の有機溶媒
中に懸濁状態で分散せしめたのち、水不溶性高分
子物質を溶解している有機溶媒を除去することに
より氷塊の周囲に水不溶性高分子物質を析出させ
て氷塊を水不溶性高分子物質で包み込むことであ
る。微生物を含有する氷塊を水不溶性高分子物質
を溶解した有機溶媒中に分散せしめるにあたつて
は、水不溶性高分子物質を有機溶媒に溶解せしめ
たのち、別途調製した氷塊を加えて急速撹拌など
により懸濁状態に分散せしめてもよく、また冷却
下の水不溶性高分子物質を溶解した有機溶媒中に
微生物を含有する水溶液を微小水滴として直接分
散させて急速凍結し微生物を含有する氷塊を生成
させてもよい。氷塊を有機溶媒に均一に分散させ
るためには、氷塊の粒径が小さい程効果的である
ため、氷塊の大きさとして直径が１mm以下のもの
を使用することが好ましい。

又、一旦分散された氷塊を有機溶媒中で安定に
維持するためには、氷塊分散時に氷塊とともに該
水不溶性高分子物質の非溶媒を適当量加えてもよ
い。特に氷塊の比重と水不溶性高分子物質を溶解
した有機溶媒との比重が異なる場合は一旦分散さ
れた氷塊は撹拌を停止すると有機溶媒と分離して
しまう。このような場合には非溶媒を加えること
により氷塊を有機溶媒中に安定に分散せしめるこ
とができる。ここで氷塊とともに該水不溶性高分
子物質の非溶媒を加えるとは、氷塊を該水不溶性
高分子物質の非溶媒に一旦スラリー化したのち、
このスラリーを水不溶性高分子物質を溶解した有
機溶媒中に急速撹拌下で加えることである。この
場合、氷塊は非溶媒とともに水不溶性高分子物質
を溶解した有機溶媒中に分散されるため、氷塊の
周辺で水不溶性高分子物質が凝固し、更にこの凝
固した水不溶性高分子物質が過剰の有機溶媒にな
かば溶解された状態が形成され、その結果氷塊は
水不溶性高分子物質を溶解した有機溶媒中に安定
に分散せしめることができる。更に又、これをよ
り効果的に行なうためには、氷塊中にポリビニル
アルコール、ポリエチレングリコール等の水溶性
高分子物質、あるいはグリセリン、エチレングリ
コール等の多価アルコールなどを共含させること
もできる。

氷塊の分散性の向上を目的として使用される非
溶媒は水不溶性高分子物質を溶解せず０℃以下で
液状の溶媒であり、水不溶性高分子物質を溶解し
た有機溶媒と混和するものから選ばれる。

氷塊を分散させた水不溶性高分子物質溶液から
氷塊包括物を得るには、溶媒を減圧下で蒸発させ
てもよく、あるいは水不溶性高分子物質の非溶媒
中で凝固させる方法によつてもよい。

微生物は氷塊の内部に包括せられている間は有
機溶媒が共存しても安定であるが、氷が融解する
と有機溶媒による微生物の死滅が起こる危険性が
あるため、氷塊が融解する前に包括物から有機溶
媒を除去することが好ましい。有機溶媒を除去す
るには減圧下で蒸発させるなどの方法が行なわれ
る。

このようにして有機溶媒を除去して氷塊包括物
は、そのままで冷凍保存し、使用前に融解して固
定化微生物として用いることができるが、更にこ
のものを凍結乾燥することにより保存や輸送に便
利な形態とすることができる。ここに凍結乾燥す
るとは、氷を昇華して除去することであり、この
ために真空凍結乾燥装置が使用される。

本発明は、微生物を一旦氷塊の内部に包括せし
めて有機溶媒による微生物の死滅を防止すること
により有機溶媒中で微生物を水不溶性高分子物質
で包括するという全く新規な固定化微生物の製造
法を提供するものである。従来法が微生物を有機
溶媒中に安定に存在せしめた状態で微生物の包括
を行なつていないため、既に述べたような種々の
欠点が生じるのに対し、本発明によればこれら従
来の欠点は解決され、現在工業的に汎用されてい
る各種の水不溶性高分子物質の使用が可能にな
り、微生物が生きた状態で包括された固定化微生
物が容易に製造できる利点を有する。更に本発明
によつて製造された固定化微生物はビーズ状、粉
末状、繊維状、棒状、フイルム状等に成型された
状態で得ることができ、微生物の特異性に着目し
た各種の有用化学物質の生産工程の触媒として、
廃水処理手段としてあるいは分析手段として広く
利用される可能性がある。更に又、固定化微生物
は生きた状態で包括されているため、その使用に
際しては栄養培地中で使用することにより長期間
自己再生を行なわしめながら反応に供することが
できる。

以下実施例により具体的に説明する。

実施例１ Corynebacterium glutamicumをグルコース4.5
重量％、尿素0.5重量％、（NH₄）₂SO₄0.5重量％、
酵母エキス0.1重量％、KH₂PO₄0.05重量％、
K₂HPO₄0.05重量％、MgSO₄・7H₂O0.025重量
％、FeSO₄・7H₂O0.001重量％、MnSO₄・
H₂O0.0008重量％、ビチオン10μ／培地、大
豆オイル25滴／培地を含有する栄養培地（初期
PH7.0）に植菌し30℃で24時間振盪培養した。こ
の培養液にグリセリン5.0重量％、シヨ糖3.0重量
％、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム1.0重量％を含
有せしめたのち、スプレーで微小な水滴にしてド
ライアイスで冷却された−75℃のｎ−ヘキサン中
で急速凍結することによりCorynebacterium
glutamicumを含有した氷塊を生成せしめた。こ
の氷塊を手早くブフナーロートで回収したのち約
30ｇをｎ−ヘキサンと二塩化メチレンの混合溶媒
（混合比：ｎ−ヘキサン／二塩化メチレン＝１／
１（vol／vol）−50℃に冷却。）50mlにスラリー化
したのち、このスラリーを0.5重量％のポリメタ
クリル酸メチルと1.5重量％のセルローストリア
セテートを溶解した−10℃の二塩化メチレン500
ｇ中に急速撹拌下徐々に加えて氷塊を分散せしめ
たのち、これを−50℃に冷却されたｎ−ヘキサン
浴に液滴として落下させることにより凝固物を得
た。この凝固物に含浸されている有機溶媒を減圧
下で除去したのち、ひきつづいて一昼夜凍結乾燥
することによりCorynebacterium glutamicumを
包括した粒状の乾固物を得た。

凍結乾燥直後及び真空下10℃で約１カ月放置し
た時のこの乾燥物に包括されている生きた
Corynebacterium glutamicumの確認を以下の方
法で行なつた。即ち、乾燥物1.0ｇをカツターで
微細片に切断し、これを100mlの無菌水に懸濁さ
せたのち、10℃の温度下で約30分間振盪すること
により菌体を溶出させた。この菌体溶出液１mlを
殺菌した上記の栄養培地10mlに注入し、振盪培養
したところ、凍結乾燥直後及び真空下10℃で約１
カ月放置した時のいずれの場合も菌の増殖がみら
れた。更に顕微鏡観察により、この増殖した菌と
包括前のCorynebacterium glutamicumとを比較
したところ、増殖した菌がCorynebacterium
glutamicumであると同定された。以上のことか
ら乾燥物中にCorynebacterium glutamicumが生
きた状態で包括されていることが確認された。

実施例２ Serratia marcescensをグルコース10重量％、
尿素0.5重量％、K₂HPO₄0.1重量％、MgSO₄・
7H₂O0.05重量％、CaCO₃2重量％、コーンステー
プリカー（CSL）0.7重量％を含有する栄養培地
（初期PH7.0）に植菌し、30℃で24時間振盪培養し
た。これにグリセリン5.0重量％、ポリエチレン
グリコール1.0重量％、デキストラン2.0重量％、
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム0.5重量％を含有せ
しめたのち、スプレーで微小な水滴にしてドライ
アイスで冷却された−75℃のｎ−ヘキサン中で急
速凍結することによりSerratia marcescensを含
有した氷塊を生成せしめた。の氷塊約30ｇを実施
例１と同様にｎ−ヘキサンと二塩化メチレンの混
合溶媒にスラリー化したのち、0.5重量％のポリ
カーボネートと1.5重量％のセルローストリアセ
テートを溶解した−10℃の二塩化メチレン500ｇ
中に急速撹拌下徐々に加えて氷塊を分散せしめた
のち、これを−50℃に冷却されたｎ−ヘキサン浴
に液滴として落下させることにより凝固物を得
た。この凝固物に含浸されている有機溶媒を減圧
下で除去したのち、ひきつづいて一昼夜凍結乾燥
することによりSerratia marcescensを包括した
粒状の乾固物を得た。

この乾固物に包括されている生きたSerratia
marcescensの確認を実施例１と同様にして行な
い、乾固物中にSerratia marcescensが生きた状
態で包括されていることが確認された。

実施例３ Escherichia coliを肉エキス1.0重量％、ペプト
ン1.0重量％、グルコース0.25重量％、NaCl 0.5
重量％含有する栄養培地（初期PH7.0）に植菌
し、30℃で24時間振盪培養した。この培養液にグ
ルコース5.0重量％、血清アルブミン5.0重量％、
ポリエチレングリコール3.0重量％、グリセリン
4.0重量％を含有せしめたのち、これをスプレー
で微小な水滴にしてドライアイスで冷却された−
75℃のｎ−ヘキサン中で急速凍結することにより
Escherichia coliを含有した氷塊を生成せしめ
た。この氷塊約10ｇを1.5重量％のアクリロニト
リルと酢酸ビニルの共重合物（重量比；アクリロ
ニトリル／酢酸ビニル＝91／９）を溶解した−10
℃のＮ・N′−ジメチルホルムアミド100ml中に分
散せしめたのち、これを冷却されたガラス板上に
流延した。これを更に−50℃付近迄冷却したの
ち、−50℃のメタノール浴に浸漬することにより
共重合物を凝固させた。この凝固物に含浸されて
いる有機溶媒を減圧下で除去したのち、ひきつづ
いて一昼夜凍結乾燥することによりEscherichia
coliを包括した膜状の共重合物を得た。

この膜状物に包括されている生きた
Escherichia coliの確認を実施例１と同様にして
行ない、膜状物中にEscherichia coliが生きた状
態で包括されていることが確認された。

実施例４ Saccharomyces cerevisiaeをペプトン0.35重量
％、酵母エキス0.3重量％、マルトエキス0.3重量
％、グルコース1.0重量％、KH₂PO₄0.2重量％、
（NH₄）₂SO₄0.1重量％、MgSO₄・7H₂O0.01重量％
含有する栄養培地（初期PH6.0）に植菌し、30℃
で48時間振盪培養した。この培養液にグリセリン
5.0重量％、ペプトン3.0重量％、ジメチルスルホ
オキサイド2.0重量％を含有せしめたのち、実施
例１と同様にしてSaccharomyces cerevisiaeを
含有した氷塊を生成せしめた。この氷塊約30ｇを
ｎ−ヘキサンと二塩化メチレンの混合溶媒（混合
比；ｎ−ヘキサン／二塩化メチレン＝１／１
（vol／vol）−50℃に冷却。）50mlにスラリー化し
たのち、このスラリーを2.5重量％のセルロース
トリアセテートを溶解した−10℃の二塩化メチレ
ン500ｇ中に急速撹拌下徐々に加えて氷塊を分散
させた。ついでこのものを−50℃に冷却されたト
ルエン浴に液滴として落下させることにより粒状
のセルローストリアセテート凝固物を得た。この
凝固物に含浸されている有機溶媒を減圧下で除去
し、ひきつづいて一昼夜凍結乾燥することにより
Saccharomyces cerevisiaeを包括した粒状のセ
ルローストリアセテート乾燥物を得た。

この乾燥物に包括されている生きた
Saccharomyces cerevisiaeの確認を実施例１と
同様にして行ない、乾燥物中にSaccharomyces
cerevisiaeが生きた状態で包括されていることが
確認された。

実施例５ Penicillum chrysogenumを乳糖2.0重量％、グ
ルコース1.0重量％、コーンステイーブリカー
（CSL）6.0重量％、NaNO₃0.3重量％、
KH₂PO₄0.05重量％、MgSO₄・7H₂O0.0125重量
％、CaCO₃0.5重量％を含有する栄養培地（初期
PH5.5）に植菌し、25℃で３日間培養した。この
培養液にグリセリン5.0重量％、Ｌ−グルタミン
酸ナトリウム5.0重量％、蜂蜜3.0重量％を含有せ
しめたのち、実施例１と同様にしてPenicillum
chrysogenumを含有した氷塊を生成せしめた。

この氷塊約10ｇを実施例３と同様にしてアクリ
ロニトリルと酢酸ビニルの共重合体を溶解した
Ｎ・N′−ジメチルホルムアミド中に分散せしめ
たのち、メタノールで共重合物を凝固させた。凝
固物に含浸されている有機溶媒を減圧下で除去
し、ついで一昼夜凍結乾燥することにより
Penicillum chrysogenumを包括した膜状の共重
合物を得た。

この膜状物に包括されている生きたPenicillum
chrysogenumの確認を実施例１と同様にして行
ない、乾燥物中にPenicillum chrysogenumが生
きた状態で包括されていることが確認された。

実施例６ Streptomyces griseusをグルコース0.5重量
％、可溶性デンプン0.5重量％、Ｌ−アスパラギ
ン0.05重量％、K₂HPO₄0.05重量％、MgSO₄・
7H₂O0.05重量％、KCl 0.05重量％、FeSO₄・
7H₂O0.001重量％、酵母エキス0.05重量％含有す
る栄養培地（初期PH7.0）に植菌し、27℃で48時
間振盪培養した。この培養液にグリセリン5.0重
量％、血清アルブミン5.0重量％、ポリエチレン
グリコール10重量％を含有せしめたのち、実施例
１と同様にしてStreptomyces griseusを含有し
た氷塊を生成せしめた。この氷塊約30ｇを実施例
４と同様にしてセルローストリアセテートを溶解
した二塩化メチレン中に分散せしめたのち、トル
エンでセルローストリアセテートを凝固させた。
凝固物に含浸されている有機溶媒を減圧下で除去
し、ついで一昼夜凍結乾燥することにより
Streptomyces griseusを包括した粒状のセルロ
ーストリアセテート乾燥物を得た。

この乾燥物に包括されている生きた
Streptomyces griseusの確認を実施例１と同様
にして行ない、乾燥物中にStreptomyces
griseusが生きた状態で包括されていることが確
認された。

Claims

【特許請求の範囲】１微生物を含有する氷塊を水不溶性高分子物質
を溶解した有機溶媒中に分散させ、ついで有機溶
媒を除去することにより該氷塊を水不溶性高分子
物質で包括せしめることを特徴とする固定化微生
物の製造法。２有機溶媒を減圧下で除去することを特徴とす
る特許請求の範囲第１項記載の固定化微生物の製
造法。３有機溶媒をそれに溶解している水不溶性高分
子物質の非溶媒で除去することを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載の固定化微生物の製造法。４微生物を含有する氷塊が、微生物を含有する
水溶液を冷却媒体中で凍結させて生成されたもの
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項又
は第２項又は第３項記載の固定化微生物の製造
法。５冷却媒体が凝固点が０℃以下の液状物である
ことを特徴とする特許請求の範囲第４項記載の固
定化微生物の製造法。６微生物を含有する氷塊が直径１mm以下のもの
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項又
は第２項又は第３項又は第４項又は第５項記載の
固定化微生物の製造法。７有機溶媒が０℃以下の温度において0.1重量
％以上の水不溶性高分子物質を溶解するものであ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第
２項又は第３項又は第４項又は第５項又は第６項
記載の固定化微生物の製造法。８水不溶性高分子物質が酢酸セルロース又はエ
チルセルロースであることを特徴とする特許請求
の範囲第７項記載の固定化微生物の製造法。９水不溶性高分子物質がポリアクリロニトリ
ル、ボリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸
エステル、ポリスチレン、ポリ酢酸ビニル、ポリ
塩化ビニル、またはポリカーボネートであるか、
又はこれらホモポリマーを構成する単量体を成分
とするようなコポリマーであることを特徴とする
特許請求の範囲第７項記載の固定化微生物の製造
法。