JPS6154040B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、ヒト白血球からのインターフエロン
の製造方法に関する。 インターフエロンは、小林茂保著「インターフ
エロン」1975年 株式会社講談社発行、D.A.J.
Tyrrell著「Interferon and its clinical
Potential」1976年 William Heinemann
Medical Books Ltd（London）発行、「蛋白質、
核酸 酵素 Vol.21No.4」（1976）などにも記載
されているように、例えばウイルス、細菌、原
虫、リケツチヤ、核酸、エンドトキシン、多糖類
などのインターフエロン誘導剤を生細胞に作用さ
せることによつて、その細胞内外に誘導生成され
る蛋白質様物質であつて、その細胞内での各種ウ
イルスの増殖を非特異的に抑制する機能を持つ物
質に与えられた名称である。 インターフエロンの持つこのような機能から、
インターフエロンはその発見の当初よりウイルス
性疾患の予防剤、治療剤として期待されてきた。 また近年、インターフエロンはウイルス性腫瘍
のみならず、非ウイルス性腫瘍に対しても抗腫瘍
性が認められるようになつて、医薬品としてのイ
ンターフエロンが鶴首されるに至つた。 インターフエロンには、生細胞がウイルス、核
酸などにさらされて生成する分子量約１〜３万の
タイプインターフエロン（別名 古典的インタ
ーフエロン）と、白血球がミトーゲン
（mitogen）によつて刺激されるか、又は抗原に
応答して生成する分子量約４〜７万のタイプイ
ンターフエロン（別名 免疫インターフエロン、
γ―インターフエロン）とがあることが知られて
いる。 “Texas Reports on Biology and
Medicine”Vol.35、1977（Published at the
Univesity of Texas Medical Branch，
Galveston，Texas，U.S.A）の第42頁で、L.B.
Epsteinが述べているように、タイプインター
フエロンは、厳しい条件（Hz２以下、Hz10以上、
温度56℃以上）の下ではタイプインターフエロ
ンよりもより不安定であることが知られている。 しかしながら、タイプインターフエロンは、
免疫反応と密接なかかわりあいを有していること
から、タイプインターフエロンよりもインター
フエロン感受性疾患に対する予防効果、治療効果
の大きいことが期待されている。 インターフエロンは、種特異性が高く、ヒトの
疾患を予防または治療するためには、ヒトの生細
胞から生成されるインターフエロンでなければ効
果がない。 そこで、本発明者は、原料生細胞にヒト白血球
を用いてインターフエロンを多量に製造する方法
について研究した。 その結果、ヒト白血球に、タイプインターフ
エロン誘導剤とタイプインターフエロン誘導剤
とを共に作用させることによつて、生成されるイ
ンターフエロンの活性量が著しく増加し得ること
を見いだし、本発明を完成した。 すなわち、ヒト白血球浮遊液にタイプインタ
ーフエロン誘導剤とタイプインターフエロン誘
導剤とを共に作用させることにより生成されるイ
ンターフエロン活性量は、タイプインターフエ
ロン誘導剤またはタイプインターフエロン誘導
剤の何れか一方のみを使用することにより生成さ
れるインターフエロン活性量の約２〜20倍、また
はこれ以上に増加することを確認したのである。 ヒト白血球は、通常血液センターから供給され
る末梢血を遠心分離して調製したものを使用す
る。また、血液センターから白血球含有量の高い
バフイーコート（buffy coats）の供給を受けて
使用してもよい。さらに、白血球を多量に含んで
いる例えば腹水、骨髄穿刺液などを使用してもよ
い。さらにまた、株化された白血球を生体外（in
vitro）で培養して得た白血球を使用することも
できる。 このようにして調製した白血球を、通常約20〜
45℃に保つた溶液、例えば生理食塩水、栄養培養
液などで細胞濃度104〜108／mlの浮遊液として使
用する。 タイプインターフエロン誘導剤としては、タ
イプインターフエロンを誘導し得るものであれ
ばよく、例えばセンダイウイルス、ニユーカツス
ル病ウイルス、二重鎖RNAなどのウイルス、核
酸などが好適である。 また、タイプインターフエロン誘導剤として
は、タイプインターフエロンを誘導し得るもの
であればよく、例えばレクチンとして知られてい
るフイトヘマグルチニン、コンカナバリンＡなど
や、ポークウイードミトーゲンなどのミトーゲン
や、例えばレンチナン、ストレプトコツカス パ
イロゲン、ツベルクリン、丸山ワクチン、KS―
２などの免疫賦活剤などが好適であり、さらに感
作化された細胞にとつては抗原もミトーゲンとし
て作用するのでタイプインターフエロン誘導剤
として有利に使用できる。 これらのインターフエロン誘導剤を白血球浮遊
液に作用させる方法は、両誘導剤を同時に添加し
て作用させる方法でも、また何れか一方の誘導剤
を先きに添加して作用させ続いて他方の誘導剤を
添加させる方法でもよい。 また、これら誘導剤の使用量は、インターフエ
ロンを誘導することのできる量であればよく、通
常約0.001μｇ／ml〜10mg／mlの濃度範囲で使用
される。 このインターフエロンの誘導生成に際して、必
要ならば、例えばヒトに種特異性の高いインター
フエロンを用いてプライミング処理をしたり、代
謝阻害剤を使用するスーパーインダクシヨン法な
どの公知の方法を採用することによつて、生成す
るインターフエロン活性量をさらに高めることも
できる。 このようにして誘導生成させたインターフエロ
ンは、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、
濾過、遠心分離、濃縮、凍結乾燥などを行うこと
によつて容易に精製分離し、採取することができ
る。さらに高度の精製を必要とする場合には、例
えばイオン交換体への吸着・溶出、ゲル濾過、ア
フイニテイクロマトグラフイー、等電点分画、電
気泳動などの公知の方法をさらに組み合せればよ
い。これらの方法によつて極めて高純度のタイプ
インターフエロンとタイプインターフエロン
とを分離採取することも容易である。 このようにして製造されるインターフエロン
は、そのままで、または他の薬剤と併用してヒト
インターフエロン感受性疾患、例えば流行性結膜
炎、ヘルペス性角膜炎、インフルエンザ、風疹、
血清肝炎などのウイルス性疾患や、白血病、骨肉
腫などの非ウイルス性疾患などの予防剤、若しく
は治療剤に、例えば噴霧剤、点眼剤、点鼻剤、う
がい剤、注射剤などの液剤、軟膏剤のようなペー
スト剤、粉剤、顆粒剤、錠剤などの固剤として有
利に利用することができる。 ヒトに種特異性の高いタイプインターフエロ
ンおよびタイプインターフエロンの活性は「蛋
白質核酸酵素 Vol.20 No.6」616頁〜643頁
（1975）に報告されているヒト羊膜由来のFL細胞
を使用して公知のプラーク半減法で測定した。 赤血球凝集価J.E.Salk著「Journal of
Immunology Vol.49」87頁（1944）の方法に準じ
て測定した。 次に、実験例で本発明をより詳細に説明する。 実験例 ヒト白血球を血清無添加のRPMI1640培地（Hz
7.2）に細胞濃度約１×106／mlになるよう浮遊さ
せ、37℃に保つた。 この浮遊液にタイプインターフエロン誘導剤
のフイトヘマグルチニンを１ml当り約100μｇ添
加して２日間保つた後、タイプインターフエロ
ン誘導剤のセンダイウイルスを１ml当り約30赤血
球凝集価の割合で添加して１日保ちインターフエ
ロンを誘導生成させたものを本発明試験体とし
た。 また、対照とし前記本発明試験片のうちタイプ
インターフエロン誘導剤のセンダイウイルスを
無添加とし、タイプインターフエロン誘導剤の
フイトヘマグルチニンを同様に添加して２日間保
つたものと対照試験体(1)とし、タイプインター
フエロン誘導剤のセンダイウイルスを無添加と
し、タイプインターフエロン誘導剤のフイトヘ
マグルチニンを同様に添加して２日間保つた後、
再びフイトヘマグルチニンを同様に添加して２日
間保つたものを対照試験体(2)とし、タイプイン
ターフエロン誘導剤のフイトヘマグルチニンを無
添加とし、タイプインターフエロン誘導剤のセ
ンダイウイルスを同様に添加して１日保つたもの
を対照試験体(3)とし、タイプインターフエロン
誘導剤のフイトヘマグルチニンを無添加とし、タ
イプインターフエロン誘導剤のセンダイウイル
スを同様に添加して１日保つた後、再びセンダイ
ウイルスを同様に添加して１日保つたものを対照
試験体(4)とした。 このようにして得たインターフエロンを含有す
る浮遊液を遠心分離し、その上清を分画分子量
6000の限外濾過液で濃縮し、次いでこの濃縮液を
デキストランゲルを使用するゲル濾過法で分子量
分画し、分子量約25000のタイプインターフエ
ロンと分子量約50000のタイプインターフエロ
ンとの活性を測定し、インターフエロン誘導時の
浮遊液１ml当りの活性を求めた。 その結果を次表に示す。
の製造方法に関する。 インターフエロンは、小林茂保著「インターフ
エロン」1975年 株式会社講談社発行、D.A.J.
Tyrrell著「Interferon and its clinical
Potential」1976年 William Heinemann
Medical Books Ltd（London）発行、「蛋白質、
核酸 酵素 Vol.21No.4」（1976）などにも記載
されているように、例えばウイルス、細菌、原
虫、リケツチヤ、核酸、エンドトキシン、多糖類
などのインターフエロン誘導剤を生細胞に作用さ
せることによつて、その細胞内外に誘導生成され
る蛋白質様物質であつて、その細胞内での各種ウ
イルスの増殖を非特異的に抑制する機能を持つ物
質に与えられた名称である。 インターフエロンの持つこのような機能から、
インターフエロンはその発見の当初よりウイルス
性疾患の予防剤、治療剤として期待されてきた。 また近年、インターフエロンはウイルス性腫瘍
のみならず、非ウイルス性腫瘍に対しても抗腫瘍
性が認められるようになつて、医薬品としてのイ
ンターフエロンが鶴首されるに至つた。 インターフエロンには、生細胞がウイルス、核
酸などにさらされて生成する分子量約１〜３万の
タイプインターフエロン（別名 古典的インタ
ーフエロン）と、白血球がミトーゲン
（mitogen）によつて刺激されるか、又は抗原に
応答して生成する分子量約４〜７万のタイプイ
ンターフエロン（別名 免疫インターフエロン、
γ―インターフエロン）とがあることが知られて
いる。 “Texas Reports on Biology and
Medicine”Vol.35、1977（Published at the
Univesity of Texas Medical Branch，
Galveston，Texas，U.S.A）の第42頁で、L.B.
Epsteinが述べているように、タイプインター
フエロンは、厳しい条件（Hz２以下、Hz10以上、
温度56℃以上）の下ではタイプインターフエロ
ンよりもより不安定であることが知られている。 しかしながら、タイプインターフエロンは、
免疫反応と密接なかかわりあいを有していること
から、タイプインターフエロンよりもインター
フエロン感受性疾患に対する予防効果、治療効果
の大きいことが期待されている。 インターフエロンは、種特異性が高く、ヒトの
疾患を予防または治療するためには、ヒトの生細
胞から生成されるインターフエロンでなければ効
果がない。 そこで、本発明者は、原料生細胞にヒト白血球
を用いてインターフエロンを多量に製造する方法
について研究した。 その結果、ヒト白血球に、タイプインターフ
エロン誘導剤とタイプインターフエロン誘導剤
とを共に作用させることによつて、生成されるイ
ンターフエロンの活性量が著しく増加し得ること
を見いだし、本発明を完成した。 すなわち、ヒト白血球浮遊液にタイプインタ
ーフエロン誘導剤とタイプインターフエロン誘
導剤とを共に作用させることにより生成されるイ
ンターフエロン活性量は、タイプインターフエ
ロン誘導剤またはタイプインターフエロン誘導
剤の何れか一方のみを使用することにより生成さ
れるインターフエロン活性量の約２〜20倍、また
はこれ以上に増加することを確認したのである。 ヒト白血球は、通常血液センターから供給され
る末梢血を遠心分離して調製したものを使用す
る。また、血液センターから白血球含有量の高い
バフイーコート（buffy coats）の供給を受けて
使用してもよい。さらに、白血球を多量に含んで
いる例えば腹水、骨髄穿刺液などを使用してもよ
い。さらにまた、株化された白血球を生体外（in
vitro）で培養して得た白血球を使用することも
できる。 このようにして調製した白血球を、通常約20〜
45℃に保つた溶液、例えば生理食塩水、栄養培養
液などで細胞濃度104〜108／mlの浮遊液として使
用する。 タイプインターフエロン誘導剤としては、タ
イプインターフエロンを誘導し得るものであれ
ばよく、例えばセンダイウイルス、ニユーカツス
ル病ウイルス、二重鎖RNAなどのウイルス、核
酸などが好適である。 また、タイプインターフエロン誘導剤として
は、タイプインターフエロンを誘導し得るもの
であればよく、例えばレクチンとして知られてい
るフイトヘマグルチニン、コンカナバリンＡなど
や、ポークウイードミトーゲンなどのミトーゲン
や、例えばレンチナン、ストレプトコツカス パ
イロゲン、ツベルクリン、丸山ワクチン、KS―
２などの免疫賦活剤などが好適であり、さらに感
作化された細胞にとつては抗原もミトーゲンとし
て作用するのでタイプインターフエロン誘導剤
として有利に使用できる。 これらのインターフエロン誘導剤を白血球浮遊
液に作用させる方法は、両誘導剤を同時に添加し
て作用させる方法でも、また何れか一方の誘導剤
を先きに添加して作用させ続いて他方の誘導剤を
添加させる方法でもよい。 また、これら誘導剤の使用量は、インターフエ
ロンを誘導することのできる量であればよく、通
常約0.001μｇ／ml〜10mg／mlの濃度範囲で使用
される。 このインターフエロンの誘導生成に際して、必
要ならば、例えばヒトに種特異性の高いインター
フエロンを用いてプライミング処理をしたり、代
謝阻害剤を使用するスーパーインダクシヨン法な
どの公知の方法を採用することによつて、生成す
るインターフエロン活性量をさらに高めることも
できる。 このようにして誘導生成させたインターフエロ
ンは、公知の精製分離法、例えば、塩析、透析、
濾過、遠心分離、濃縮、凍結乾燥などを行うこと
によつて容易に精製分離し、採取することができ
る。さらに高度の精製を必要とする場合には、例
えばイオン交換体への吸着・溶出、ゲル濾過、ア
フイニテイクロマトグラフイー、等電点分画、電
気泳動などの公知の方法をさらに組み合せればよ
い。これらの方法によつて極めて高純度のタイプ
インターフエロンとタイプインターフエロン
とを分離採取することも容易である。 このようにして製造されるインターフエロン
は、そのままで、または他の薬剤と併用してヒト
インターフエロン感受性疾患、例えば流行性結膜
炎、ヘルペス性角膜炎、インフルエンザ、風疹、
血清肝炎などのウイルス性疾患や、白血病、骨肉
腫などの非ウイルス性疾患などの予防剤、若しく
は治療剤に、例えば噴霧剤、点眼剤、点鼻剤、う
がい剤、注射剤などの液剤、軟膏剤のようなペー
スト剤、粉剤、顆粒剤、錠剤などの固剤として有
利に利用することができる。 ヒトに種特異性の高いタイプインターフエロ
ンおよびタイプインターフエロンの活性は「蛋
白質核酸酵素 Vol.20 No.6」616頁〜643頁
（1975）に報告されているヒト羊膜由来のFL細胞
を使用して公知のプラーク半減法で測定した。 赤血球凝集価J.E.Salk著「Journal of
Immunology Vol.49」87頁（1944）の方法に準じ
て測定した。 次に、実験例で本発明をより詳細に説明する。 実験例 ヒト白血球を血清無添加のRPMI1640培地（Hz
7.2）に細胞濃度約１×106／mlになるよう浮遊さ
せ、37℃に保つた。 この浮遊液にタイプインターフエロン誘導剤
のフイトヘマグルチニンを１ml当り約100μｇ添
加して２日間保つた後、タイプインターフエロ
ン誘導剤のセンダイウイルスを１ml当り約30赤血
球凝集価の割合で添加して１日保ちインターフエ
ロンを誘導生成させたものを本発明試験体とし
た。 また、対照とし前記本発明試験片のうちタイプ
インターフエロン誘導剤のセンダイウイルスを
無添加とし、タイプインターフエロン誘導剤の
フイトヘマグルチニンを同様に添加して２日間保
つたものと対照試験体(1)とし、タイプインター
フエロン誘導剤のセンダイウイルスを無添加と
し、タイプインターフエロン誘導剤のフイトヘ
マグルチニンを同様に添加して２日間保つた後、
再びフイトヘマグルチニンを同様に添加して２日
間保つたものを対照試験体(2)とし、タイプイン
ターフエロン誘導剤のフイトヘマグルチニンを無
添加とし、タイプインターフエロン誘導剤のセ
ンダイウイルスを同様に添加して１日保つたもの
を対照試験体(3)とし、タイプインターフエロン
誘導剤のフイトヘマグルチニンを無添加とし、タ
イプインターフエロン誘導剤のセンダイウイル
スを同様に添加して１日保つた後、再びセンダイ
ウイルスを同様に添加して１日保つたものを対照
試験体(4)とした。 このようにして得たインターフエロンを含有す
る浮遊液を遠心分離し、その上清を分画分子量
6000の限外濾過液で濃縮し、次いでこの濃縮液を
デキストランゲルを使用するゲル濾過法で分子量
分画し、分子量約25000のタイプインターフエ
ロンと分子量約50000のタイプインターフエロ
ンとの活性を測定し、インターフエロン誘導時の
浮遊液１ml当りの活性を求めた。 その結果を次表に示す。
【表】
(注) Ｓはセンダイウイルスを示す。
Ｐはフイトヘマグルチニンを示す。
表の結果から明らかなように、タイプインタ
ーフエロン誘導剤センダイウイルスとタイプイ
ンターフエロン誘導剤フイトヘマグルチニンとを
併用して生成される全活性は、タイプインター
フエロン誘導剤センダイウイルス単独使用、また
はタイプインターフエロン誘導剤フイトヘマグ
ルチニン単独使用の場合と比較して、それぞれ約
６〜８倍、約25〜30倍と著しく増加しており、両
インターフエロン誘導剤の相乗効果が認められ
た。 また、両インターフエロン誘導剤の併用は、タ
イプインターフエロンだけの活性に着目すると
タイプインターフエロン誘導剤単独使用の場合
と比較し約４〜５倍の活性を誘導生成し、タイプ
インターフエロンだけの活性に着目すると、タ
イプインターフエロン誘導剤単独使用の場合と
比較し約８〜10倍の活性を誘導生成したこととな
り、特にタイプインターフエロンの増収に有利
であることが認められた。 このように、ヒト白血球浮遊液にタイプイン
ターフエロン誘導剤とタイプインターフエロン
誘導剤とを併用したヒトインターフエロン生産量
を著増させることは、治療剤、予防剤として熱望
されているヒトインターフエロンの安定供給に貢
献するだけでなく、貴重な血液資源の有効利用に
も貢献することができる。 次に、２〜３の実施例を述べる。 実施例 １ ヒト白血球をヒト血清5v／ｖ％含有するHz7.2
のEagleの最少基本培地に細胞濃度が約５×106／
mlにとなるように浮遊させ、37℃に保つた浮遊液
１に部分精製したヒトに種特異性の高いタイプ
インターフエロンを約100単位／mlの割合で加
えて約１時間保つた。これにコンカナバリンＡを
500μｇ／mlの割合で加え２日間保ち、さらにセ
ンダイウイルスを約100赤血球凝集価／mlの割合
で加えて20時間保つてインターフエロンを誘導生
成させた。 これを４℃、約1000ｇで遠心分離し、細胞など
の沈澱物を除去し、得られた上清をHz7.2、
0.01Mリン酸塩緩衝液を含有する生理食塩水で24
時間透析し、さらに精密濾過して得た濾液を濃縮
し、凍結乾燥してインターフエロン活性を有する
粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
1200万単位およびタイプインターフエロン活性
を約400万単位含有していた。 実施例 ２ ヒト白血球を子ウシの血清10v／ｖ％を含むHz
7.4のRPMI1640培地に細胞濃度が約２×107／ml
となるように浮遊させ、35℃に保つた浮遊液１
にフイトヘマグルチニンを約200μｇ／mlの割合
で加え３日間保つた後、さらに紫外線によつて予
じめほとんど失活させたニユーカツスル病ウイル
スを約300赤血球凝集価／mlの割合で加えて約24
時間保つてインターフエロンを誘導生成させた。 これを約４℃、約1000ｇで遠心分離し、細胞な
どの沈澱物を除去し、得られた上清をHz7.2、
0.01Mリン酸塩浮緩衝を含有する生理食塩水で20
時間透析し、さらに精密濾過して得た濾液を濃縮
してインターフエロン活性を有する濃縮液を得
た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
7000万単位およびタイプインタフエロン活性を
約2300万単位含有していた。 実施例 ３ バフイーコートを血清無添加のRPMI1640培地
（Hz7.2）に細胞濃度約５×105／mlになるよう浮
遊させ、38℃に保つた浮遊液２に、１ml当り丸
山ワクチンを約１μｇとセンダイウイルス約20赤
血球凝集価とを加えて２日間保つてインターフエ
ロンを誘導生成させた。 次いで、実施例１と同様に精製し、凍結乾燥し
てインターフエロン活性を有する粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
500万単位およびタイプインターフエロン活性
を約100万単位含有していた。 実施例 ４ バフイーコートをヒト血清5v／ｖ％含有する
Eagleの最少基本培地（Hz7.2）に細胞濃度約１×
107／mlになるように浮遊させ、37℃に保つた浮
遊液１にツベルクリン（PPD）を10μｇ／mlの
割合で加えて２日間保ち、さらに合成核酸ポリ
：ポリＣを５μｇ／mlの割合で加え10時間保つ
てインターフエロンを誘導生成させた。 次いで、これを実施例２と同様に精製し、濃縮
してインターフエロン活性を有する濃縮液を得
た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
2000万単位およびタイプインターフエロン活性
を約600万単位含有していた。 実施例 ５ ヒト白血球をヒト白血清5v／ｖ％含有する
RPMI1640培地（Hz7.2）に約１×106／mlになる
ように浮遊させ、37℃に保つた浮遊液１にKS
−２（Lentinus edodesの培養菌子体由来の免疫
賦活剤）を３μｇ／mlの割合で加えて２日間保
ち、さらにセンダイウイルスを50赤血球凝集価／
mlの割合で加え20時間保つてインターフエロンを
誘導生成させた。 次いで、実施例１と同様に精製し、凍結乾燥し
てインターフエロン活性を有する粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
300万単位およびタイプインターフエロン活性
を約150万単位含有していた。
Ｐはフイトヘマグルチニンを示す。
表の結果から明らかなように、タイプインタ
ーフエロン誘導剤センダイウイルスとタイプイ
ンターフエロン誘導剤フイトヘマグルチニンとを
併用して生成される全活性は、タイプインター
フエロン誘導剤センダイウイルス単独使用、また
はタイプインターフエロン誘導剤フイトヘマグ
ルチニン単独使用の場合と比較して、それぞれ約
６〜８倍、約25〜30倍と著しく増加しており、両
インターフエロン誘導剤の相乗効果が認められ
た。 また、両インターフエロン誘導剤の併用は、タ
イプインターフエロンだけの活性に着目すると
タイプインターフエロン誘導剤単独使用の場合
と比較し約４〜５倍の活性を誘導生成し、タイプ
インターフエロンだけの活性に着目すると、タ
イプインターフエロン誘導剤単独使用の場合と
比較し約８〜10倍の活性を誘導生成したこととな
り、特にタイプインターフエロンの増収に有利
であることが認められた。 このように、ヒト白血球浮遊液にタイプイン
ターフエロン誘導剤とタイプインターフエロン
誘導剤とを併用したヒトインターフエロン生産量
を著増させることは、治療剤、予防剤として熱望
されているヒトインターフエロンの安定供給に貢
献するだけでなく、貴重な血液資源の有効利用に
も貢献することができる。 次に、２〜３の実施例を述べる。 実施例 １ ヒト白血球をヒト血清5v／ｖ％含有するHz7.2
のEagleの最少基本培地に細胞濃度が約５×106／
mlにとなるように浮遊させ、37℃に保つた浮遊液
１に部分精製したヒトに種特異性の高いタイプ
インターフエロンを約100単位／mlの割合で加
えて約１時間保つた。これにコンカナバリンＡを
500μｇ／mlの割合で加え２日間保ち、さらにセ
ンダイウイルスを約100赤血球凝集価／mlの割合
で加えて20時間保つてインターフエロンを誘導生
成させた。 これを４℃、約1000ｇで遠心分離し、細胞など
の沈澱物を除去し、得られた上清をHz7.2、
0.01Mリン酸塩緩衝液を含有する生理食塩水で24
時間透析し、さらに精密濾過して得た濾液を濃縮
し、凍結乾燥してインターフエロン活性を有する
粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
1200万単位およびタイプインターフエロン活性
を約400万単位含有していた。 実施例 ２ ヒト白血球を子ウシの血清10v／ｖ％を含むHz
7.4のRPMI1640培地に細胞濃度が約２×107／ml
となるように浮遊させ、35℃に保つた浮遊液１
にフイトヘマグルチニンを約200μｇ／mlの割合
で加え３日間保つた後、さらに紫外線によつて予
じめほとんど失活させたニユーカツスル病ウイル
スを約300赤血球凝集価／mlの割合で加えて約24
時間保つてインターフエロンを誘導生成させた。 これを約４℃、約1000ｇで遠心分離し、細胞な
どの沈澱物を除去し、得られた上清をHz7.2、
0.01Mリン酸塩浮緩衝を含有する生理食塩水で20
時間透析し、さらに精密濾過して得た濾液を濃縮
してインターフエロン活性を有する濃縮液を得
た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
7000万単位およびタイプインタフエロン活性を
約2300万単位含有していた。 実施例 ３ バフイーコートを血清無添加のRPMI1640培地
（Hz7.2）に細胞濃度約５×105／mlになるよう浮
遊させ、38℃に保つた浮遊液２に、１ml当り丸
山ワクチンを約１μｇとセンダイウイルス約20赤
血球凝集価とを加えて２日間保つてインターフエ
ロンを誘導生成させた。 次いで、実施例１と同様に精製し、凍結乾燥し
てインターフエロン活性を有する粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
500万単位およびタイプインターフエロン活性
を約100万単位含有していた。 実施例 ４ バフイーコートをヒト血清5v／ｖ％含有する
Eagleの最少基本培地（Hz7.2）に細胞濃度約１×
107／mlになるように浮遊させ、37℃に保つた浮
遊液１にツベルクリン（PPD）を10μｇ／mlの
割合で加えて２日間保ち、さらに合成核酸ポリ
：ポリＣを５μｇ／mlの割合で加え10時間保つ
てインターフエロンを誘導生成させた。 次いで、これを実施例２と同様に精製し、濃縮
してインターフエロン活性を有する濃縮液を得
た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
2000万単位およびタイプインターフエロン活性
を約600万単位含有していた。 実施例 ５ ヒト白血球をヒト白血清5v／ｖ％含有する
RPMI1640培地（Hz7.2）に約１×106／mlになる
ように浮遊させ、37℃に保つた浮遊液１にKS
−２（Lentinus edodesの培養菌子体由来の免疫
賦活剤）を３μｇ／mlの割合で加えて２日間保
ち、さらにセンダイウイルスを50赤血球凝集価／
mlの割合で加え20時間保つてインターフエロンを
誘導生成させた。 次いで、実施例１と同様に精製し、凍結乾燥し
てインターフエロン活性を有する粉末を得た。 本品は、タイプインターフエロン活性を約
300万単位およびタイプインターフエロン活性
を約150万単位含有していた。
Claims (1)
- １ ヒト白血球浮遊液にタイプインターフエロ
ン誘導剤とタイプインターフエロン誘導剤とを
作用させてインターフエロンを生成し、その生成
したインターフエロンを精製採取することを特徴
とするインターフエロンの製造方法。
Priority Applications (6)
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|---|---|---|---|
| JP6321079A JPS55154919A (en) | 1979-05-24 | 1979-05-24 | Preparation of interferon |
| US06/149,533 US4296025A (en) | 1979-05-24 | 1980-05-13 | Process for preparing human interferon |
| GB8016993A GB2051820B (en) | 1979-05-24 | 1980-05-22 | Process for preparing human interferon |
| FI801668A FI72143C (fi) | 1979-05-24 | 1980-05-22 | Foerfarande foer framstaellning av maenniskointerferon. |
| DE3019847A DE3019847C2 (de) | 1979-05-24 | 1980-05-23 | Verfahren zur Herstellung von Humaninterferon |
| FR8011507A FR2457103B1 (fr) | 1979-05-24 | 1980-05-23 | Procede pour preparer de l'interferon humain |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP6321079A JPS55154919A (en) | 1979-05-24 | 1979-05-24 | Preparation of interferon |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55154919A JPS55154919A (en) | 1980-12-02 |
| JPS6154040B2 true JPS6154040B2 (ja) | 1986-11-20 |
Family
ID=13222601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6321079A Granted JPS55154919A (en) | 1979-05-24 | 1979-05-24 | Preparation of interferon |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4296025A (ja) |
| JP (1) | JPS55154919A (ja) |
| DE (1) | DE3019847C2 (ja) |
| FI (1) | FI72143C (ja) |
| FR (1) | FR2457103B1 (ja) |
| GB (1) | GB2051820B (ja) |
Families Citing this family (16)
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| FR2473971A1 (fr) * | 1980-01-18 | 1981-07-24 | Amfg Ste Nle Expl Procedes | Reservoir de liquide de freinage pour vehicules automobiles |
| JPS6045849B2 (ja) * | 1980-08-25 | 1985-10-12 | 林原 健 | ヒトエリトロポエチンの製造方法 |
| FR2513124B1 (fr) * | 1981-07-21 | 1989-11-17 | Hayashibara Biochem Lab | Production et applications du facteur de lyse des cellules-cibles |
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| US4599306A (en) * | 1983-04-15 | 1986-07-08 | Amgen | Monoclonal antibodies which specifically bind to human immune interferon |
| US4723000A (en) * | 1983-07-05 | 1988-02-02 | Biospectrum, Inc. | Human interferon gamma and interleukin-2 |
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| HU192254B (en) * | 1983-12-13 | 1987-05-28 | Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar | Process for producing human leucocite and human gamma interferons in consecutive steps |
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| JPH0765996B2 (ja) * | 1984-12-30 | 1995-07-19 | 株式会社林原生物化学研究所 | 血液のインターフェロン−γ産生能測定方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| FR2282910A2 (fr) * | 1974-08-26 | 1976-03-26 | Anvar | Procede de fabrication a l'echelle industrielle de preparations d'interferon de titre eleve |
| US3975344A (en) * | 1974-10-02 | 1976-08-17 | G. D. Searle & Co. | Interferon purification |
| JPS5598118A (en) * | 1979-01-18 | 1980-07-25 | Hayashibara Takeshi | Preparation of type-2 interferon and drug containing the same |
-
1979
- 1979-05-24 JP JP6321079A patent/JPS55154919A/ja active Granted
-
1980
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