JPS6157809B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 レラキシンは、哺乳動物の骨盤靭帯の弛緩を促
進するポリベプチドホルモンである。Hisawは
1926年に最初にレラキシンの存在を観察した
（Proc.Scc.Exp.Bio．23，661，1926年）。その
最初の発見以来、長い年数が経過しているにもか
かわらず、該ホルモンに関する情報は殆んど得ら
れておらず、特にヒトにおけるものについては得
られていない。

動物において、レラキシンは哺乳動物および非
哺乳動物の種々の組織中に見出されている。これ
まで、レラキシンの唯一の豊富な源は、妊娠して
いる牝豚の卵巣であり、そこからレラキシンは商
業用および実験用に得られる。

ヒトにおいて、該レラキシンの源、生理学上の
ルートもしくは病理学上のルート、並びにレラキ
シンの構造に関しては、殆んど知られていない。

妊娠卵巣は、婦人においてレラキシン様活性に
おいても富んでいるように思われる。しかし、該
種からヒトレラキシンを得る可能性は、非常に少
ない。と言うのは抽出手順に対し利用できるヒト
の妊娠卵巣を十分量得ることが実際上不可能であ
るからである。

本発明は、ヒトレラキシンについて容易に入手
できる源が、分娩で胎盤と共に容易に得られる胚
胎膜の複合体であることを発見に基づいている。

更に詳しくは、被包脱落膜は特にレラキシンに
富んでいることが見出された。

いわゆる「胎盤膜」は、羊膜、卵膜および脱落
膜の三層の複合体である。

羊膜は、離層法によつて結合した卵膜―脱落膜
から容易に分離する。これに反して、卵膜および
脱落膜は、お互いから完全に分離されることは困
難である。

本発明の主たる目的は、源物質として胚胎膜を
用いてレラキシンを得る方法を提供するにある。
かかる源物質としては、結合した卵膜―脱落膜が
好ましく使用されるか、又は脱落膜それ自身が更
に好ましく使用される。

ヒトレラキシンは、上記源物質を抽出して直接
得ることもできるし、又その組織又は細胞の試験
管内培養の振盪培地から間接的に得ることもでき
る。

レラキシンを含有する調製品のバイオアツセー
は、一般に以下の方法に基づいている： (1) 生体内および試験管内の双方における自然性
子宮収縮の抑制および (2) 以下によつて決定され得る結合恥骨の弛緩： (a) モルモツト結合恥骨の触診； (b) マウス結合恥骨のＸ線；又は (c) マウス結合恥骨の直接測定。

本発明によつて得られるレラキシン含有調製品
の生物学的活性は上記２(c)の方法に従つて測定さ
れそして標準として使用される豚のレラキシン調
製品（NIH）に準じてGPU（モルモツト単位）で
表わされた。

本発明品の調製品は子宮収縮抑制試験（上記１
参照）において活性であることも見出された。

レラキシンは、妊娠の種々の病理学的状態（早
産、切迫流産）および結合組織の種々の病理学的
状態（鞏皮症および栄養性漬瘍）における治療に
使用され得る。

更にヒトレラキシンは、ヒトの体液および組織
内のレラキシンの測定を可能にする、相同性の放
射性免疫検査具の調製において非常に重要であ
る。

本発明を、以下の実施例により非制限的に説明
する。

実施例 １ 組織均等質からのヒトレラキシン ヒトの胎盤および結合胚胎膜を、分娩の際集
め、そしてハンク（Hank）溶液又は緩衝食塩水
（PH7.4）にて洗浄する。洗浄物を、処理するまで
−30℃で保存する（胎盤は、結合胚胎膜から保存
前又は保存後分離され得る）。次いで胚胎膜は、
一般的に処理されるか、又は好ましくは、羊膜が
離層法によつて脱落膜―卵膜から分離されそして
廃棄される。所望により、脱落膜は、卵膜から掻
爬されそしてかかる如く処理される。しかし、後
者の操作は容易には行われ難くそして日常の剔出
手順としては価値があるとは思われない。

15ないし20個の導出物から得られる膜物質約
500grを一時に処理する。組織を細かに切断し蒸
留水200ml中に均質化する。次いでかくして得ら
れた組織均等質を次のいずれかの方法で処理す
る： (a) SchwabeおよびBraddonの方法による
（Biophys.Res.Commun.68巻、1126頁（1976
年）；濃HC 30mlを添加後、混合物を４℃
で24時間保持し、次いで冷アセトン160mlを添
加し、更に混合物を40℃で一昼夜保持する。沈
殿物を200rpmで15分間遠心分離して除きそし
て棄てる。透明の上澄み液を５倍容量の冷アセ
トンで24時間処理し次いで27000rpmで30分遠
心分離する。

(b) Sherwoodによる方法（内分泌学、104巻886
頁（1979年））；先ず混合物を燐酸塩緩衝液で
抽出し、次いで組織残余物および最も重い細胞
器官を、27000rpmで30分間遠心分離して分離
し、次いで棄てる。

両方の場合において、レラキシンは粗留出物と
して得られる。粗留出物は、更に前述の著者によ
つて提案された方法に従つて、CM―セルロー
ス、超微細のセフアデツクスＧ―50およびセフア
デツクスＧ―15による連続クロマトグラフイーに
よつて更に精製し、1500ないし2500GPUの全レ
ラキシン活性度およびクロマトグラフイーの工程
数に依存して150ないし1500GPU／mgタンパク質
の特定活性度を有する精製物質を得る。

実施例 ２ ヒトの脱落膜の試験管内培地からのヒトレラキ
シン 脱落膜を、脱落膜―卵膜結合膜の表面から掻爬
しそして細かに切断する。

切断した組織１ないし２ｇをエレンマイヤーフ
ラスコ内に投入するが、該フラスコの各々は、
Hepes（20mM）、ペニシリン（50U／ml）および
10％のこうしの血清を添加して変成された酸化
Gey溶液40mlで満たされている。

培地をメタボリツクインキユベーター内で37℃
のもと48時間培養する。培地を集め、冷アセトン
の５倍容量で処理し、４℃の温度で24時間保持す
る。次いで、混合物を27000rpmで30分間遠心分
離し、500ないし2000GPU／mgタンパク質の活性
度を有する粗レラキシン抽出物を含有するペレツ
トを得る。

次いで粗抽出物を、実施例１で述べた公知方法
によつて更に精製する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ヒトレラキシンを得る方法において、 (a) ヒトの胚胎膜を採取する工程と、 (b) 結合した卵膜―脱落膜から羊膜を分離する工
   程と、 (c) 結合した卵膜―脱落膜を細かに切断しそして
   均質化する工程と、 (d) 沈澱せしめ次いで組織残余物および最も重い
   細胞器官を廃棄して粗レラキシン抽出物を得る
   工程と、所望により (e) 更に粗抽出物を通常のクロマトグラフイー法
   により精製する工程を 含んでなる、前記方法。 ２ 結合した卵膜―脱落膜から脱落膜を更に掻爬
   する工程を前記工程(b)および工程(c)の間で行な
   い、脱落膜を前記工程(c)ないし(e)に従つて更に処
   理する、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 前記方法において源物質として、胚胎膜が用
   いられる、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４ 前記胚胎膜が卵膜―脱落膜である、特許請求
   の範囲第３項記載の方法。 ５ 試験官内培養法によるヒトレラキシンを製造
   する方法において、 (a) ヒトの脱落膜組織又は細胞を培養する工程
   と、次いで (b) 通常の手順により振盪培地からレラキシンを
   精製する工程を含んでなる、前記方法。 ６ 前記方法において、源物質として胚胎膜が用
   いられる特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７ 前記胚胎膜が卵膜―脱落膜である、特許請求
   の範囲第６項記載の方法。