JPS6161064B2 - - Google Patents
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- JPS6161064B2 JPS6161064B2 JP53028780A JP2878078A JPS6161064B2 JP S6161064 B2 JPS6161064 B2 JP S6161064B2 JP 53028780 A JP53028780 A JP 53028780A JP 2878078 A JP2878078 A JP 2878078A JP S6161064 B2 JPS6161064 B2 JP S6161064B2
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- antibody
- triiodothyronine
- complex
- enzyme
- insolubilized
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- Expired
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/44—Antibodies bound to carriers
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、トリヨードチロニンの定量法に係
る。
る。
さらに詳述すれば、本発明は、ナノｇ程度の濃
度で存在するトリヨードチロニンを、チロキシン
とは関連なく単独で定量する方法に係る。
度で存在するトリヨードチロニンを、チロキシン
とは関連なく単独で定量する方法に係る。
トリヨードチロニン（以下T3と略称する）お
よびその抗体の分析法、特に血漿におけるこれら
の定量法は多数存在することは公知である。この
ような方法としては、たとえば以下の方法があ
る。
よびその抗体の分析法、特に血漿におけるこれら
の定量法は多数存在することは公知である。この
ような方法としては、たとえば以下の方法があ
る。
(1) 全T3の濃度の測定
(a) 飽和分析による方法。この方法ではT3を
チロキシン（T4）から分離する必要がある。
この分離は実際には繁雑であり、かつ通常の
使用には重大な欠点となる。
チロキシン（T4）から分離する必要がある。
この分離は実際には繁雑であり、かつ通常の
使用には重大な欠点となる。
(b) 放射線免疫学的検定法。現在、トリヨード
チロニンの測定には最適の方法である。この
方法は特殊な抗体およびT3を使用する必要
があり、後者はI125でラベルする必要があ
る。分析すべき血漿中のT3はラベルつきT3
と抗体を奪い合う。複合体（I125・T3−抗
体）の量は分析すべきサンプル中のT3濃度
に逆比例する。この方法に関連して、必要な
化合物、たとえばI125は比較的短命であり、
かつ検出のためには高価な器具が必要であ
る。さらに放射性同位体の使用には各種の規
制がある。
チロニンの測定には最適の方法である。この
方法は特殊な抗体およびT3を使用する必要
があり、後者はI125でラベルする必要があ
る。分析すべき血漿中のT3はラベルつきT3
と抗体を奪い合う。複合体（I125・T3−抗
体）の量は分析すべきサンプル中のT3濃度
に逆比例する。この方法に関連して、必要な
化合物、たとえばI125は比較的短命であり、
かつ検出のためには高価な器具が必要であ
る。さらに放射性同位体の使用には各種の規
制がある。
(2) ホルモンとTBP（チロキシン結合たんぱく
質）との間の相互作用の測定 (a) 等張透析、限外濾過による遊離ホルモンフ
ラクシヨンの評価。
質）との間の相互作用の測定 (a) 等張透析、限外濾過による遊離ホルモンフ
ラクシヨンの評価。
(b) チロキシン結合部位の相対飽和度の評価；
ラベルつきT3の樹脂による吸収（RT3U、す
なわち樹脂・T3・Uptake）の評価。
ラベルつきT3の樹脂による吸収（RT3U、す
なわち樹脂・T3・Uptake）の評価。
(c) チロキシン結合たんぱく質の定量分析：
TBG（チロキシン結合グロブリン） およびTBPA（チロキシン結合プレアルブ
ミン）の濃度の評価。
TBG（チロキシン結合グロブリン） およびTBPA（チロキシン結合プレアルブ
ミン）の濃度の評価。
これらはいずれもTBPのホルモンへの結合性
に基く繁雑な方法であるが、循環する（すなわち
血漿中の）T3を直接測定できる。中でもラベル
つきT3の樹脂による吸収を測定する方法は前記
(1)、(b)で示した欠点を有するものではあるが、こ
の３つの方法の中では最も簡便である。
に基く繁雑な方法であるが、循環する（すなわち
血漿中の）T3を直接測定できる。中でもラベル
つきT3の樹脂による吸収を測定する方法は前記
(1)、(b)で示した欠点を有するものではあるが、こ
の３つの方法の中では最も簡便である。
このように総T3の濃度、ホルモンとTBPとの
間の相互作用を測定することにより遊離T3の濃
度は算出できる。
間の相互作用を測定することにより遊離T3の濃
度は算出できる。
本発明者等は、ナノｇ程度あるいはそれ以下の
非常に少量であつても測定可能でかつ上記欠点を
示さないトリヨードチロニンの定量方法を開発
し、本発明に至つた。この方法は、T3に対する
特殊な不溶化した抗体およびT3に共有結合した
特殊な酵素（すなわち感作化酵素（Ｅ−T3））で
なる定量用試薬セツトの使用に基くものである。
非常に少量であつても測定可能でかつ上記欠点を
示さないトリヨードチロニンの定量方法を開発
し、本発明に至つた。この方法は、T3に対する
特殊な不溶化した抗体およびT3に共有結合した
特殊な酵素（すなわち感作化酵素（Ｅ−T3））で
なる定量用試薬セツトの使用に基くものである。
公知の如く、不溶化により高い免疫特性および
親和性を有する免疫吸収性抗体が得られる。上記
組成物を使用する際には、これらの特性、中でも
安定性が増長され、したがつて従来の知識では予
想され得なかつた結果が達成できる。すなわちト
リヨードチロニンが非常に少量で存在する場合に
も測定できかつその再現性も非常に高い。この事
実は、トリヨードチロニンがいくつかの酵素（た
とえばリゾチーム）の活性阻害剤（不溶性の複合
体を形成する）であることが公知である点からみ
て、注目すべきことである。
親和性を有する免疫吸収性抗体が得られる。上記
組成物を使用する際には、これらの特性、中でも
安定性が増長され、したがつて従来の知識では予
想され得なかつた結果が達成できる。すなわちト
リヨードチロニンが非常に少量で存在する場合に
も測定できかつその再現性も非常に高い。この事
実は、トリヨードチロニンがいくつかの酵素（た
とえばリゾチーム）の活性阻害剤（不溶性の複合
体を形成する）であることが公知である点からみ
て、注目すべきことである。
免疫触媒検定用の酵素の選択については以下の
条件を考虜しなければならない。
条件を考虜しなければならない。
(a) 酵素は抗原−抗体結合を解放しないPHにおい
て高い固有活性を有するものでなければならな
い。
て高い固有活性を有するものでなければならな
い。
(b) 酵素は容易に測定されうるものでなければな
らない。
らない。
(c) 酵素は高純度、可溶性かつ安定なものとして
容易に得られるものでなければならない。
容易に得られるものでなければならない。
(d) 酵素は生化学的活性を何ら失うことなく他の
分子が結合できる活性基を有するものでなけれ
ばならない。
分子が結合できる活性基を有するものでなけれ
ばならない。
(e) 酵素は血漿中に存在する物質によつて阻害さ
れないものでなければならない。
れないものでなければならない。
本発明の方法によれば測定は次の如く実施す
る。まず検定すべきサンプル中に存在するT3
を、不溶化した抗T3抗体で親和クロマトグラフ
法により抽出する（抗原−抗体反応が生ずる）。
この場合、クロマトグラフはカラムを使用してあ
るいは試験管中で実施できる。この工程により、
検定すべき物質の濃縮物が得られるとともに、分
析の障害となる化合物が除去できる。ついでこの
抗T3抗体を（Ｅ−T3）の溶液で処理し、溶出液中
の残留酵素活性を測定する。サンプルが定量すべ
き物質（T3）を含有しない場合には、抗体は感作
化酵素（Ｅ−T3）をブロツクし（抗体が感作化酵
素のT3部と免疫反応してこれを固定する）、その
活性を阻害する（すなわち、溶出液は酵素活性を
示さず）。逆に物質が存在する場合には、T3は感
作化酵素と抗体を奪い合い、これにより酵素活性
の少なくとも一部は溶出液中に残留する。
る。まず検定すべきサンプル中に存在するT3
を、不溶化した抗T3抗体で親和クロマトグラフ
法により抽出する（抗原−抗体反応が生ずる）。
この場合、クロマトグラフはカラムを使用してあ
るいは試験管中で実施できる。この工程により、
検定すべき物質の濃縮物が得られるとともに、分
析の障害となる化合物が除去できる。ついでこの
抗T3抗体を（Ｅ−T3）の溶液で処理し、溶出液中
の残留酵素活性を測定する。サンプルが定量すべ
き物質（T3）を含有しない場合には、抗体は感作
化酵素（Ｅ−T3）をブロツクし（抗体が感作化酵
素のT3部と免疫反応してこれを固定する）、その
活性を阻害する（すなわち、溶出液は酵素活性を
示さず）。逆に物質が存在する場合には、T3は感
作化酵素と抗体を奪い合い、これにより酵素活性
の少なくとも一部は溶出液中に残留する。
このように、本発明による方法は、トリヨード
チロニンの測定にあたり、循環するこのホルモン
（T3）がたとえ非常に少量であつた場合にも直接
的に測定でき、血漿中に存在する物質に何ら妨害
されることなく容易に実施できるので、有効な方
法である。
チロニンの測定にあたり、循環するこのホルモン
（T3）がたとえ非常に少量であつた場合にも直接
的に測定でき、血漿中に存在する物質に何ら妨害
されることなく容易に実施できるので、有効な方
法である。
本発明の方法は、T3を充分に不溶化し、この
不溶化T3をまずサンプルと接触させ、ついで抗
T3抗体に共有結合した酵素（Ｅ−Ab）と接触さ
せ、最後に残留酵素活性を測定することにより抗
T3抗体の定量にも利用できる。もしサンプル中
に抗体が存在しない場合には、結合体（Ｅ−
Ab）−T3が生ずるため溶出液中では酵素活性は検
出されない。逆にサンプル中に抗体が存在する場
合には、すでに結合体T3−Abが生じているた
め、溶出液中で残留する（Ｅ−Ab）の活性が測
定できる。
不溶化T3をまずサンプルと接触させ、ついで抗
T3抗体に共有結合した酵素（Ｅ−Ab）と接触さ
せ、最後に残留酵素活性を測定することにより抗
T3抗体の定量にも利用できる。もしサンプル中
に抗体が存在しない場合には、結合体（Ｅ−
Ab）−T3が生ずるため溶出液中では酵素活性は検
出されない。逆にサンプル中に抗体が存在する場
合には、すでに結合体T3−Abが生じているた
め、溶出液中で残留する（Ｅ−Ab）の活性が測
定できる。
調製材料
炭酸脱水酵素および牛型セロアルブミンはＢｏ¨
hringer−Mannheim社製のものである。１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドはSigma社製のものである。３・５・
3′−トリヨードチロニンおよびグルタルアルデヒ
ドはFluka社製のものである。電気泳動用の試薬
はCanalco社製のものである。他の材料はCarlo
Erba社製あるいはMerck社製のものを使用し
た。
hringer−Mannheim社製のものである。１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドはSigma社製のものである。３・５・
3′−トリヨードチロニンおよびグルタルアルデヒ
ドはFluka社製のものである。電気泳動用の試薬
はCanalco社製のものである。他の材料はCarlo
Erba社製あるいはMerck社製のものを使用し
た。
(A) 抗T3抗体の調製
BSA（牛型セロアルブミン）50mgを水25ml
に溶解し、これに１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミド150mgを
添加した。ついでＮ・Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド５mlに溶解したT3100mgを滴下した。約５分
後１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド50mgを添加した。
に溶解し、これに１−エチル−３−（３−ジメ
チルアミノプロピル）カルボジイミド150mgを
添加した。ついでＮ・Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド５mlに溶解したT3100mgを滴下した。約５分
後１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド50mgを添加した。
室温において暗室中で撹拌しながら18時間反
応を行なつた。反応後混合物を遠心分離し、蒸
留水をたびたび取換えながら72時間透析を行な
つた。アルブミンの各分子に結合したT3の数
を320nｍにおける6100M-1cm-1の率により分光
光度法で求めた。その結果、BSA1分子に約５
個のT3が結合していた。BSAおよび複合体T3
−BSAの各UVスペクトルを第１図にそれぞれ
曲線１および２として示した。第１図の曲線３
は牛型アルブミン以外の複合体のUVスペクト
ルである。
応を行なつた。反応後混合物を遠心分離し、蒸
留水をたびたび取換えながら72時間透析を行な
つた。アルブミンの各分子に結合したT3の数
を320nｍにおける6100M-1cm-1の率により分光
光度法で求めた。その結果、BSA1分子に約５
個のT3が結合していた。BSAおよび複合体T3
−BSAの各UVスペクトルを第１図にそれぞれ
曲線１および２として示した。第１図の曲線３
は牛型アルブミン以外の複合体のUVスペクト
ルである。
抗体は複合体T3−BSAによる家兎の免疫反
応により得た。抗体を滴定するため受動凝集法
を利用した。この方法は血清学における標準的
な方法の１つで、タンニン酸で前処理した赤血
球を検定すべき抗原でコーテイングし、ついで
凝集検定を行なう。得られた抗体は１：8000の
比率を有していた。
応により得た。抗体を滴定するため受動凝集法
を利用した。この方法は血清学における標準的
な方法の１つで、タンニン酸で前処理した赤血
球を検定すべき抗原でコーテイングし、ついで
凝集検定を行なう。得られた抗体は１：8000の
比率を有していた。
抗体の精製は次の如くして実施した。血漿を
遠心分離し、上澄液を水１および硫酸アンモニ
ウム飽和溶液１で希釈し、最終濃度33％とし
た。15分後、混合物を4000rpmで20分間遠心分
離し、沈殿物を塩溶液中にスラリー化し、再び
硫酸アンモニウムで晶析させ、溶液の色が完全
になくなるまで繰返し操作した。塩溶液で取出
した沈殿物を硫酸アンモニウムが完全に除去で
きるまで２、３回新しい塩溶液を取換えて４℃
で透析した。
遠心分離し、上澄液を水１および硫酸アンモニ
ウム飽和溶液１で希釈し、最終濃度33％とし
た。15分後、混合物を4000rpmで20分間遠心分
離し、沈殿物を塩溶液中にスラリー化し、再び
硫酸アンモニウムで晶析させ、溶液の色が完全
になくなるまで繰返し操作した。塩溶液で取出
した沈殿物を硫酸アンモニウムが完全に除去で
きるまで２、３回新しい塩溶液を取換えて４℃
で透析した。
(B) ポリアクリルアミドにより不溶化した免疫吸
収性抗体の調製 Bio−Gel Ｐ−300を水中で24時間水和させ、
数回水洗した。水和したゲル100mlにPH7.0の
0.1Mリン酸塩緩衝液中にグルタルアルデヒド
を含有する６％溶液500mlを添加した。溶液を
37℃で１夜熟成した。ついでゲルを10ないし20
回水洗した（各回500mlの水を使用した）。
収性抗体の調製 Bio−Gel Ｐ−300を水中で24時間水和させ、
数回水洗した。水和したゲル100mlにPH7.0の
0.1Mリン酸塩緩衝液中にグルタルアルデヒド
を含有する６％溶液500mlを添加した。溶液を
37℃で１夜熟成した。ついでゲルを10ないし20
回水洗した（各回500mlの水を使用した）。
活性化したゲル10mlを血漿12mlと混合した。
溶液を室温で14時間ゆつくりと撹拌し、４℃に
おいて3000rpmで10分間遠心分離し、吸収され
なかつた抗体の量を測定するため上澄液を取出
した。ゲル粒子を、上澄液の光学密度が280n
ｍにおいて0.02以下となるまで等張緩衝液で洗
浄した。結合した抗体の量はゲル１ml当り23mg
であつた。
溶液を室温で14時間ゆつくりと撹拌し、４℃に
おいて3000rpmで10分間遠心分離し、吸収され
なかつた抗体の量を測定するため上澄液を取出
した。ゲル粒子を、上澄液の光学密度が280n
ｍにおいて0.02以下となるまで等張緩衝液で洗
浄した。結合した抗体の量はゲル１ml当り23mg
であつた。
(C) T3−炭酸脱水酵素複合体（T3−BCA）の調
製 炭酸脱水酵素50mgを水25mlに溶解し、１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カ
ルボジイミド30mgと混合し、これにＮ・Ｎ−ジ
メチルホルムアミド５ml中に溶解したT320mg
を滴下し、その間PHを5.5ないし6.0に維持し
た。溶液を一定に撹拌しながら室温で暗室に18
時間置いた。その後、混合物を遠心分離し、た
びたび水を取換えながら４℃で約48時間透析し
た分光光度分析によれば炭酸脱水酵素１分子に
１つのT3が結合していた。複合体の残留酵素
活性は天然の酵素の約50％に相当した。複合体
（T3−BCA）は均質であるが、電気泳動法によ
りチエツクされるという点で天然の酵素とは異
なる。
製 炭酸脱水酵素50mgを水25mlに溶解し、１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カ
ルボジイミド30mgと混合し、これにＮ・Ｎ−ジ
メチルホルムアミド５ml中に溶解したT320mg
を滴下し、その間PHを5.5ないし6.0に維持し
た。溶液を一定に撹拌しながら室温で暗室に18
時間置いた。その後、混合物を遠心分離し、た
びたび水を取換えながら４℃で約48時間透析し
た分光光度分析によれば炭酸脱水酵素１分子に
１つのT3が結合していた。複合体の残留酵素
活性は天然の酵素の約50％に相当した。複合体
（T3−BCA）は均質であるが、電気泳動法によ
りチエツクされるという点で天然の酵素とは異
なる。
(D) T3の測定
まず、以下の操作に従つて検量線を作成し
た。Bio−Gel P300で不溶化した抗体１mlを25
℃で恒温としたカラム（0.5×５cm）に入れ
た。複合体（T3−BCA）を濃度0.5Mで含有す
る溶液１mlをこのカラムを通過させた。ついで
カラムを１時間静置し、ついで等張溶液１mlで
洗浄し、溶出液について複合体の残留生化学活
性を測定した。複合体（T3−BCA）の生化学
活性は、パラ−ニトロフエニル酢酸によつて生
ずる加水分解による348nｍにおける吸光度の
増加を測定することにより25℃において分光光
度法で検定した。すなわち溶出液１mlを、パラ
−ニトロフエニル酢酸の３ｍＭ溶液１ml、20ｍ
Ｍリン酸塩緩衝液（PH7.4）0.3mlおよび水0.7ml
と混合した。標準用セルには酵素を除く他の試
薬すべてを入れた。トリヨードチロニンを測定
するため、徐々に増量した既知量（３ないし70
ナノｇ／ml）の遊離ホルモン（T3）をカラム
（不溶化抗体１mlを収容する）を通過させ、一
時間静置した。この不溶化抗体を等張溶液（緩
衝液）５mlで洗浄し、ついで（T3−BCA）0.5
ミクロモル溶液１mlを入れ、１時間静置した。
不溶化抗体を再び等張緩衝液１mlで洗浄し、カ
ラムを通過したのちの（T3−BCA）溶液と洗
浄液でなる溶出液について複合体（T3−
BCA）の固有活性度を測定した。第２ａおよ
び第２ｂ図は遊離T3の濃度（横軸）を関数と
して複合体T3−BCAの固有活性度の傾向を示
したグラフで、第２ａ図はT3含量０ないし７
ナノｇ／mlの範囲であり第２ｂ図はT3含量０
ないし70ナノｇ／mlの範囲を示す。本発明の方
法により定量できる最少量は１ないし２ナノ
ｇ／mlである。
た。Bio−Gel P300で不溶化した抗体１mlを25
℃で恒温としたカラム（0.5×５cm）に入れ
た。複合体（T3−BCA）を濃度0.5Mで含有す
る溶液１mlをこのカラムを通過させた。ついで
カラムを１時間静置し、ついで等張溶液１mlで
洗浄し、溶出液について複合体の残留生化学活
性を測定した。複合体（T3−BCA）の生化学
活性は、パラ−ニトロフエニル酢酸によつて生
ずる加水分解による348nｍにおける吸光度の
増加を測定することにより25℃において分光光
度法で検定した。すなわち溶出液１mlを、パラ
−ニトロフエニル酢酸の３ｍＭ溶液１ml、20ｍ
Ｍリン酸塩緩衝液（PH7.4）0.3mlおよび水0.7ml
と混合した。標準用セルには酵素を除く他の試
薬すべてを入れた。トリヨードチロニンを測定
するため、徐々に増量した既知量（３ないし70
ナノｇ／ml）の遊離ホルモン（T3）をカラム
（不溶化抗体１mlを収容する）を通過させ、一
時間静置した。この不溶化抗体を等張溶液（緩
衝液）５mlで洗浄し、ついで（T3−BCA）0.5
ミクロモル溶液１mlを入れ、１時間静置した。
不溶化抗体を再び等張緩衝液１mlで洗浄し、カ
ラムを通過したのちの（T3−BCA）溶液と洗
浄液でなる溶出液について複合体（T3−
BCA）の固有活性度を測定した。第２ａおよ
び第２ｂ図は遊離T3の濃度（横軸）を関数と
して複合体T3−BCAの固有活性度の傾向を示
したグラフで、第２ａ図はT3含量０ないし７
ナノｇ／mlの範囲であり第２ｂ図はT3含量０
ないし70ナノｇ／mlの範囲を示す。本発明の方
法により定量できる最少量は１ないし２ナノ
ｇ／mlである。
(E) 標準的な人間の血漿中のT3の測定
上記操作に従つて、甲状腺機能低下症、正常
および甲状腺機能亢進症の者から得た標準的な
血漿について定量を行なつたところ各々、110
ナノｇ／100ml、236ナノｇ／100ml、500ナノ
ｇ／100mlの数値を得た。これらの数値は放射
線免疫学的検定法を利用することにより得たも
のとよく一致した。本発明により得られた抗体
の特殊性はT4がT3と抗血清を奪い合うか否か
を調べることにより評価した。T32ナノｇによ
つて生ずるに等しい複合体（T3−BCA）の固
有活性度の変化を得るためにはT4500ミクログ
ラムが必要である。人間の血漿中におけるT4
の正常濃度は約80ナノｇ／mlであることを考慮
すれば、測定におけるその影響は無視できる。
および甲状腺機能亢進症の者から得た標準的な
血漿について定量を行なつたところ各々、110
ナノｇ／100ml、236ナノｇ／100ml、500ナノ
ｇ／100mlの数値を得た。これらの数値は放射
線免疫学的検定法を利用することにより得たも
のとよく一致した。本発明により得られた抗体
の特殊性はT4がT3と抗血清を奪い合うか否か
を調べることにより評価した。T32ナノｇによ
つて生ずるに等しい複合体（T3−BCA）の固
有活性度の変化を得るためにはT4500ミクログ
ラムが必要である。人間の血漿中におけるT4
の正常濃度は約80ナノｇ／mlであることを考慮
すれば、測定におけるその影響は無視できる。
第１図はBSA、複合体T3−BSAおよびBSA以
外の複合体のそれぞれ紫外線吸収スペクトルを示
す図、および第２ａ図および第２ｂ図はそれぞれ
T3含量が０ないし７ナノｇ／mlの範囲および０
ないし70ナノｇ／mlの範囲における残留酵素活性
の検量線を示すグラフである。
外の複合体のそれぞれ紫外線吸収スペクトルを示
す図、および第２ａ図および第２ｂ図はそれぞれ
T3含量が０ないし７ナノｇ／mlの範囲および０
ないし70ナノｇ／mlの範囲における残留酵素活性
の検量線を示すグラフである。
Claims (1)
- １ (a)不溶化させた抗トリヨードチロニン抗体と
検体サンプルとを接触させて、該検体サンプル中
のトリヨードチロニンと該不溶化抗体との間で免
疫反応を生じさせ、(b)ついで、前記不溶化抗体
を、トリヨードチロニンと炭酸脱水酵素とを共有
結合せしめてなるトリヨードチロニン−炭酸脱水
酵素複合体と接触させ、(c)前記工程(b)における前
記不溶化抗体と前記トリヨードチロニン−炭酸脱
水酵素複合体との間の免疫反応に関与しなかつた
残留トリヨードチロニン−炭酸脱水酵素複合体の
酵素活性を測定することを特徴とする、トリヨー
ドチロニン含量の定量法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT21231/77A IT1153999B (it) | 1977-03-15 | 1977-03-15 | Composizione atta alla determinazione della triiodotironina e metodo diagnostico impiegante la stessa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS53115813A JPS53115813A (en) | 1978-10-09 |
| JPS6161064B2 true JPS6161064B2 (ja) | 1986-12-24 |
Family
ID=11178747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2878078A Granted JPS53115813A (en) | 1977-03-15 | 1978-03-15 | Quantitative determination of content of triiodo thironine |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4250253A (ja) |
| JP (1) | JPS53115813A (ja) |
| AU (1) | AU515842B2 (ja) |
| BE (1) | BE864934A (ja) |
| CA (1) | CA1100869A (ja) |
| CH (1) | CH636450A5 (ja) |
| CS (1) | CS217962B2 (ja) |
| DD (1) | DD138246A5 (ja) |
| DE (1) | DE2811057C2 (ja) |
| DK (1) | DK149909C (ja) |
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| IT (1) | IT1153999B (ja) |
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Families Citing this family (2)
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|---|---|---|---|---|
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| JPS6385358A (ja) * | 1986-09-29 | 1988-04-15 | Eiken Kagaku Kk | 血中遊離型トリヨ−ドサイロニンの酵素免疫測定法 |
Family Cites Families (10)
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|---|---|---|---|---|
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