JPS621216B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 血漿中の個々の胆汁酸およびグリシンとの抱合
胆汁酸の定性、定量分析は肝疾患の診断にとつて
重要であるにもかゝわらずこれらを微量定量する
有効な手法はあまりない。 これまで化学的、生化学的、放射化学的な方法
が種々用いられてきたがいずれも十分な方法とは
いいがたい。 最近、高速液体クロマトグラフイーによる分析
手法が発展してきたが、通常の胆汁酸は高速液体
クロマトグラフ分析に必要な紫外部吸収を示さな
い。このため胆汁酸を紫外部吸収を有する化合
物、例えばフエナシルブロマイド、ｐ―クロロベ
ンゾイルクロライド、ｏ―（ｐ―ニトロベンジ
ル）―Ｎ，N′―ジイソプロピルイソ尿素やナフ
チルジアゾメタンと反応させて分析する方法が用
いられている。 しかし、近年高速液体クロマトグラフイーのめ
ざましい発展にともない各種高感度検出器が開発
され、なかでも螢光検出器の利用はピコモル濃度
レベルでの分析定量が可能となりつつある。そこ
で本発明者らは胆汁酸の螢光標識化合物への変換
による微量定量化に関し鋭意研究を重ねてきたと
ころ、１―ブロモアセチルピレンが胆汁酸と反応
して強い螢光物質となることを見出し、螢光検出
器による微量分析定量を可能にして本発明を完成
した。 本発明で使用する１―ブロモアセチルピレンは
次の化学構造をもつ新規化合物である。 １―ブロモアセチルピレンは胆汁酸と反応して
次に示す螢光標識化合物が生成される。 （式中、Ｒは胆汁酸よりカルボキシル基を除い
た残基を示す。） この反応は胆汁酸を適当な溶媒（一般的にアセ
トニトリル，アセトン，ジクロルメタン，酢酸エ
チルなどが使用される）に溶解し、炭酸水素カリ
ウム，炭酸カリウム等のアルカ金属塩を加え、１
―ブロモアセチルピレンを加えるとき進行する
が、クラウンエーテル（18―クラウン―６，ジベ
ンゾ―18―クラウン―６，ジシクロヘキサノ―18
―クラウン―６など）等の相間移動触媒を共存さ
せるとき、より効率よく速やかに反応する。こう
して得られた螢光標識化合物は高速液体クロマト
グラフイー、薄層クロマトグラフイー等の分離手
法を駆使して微量分析定量が可能である。 胆汁酸としては例えば次の化合物があげられ
る。（この例示化合物No.は後記の実施例において
参照される。） １ グリコウルソデオキシコール酸 ２ グリコ胆汁酸 ３ グリコケノデオキシコール酸 ４ グリコデオキシコール酸 ５ ウルソデオキシコール酸 ６ コール酸 ７ グリコリトコール酸 ８ ケノデオキシコール酸 ９ デオキシコール酸 10 リトコール酸 またこれらの胆汁酸のみならず胆汁酸とグリシ
ンとの抱合胆汁酸も同様に螢光分析が可能であ
る。したがつて本発明において胆汁酸とはグリシ
ン抱合胆汁酸をも意味するものである。 １―ブロモアセチルピレンは次のようにして製
造することができる。 製造例 ピレンをバツハマンらの文献（ジヤーナル・オ
ブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエテイー：63
2494，1941年）にもとずいて１―アセチルピレ
ンを合成し、次いでアシル側鎖を選択的にブロム
化し１―ブロモアセチルピレンを得た。即ち、撹
拌機、温度計、滴下ロートの装置された200mlの
４口フラスコに１―アセチルピレン6.0ｇ、ジオ
キサン60mlを仕込み溶解し、永冷水で10℃に冷却
する。一方臭素3.9ｇをジオキサン40mlに溶解し
た溶液を滴下ロートにとり、内温10―15℃に保ち
ながら約30分間で滴下する。同温度で10時間撹拌
したのちジオキサンを減圧留去する。残渣を少量
のメタノールで溶解、冷却し、生じた結晶を
過、乾燥すると１―ブロモアセチルピレン6.0ｇ
を得る。収率75.6％トルエンより再結し、融点
130.5〜131.5℃の黄色結晶が得られた。分析値
（C₁₈H₁₁OBr）は次の通り。 Ｃ％ Ｈ％ Br％ 計算値 69.89 3.43 24.73 実測値 66.43 3.38 24.50 本品をマスフラグメントメトリーにて分析した
結果を第１図に示した。分子量ピークは322にあ
り、１―ブロモアセチルピレンが生成しているこ
とが確認された。本品のIRスペクトルは第２図
に、NMRスペクトルを第３図に示す。 次に実施例を示す。 実施例 前述の10種の胆汁酸標品の一定量（通常１マイ
クロモル／ml濃度の液100マイクロリツター）に
水酸化カリを含むメタノール液を加え中性ないし
弱アルカリとしたのち、１―ブロモアセチルピレ
ン0.2ミリモル及び、ジシクロヘキシル18―クラ
ウン―61.0mlを含むアセトニトリル溶液50マイク
ロリツトルを加える。混液を80℃２時間加温して
反応を完結させる。反応後その一定量（通常２マ
イクロリツトル）を用いて高速液体クロマトグラ
フイートにより分離定量した。高速液体クロマト
グラフイー装置としては島律LC3A型分光器RF
―500LCA型を使用し、分離用カラムとしてマイ
クロボンダパツクC₁₈の逆相系カラムを、移動相
としてアセトニトリルーメタノール―水（Ａ溶媒
混合比100―50―70，Ｂ溶媒混合比100―50―60，
Ｃ溶媒混合比100―50―40），流速1.0ml／minで
行つた。分析装置としては本装置に限定されるも
のではなく、通常広く使用されている高速液体ク
ロマトグラフイー装置で代替され、分離用カラム
も逆相系カラムで代替されうる。 胆汁酸の標準品を用いて分析したクロマトグラ
ムを第４図に示した。図中Ａ，Ｂ，Ｃは混合溶媒
の種類を示し、チヤートのそれぞれのピークにつ
けられた番号は前述の例示番号に対応し、この番
号で示された胆汁酸のピークを示す。同様にして
胆汁酸代謝に異常を来たした肝疾患者の血中胆汁
酸を分析した。その結果を第５図に示す。第５図
中，Ａ，Ｂ，Ｃおよびピーク番号の意味は第４図
と同じである。

【図面の簡単な説明】

第１図は１―ブロモアセチルピレンのマススペ
クトラム、第２図は同物質のIRスペクトラム、
第３図は同物質のNMRスペクトラムを示す。第
４図は胆汁酸標準品の高速液体クロマトグラム、
第５図は肝疾患患者血中胆汁酸の高速液体クロマ
トグラムを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 胆汁酸に１―ブロモアセチルピレンを反応せ
   しめ、生じる螢光物質を検出することを特徴とす
   る胆汁酸の螢光分析法。