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JPS6241690B2 - - Google Patents
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JPS6241690B2 - - Google Patents

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Publication number
JPS6241690B2
JPS6241690B2 JP59022032A JP2203284A JPS6241690B2 JP S6241690 B2 JPS6241690 B2 JP S6241690B2 JP 59022032 A JP59022032 A JP 59022032A JP 2203284 A JP2203284 A JP 2203284A JP S6241690 B2 JPS6241690 B2 JP S6241690B2
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JP
Japan
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fsh
mixture
hormone
ratio
embryos
Prior art date
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JP59022032A
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Inventor
Barubetsutei Manrio
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Merck Serono SpA
Original Assignee
Istituto Farmacologico Serono SpA
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Publication date
Application filed by Istituto Farmacologico Serono SpA filed Critical Istituto Farmacologico Serono SpA
Publication of JPS59193828A publication Critical patent/JPS59193828A/ja
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575Hormones
    • C07K14/59Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

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Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、豚の脳下垂体からの一定比率の
FSH(濾胞成熟ホルモン)およびLH(黄体形成
ホルモン)の混合物に関する。
従来技術 牛、やぎおよび羊において誘発された多数の排
卵、または過剰排卵は、農業経済にとつての所定
の目的である最大利益:計画的妊娠、双胎妊娠そ
して特に胚移植を得るための基本的な問題であ
る。
飼育動物種において、胚移植は、特別に有能な
雌(例えば、乳の高生産)から、選ばれた雄の精
子を用いて受精される卵子の最大量を得るのに役
立つ。これらの遺伝学的にすぐれた胚を、妊娠を
最後まで実行する傾向にある別の動物に移植す
る。
概略的に、胚移植を2工程に区分できる。: 最初の工程の間、「提供者」の雌において、性
腺刺激ホルモンの投与によつて、自発的に成熟に
至るような、1個の濾胞の代わりに数個の濾胞の
成熟を誘発する。
第2の工程の間、あらかじめ性腺刺激ホルモン
を用いて処理を受けた動物の生殖路中に集めら
れ、後ほど人工受精に付された、形態学的に正常
な胚を、「同期」させた別の雌であつてかつ「受
容者」と呼ばれる雌に移植する。
この過剰排卵の結果は、下記の理由により、い
くつかの場合において、良好な経済的結果には至
らない: a 極めて不足ないくつかの胚形成、または/お
よび生存できない奇形の胚形成; b 遺伝的にすぐれた雌における次の過剰排卵を
妨げ得る、卵巣の損傷の誘発。
数個の濾胞に対するホルモン刺激手順は最も注
意深い調節および調整を要するという事実に関す
るところの一般的一致がある。
多数の排卵、または過剰排卵は、通常、妊娠し
た雌の血液から抽出したPMSG(Pregnant Mare
Serum Gonadotropin、妊娠した雌の血清性腺刺
激ホルモン)か、あるいはそれとは別に豚および
馬のような飼育動物の脳下垂体から抽出した
FSH(濾胞成熟ホルモン)を投与することによ
つて誘発される。
PMSGは、その容易な投与と共にその広い利用
性のゆえに、すべての飼育動物の過剰排卵におい
て長年にわたり支配的な地位を有していた。この
ホルモンは、FSHタイプおよびLHタイプの共同
の作用性を有する1分子のみからなり、高い含有
量のn−アセチル−ノイラミン酸を有しそして1
回のみの注射後何日間も循環血液中に残存する。
それゆえ、PMSGを用いて、1回のみの注射にお
いて通常の投与量の投与を行なうことにより満足
な刺激を得ることが可能である。
しかしながら、PMSGを用いて行なつた過剰排
卵処理に対する応答は、このホルモンの使用を正
確な計画および期間内で実施する場合でさえ、極
めてさまざまな形をとる。
さらに、PMSGは、投与後の、自発的循環の反
復における長期遅滞によつて、明白な卵巣構造の
所定の変化を生ずる。これらの遅滞は、別の種類
の性腺紙激ホルモンを用いた過剰排卵処理から生
じる遅滞よりずつと長い。
循環血液内のPMSGの長期にわたる存在でさ
え、いくらかの望しくない結果、例えばいろいろ
な応答、および高率の異常胚の生産、の原因とな
り得ることが考えられる。
前記理由により、今や、飼育動物の脳下垂体か
ら抽出されたFSHがPMSGにとつて代わる傾向に
ある。
文献からわかるように、最も使用される製品
は、豚の脳下垂体から抽出されるFSHからなる
FSH−Pであり、その用いられる投与量は、標
準のアーマー(Armour)FSHのmgと同じ量であ
る。
アーマー(Armour)に付与された米国特許第
2799621号(1957)によれば、そこに記載の方法
によつて得たFSHは実質的にLHを欠いているの
でとりわけ有用である。さらに、この特許によれ
ば、FSHは所定の適用を有しその適用において
はLHの実質的欠如が有効であるので、前記の事
実は本質的に重要な発見である。
最近発行された文献から下記の結論を得る。す
なわち、実際に好ましい投与計画は、5日間にわ
たり、少しもLHを加えずに30〜32mgのFSH−P
の投与からなることである。
発明の目的 本発明の主要な目的は、豚の脳下垂体から抽出
される一定比率のFSHおよびLHの組成物
(FSH/LH比が0.5〜2.5の範囲にある)であり、
この組成物は飼育動物中での過剰排卵の誘発にお
いて、FSH−およびPMSGの双方を用いて得られ
た結果よりすぐれた結果を与えるものである。
本発明の他の目的は、以下の記載から明白とあ
るであろう。
発明の構成の具体的説明 FSHの投与およびLHの投与を、おのおの、参
照調製液としてFSHおよびLHの生物学的投与用
の第1HMG国際標準品を使用して、ステイールマ
ンおよびポーレイ(Steelman and Pohley)の方
法(ステイールマン エス.エル.およびポーレ
イ エフ.エム.−Endocrinology 53:
604.1953)およびパーロー(Parlow)法(パーロ
ー エイ.エフ.(Parlow A.F.)、アルバート
エイ.(Albert A.)編Human Pituitary
Gonadotropins 300〜310−C.C.Thomas,
Springfield,Illinois)を用いて実施すると、本
開示に従つてつくられた組成物中のFSH/LH比
は0.5〜2.5の間に含まれた。
本開示に従つて豚の脳下垂体から生産される
FSH/LH組成物の抽出方法および精製方法の詳
細を以下に記載する。
本方法に用いる生の原料は、好ましくは、豚の
凍結した脳下垂体腺からなり、それは注意深く集
められそして貯蔵されねばならない。
当業界の通常の方法において、他の分離方法は
もちろん使用することができるが、この抽出物は
遠心法によつて残余また不溶性部分から分離され
る。同様に、透析に代えて限外過法を用いるこ
ともできる。
本方法のすべての段階を、性腺刺激ホルモンの
変性を防ぐために、十分に低温で実施しなければ
ならない。通常、10℃以下の温度が勧められる。
この凍結の豚脳下垂体を、フエニル−メタン−ス
ルホニル−フルオリドを含有するアセトン中で4
℃において解かし、次いで均質化した。この均質
化した物質をアセトン性粉末を得るために、過
し、アセトンを用いて数回洗浄し、予備冷却し、
そして真空下で乾燥させた。
このアセトン性粉末を、40%のエタノールおよ
びフエニル−メタン−スルホニル−フルオリドを
含有するPH5の4℃に予備冷却したアセテート−
エタノール緩衝液に加えた。この混合物を4℃で
20時間撹拌した。アセテート−エタノールで抽出
したこの産物の遠心法により、80%のエタノール
含有量まで調整されている透明な上澄を得た。こ
のようにして得た沈殿を、デカンテーシヨンおよ
び遠心法によつて集めた。
この後、不溶性タンパクを除去するために炭酸
水素アンモニウムでの抽出を実施し、次いでこの
不溶性残余を遠心法で除去し、この上澄を水に対
して透析し次いで凍結乾燥を行ない、未精製の豚
の性腺刺激ホルモンを得た。
未精製物質の溶液を蒸留水で調製し、そして硫
酸アンモニウムを用いてPH5.3までおよび30%飽
和まで調製した。得られた沈殿を遠心法で分離
し、そしてこの上澄を硫酸アンモニウムを用いて
PH7.3および50%飽和まで調製した。
大部分のLHを含有する沈殿をこの後遠心法で
集め、水に対して透析し、次いで凍結乾燥した。
以下「LH画分」と称するこの画分はいくらかの
少量のFSHをも含有していた。
次いでこの上澄の硫酸アンモニウム濃度を90%
飽和まで調製し、この混合物を数時間放置した。
FSHに富む沈殿を集め、透析し、そして凍結乾
燥した。以下「FSH画分」と称するこの画分は
いくらかの少量のLHをも含有していた。
前記の方法によつて得た「FSH画分)および
「LH画分」は、おのおの、少量のLHおよびFSH
によつて汚染されていた。一方の調製物と他方の
調製物とでは汚染物の存在が変化するので、
FSHおよびLHの所望の組成物を有する混合物を
得るために必要とされる量を計算するために、汚
染物の量を双方の画分において正確に測定しなけ
ればならない。
一定比率のFSHおよびLHの混合物を調製する
ための出発物質を以下に記載する。
「a」mg当りのFSHの国際単位、および
「b」mg当りのLHの国際単位を含有する「FSH
画分」。
「c」mg当りのFSHの国際単位、および
「d」mg当りのLHの国際単位を含有する「LH画
分」。
「T」単位のFSHを含有しかつFSH/LH比=
「R」である組成物を得るために混合物中に含さ
れる「FSH画分」および「LH画分」に対する、
おのおのの量「x」および「y」(ミリグラムで
表わされる)を下記式から得る。
x=T/R・c−R・d/b・c−a・d y=T/R・R・b−a/b・c−a・d 例えば、比(「R」)FSH/LH.=1を有する
「T」=120000国際単位のFSHを得るためには、
ミリグラム当り27.3国際単位のFSHおよびミリグ
ラム当り6.73国際単位のLHを含有する「x」ミ
リグラムの「FSH画分」を、ミリグラム当り8.9
国際単位のFSHおよびミリグラム当り811.7国際
単位のLHを含有する「y」ミリグラムの「LH画
分」と混合しなければならない。
前記の式を適用して、下記の値を得る。
x=120000/1・8.9−1×811.7/6.
73×8.9−27.3×811.7=4359.2 y=120000/1・1×6.73−27.3/6.
73×8.9−27.3×811.7=111.7 従つて、120000国際単位のFSHおよび120000
国際単位のLH(比FSH/LH=1)を含有する組
成物を得るためには、4359.2mgの「FSH画分」を
111.7mgの「LH画分」と混合しなければならな
い。
すべての飼育動物において、提供者の雌から、
生存しかつ移植可能な最大量の胚を得るためにさ
まざまな種類のホルモンおよび投与計画によつて
過剰排卵を誘発することが、過去および現在の目
標である。最近、前記種類に、薬理学的研究に使
用される動物、例えば、猿、犬および猫を含め
た。
しかしながら、カナダの農務省(Department
Agriculture)によつて1977年に発行された(ベ
タリツジケイ.ジエイ.(Betteridge K.J.)編、
1977,Canada Depertment of Agriculture,
Monograph 16)この問題に関する一般的検討か
らわかるように、所定の統計的に求められた結果
は雌牛に対してしか有効でない。
1700頭以上の提供者の雌牛に基づいた計算によ
れば、移植可能な胚の収率は、極端に不定ではあ
るが、平均して動物当り5個以下である(ムール
アール.エム.(Moor R.M.)他、Vol.i,page
43,9th International Congress on Animal
Reproduction and Artifical Insemination−
Madrid 1980)。
本発明による組成物を、牛の種で試験し、前記
の平均よりはるかにすぐれた結果を得た。
本発明によつて調製したFSHおよびLHの混合
物を用いた処理計画であつて十分な乳生産期のフ
リージヤン牛(Frisian cow)に適したものは、
投与量を減少させながら総量で1000国際単位の
FSHおよび1000国際単位のLHを投与するもので
あつて、発情周期の9日目〜11日目から開始し5
日間にわたる投与からなる。
処理の3日目の晩に、黄体退行を刺激するため
に1アンプルのプロスタグランジンを投与した。
発情周期の開始から12時間後に人工受精を開始
し、2〜3回の人工受精を行なつた。
2回目の受精後7日目に、外科的方法によら
ず、子宮角を洗浄することによつて、胚を取り出
した。
この系を用いて、生産した卵子の受精から得ら
れるすべての胚、並びに、もしあるなら未受精の
卵子を容器中に集めた。
集めた胚を顕微鏡下で注意深く検査し、胚の形
態学上の特徴に従つて移植可能な胚と移植できな
い胚に分けた。
乳生産期間のフリージヤン牛において、前期計
画によつて処理し、下記の平均値を得た。
胚の総数 =14.571 移動可能な胚の総数 =11.142 産肉用の品種、例えば「マルキジアン
(marchigiane)」または「キアニン(chianine)」
においては、総投与量として750国際単位のFSH
および750国際単位のLHで十分である。
この投与量の投与計画、およびこの処理の他の
各詳細は、乳生産期間のフリージヤン牛に対して
前記したものと同一である。
「マルキシジアン」牛および「キアニン」牛に
おいては、下記の平均値を得た。
胚の総数 =14.142 移植可能な胚の総数 =10.571 前記の報告した平均値が「野外での」動物の処
理から得られたものであることは、強調べすき極
めて重要なことである。
「野外での」処理に代えて、すべての動物を十
分なあらゆる技術的条件下に処置し得る専門病院
で処理した場合には、かなりの改善した結果を得
ることは、当業者に十分理解されるところであ
る。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 豚の脳下垂体から抽出されるFSH(濾胞成
    熟ホルモン)およびLH(黄体形成ホルモン)の
    混合物であつて、FSH/LH比が0.5〜2.5の範囲
    にある混合物。 2 FSH/LH比が実質的に1に等しい、特許請
    求の範囲第1項記載のFSHおよびLHの混合物。 3 豚の脳下垂体からつくられるFSH(濾胞成
    熟ホルモン)およびLH(黄体形成ホルモン)の
    混合物であつて、FSH/LH比が0.5〜2.5の範囲
    にある混合物の調製方法であつて、FSHに富む
    画分およびLHに富む画分を調製し、所望の
    FSH/LH比の混合物を得るために、双方の画分
    の必要量を混合する方法。 4 FSHに富む画分が実質的に所定のLHによる
    汚染を伴うFSHからなり、LHに富む画分が実質
    的に所定のFSHによる汚染を伴うLHからなる、
    特許請求の範囲第3項記載の方法。 5 豚の脳下垂体から抽出されるFSH(濾胞成
    熟ホルモン)およびLH(黄体形成ホルモン)の
    混合物であつて、FSH/LH比が0.5〜2.5の範囲
    にある混合物を用いる、飼育動物における過剰排
    卵誘発剤。
JP59022032A 1983-02-11 1984-02-10 豚の脳下垂体からの一定比率のfshおよびlhの混合物 Granted JPS59193828A (ja)

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IT47699/83A IT1197570B (it) 1983-02-11 1983-02-11 Miscele di fsh e lh da ipofisi porcine in rapporto definito
IT47699A/83 1983-02-11

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EP (1) EP0119168B1 (ja)
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DE (2) DE3484626D1 (ja)
DK (1) DK164201C (ja)
ES (1) ES529666A0 (ja)
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