JPS6254800B2 - - Google Patents
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- JPS6254800B2 JPS6254800B2 JP52116590A JP11659077A JPS6254800B2 JP S6254800 B2 JPS6254800 B2 JP S6254800B2 JP 52116590 A JP52116590 A JP 52116590A JP 11659077 A JP11659077 A JP 11659077A JP S6254800 B2 JPS6254800 B2 JP S6254800B2
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
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- C07K14/702—Enkephalins with at least 1 amino acid in D-form
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Description
本発明は、非経口投与により鎮痛作用を示す新
しい化合物に関する。 最近、モルフイン様の特性を示す内因性物質が
哺乳動物の脳または髄液から抽出された。これら
の物質はエンケフアリンと命名され、下記のペン
タペプチドと同定された。 Ｈ−Try−Gly−Gly−Phe−Met−OH Ｈ−Try−Gly−Gly−Phe−Leu−OH ［Hughes et al.、Nature、258、577
（1975）］。これらの化合物は、各々メチオニン−
エンケフアリンおよびロイシン−エンケフアリン
と呼ばれている。 これらの化合物をマウスの脳室内
（intracerebroventricularly）に投与すると鎮痛
作用を示すが［Buscher et al.、Nature、261、
423（1976）］、非経口的に投与した場合には有用
な鎮痛作用が実際上失われる。 本発明化合物は下記式（ペンタペプチド）で示
され、全身投与において顕著な鎮痛作用を示す。 Ｈ−Ｌ−Tyr−Ｄ−Ala−Gly−Ｌ−Phe −Ｌ−（Ｎ−Me）Met−NH2 本発明化合物には、その製剤上許容される非毒
性酸付加塩も含まれる。 製剤上許容される非毒性酸付加塩には、例えば
塩酸、硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマル酸、臭
化水素酸、グリコール酸、クエン酸、マレイン
酸、リン酸、コハク酸、酢酸、硝酸、安息香酸、
アスコルビン酸、Ｐ−トルエンスルホン酸、ベン
ゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、プロピ
オン酸などから製造された有機および無機の酸付
加塩が含まれる。特に、塩酸、酢酸またはコハク
酸から製造した酸付加塩が好ましい。これらの塩
は、いずれも常法に従つて製造する。 本発明のペンタベプチドのアミノ酸残基は、便
宜上、末端アミノ基側の残基から順番に番号を附
す。 本明細書中で用いる略記号は、ペプチド化学の
分野で繁用のものであり、それぞれ以下の意味を
有する。 Ala アラニン Gly グリシン Met メチオニン Phe フエニルアラニン Tyr チロシン Ac アセチル Me メチル Et エチル BOC ｔ−ブチルオキシカルボニル Bzl ベンジル DCC Ｎ・N′−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド HBT １−ヒドロキシベンゾトリアゾール DMF Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド TFA トリフルオロ酢酸 THF テトラヒドロフラン DEAE ジエチルアミノエチル 本発明化合物は、通常のペプチド合成法に従つ
て製造する。本発明化合物のあるものについて
は、その合成中に部分的なラセミ化が生じる可能
性がある。しかしながら、このラセミ化の程度
は、実際にラセミ化が生じたとしても、本発明化
合物の鎮痛作用を大きく変えるほど強力なもので
はない。 本発明化合物の製法にはアミノ酸またはペプチ
ド片の結合反応が含まれており、これは一方のカ
ルボキシ基と他方のアミノ基とのアミド結合によ
るものである。効果的に結合させるためには、ま
ず第一に、反応に直接関与しないすべての反応基
を適当な保護基で不活性化し、そして第二に、結
合に関与するカルボキシ基を適当に活性化してカ
ツプリングを促進させる必要がある。これには、
反応工程と反応条件の注意深い選択は勿論のこ
と、特定保護基の使用による目的ペプチドの製造
を含まれる。本発明化合物の製造に用いる各アミ
ノ酸は特に選択した保護基および／または官能基
を有しており、ペプチド分野における公知技術に
よつて製造される。 選択した保護基の組合わせは、本発明化合物の
全合成において、どの段階で用いてもよい。これ
らの特定の組合せは反応を非常に円滑に進行させ
る。他の組合せも本発明化合物の合成において充
分に作用するが、その成功率は多くの場合低い。
従つて、本発明化合物の合成に用い得るアミノ保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル
（CBz）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（BOC）、
ｔ−アミルオキシカルボニル（AOC）、ｐ−メト
キシベンジルオシカルボニル（MBOC）、アダマ
ンチルオキシカルボニル（AdOC）およびイソボ
ルニルオキシカルボニルをあげることができる。
チロシル残基のヒドロキシ保護基としては、ｐ−
ニトロベンジル（PNB）、ｐ−メトキシベンジル
（PMB）などを用いることもできるが、一般には
ベンジル（Bzl）が用いられる。 本発明化合物の製造に用いられるカルボキシ保
護基は代表的なエステル形成基であつて、これに
は例えば、メチル、エチル、ベンジル、ｐ−ニト
ロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、２・２・２
−トリクロルエチルなどが含まれる。 本発明化合物の製造における適切な保護Ｎ−保
護アミノ酸もしくはペプチド片と適切な保護カル
ボキシ−保護アミノ酸もしくはペプチド片との結
合反応は、アミノ酸またはペプチド片の遊離カル
ボキシ基を、結合反応に対して活性にする。これ
は、いくつかの公知技術によつて成し遂げられ
る。このような活性化法の一つには、カルボキシ
基を混合酸無水物に変換させる方法が含まれてい
る。遊離カルボキシ基は他の酸、具体的にはカル
ボン酸誘導体（例えば、酸クロリド）と反応させ
て活性化する。混合酸無水物を形成するために用
いる酸クロリドの具体例には、エチルクロロホル
メート、フエニルクロロホルメート、sec−ブチ
ルクロロホルメート、イソブチルクロロホルメー
ト、ピバロイルクロリドなどがあり、特にイソブ
チルクロロホルメートが好ましい。 結合反応を実施する目的でカルボキシ基を活性
化する別な方法としては、その活性なエステル誘
導体へ変換する方法がある。この種の活性エステ
ルには、例えば２・４・５−トリクロルフエニ
ル、ペンタクロルフエニル、ｐ−ニトロフエニル
などが含まれる。他の結合方法としては、良く知
られているアジド結合法がある。 本発明化合物の製法として好ましい結合法に
は、Ｎ・N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（DCC）を用いて遊離カルボキシ基を活性化し、
結合を促進させる方法が含まれる。この活性化お
よび結合技術は、アミノ酸もしくはペプチド片に
対してモル当量のDCCを用いてモル当量の１−
ビドロキシベンゾトリアゾール（HBT）の存在
下に実施する。このHBTは、ラセミ化の可能性
を含めて、望ましくない副反応を阻止する。 選択した保護基の脱離は、本発明化合物の製法
に用いる合成法の特定段階において行なう必要が
ある。ペプチド合成分野の当業者は、アミミノ酸
またはペプチド片に存在する保護基を、すべてで
はないが一つまたは一つ以上除去することによつ
て生成物の選択的な脱離を行なう、という意味
で、適合する基を、具体的に示した保護基から容
易に選択することができる。これらの方法はペプ
チド分野で良く知られているものである。選択的
な脱離に用い得る技術については文献
［Schro¨der and Lu¨bke、The Peptide vol.1、
Academic Press、New York、（1965）］で充分
に議論されており、特に、この文献中の72〜75頁
の表に示されている。 カルボキシ保護基の脱離は、アルカリ性けん化
によつて行なうこともできる。保護カルボキシの
脱エステル化には、一般に比較的強いアルカリ性
条件、具体的には水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化
物を使用する。けん化を実施する反応条件は、こ
の分野で良く知られている。カルボキシ保護基は
触媒による水素化分解、例えばパラジウム−炭素
のような触媒の存在下における水素化分野によつ
て除去することもできる。さらに、カルボキシ保
護基がｐ−ニトロベンジルまたは２・２・２−ト
リクロルエチルの場合は、亜鉛と塩酸の存在下に
還元して保護基を脱離することもできる。 アミノ保護基は、保護されたアミノ酸またはペ
プチドを、98％ギ酸、トリフルオロ酢酸
（TFA）、アリールスルホン酸［例えば、ｐ−ト
ルエンスルホン酸（TSA）、ベンゼンスルホン酸
（BSA）、ナフタレンスルホン酸］、トリフルオロ
メタンスルホン酸（ニート）などの酸、液体フツ
化水素、および三臭化ホウ素のメチレンクロリド
溶液で処理して、各々の酸付加塩を製造すること
によつて脱離する。アミノ保護基の脱離は、保護
されたアミノ酸またはペプチドを、臭化水素酸も
しくは塩酸と氷酢酸との混液で処理して対応する
臭化水素酸付加塩または塩酸付加塩を製造するこ
とによつて行なつてもよい。従つて、これらの脱
保護試薬はすべて実質的に無水の酸媒質である。
ここで使用する特定の方法または試薬は、特別な
脱保護反応に関与している物質の化学的あるいは
物理的特性に依存する。本発明においては、この
ペプチドをトリフルオロ酢酸またはギ酸で、対応
する酸付加塩に脱保護するのが非常に好ましい。
この塩は、DEAEセフアデツクスA25、アンベル
リスト（Amberlyst）A27などの適切なイオン交
換樹脂で処理して、さらに製薬的に許容され得る
形に変換することができる。 チロシル酸基のヒドロキシ保護基はペプチドの
製造中そのままにしておき、合成の最段階におい
てアミノ保護基と共に除去する。しかしながら、
ヒドロキシ保護基はカルボキシ保護基の脱離条件
に依存して、もつと早い段階で除去されてもよ
い。カルボキシ保護基をアルカリ性のけん化によ
つて脱離するとヒドロキシ保護基はそのまま残る
が、触媒による水素化分解によつてカルボキシ保
護基を脱離するとヒドロキシ保護基も共に脱離さ
れる。本発明化合物の製造は、遊離ヒドロキシル
基を有するチロシル残基の存在下で実施し得るの
で、後者の情況はそれほど問題ではない。 本発明化合物の好ましい製造法には、それぞれ
別々に製造したＮ−末端トリペプチドとＣ−末端
ジペプチドアミドもしくはＣ−末端アミノ酸アミ
ドとの結合反応および残つている保護基の適切な
脱離反応が含まれる。この一般法を、本発明のペ
ンタペプチドの製法を例に示すと、次のようにな
る。 この反応図は、本発明化合物の製造の一例を示
しているだけである。他の方法を用いることもで
きる。他の方法には、カルボキシアミド末端アミ
ノ酸から始まるペプチド鎖構造を製造するのに、
単一のアミノ酸を段階的に連続して付加させる方
法が含まれる。さらに別な方法としては、固相ペ
プチド合成法がある。Ｃ−末端残基を適当な重合
保持体に結合させ、一度に１個の残基を結合させ
ながら目的のペプチドが得られるまで伸長し、重
合体に結合したペプチドを合成する。適当な脱保
護剤を用いてペプチドを重合体から除去する。 本発明化合物は鎮痛作用を示し、有用な薬剤で
ある。特に人間を含めて、哺乳動物に非経口的に
投与した場合に有効である。 本発明化合物はそのまま投与することもできる
し、投与量単位に調合または製剤して非経口的に
投与することもできる。この調合もしくは製剤に
は、製薬的に許容し得る担体である有機もしくは
無機の固体および／または液体を用い得る。この
ような担体は、当業者に周知である。組成物は、
錠剤、粉末、顆粒、カプセル、懸濁液、溶液など
に製剤し得る。 本発明化合物の有効量を投与すると鎮痛効果が
得られる。投与量は、患者の体重１Kgあたり約
0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜20mgである。 以下の実施例は、本発明化合物の製法と活性を
示すものであるが、本発明はこれらの実施例に制
限されるものではない。 実施例 １ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオ
ニルアミド・塩酸塩の製法 Ａ ベンジル Ｄ−アラネート ｐ−トルエンス
ルホネート ｐ−トルエンスルホン酸・１水和物55.1ｇ
（0.29mole）を含むベンゼン200mlとベンジルア
ルコール100mlとの混液にＤ−アラニン25ｇ
（0.281mole）を加えた。混液を還流し、デイー
ン・スターク（Dean−Stark）装置で水を共沸
除去した。混液を15時間加熱した後に室温まで
冷却し、エーテルで稀釈した。得られた沈殿を
回収し、メタノールエーテルから再結晶して標
記化合物55.3ｇ（56％）を得た。 mp.112〜115℃ 元素分析 C17H21NO5Sとして（351.42） 計算値：Ｃ、58.10；Ｈ、6.02；Ｎ、3.99 実験値：Ｃ、58.19；Ｈ、6.06；Ｎ、3.82 Ｂ ベンジル Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラネ
ート 工程Ａの生成物35.1ｇ（0.1mole）を無水
Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド（DMF）200ml
に加えて撹拌し、０℃に冷却してジアザビシク
ロオクタン（DABCO）11.2ｇ（0.1mole）を加
えた。混液を０℃において10分間撹拌し、Ｎ〓
−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル
−Ｌ−チロシン37.1ｇ（0.1mole）を加え、次
いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HBT）13.5ｇ（0.1mole）とＮ・N′−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（DCC）20.6ｇ
（0.1mole）を加えた。得られた混液を０℃にお
いて３時間、次いで室温で24時間撹拌した。混
液を０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧濃縮し
た。残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N炭酸水
素ナトリウム、水、0.75N冷クエン酸および水
で順次洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで
乾燥して濾過し、濾液を減圧濃縮した。得られ
た残渣を熱エタノールに溶解し、冷却して結晶
化させた。これをエタノールから１回再結晶し
て純粋な標記化合物41.5ｇ（80％）を得た。 mp.121〜123℃ 元素分析 C30H36N2O6として（520.63） 計算値：Ｃ、69.21；Ｈ、6.97；Ｎ、5.38 実験値：Ｃ、68.99；Ｈ、6.75；Ｎ、5.17 Ｃ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｏ−ベ
ンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニン テトラヒドロフラン（THF）200mlと水20ml
との水溶液に、工程Ｂの生成物31.2ｇ
（0.06mole）を加えた。得られた溶液を０℃に
冷却して5N水酸化ナトリウム13.2ml（1.1当
量）を徐々に加え、撹拌しながら徐々に室温ま
で暖めた。５時間後に混液を水とエーテルとに
分け、水層を分離して冷却した。この混液にク
エン酸を加えてPHを２に調整し、酢酸エチルで
抽出した。酢酸エチル抽出液を水洗して硫酸マ
グネウムで乾燥し、濾過してエーテルで稀釈し
た。得られた沈殿を濾取して標記化合物17.7ｇ
（67％）を得た。 mp.160〜162℃ 元素分析 C24H30N2O6として（442.51） 計算値：Ｃ、65.14；Ｈ、6.83；Ｎ、6.63 実験値：Ｃ、64.73；Ｈ、6.70；Ｎ、6.20 Ｄ ベンジル Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニ
ル−グリシネート 無水DMF70mlにベンジル グリシネートの
ｐ−トルエンスルホン酸塩6.74ｇ（0.02mole）
を加えて０℃に冷却し、DABCO2.24ｇ
（0.020mole）を加えた。混液を数分間撹拌した
後に、工程Ｃの生成物8.84ｇ（0.020mole）を
加え、さらにHBT2.7ｇ（0.020mole）と
DCC4.12ｇ（0.020mole）を加えた。混液を０
℃において２時間、次いで室温において24時間
撹拌した。得られた懸濁液を０℃に冷却して濾
過し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣を酢酸エ
チルに溶解して1N炭酸水素ナトリウム、水、
冷0.75Nクエン酸および水で順次洗浄した。有
機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して減
圧下に濃縮した。得られた残渣をエタノールか
ら結晶化させて純粋の標記化合物10.8ｇ（92
％）を得た。 mp.145〜147℃ 元素分析 C33H39N3O7として（589.69） 計算値：Ｃ、67.22；Ｈ、6.67；Ｎ、7.13 実験値：Ｃ、67.32；Ｈ、6.83；Ｎ、6.91 Ｅ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル．グリシン DMF 60mlに工程Ｄの生成物10.5ｇ
（0.018mole）を加え、次いで５％パラジウム−
炭素2.5ｇをDMFスラリーとして加えた。得ら
れた混液に窒素を流入し、室温、常圧において
水素を気体分散チユーブを通じて導入した。
3.5時間後に水素の流入を中止して触媒を濾去
し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣をエーテル
で摩砕して標記化合物5.4ｇ（75％）を無定形
の固体として得た。 元素分析 C26H26N2O5として（446.65） 計算値：Ｃ、69.94；Ｈ、5.87；Ｎ、6.27 実験値：Ｃ、70.08；Ｈ、5.82；Ｎ、6.16 Ｆ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニルアミド Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−メ
チオニンのジシクロヘキシルアミン塩17.2ｇ
（0.04mole）を酢酸エチルと冷0.75Nクエン酸に
分配した。得られた有機層を分離して水洗し、
硫酸マグネウムで乾燥して濾過し、濾液を減圧
下に濃縮した。油状残渣を無水THF80mlと
DMF10mlとの混液に溶解し、18−クラウン−
６ エーテル0.5ｇを加えた。水素化カリウム
懸濁液（0.12モル当量）を撹拌し、30分間にわ
たつて前記冷混液に滴下した。ヨウ化メチル
2.49ml（0.04mole）を加えて室温で24間時間撹
拌し、冷却して0.75Nクエン酸でPH３に酸性化
した後、混液を水層とエーテル層に分けた。こ
のエーテル層を数回水洗して1N炭酸水素ナト
リウムで抽出した。抽出液を合してPH２に酸性
化し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出
液を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濾液
を減圧下に蒸発させて、目的のＮ−メチル化生
成物と同一のNMRスペクトル［δ2.92、Ｎ−
CH3；δ2.11、Ｓ−CH3；δ1.6、Ｃ（CH3）3］
を有する生成物8.4ｇを得た。 この油状残渣8.4ｇ（約0.034mole）を
DMF60mlに溶解して０℃に冷却し、HBT4.69
ｇ（0.035mole）とDCC7.0ｇ（0.034mole）を
加えた。混液を０℃において２時間撹拌し、気
体分散チユーブを通して無水アンモニアと45分
間導通した。次いで混液を濾過して濾液を減圧
下に濃縮した。得られた残渣を60〜200メツシ
ユのシリカゲルカラム（３×50cm）でクロマト
グラフし、クロロホルム、次いでクロロホルム
−メタノール混液（9.75：0.25）で溶出した。
薄層クロマトグラフイー（TLC）分析のプロ
フイルに基づいて分画を合併し、減圧下に濃縮
した後に、エーテルと石油エーテルとの混液か
ら２回再結晶して標記化合物4.1ｇ（39％）を
得た。 mp.75〜78℃ NMR：δ2.80、Ｎ−CH3；δ2.10、Ｓ−CH3；
δ1.48、Ｃ（CH3）3 ［α］２５ Ｄ−29.5゜（Ｃ＝0.5、CHCl3） 元素分析 C11H22N2SO3として（262.37） 計算値：Ｃ、50.36；Ｈ、8.45；Ｎ、10.68 実験値：Ｃ、50.59；Ｈ、8.24；Ｎ、10.87 Ｇ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニ
ルアミド 氷酢酸20ml、アニソール２ml、トリエチルシ
ラン２mlおよび工程Ｆの生成物3.8ｇ
（0.0144mole）から成る混液を調製、無水塩化
水素を30分間導通した。混液をエーテルで稀釈
し、得られた沈殿を濾取して乾燥し（2.9ｇ）、
DMF40mlに再溶解した。混液を０℃に冷却し
てジシクロヘキシルアミン2.9ml
（0.0146mole）を加え、さらにHBT1.97ｇ
（0.0146mole）、Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−Ｌ−フエニルアラニン3.87ｇ
（0.0146mole）およびDCC3.0ｇ（0.0146mole）
を加えた。得られた混液を０℃において２時
間、次いで室温において24時間撹拌した。混液
を再び０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧下に
濃縮した。残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N
炭酸水素ナトリウム、水、0.75Nクエン酸およ
び水で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し
て減圧下に蒸発した。得られた油状残渣は石油
エーテルから結晶化しなかつたので、60〜200
メツシユのシリカゲルカラム（３×500cm）で
クロマトグラフし、クロロホルム、次いでクロ
ロホルム−メタノール（9.8：0.2）で溶出し
た。TLC分析のプロフイルに基づいて分画を
合併して溶媒を留去し、残渣をエーテルと石油
エーテルとの混液から結晶化して標記化合物
3.1ｇ（52.5％）を得た。 mp.99〜103℃ 元素分析 C20H31N3O4Sとして（409.55） 計算値：Ｃ、58.65；Ｈ、7.63；Ｎ、10.26 実験値：Ｃ、58.74；Ｈ、7.47；Ｎ、10.45 Ｈ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−フエニ
ルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニルア
ミド 氷酢酸20ml、アニソール３mlおよびトリエチ
ルシラン３mlの混液に工程Ｇの生成物2.2ｇ
（5.37ｍmole）を加え、無水塩化水素を30分間
導通した。混液にエーテルを加え、沈殿した固
体を濾取して減圧乾燥した。この固体1.75ｇ
（５ｍmole）を無水DMF30mlに溶解して０℃に
冷却し、ジシクロヘキシルアミン0.99ml（５ｍ
mole）を加えて塩酸塩を中和した。５分後
に、工程Ｅの生成物2.05ｇ（５ｍmole）、続い
てHBT0.68ｇ（５ｍmole）とDCC1.03ｇ（５
ｍmole）を加た。混液を４℃において24時間
撹拌して不溶物質を濾去し、濾液を減圧下に留
去した。得られた残渣を酢酸エチルに再溶解し
て1N炭酸水素ナトリウム水溶液、0.75N冷クエ
ン酸および水で順次洗浄し、硫酸マグネシウム
で乾燥した。溶液をシリカゲル（60〜200メツ
シユカラム（３×50cm）でクロマトグラフし、
クロロホルム、次いでクロロホルム−メタノー
ル（９：１）で溶出した。TLC分析のブロフ
イルに基づいて分画を合併して溶媒を留去する
と、各々0.8ｇと1.2ｇの粗生成物が二組得られ
た。最初の一組をシリカゲル上にクロマトグラ
フしてクロロホルム−メタノール（９：１）で
溶出すると標記化合物0.62ｇが無定形の固体と
して得られた。 元素分析 C34H48N6O8Sとして（700.86） 計算値：Ｃ、58.27；Ｈ、6.90；Ｎ、11.99 実験値：Ｃ、58.48；Ｈ、6.64；Ｎ、11.97 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、0.99；Ala、
1.00；Gly、1.00；Phe、1.00 二組目の物質は前記方法で２回クロマトグラ
フし、正しい元素分析値とアミノ酸分析値を有
する目的化合物0.74ｇを得た。 Ｉ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミド塩酸塩 アニソール0.2mlを含む氷酢酸５mlに、工程
Ｈの標記化合物0.72ｇ（1.03ｍmole）を加え
た。混液に無水塩化水素を20分間導通し、凍結
乾燥して標記化合物0.74ｇを得た。ＲＡ ｆ0.3 生成物の一部を100℃において減圧乾燥し
た。 元素分析 C29H41N6O6SClとして（637.20） 計算値：Ｃ、54.66；Ｈ、6.49；Ｎ、13.19 実験値：Ｃ、54.36；Ｈ、6.19：Ｎ、13.00 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.01；Ala、
0.99；Gly、1.00；Phe、1.00 実施例 ２ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−オチオ
ニルアミド・アセテートの製造 Ａ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニン・ｄ（＋）α−メチル
ベンジルアミン塩 Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−メ
チオニンのジシクロヘキシルアミン塩86.13ｇ
（0.2mole）を冷エーテル600mlに懸濁し、1.5N
冷クエン酸100mlおよび水で４回抽出した。得
られた有機層を分離して硫酸マグネシウム乾燥
し、減圧下に濃縮した。18−クラウン−６ エ
ーテル1.0ｇ含有の無水THF（０℃）1000mlと
水素化カリウム（0.6mole）との懸濁液を機械
的に撹拌し、前記残渣THF150mlに溶かし溶液
を30分間にわたつて滴下した。ヨウ化メチル25
ml（0.4mole）を15分間にわたつて滴下し、２
時間後に酢酸20mlとTHF20mlとの混液を滴下
し、エタノール40mlを加えた。混液を30分間撹
拌して氷２に注入し、2N水酸化カリウムを
加えてPHを７に調整した。混液をエーテル400
mlで３回抽出し、クエン酸（固体）でPH３に酸
性化した。混液をエーテル500mlで３回抽出
し、抽出液を合して再抽出し、硫酸マグネシウ
ムで乾燥して減圧下に溶媒を留去した。シロツ
プ状の残渣44.76ｇ（84％）を酢酸エチル450ml
に溶解してｄ（＋）α−メチルベンジルアミン
25.78ml（0.2moleを加え、冷却及び軽くこする
ことによつて生じる結晶を濾取して標記化合物
51.05ｇ（66％）を得た。 mp.131〜134℃ ［α］２５ Ｄ−18.9゜（ｃ＝１、EtOH） 元素分析 C19H32N2O4Sとして（384.54） 計算値：Ｃ、59.35；Ｈ、8.39；Ｎ、7.29 実験値：Ｃ、59.15；Ｈ、8.12、Ｎ、7.21 Ｂ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチニルアミド Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニン（工程Ａのｄ（＋）α
−メチルベンジルアミン塩を酸性化し、エーテ
ルに抽出して製造）33.3ｇ（0.127mole）を
DMF160mlに溶解し、−15℃に冷却してイソブ
チル クロロホルメート18.3ml（0.14mole）と
Ｎ−メチルモルホリン・15.4ml（0.14mole）を
加えた。混液を−15℃において10分間撹拌し、
気体分散チユーブを通して無水アンモニアを１
時間導通した。反応混液を−15℃で４時間撹拌
し、1N冷炭酸水素ナトリウム溶液300mlに注入
した。懸濁液をエーテルで抽出し、水、0.75N
冷クエン酸および水で洗浄して硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。シロツ
プ状の残渣をエーテル−石油エーテルから再結
晶して標記化合物16ｇ（48％）を得た。 mp.75〜77℃ ［α］２５ Ｄ−177.3゜（ｃ＝0.5、CHCl3） 元素分析 C11H22N2SO3として（262.37） 計算値：Ｃ、50.36；Ｈ、8.45；Ｎ、10.68 実験値：Ｃ、50.63；Ｈ、8.57、Ｎ、10.45 Ｃ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニ
ルアミド 氷酢酸70ml、アニソール５ml、トリエチルシ
ラン７mlおよび工程Ｂの生成物13.15ｇ
（0.05mole）から成る混液を調整し、無水塩化
水素を25分間導通して混液をエーテルに注入
し、沈殿を濾取して乾燥した（9.9ｇ）。この塩
酸塩をDMF200mlに溶解して０℃に冷却し、ジ
シクロヘキシルアミン6.9ml（0.05mole）を加
た。10分間撹拌した後に、HBT6.8ｇ
（0.05mole）、Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｌ−フエニルアラニン13.3ｇ（0.05mole）
およびDCC10.3ｇ（0.05mole）を加え、０℃で
２時間、さらに室温で48時間撹拌した。混液を
０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧下に濃縮し
た。油状残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N炭
酸水素ナトリウム、水、0.75Nクエン酸および
水で順次洗浄した。この溶液を硫酸マグネシウ
ムで乾燥して減圧下に溶媒を留去し、残渣をエ
ーテルから結晶化させて標記化合物16.4ｇ（80
％）を得た。 mp.114〜115℃ ［α］２５ Ｄ−43.4゜（ｃ＝0.5、MeOH） 元素分析 C20H31N3O4Sとして（409.55） 計算値：Ｃ、58.65；Ｈ、7.63；Ｎ、10.26 実験値：Ｃ、58.76；Ｈ、7.42；Ｎ、10.30 Ｄ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−フエニ
ルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニルア
ミド 氷酢酸20ml、アニソール２ml、トリエチルシ
ラン２mlと工程Ｃの生成物3.5ｇ（8.56ｍ
mole）との混液に、無水塩化水素を25分間導
通してエーテルを加え、沈澱した塩酸塩を濾取
して減圧下に乾燥した。Ｎ〓−ｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−
グリシン・ジシクロヘキシルアミン塩5.0ｇ
（8.47ｍmol）をDMF40ml溶液を０℃に冷却し
て上記塩酸塩を加え、０℃で数分撹拌した後に
HBT1.1ｇ（8.47ｍmole）とDCC1.7ｇ（8.47ｍ
mole）を加えた。混液を４℃で24時間撹拌
し、不溶物を濾去して濾液を減圧下に留去し、
残渣を酢酸エチルに再溶解した。この溶液を
2N炭酸水素ナトリウム水溶液、水、0.75N冷ク
エン酸および水で順次洗浄して硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。残渣を
シリカゲルG62（Grace and Davidson）でク
ロマトグラフして標記化合物4.1ｇ（69％）を
得た。 ［α］２５ Ｄ−13.1゜（ｃ＝0.5、MeOH） 元素分析 C34H48N6O8Sとして（700.86） 計算値：Ｃ、58.27；Ｈ、6.90；Ｎ、11.99 実験値：Ｃ、58.05；Ｈ、6.62；Ｎ、11.73 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.00；Ala、
1.01；Gly、0.99；Phe、1.00；NH3、1.01 Ｅ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミドアセテート 工程Ｄの生成物8.3ｇ（0.012mole）をチオア
ニソール15mlに加えて０℃に冷却し、冷
TFA50mlを加えた。混液を０℃で30分間撹拌
してエーテルで数回稀釈し、沈澱を濾取して乾
燥した。この粗製のトリフルオロ酢酸塩８ｇを
緩衝液（１％ピリジンおよび0.05％酢酸を含
む）に溶解して全体を60mlとし、同一の緩衝液
で平衝状態にしたDEAEセフアデツクスＡ−25
（アセテート型）カラム（５×138cm）にクロマ
トグラフした。280ｍμにおけるUV吸収帯を測
定し、1270mlと1950mlとの間で溶出した生成物
を回収した。緩衝液を凍結乾燥して残渣を1N
酢酸約200mlに溶解し、再び凍結乾燥した。最
後に水−アセトニトリル（３：１）から凍結乾
燥して標記化合物6.64ｇ（83％）を得た。 ［α］２５ Ｄ＋21.7゜（ｃ＝１、1NHCl） 元素分析 C31H44N6O8Sとして（660.79） 計算値：
Ｃ、56.35；Ｈ、6.71；Ｎ、12.72；Ｏ、19.37 実験値：
Ｃ、56.50；Ｈ、6.46；Ｎ、12.62；Ｏ、19.25 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.00；Ala、
1.01；Gly、1.00；Phe、0.99；NH3、1.03 実施例 ３ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオ
ニルアミド・アセテート塩の製法 Ａ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニル・ベンズヒドリルアミンのトリフルオロ
酢酸塩樹脂 標記のペプチド樹脂はベンズヒドリルアミン
樹脂5.0ｇを用いてBeckman990ペプチド合成機
で自動固相合成法により合成した。ベンズヒド
リルアミン樹脂を４％ジイソプロピルエチルア
ミン（DIEA）により塩化メチレン中で中和
し、塩化メチレン中でBOC−（Ｎ−Me）−Met
−OHおよびDCCと結合させてBOC（Ｎ−
Me）−Met−置換樹脂とした。このペプチド樹
脂にBOC−Phe−OH、BOC−Gly−OH、BOC
−Ala−OHおよBOC−Tyr−OHを順次結合さ
せた。その際、最初の結合はプログラムNo.１に
従い、同じアミノ酸の次からの再結晶はプログ
ラムNo.２に従つた。プログラムNo.２は３回で実
施するＬ−Phe−OH以外は各々のアミノ酸に
対して１回実施した。得られたBOC−ペンタ
ペプチド−樹脂をプログラムNo.１の１〜８の工
程に従つて脱保護して標記化合物6.13ｇを得
た。プログラムNo.１および２による洗浄を樹脂
１ｇ当り10mlで実施した。 プログラム１ １ CH2Cl2で３回洗浄、 ２ ５分間TFA：ET3SiH：CH2Cl2（容積
比、30：５：65）で処理、 ３ 工程２と同様に30分間処理、 ４ CH2Cl2で２回洗浄、 ５ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ６ メタノールで２回洗浄、 ７ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ８ CH2Cl2で２回洗浄、 ９ CH2Cl2中、４％DIEAで１回につき２分間
を４回処理、 10 工程４〜８を繰り返す、 11 CH2Cl2中、所望のアミノ酸誘導体2.5当量
およびCH2Cl2中、DCC1.25当量で120分間処
理、 12 CH2Cl2で４回洗浄、 13 工程５〜７を繰り返す、 14 CH2Cl2で３回洗浄。 プログラム２ １ CH2Cl2中、４％DIEAで１回につき２分間
を４回処理、 ２ CH2Cl2で２回洗浄、 ３ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ４ メタノールで２回洗浄、 ５ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ６ CH2Cl2で２回洗浄、 ７ DMF：CH2Cl2（１：１）で３回洗浄、 ８ DMF：CH2Cl2（１：１）中、所望のアミ
ノ酸誘導体2.5当量およびCH2Cl2中、
DCC1.25当量で120分間処理、 ９ DMF：CH2Cl2（１：１）で４回洗浄、 10 工程４〜６を繰り返す。 Ｂ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミドのフツ化水素酸塩 工程Ａで得たペプチド樹脂を減圧下、60分
間、０℃でアニソールを酸除去剤として用いて
無水液体HFと反応させた。揮発性成分を反応
液から減圧除去し、ペプチド樹脂をエーテルで
摩砕し、残留するHFとアニソールを留去し
た。10％酢酸で摩砕することにより樹脂からペ
プチドを抽出し、濾過して10％酢酸50mlで３回
洗浄、凍結乾燥して粗製の標記化合物940mgを
得た。 Ｃ 最終産物を得るためのクロマトグラフイーに
よる精製 工程Ｂから得たペプチド・ジアステレオマー
の粗製混合物470mgを低圧（7.17Kg／cm2）の逆
相（C18）シリカゲルカラム（3.8×58.5cm）で
25％アセトニトリルの0.1N酢酸アンモニウム
を用いてクロマトグラフイーに付して、１分間
ずつ分画98〜150を合し、凍結乾燥して生成物
360mgを得た。 工程Ｂで得た粗製混合物の残りを上記に詳述
したようにクロマトグラフイーに付して生成物
320mgを得た。 本工程で得た２つの凍結乾燥品を合し、
0.2N酢酸中、Sephedex Ｇ−10カラム（2.5×
10.0cm）でクロマトグラフイーに付して残留す
る酢酸アンモニウムを除去した、いくつかの分
画を凍結乾燥して標記化合物636.7mgを得た。 ［α］２５ Ｄ＋19.7゜（ｃ＝0.5、1N HCl） ［α］２５ ３６５＋71.70゜（ｃ＝0.5、1N HCl） 元素分析 C31H43N6O8Sとして 計算値：
Ｃ、56.35；Ｈ、6.71；Ｎ、12.72；Ｓ、4.85 実験値：
Ｃ、56.60；Ｈ、6.43；Ｎ、12.97；Ｓ、4.92 アミノ酸分析： Ala Tyr Gly Phe NH3 ％ペプチド 0.99 1.01 1.00 1.01 1.10 93.1 1.00 1.01 1.00 0.97 1.02 90.5 本発明化合物は有用な鎮痛剤である。本発明化
合物の鎮痛作用は、マウスのホツト・プレート・
テストで示した。このテストは、マウスを垂直な
アクリル性シリンダー内に入れて行なうもので、
シリンダー内の底面には、52℃に維持したホツト
プレートが入れてある。このテストでは、あらか
じめ決めておいた量のテスト化合物を適当な担体
に溶解もしくは懸濁してマウスに皮下注射し、一
定時間をおいてマウスをホツトプレート上にの
せ、二つの行動がみられるまでの経過時間を秒単
位で測定する。一つは、マウスが後足をなめるま
での経過時間であり、二つ目は、マウスがホツ
ト・プレートから飛び上がるまでの経過時間であ
る。鎮痛作用を示す試薬を投与したマウスの場合
には、担体だけを注入したコントロール用マウス
と比較して、この経過時間に増加がみとめられ
る。これは、運動失調や無能力を生じないような
投与量範囲で行なう必要がある。以下の表は、こ
のテストの結果を示したものであり、コントロー
ル、天然エンケフアリンおよびそのアミドとを比
較したものである。表は、マウスが後足をなめ
るまでの経過時間、表は、マウスがジヤンプす
るまでの経過時間、そして表は、各テストにお
いて鎮痛効果を示した動物の百分率を表わす。陽
性の鎮痛効果の基準は次のとおりである。テスト
化合物を投与した動物が後足をなめるまでの時間
またはジヤンプするまでの経過時間、コントロー
ルの平均経過時間と平均から二つの標準偏差の和
と等しいか、それよりも長くなければならない。
以下表および表に示されている結果は、主値
±標準偏差を示したものであり、表は、少なく
とも９匹から40匹までのマウスで得られた百分率
を表わす。
しい化合物に関する。 最近、モルフイン様の特性を示す内因性物質が
哺乳動物の脳または髄液から抽出された。これら
の物質はエンケフアリンと命名され、下記のペン
タペプチドと同定された。 Ｈ−Try−Gly−Gly−Phe−Met−OH Ｈ−Try−Gly−Gly−Phe−Leu−OH ［Hughes et al.、Nature、258、577
（1975）］。これらの化合物は、各々メチオニン−
エンケフアリンおよびロイシン−エンケフアリン
と呼ばれている。 これらの化合物をマウスの脳室内
（intracerebroventricularly）に投与すると鎮痛
作用を示すが［Buscher et al.、Nature、261、
423（1976）］、非経口的に投与した場合には有用
な鎮痛作用が実際上失われる。 本発明化合物は下記式（ペンタペプチド）で示
され、全身投与において顕著な鎮痛作用を示す。 Ｈ−Ｌ−Tyr−Ｄ−Ala−Gly−Ｌ−Phe −Ｌ−（Ｎ−Me）Met−NH2 本発明化合物には、その製剤上許容される非毒
性酸付加塩も含まれる。 製剤上許容される非毒性酸付加塩には、例えば
塩酸、硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマル酸、臭
化水素酸、グリコール酸、クエン酸、マレイン
酸、リン酸、コハク酸、酢酸、硝酸、安息香酸、
アスコルビン酸、Ｐ−トルエンスルホン酸、ベン
ゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、プロピ
オン酸などから製造された有機および無機の酸付
加塩が含まれる。特に、塩酸、酢酸またはコハク
酸から製造した酸付加塩が好ましい。これらの塩
は、いずれも常法に従つて製造する。 本発明のペンタベプチドのアミノ酸残基は、便
宜上、末端アミノ基側の残基から順番に番号を附
す。 本明細書中で用いる略記号は、ペプチド化学の
分野で繁用のものであり、それぞれ以下の意味を
有する。 Ala アラニン Gly グリシン Met メチオニン Phe フエニルアラニン Tyr チロシン Ac アセチル Me メチル Et エチル BOC ｔ−ブチルオキシカルボニル Bzl ベンジル DCC Ｎ・N′−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド HBT １−ヒドロキシベンゾトリアゾール DMF Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド TFA トリフルオロ酢酸 THF テトラヒドロフラン DEAE ジエチルアミノエチル 本発明化合物は、通常のペプチド合成法に従つ
て製造する。本発明化合物のあるものについて
は、その合成中に部分的なラセミ化が生じる可能
性がある。しかしながら、このラセミ化の程度
は、実際にラセミ化が生じたとしても、本発明化
合物の鎮痛作用を大きく変えるほど強力なもので
はない。 本発明化合物の製法にはアミノ酸またはペプチ
ド片の結合反応が含まれており、これは一方のカ
ルボキシ基と他方のアミノ基とのアミド結合によ
るものである。効果的に結合させるためには、ま
ず第一に、反応に直接関与しないすべての反応基
を適当な保護基で不活性化し、そして第二に、結
合に関与するカルボキシ基を適当に活性化してカ
ツプリングを促進させる必要がある。これには、
反応工程と反応条件の注意深い選択は勿論のこ
と、特定保護基の使用による目的ペプチドの製造
を含まれる。本発明化合物の製造に用いる各アミ
ノ酸は特に選択した保護基および／または官能基
を有しており、ペプチド分野における公知技術に
よつて製造される。 選択した保護基の組合わせは、本発明化合物の
全合成において、どの段階で用いてもよい。これ
らの特定の組合せは反応を非常に円滑に進行させ
る。他の組合せも本発明化合物の合成において充
分に作用するが、その成功率は多くの場合低い。
従つて、本発明化合物の合成に用い得るアミノ保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル
（CBz）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（BOC）、
ｔ−アミルオキシカルボニル（AOC）、ｐ−メト
キシベンジルオシカルボニル（MBOC）、アダマ
ンチルオキシカルボニル（AdOC）およびイソボ
ルニルオキシカルボニルをあげることができる。
チロシル残基のヒドロキシ保護基としては、ｐ−
ニトロベンジル（PNB）、ｐ−メトキシベンジル
（PMB）などを用いることもできるが、一般には
ベンジル（Bzl）が用いられる。 本発明化合物の製造に用いられるカルボキシ保
護基は代表的なエステル形成基であつて、これに
は例えば、メチル、エチル、ベンジル、ｐ−ニト
ロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、２・２・２
−トリクロルエチルなどが含まれる。 本発明化合物の製造における適切な保護Ｎ−保
護アミノ酸もしくはペプチド片と適切な保護カル
ボキシ−保護アミノ酸もしくはペプチド片との結
合反応は、アミノ酸またはペプチド片の遊離カル
ボキシ基を、結合反応に対して活性にする。これ
は、いくつかの公知技術によつて成し遂げられ
る。このような活性化法の一つには、カルボキシ
基を混合酸無水物に変換させる方法が含まれてい
る。遊離カルボキシ基は他の酸、具体的にはカル
ボン酸誘導体（例えば、酸クロリド）と反応させ
て活性化する。混合酸無水物を形成するために用
いる酸クロリドの具体例には、エチルクロロホル
メート、フエニルクロロホルメート、sec−ブチ
ルクロロホルメート、イソブチルクロロホルメー
ト、ピバロイルクロリドなどがあり、特にイソブ
チルクロロホルメートが好ましい。 結合反応を実施する目的でカルボキシ基を活性
化する別な方法としては、その活性なエステル誘
導体へ変換する方法がある。この種の活性エステ
ルには、例えば２・４・５−トリクロルフエニ
ル、ペンタクロルフエニル、ｐ−ニトロフエニル
などが含まれる。他の結合方法としては、良く知
られているアジド結合法がある。 本発明化合物の製法として好ましい結合法に
は、Ｎ・N′−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（DCC）を用いて遊離カルボキシ基を活性化し、
結合を促進させる方法が含まれる。この活性化お
よび結合技術は、アミノ酸もしくはペプチド片に
対してモル当量のDCCを用いてモル当量の１−
ビドロキシベンゾトリアゾール（HBT）の存在
下に実施する。このHBTは、ラセミ化の可能性
を含めて、望ましくない副反応を阻止する。 選択した保護基の脱離は、本発明化合物の製法
に用いる合成法の特定段階において行なう必要が
ある。ペプチド合成分野の当業者は、アミミノ酸
またはペプチド片に存在する保護基を、すべてで
はないが一つまたは一つ以上除去することによつ
て生成物の選択的な脱離を行なう、という意味
で、適合する基を、具体的に示した保護基から容
易に選択することができる。これらの方法はペプ
チド分野で良く知られているものである。選択的
な脱離に用い得る技術については文献
［Schro¨der and Lu¨bke、The Peptide vol.1、
Academic Press、New York、（1965）］で充分
に議論されており、特に、この文献中の72〜75頁
の表に示されている。 カルボキシ保護基の脱離は、アルカリ性けん化
によつて行なうこともできる。保護カルボキシの
脱エステル化には、一般に比較的強いアルカリ性
条件、具体的には水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化
物を使用する。けん化を実施する反応条件は、こ
の分野で良く知られている。カルボキシ保護基は
触媒による水素化分解、例えばパラジウム−炭素
のような触媒の存在下における水素化分野によつ
て除去することもできる。さらに、カルボキシ保
護基がｐ−ニトロベンジルまたは２・２・２−ト
リクロルエチルの場合は、亜鉛と塩酸の存在下に
還元して保護基を脱離することもできる。 アミノ保護基は、保護されたアミノ酸またはペ
プチドを、98％ギ酸、トリフルオロ酢酸
（TFA）、アリールスルホン酸［例えば、ｐ−ト
ルエンスルホン酸（TSA）、ベンゼンスルホン酸
（BSA）、ナフタレンスルホン酸］、トリフルオロ
メタンスルホン酸（ニート）などの酸、液体フツ
化水素、および三臭化ホウ素のメチレンクロリド
溶液で処理して、各々の酸付加塩を製造すること
によつて脱離する。アミノ保護基の脱離は、保護
されたアミノ酸またはペプチドを、臭化水素酸も
しくは塩酸と氷酢酸との混液で処理して対応する
臭化水素酸付加塩または塩酸付加塩を製造するこ
とによつて行なつてもよい。従つて、これらの脱
保護試薬はすべて実質的に無水の酸媒質である。
ここで使用する特定の方法または試薬は、特別な
脱保護反応に関与している物質の化学的あるいは
物理的特性に依存する。本発明においては、この
ペプチドをトリフルオロ酢酸またはギ酸で、対応
する酸付加塩に脱保護するのが非常に好ましい。
この塩は、DEAEセフアデツクスA25、アンベル
リスト（Amberlyst）A27などの適切なイオン交
換樹脂で処理して、さらに製薬的に許容され得る
形に変換することができる。 チロシル酸基のヒドロキシ保護基はペプチドの
製造中そのままにしておき、合成の最段階におい
てアミノ保護基と共に除去する。しかしながら、
ヒドロキシ保護基はカルボキシ保護基の脱離条件
に依存して、もつと早い段階で除去されてもよ
い。カルボキシ保護基をアルカリ性のけん化によ
つて脱離するとヒドロキシ保護基はそのまま残る
が、触媒による水素化分解によつてカルボキシ保
護基を脱離するとヒドロキシ保護基も共に脱離さ
れる。本発明化合物の製造は、遊離ヒドロキシル
基を有するチロシル残基の存在下で実施し得るの
で、後者の情況はそれほど問題ではない。 本発明化合物の好ましい製造法には、それぞれ
別々に製造したＮ−末端トリペプチドとＣ−末端
ジペプチドアミドもしくはＣ−末端アミノ酸アミ
ドとの結合反応および残つている保護基の適切な
脱離反応が含まれる。この一般法を、本発明のペ
ンタペプチドの製法を例に示すと、次のようにな
る。 この反応図は、本発明化合物の製造の一例を示
しているだけである。他の方法を用いることもで
きる。他の方法には、カルボキシアミド末端アミ
ノ酸から始まるペプチド鎖構造を製造するのに、
単一のアミノ酸を段階的に連続して付加させる方
法が含まれる。さらに別な方法としては、固相ペ
プチド合成法がある。Ｃ−末端残基を適当な重合
保持体に結合させ、一度に１個の残基を結合させ
ながら目的のペプチドが得られるまで伸長し、重
合体に結合したペプチドを合成する。適当な脱保
護剤を用いてペプチドを重合体から除去する。 本発明化合物は鎮痛作用を示し、有用な薬剤で
ある。特に人間を含めて、哺乳動物に非経口的に
投与した場合に有効である。 本発明化合物はそのまま投与することもできる
し、投与量単位に調合または製剤して非経口的に
投与することもできる。この調合もしくは製剤に
は、製薬的に許容し得る担体である有機もしくは
無機の固体および／または液体を用い得る。この
ような担体は、当業者に周知である。組成物は、
錠剤、粉末、顆粒、カプセル、懸濁液、溶液など
に製剤し得る。 本発明化合物の有効量を投与すると鎮痛効果が
得られる。投与量は、患者の体重１Kgあたり約
0.1〜100mg、好ましくは約1.0〜20mgである。 以下の実施例は、本発明化合物の製法と活性を
示すものであるが、本発明はこれらの実施例に制
限されるものではない。 実施例 １ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオ
ニルアミド・塩酸塩の製法 Ａ ベンジル Ｄ−アラネート ｐ−トルエンス
ルホネート ｐ−トルエンスルホン酸・１水和物55.1ｇ
（0.29mole）を含むベンゼン200mlとベンジルア
ルコール100mlとの混液にＤ−アラニン25ｇ
（0.281mole）を加えた。混液を還流し、デイー
ン・スターク（Dean−Stark）装置で水を共沸
除去した。混液を15時間加熱した後に室温まで
冷却し、エーテルで稀釈した。得られた沈殿を
回収し、メタノールエーテルから再結晶して標
記化合物55.3ｇ（56％）を得た。 mp.112〜115℃ 元素分析 C17H21NO5Sとして（351.42） 計算値：Ｃ、58.10；Ｈ、6.02；Ｎ、3.99 実験値：Ｃ、58.19；Ｈ、6.06；Ｎ、3.82 Ｂ ベンジル Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラネ
ート 工程Ａの生成物35.1ｇ（0.1mole）を無水
Ｎ・Ｎ−ジメチルホルムアミド（DMF）200ml
に加えて撹拌し、０℃に冷却してジアザビシク
ロオクタン（DABCO）11.2ｇ（0.1mole）を加
えた。混液を０℃において10分間撹拌し、Ｎ〓
−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル
−Ｌ−チロシン37.1ｇ（0.1mole）を加え、次
いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HBT）13.5ｇ（0.1mole）とＮ・N′−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド（DCC）20.6ｇ
（0.1mole）を加えた。得られた混液を０℃にお
いて３時間、次いで室温で24時間撹拌した。混
液を０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧濃縮し
た。残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N炭酸水
素ナトリウム、水、0.75N冷クエン酸および水
で順次洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで
乾燥して濾過し、濾液を減圧濃縮した。得られ
た残渣を熱エタノールに溶解し、冷却して結晶
化させた。これをエタノールから１回再結晶し
て純粋な標記化合物41.5ｇ（80％）を得た。 mp.121〜123℃ 元素分析 C30H36N2O6として（520.63） 計算値：Ｃ、69.21；Ｈ、6.97；Ｎ、5.38 実験値：Ｃ、68.99；Ｈ、6.75；Ｎ、5.17 Ｃ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｏ−ベ
ンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニン テトラヒドロフラン（THF）200mlと水20ml
との水溶液に、工程Ｂの生成物31.2ｇ
（0.06mole）を加えた。得られた溶液を０℃に
冷却して5N水酸化ナトリウム13.2ml（1.1当
量）を徐々に加え、撹拌しながら徐々に室温ま
で暖めた。５時間後に混液を水とエーテルとに
分け、水層を分離して冷却した。この混液にク
エン酸を加えてPHを２に調整し、酢酸エチルで
抽出した。酢酸エチル抽出液を水洗して硫酸マ
グネウムで乾燥し、濾過してエーテルで稀釈し
た。得られた沈殿を濾取して標記化合物17.7ｇ
（67％）を得た。 mp.160〜162℃ 元素分析 C24H30N2O6として（442.51） 計算値：Ｃ、65.14；Ｈ、6.83；Ｎ、6.63 実験値：Ｃ、64.73；Ｈ、6.70；Ｎ、6.20 Ｄ ベンジル Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニ
ル−グリシネート 無水DMF70mlにベンジル グリシネートの
ｐ−トルエンスルホン酸塩6.74ｇ（0.02mole）
を加えて０℃に冷却し、DABCO2.24ｇ
（0.020mole）を加えた。混液を数分間撹拌した
後に、工程Ｃの生成物8.84ｇ（0.020mole）を
加え、さらにHBT2.7ｇ（0.020mole）と
DCC4.12ｇ（0.020mole）を加えた。混液を０
℃において２時間、次いで室温において24時間
撹拌した。得られた懸濁液を０℃に冷却して濾
過し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣を酢酸エ
チルに溶解して1N炭酸水素ナトリウム、水、
冷0.75Nクエン酸および水で順次洗浄した。有
機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して減
圧下に濃縮した。得られた残渣をエタノールか
ら結晶化させて純粋の標記化合物10.8ｇ（92
％）を得た。 mp.145〜147℃ 元素分析 C33H39N3O7として（589.69） 計算値：Ｃ、67.22；Ｈ、6.67；Ｎ、7.13 実験値：Ｃ、67.32；Ｈ、6.83；Ｎ、6.91 Ｅ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル．グリシン DMF 60mlに工程Ｄの生成物10.5ｇ
（0.018mole）を加え、次いで５％パラジウム−
炭素2.5ｇをDMFスラリーとして加えた。得ら
れた混液に窒素を流入し、室温、常圧において
水素を気体分散チユーブを通じて導入した。
3.5時間後に水素の流入を中止して触媒を濾去
し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣をエーテル
で摩砕して標記化合物5.4ｇ（75％）を無定形
の固体として得た。 元素分析 C26H26N2O5として（446.65） 計算値：Ｃ、69.94；Ｈ、5.87；Ｎ、6.27 実験値：Ｃ、70.08；Ｈ、5.82；Ｎ、6.16 Ｆ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニルアミド Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−メ
チオニンのジシクロヘキシルアミン塩17.2ｇ
（0.04mole）を酢酸エチルと冷0.75Nクエン酸に
分配した。得られた有機層を分離して水洗し、
硫酸マグネウムで乾燥して濾過し、濾液を減圧
下に濃縮した。油状残渣を無水THF80mlと
DMF10mlとの混液に溶解し、18−クラウン−
６ エーテル0.5ｇを加えた。水素化カリウム
懸濁液（0.12モル当量）を撹拌し、30分間にわ
たつて前記冷混液に滴下した。ヨウ化メチル
2.49ml（0.04mole）を加えて室温で24間時間撹
拌し、冷却して0.75Nクエン酸でPH３に酸性化
した後、混液を水層とエーテル層に分けた。こ
のエーテル層を数回水洗して1N炭酸水素ナト
リウムで抽出した。抽出液を合してPH２に酸性
化し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出
液を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濾液
を減圧下に蒸発させて、目的のＮ−メチル化生
成物と同一のNMRスペクトル［δ2.92、Ｎ−
CH3；δ2.11、Ｓ−CH3；δ1.6、Ｃ（CH3）3］
を有する生成物8.4ｇを得た。 この油状残渣8.4ｇ（約0.034mole）を
DMF60mlに溶解して０℃に冷却し、HBT4.69
ｇ（0.035mole）とDCC7.0ｇ（0.034mole）を
加えた。混液を０℃において２時間撹拌し、気
体分散チユーブを通して無水アンモニアと45分
間導通した。次いで混液を濾過して濾液を減圧
下に濃縮した。得られた残渣を60〜200メツシ
ユのシリカゲルカラム（３×50cm）でクロマト
グラフし、クロロホルム、次いでクロロホルム
−メタノール混液（9.75：0.25）で溶出した。
薄層クロマトグラフイー（TLC）分析のプロ
フイルに基づいて分画を合併し、減圧下に濃縮
した後に、エーテルと石油エーテルとの混液か
ら２回再結晶して標記化合物4.1ｇ（39％）を
得た。 mp.75〜78℃ NMR：δ2.80、Ｎ−CH3；δ2.10、Ｓ−CH3；
δ1.48、Ｃ（CH3）3 ［α］２５ Ｄ−29.5゜（Ｃ＝0.5、CHCl3） 元素分析 C11H22N2SO3として（262.37） 計算値：Ｃ、50.36；Ｈ、8.45；Ｎ、10.68 実験値：Ｃ、50.59；Ｈ、8.24；Ｎ、10.87 Ｇ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニ
ルアミド 氷酢酸20ml、アニソール２ml、トリエチルシ
ラン２mlおよび工程Ｆの生成物3.8ｇ
（0.0144mole）から成る混液を調製、無水塩化
水素を30分間導通した。混液をエーテルで稀釈
し、得られた沈殿を濾取して乾燥し（2.9ｇ）、
DMF40mlに再溶解した。混液を０℃に冷却し
てジシクロヘキシルアミン2.9ml
（0.0146mole）を加え、さらにHBT1.97ｇ
（0.0146mole）、Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−Ｌ−フエニルアラニン3.87ｇ
（0.0146mole）およびDCC3.0ｇ（0.0146mole）
を加えた。得られた混液を０℃において２時
間、次いで室温において24時間撹拌した。混液
を再び０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧下に
濃縮した。残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N
炭酸水素ナトリウム、水、0.75Nクエン酸およ
び水で順次洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し
て減圧下に蒸発した。得られた油状残渣は石油
エーテルから結晶化しなかつたので、60〜200
メツシユのシリカゲルカラム（３×500cm）で
クロマトグラフし、クロロホルム、次いでクロ
ロホルム−メタノール（9.8：0.2）で溶出し
た。TLC分析のプロフイルに基づいて分画を
合併して溶媒を留去し、残渣をエーテルと石油
エーテルとの混液から結晶化して標記化合物
3.1ｇ（52.5％）を得た。 mp.99〜103℃ 元素分析 C20H31N3O4Sとして（409.55） 計算値：Ｃ、58.65；Ｈ、7.63；Ｎ、10.26 実験値：Ｃ、58.74；Ｈ、7.47；Ｎ、10.45 Ｈ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−フエニ
ルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニルア
ミド 氷酢酸20ml、アニソール３mlおよびトリエチ
ルシラン３mlの混液に工程Ｇの生成物2.2ｇ
（5.37ｍmole）を加え、無水塩化水素を30分間
導通した。混液にエーテルを加え、沈殿した固
体を濾取して減圧乾燥した。この固体1.75ｇ
（５ｍmole）を無水DMF30mlに溶解して０℃に
冷却し、ジシクロヘキシルアミン0.99ml（５ｍ
mole）を加えて塩酸塩を中和した。５分後
に、工程Ｅの生成物2.05ｇ（５ｍmole）、続い
てHBT0.68ｇ（５ｍmole）とDCC1.03ｇ（５
ｍmole）を加た。混液を４℃において24時間
撹拌して不溶物質を濾去し、濾液を減圧下に留
去した。得られた残渣を酢酸エチルに再溶解し
て1N炭酸水素ナトリウム水溶液、0.75N冷クエ
ン酸および水で順次洗浄し、硫酸マグネシウム
で乾燥した。溶液をシリカゲル（60〜200メツ
シユカラム（３×50cm）でクロマトグラフし、
クロロホルム、次いでクロロホルム−メタノー
ル（９：１）で溶出した。TLC分析のブロフ
イルに基づいて分画を合併して溶媒を留去する
と、各々0.8ｇと1.2ｇの粗生成物が二組得られ
た。最初の一組をシリカゲル上にクロマトグラ
フしてクロロホルム−メタノール（９：１）で
溶出すると標記化合物0.62ｇが無定形の固体と
して得られた。 元素分析 C34H48N6O8Sとして（700.86） 計算値：Ｃ、58.27；Ｈ、6.90；Ｎ、11.99 実験値：Ｃ、58.48；Ｈ、6.64；Ｎ、11.97 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、0.99；Ala、
1.00；Gly、1.00；Phe、1.00 二組目の物質は前記方法で２回クロマトグラ
フし、正しい元素分析値とアミノ酸分析値を有
する目的化合物0.74ｇを得た。 Ｉ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミド塩酸塩 アニソール0.2mlを含む氷酢酸５mlに、工程
Ｈの標記化合物0.72ｇ（1.03ｍmole）を加え
た。混液に無水塩化水素を20分間導通し、凍結
乾燥して標記化合物0.74ｇを得た。ＲＡ ｆ0.3 生成物の一部を100℃において減圧乾燥し
た。 元素分析 C29H41N6O6SClとして（637.20） 計算値：Ｃ、54.66；Ｈ、6.49；Ｎ、13.19 実験値：Ｃ、54.36；Ｈ、6.19：Ｎ、13.00 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.01；Ala、
0.99；Gly、1.00；Phe、1.00 実施例 ２ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−オチオ
ニルアミド・アセテートの製造 Ａ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニン・ｄ（＋）α−メチル
ベンジルアミン塩 Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−メ
チオニンのジシクロヘキシルアミン塩86.13ｇ
（0.2mole）を冷エーテル600mlに懸濁し、1.5N
冷クエン酸100mlおよび水で４回抽出した。得
られた有機層を分離して硫酸マグネシウム乾燥
し、減圧下に濃縮した。18−クラウン−６ エ
ーテル1.0ｇ含有の無水THF（０℃）1000mlと
水素化カリウム（0.6mole）との懸濁液を機械
的に撹拌し、前記残渣THF150mlに溶かし溶液
を30分間にわたつて滴下した。ヨウ化メチル25
ml（0.4mole）を15分間にわたつて滴下し、２
時間後に酢酸20mlとTHF20mlとの混液を滴下
し、エタノール40mlを加えた。混液を30分間撹
拌して氷２に注入し、2N水酸化カリウムを
加えてPHを７に調整した。混液をエーテル400
mlで３回抽出し、クエン酸（固体）でPH３に酸
性化した。混液をエーテル500mlで３回抽出
し、抽出液を合して再抽出し、硫酸マグネシウ
ムで乾燥して減圧下に溶媒を留去した。シロツ
プ状の残渣44.76ｇ（84％）を酢酸エチル450ml
に溶解してｄ（＋）α−メチルベンジルアミン
25.78ml（0.2moleを加え、冷却及び軽くこする
ことによつて生じる結晶を濾取して標記化合物
51.05ｇ（66％）を得た。 mp.131〜134℃ ［α］２５ Ｄ−18.9゜（ｃ＝１、EtOH） 元素分析 C19H32N2O4Sとして（384.54） 計算値：Ｃ、59.35；Ｈ、8.39；Ｎ、7.29 実験値：Ｃ、59.15；Ｈ、8.12、Ｎ、7.21 Ｂ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチニルアミド Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ〓−
メチル−Ｌ−メチオニン（工程Ａのｄ（＋）α
−メチルベンジルアミン塩を酸性化し、エーテ
ルに抽出して製造）33.3ｇ（0.127mole）を
DMF160mlに溶解し、−15℃に冷却してイソブ
チル クロロホルメート18.3ml（0.14mole）と
Ｎ−メチルモルホリン・15.4ml（0.14mole）を
加えた。混液を−15℃において10分間撹拌し、
気体分散チユーブを通して無水アンモニアを１
時間導通した。反応混液を−15℃で４時間撹拌
し、1N冷炭酸水素ナトリウム溶液300mlに注入
した。懸濁液をエーテルで抽出し、水、0.75N
冷クエン酸および水で洗浄して硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。シロツ
プ状の残渣をエーテル−石油エーテルから再結
晶して標記化合物16ｇ（48％）を得た。 mp.75〜77℃ ［α］２５ Ｄ−177.3゜（ｃ＝0.5、CHCl3） 元素分析 C11H22N2SO3として（262.37） 計算値：Ｃ、50.36；Ｈ、8.45；Ｎ、10.68 実験値：Ｃ、50.63；Ｈ、8.57、Ｎ、10.45 Ｃ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニ
ルアミド 氷酢酸70ml、アニソール５ml、トリエチルシ
ラン７mlおよび工程Ｂの生成物13.15ｇ
（0.05mole）から成る混液を調整し、無水塩化
水素を25分間導通して混液をエーテルに注入
し、沈殿を濾取して乾燥した（9.9ｇ）。この塩
酸塩をDMF200mlに溶解して０℃に冷却し、ジ
シクロヘキシルアミン6.9ml（0.05mole）を加
た。10分間撹拌した後に、HBT6.8ｇ
（0.05mole）、Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｌ−フエニルアラニン13.3ｇ（0.05mole）
およびDCC10.3ｇ（0.05mole）を加え、０℃で
２時間、さらに室温で48時間撹拌した。混液を
０℃に冷却して濾過し、濾液を減圧下に濃縮し
た。油状残渣を酢酸エチルに再溶解し、1N炭
酸水素ナトリウム、水、0.75Nクエン酸および
水で順次洗浄した。この溶液を硫酸マグネシウ
ムで乾燥して減圧下に溶媒を留去し、残渣をエ
ーテルから結晶化させて標記化合物16.4ｇ（80
％）を得た。 mp.114〜115℃ ［α］２５ Ｄ−43.4゜（ｃ＝0.5、MeOH） 元素分析 C20H31N3O4Sとして（409.55） 計算値：Ｃ、58.65；Ｈ、7.63；Ｎ、10.26 実験値：Ｃ、58.76；Ｈ、7.42；Ｎ、10.30 Ｄ Ｎ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−チ
ロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−フエニ
ルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオニルア
ミド 氷酢酸20ml、アニソール２ml、トリエチルシ
ラン２mlと工程Ｃの生成物3.5ｇ（8.56ｍ
mole）との混液に、無水塩化水素を25分間導
通してエーテルを加え、沈澱した塩酸塩を濾取
して減圧下に乾燥した。Ｎ〓−ｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−
グリシン・ジシクロヘキシルアミン塩5.0ｇ
（8.47ｍmol）をDMF40ml溶液を０℃に冷却し
て上記塩酸塩を加え、０℃で数分撹拌した後に
HBT1.1ｇ（8.47ｍmole）とDCC1.7ｇ（8.47ｍ
mole）を加えた。混液を４℃で24時間撹拌
し、不溶物を濾去して濾液を減圧下に留去し、
残渣を酢酸エチルに再溶解した。この溶液を
2N炭酸水素ナトリウム水溶液、水、0.75N冷ク
エン酸および水で順次洗浄して硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。残渣を
シリカゲルG62（Grace and Davidson）でク
ロマトグラフして標記化合物4.1ｇ（69％）を
得た。 ［α］２５ Ｄ−13.1゜（ｃ＝0.5、MeOH） 元素分析 C34H48N6O8Sとして（700.86） 計算値：Ｃ、58.27；Ｈ、6.90；Ｎ、11.99 実験値：Ｃ、58.05；Ｈ、6.62；Ｎ、11.73 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.00；Ala、
1.01；Gly、0.99；Phe、1.00；NH3、1.01 Ｅ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミドアセテート 工程Ｄの生成物8.3ｇ（0.012mole）をチオア
ニソール15mlに加えて０℃に冷却し、冷
TFA50mlを加えた。混液を０℃で30分間撹拌
してエーテルで数回稀釈し、沈澱を濾取して乾
燥した。この粗製のトリフルオロ酢酸塩８ｇを
緩衝液（１％ピリジンおよび0.05％酢酸を含
む）に溶解して全体を60mlとし、同一の緩衝液
で平衝状態にしたDEAEセフアデツクスＡ−25
（アセテート型）カラム（５×138cm）にクロマ
トグラフした。280ｍμにおけるUV吸収帯を測
定し、1270mlと1950mlとの間で溶出した生成物
を回収した。緩衝液を凍結乾燥して残渣を1N
酢酸約200mlに溶解し、再び凍結乾燥した。最
後に水−アセトニトリル（３：１）から凍結乾
燥して標記化合物6.64ｇ（83％）を得た。 ［α］２５ Ｄ＋21.7゜（ｃ＝１、1NHCl） 元素分析 C31H44N6O8Sとして（660.79） 計算値：
Ｃ、56.35；Ｈ、6.71；Ｎ、12.72；Ｏ、19.37 実験値：
Ｃ、56.50；Ｈ、6.46；Ｎ、12.62；Ｏ、19.25 アミノ酸分析（実験値）：Tyr、1.00；Ala、
1.01；Gly、1.00；Phe、0.99；NH3、1.03 実施例 ３ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ−
フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチオ
ニルアミド・アセテート塩の製法 Ａ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニル・ベンズヒドリルアミンのトリフルオロ
酢酸塩樹脂 標記のペプチド樹脂はベンズヒドリルアミン
樹脂5.0ｇを用いてBeckman990ペプチド合成機
で自動固相合成法により合成した。ベンズヒド
リルアミン樹脂を４％ジイソプロピルエチルア
ミン（DIEA）により塩化メチレン中で中和
し、塩化メチレン中でBOC−（Ｎ−Me）−Met
−OHおよびDCCと結合させてBOC（Ｎ−
Me）−Met−置換樹脂とした。このペプチド樹
脂にBOC−Phe−OH、BOC−Gly−OH、BOC
−Ala−OHおよBOC−Tyr−OHを順次結合さ
せた。その際、最初の結合はプログラムNo.１に
従い、同じアミノ酸の次からの再結晶はプログ
ラムNo.２に従つた。プログラムNo.２は３回で実
施するＬ−Phe−OH以外は各々のアミノ酸に
対して１回実施した。得られたBOC−ペンタ
ペプチド−樹脂をプログラムNo.１の１〜８の工
程に従つて脱保護して標記化合物6.13ｇを得
た。プログラムNo.１および２による洗浄を樹脂
１ｇ当り10mlで実施した。 プログラム１ １ CH2Cl2で３回洗浄、 ２ ５分間TFA：ET3SiH：CH2Cl2（容積
比、30：５：65）で処理、 ３ 工程２と同様に30分間処理、 ４ CH2Cl2で２回洗浄、 ５ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ６ メタノールで２回洗浄、 ７ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ８ CH2Cl2で２回洗浄、 ９ CH2Cl2中、４％DIEAで１回につき２分間
を４回処理、 10 工程４〜８を繰り返す、 11 CH2Cl2中、所望のアミノ酸誘導体2.5当量
およびCH2Cl2中、DCC1.25当量で120分間処
理、 12 CH2Cl2で４回洗浄、 13 工程５〜７を繰り返す、 14 CH2Cl2で３回洗浄。 プログラム２ １ CH2Cl2中、４％DIEAで１回につき２分間
を４回処理、 ２ CH2Cl2で２回洗浄、 ３ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ４ メタノールで２回洗浄、 ５ メタノール：CH2Cl2（１：１）で洗浄、 ６ CH2Cl2で２回洗浄、 ７ DMF：CH2Cl2（１：１）で３回洗浄、 ８ DMF：CH2Cl2（１：１）中、所望のアミ
ノ酸誘導体2.5当量およびCH2Cl2中、
DCC1.25当量で120分間処理、 ９ DMF：CH2Cl2（１：１）で４回洗浄、 10 工程４〜６を繰り返す。 Ｂ Ｌ−チロシル−Ｄ−アラニル−グリシル−Ｌ
−フエニルアラニル−Ｎ〓−メチル−Ｌ−メチ
オニルアミドのフツ化水素酸塩 工程Ａで得たペプチド樹脂を減圧下、60分
間、０℃でアニソールを酸除去剤として用いて
無水液体HFと反応させた。揮発性成分を反応
液から減圧除去し、ペプチド樹脂をエーテルで
摩砕し、残留するHFとアニソールを留去し
た。10％酢酸で摩砕することにより樹脂からペ
プチドを抽出し、濾過して10％酢酸50mlで３回
洗浄、凍結乾燥して粗製の標記化合物940mgを
得た。 Ｃ 最終産物を得るためのクロマトグラフイーに
よる精製 工程Ｂから得たペプチド・ジアステレオマー
の粗製混合物470mgを低圧（7.17Kg／cm2）の逆
相（C18）シリカゲルカラム（3.8×58.5cm）で
25％アセトニトリルの0.1N酢酸アンモニウム
を用いてクロマトグラフイーに付して、１分間
ずつ分画98〜150を合し、凍結乾燥して生成物
360mgを得た。 工程Ｂで得た粗製混合物の残りを上記に詳述
したようにクロマトグラフイーに付して生成物
320mgを得た。 本工程で得た２つの凍結乾燥品を合し、
0.2N酢酸中、Sephedex Ｇ−10カラム（2.5×
10.0cm）でクロマトグラフイーに付して残留す
る酢酸アンモニウムを除去した、いくつかの分
画を凍結乾燥して標記化合物636.7mgを得た。 ［α］２５ Ｄ＋19.7゜（ｃ＝0.5、1N HCl） ［α］２５ ３６５＋71.70゜（ｃ＝0.5、1N HCl） 元素分析 C31H43N6O8Sとして 計算値：
Ｃ、56.35；Ｈ、6.71；Ｎ、12.72；Ｓ、4.85 実験値：
Ｃ、56.60；Ｈ、6.43；Ｎ、12.97；Ｓ、4.92 アミノ酸分析： Ala Tyr Gly Phe NH3 ％ペプチド 0.99 1.01 1.00 1.01 1.10 93.1 1.00 1.01 1.00 0.97 1.02 90.5 本発明化合物は有用な鎮痛剤である。本発明化
合物の鎮痛作用は、マウスのホツト・プレート・
テストで示した。このテストは、マウスを垂直な
アクリル性シリンダー内に入れて行なうもので、
シリンダー内の底面には、52℃に維持したホツト
プレートが入れてある。このテストでは、あらか
じめ決めておいた量のテスト化合物を適当な担体
に溶解もしくは懸濁してマウスに皮下注射し、一
定時間をおいてマウスをホツトプレート上にの
せ、二つの行動がみられるまでの経過時間を秒単
位で測定する。一つは、マウスが後足をなめるま
での経過時間であり、二つ目は、マウスがホツ
ト・プレートから飛び上がるまでの経過時間であ
る。鎮痛作用を示す試薬を投与したマウスの場合
には、担体だけを注入したコントロール用マウス
と比較して、この経過時間に増加がみとめられ
る。これは、運動失調や無能力を生じないような
投与量範囲で行なう必要がある。以下の表は、こ
のテストの結果を示したものであり、コントロー
ル、天然エンケフアリンおよびそのアミドとを比
較したものである。表は、マウスが後足をなめ
るまでの経過時間、表は、マウスがジヤンプす
るまでの経過時間、そして表は、各テストにお
いて鎮痛効果を示した動物の百分率を表わす。陽
性の鎮痛効果の基準は次のとおりである。テスト
化合物を投与した動物が後足をなめるまでの時間
またはジヤンプするまでの経過時間、コントロー
ルの平均経過時間と平均から二つの標準偏差の和
と等しいか、それよりも長くなければならない。
以下表および表に示されている結果は、主値
±標準偏差を示したものであり、表は、少なく
とも９匹から40匹までのマウスで得られた百分率
を表わす。
【表】
【表】
【表】
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 Ｈ−Ｌ−Tyr−Ｄ−Ala−Gly−Ｌ−Phe −Ｌ−（Ｎ−Me）Met−NH2 で表わされる化合物およびその製薬的に許容され
得る非毒性酸付加塩。
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