JPS6312877B2

JPS6312877B2 -

Info

Publication number: JPS6312877B2
Application number: JP7805479A
Authority: JP
Inventors: Toshio Kinoshita; Kyoshi Kanoda
Original assignee: HORIUCHIITARO SHOTEN KK
Current assignee: HORIUCHIITARO SHOTEN KK
Priority date: 1979-06-22
Filing date: 1979-06-22
Publication date: 1988-03-23
Also published as: JPS562996A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β
−Ｌ−イズロノ−６，３−ラクトンを高収率でか
つ高純度で選択的に分離する方法に係わる。

１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−イズ
ロノ−６，３−ラクトンは、生体内の結合組織、
軟骨組織、腱、角膜、動脈壁などに存在する酸性
ムコ多糖類のうちの特にコンドロイチン硫酸Ｂの
構成成分として知られているイズロン酸の化学合
成法における重要な中間物質であり、また代謝異
常症の１つであるダウン症（Hurler−Pfaundler
病）の診断法の研究および生化学研究分野におい
ても注目されている物質であつて、生化学試験に
使用される非常に高価な試薬である。

この１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−
イズロノ−６，３−ラクトン（以下IILと略称す
る）の製造について、従来、エム・エル・ウオル
フロム等（M.L.Wolfrom et al）による合成法
（メソツド・イン・カーボヒドレート・ケミスト
リ（Methos in Carbohydrate Chemistry）２、
32−34（1963））がよく知られており、一般的な合
成法として利用されている。この方法によれば、
IILは１，２−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−
グルコフラノースを原料として過ヨウ素酸による
酸化およびシアノヒドリン反応を経て生成される
が、IILの異性体である１，２−Ｏ−イソプロピ
リデン−α−Ｄ−グルクロノ−６，３−ラクトン
（以下IGLと略称する）との混合物として得られ
る。そして、この方法によれば、得られた混合物
からIILを単離するにあたつては、フロレツクス
（Florex）XXXとセライト（Celite）との混合物
（混合比４：１）を担体とするカラムクロマトグ
ラフイによつてIILの分離が行なわれていた。し
かしながら、この分離操作法では、流出してくる
IILをペーパークロマトグラフイで確認しながら
分離するという繁雑な操作を必要とし、さらに分
離効率が必ずしも良くないため、多量の担体を使
用してもわずかの量のIILを分離できるにすぎな
かつた。

本発明者等はこのようなIILとIGLとの混合物
から、簡単にかつ収率よく、しかも高純度でIIL
を単離しうる方法を見出し、本発明に至つた。

本発明によるIILの単離法は、IILとIGLとの混
合物の水溶液にIILのラクトン環のみが開環する
PH域に液性を保ちながら塩基を添加する工程、お
よび得られたイズロノ酸の塩を未変化のIGLから
分離したのち、これをIILに変化させる工程を包
含することを特徴とする。

以下に本発明のIILの単離法について詳細に説
明する。

本発明方法の出発原料であるIILとIGLとの混
合物は、前述のエム・エル・ウオルフロム等の合
成法に従つて調製する。このようにして得られた
混合物を水に溶解し、激しく撹拌しながら、溶液
中のラクトンの全量に対してほぼ1/2当量（IILに
相当する量）のNaOHを含有する水溶液を滴加
する。この際、液性をIILのラクトン環のみが開
環するPH域、好ましくはPH６ないし７に保ちうる
速度でアルカリ液を添加することが重要である。
なおアルカリPH域ではIGLのラクトン環も開環
し、したがつて得られるIILの純度が低下するこ
とになるため、PHの調整は重要なフアクタであ
る。PHの調整にあたつてはPHメータあるいは精密
なPH試験紙等の通常の手段が利用できる。アルカ
リ液の滴加終了時、薄層クロマトグラフイを行な
い、反応前のIILとIGLとの混合物についてのク
ロマトグラムと比較すると、IILのスポツトが消
失し、代わつて原点に新たなスポツトが見られ
る。これは、IILのみが選択的に開環して、IGL
よりも速く消費されて１，２−Ｏ−イソプロピリ
デン−イズロン酸のナトリウム塩となつたことに
由来するものである。

このようにして得られた反応液を減圧下で濃縮
し、得られる残渣をクロロホルムあるいは塩化メ
チレンなどの有機溶媒で洗浄したのち過する。
この液中にはIGLのみが抽出されてくる。一
方、洗浄して得られた１，２−Ｏ−イソプロピリ
デン−イズロン酸のナトリウム塩を再び水に溶解
し、ついで陽イオン交換樹脂を通過させるか、酸
性条件下有機溶媒を用いて１，２−Ｏ−イソプロ
ピリデン−イズロン酸を抽出する通常の脱塩法に
てナトリウムイオンを除去し、流出液または抽出
液を濃縮するとシロツプ状の物質が得られる。こ
れをノルマル−プロパノールあるいはアセトンな
どの有機溶媒と石油エーテルとの混合溶媒で処理
して結晶化されるとIILが結晶として単離できる。

本発明によるIILの単離操作は上記のとおりで
あるが、本発明の方法は従来法に比して非常に操
作が簡便であり、さらに後述の実施例の結果から
も明らかなように高収率でかつ高純度でIILを単
離できる。

また、本発明によれば、添加する塩基として
は、NaOH以外のアルカリ塩（KOH等）、有機
塩基（たとえばトリエチルアミン、ピリジン等）
などもNaOHと同様にIILのラクトン環を選択的
に開環させうることが確認されている。しかしな
がら、これらの塩基を使用する場合には開環反応
時間はNaOHに比べて遅い。このように反応速
度および後処理の簡単さを考慮した場合、
NaOHを使用することが有利である。

次に、本発明の方法の好適な１具体例である以
下の実施例により、本発明をさらに説明するが、
本発明はこれに限定されない。

実施例 IILとIGLとの等量混合物1.10ｇを水20mlに溶
解した。この水溶液を氷冷下撹拌しながら、溶液
中のIILに相当する当量のNaOHを含む0.12N
NaOH水溶液を滴加した。この間、PHメータで
厳重に監視しながらPHを6.0ないし7.0、好ましく
は6.8に維持しながら滴加を行なつた。

添加後、薄層クロマドグラフイ（シリカゲル
Ｇ）によりIILの消失を確認したのち、約40℃の
水浴上で減圧下、水溶液を濃縮した。これにより
白色残渣が得られた。

ついで、この残渣をCHCl₃またはCH₂Cl₂で数
回洗浄し、洗液を集めた。この洗液からはIGLが
回収された。これは、赤外吸収スペクトル、混融
試験、薄層クロマトグラフイの結果で同定確認し
た。

一方、有機溶媒に不溶な白色残渣は１，２−Ｏ
−イソプロピリデン−イゾロン酸のNa塩体0.62
ｇであつた。この化合物の赤外吸収スペクトルに
よればラクトン環特有の吸収（1765cm^-1）は消失
し、かつ1610cm^-1にはカルボキシレート（−
COO^-）特有の吸収が認められた。

得られたナトリウム塩体0.62ｇを再び水に溶解
し、陽イオン交換樹脂のカラム層を通し、流出液
を減圧下で濃縮した。これにより無色のシロツプ
が得られた。これを結晶化することにより
IIL0.50ｇが得られた。融点（137℃）、赤外吸収
スペクトル、比色定性等により、この生成物が
IILであることを確認した。また、この生成物の
クロマトグラフイによれば唯一のスポツトしか認
められず、ほぼ純粋であることが確認された。

なお、ナトリウム塩体を陽イオン交換樹脂を通
す間に１，２−Ｏ−イソプロピリデン−イズロン
酸が生成されるが、流出液の濃縮段階あるいは結
晶化段階においてC⁶の酸性基とC³の水酸基との
間で脱水を生じラクトン環型となつて安定化し、
直ちにIILに変化するものと考えられる。

以上本発明をその具体例について詳述したが、
本発明はこの特定の実施例に限定されるものでは
なく、本発明の精神を逸脱しないで幾多の変化変
形がなし得ることはもちろんである。

Claims

【特許請求の範囲】１１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−イ
ズロノ−６，３−ラクトンと１，２−Ｏ−イソプ
ロピリデン−α−Ｄ−グルクロノ−６，３−ラク
トンとの混合物の水溶液に１，２−Ｏ−イソプロ
ピリデン−β−Ｌ−イズロノ−６，３−ラクトン
のラクトン環のみが開環するPH域に液性を保ちな
がら塩基を添加する工程および得られたイズロノ
酸の塩を未変化の１，２−Ｏ−イソプロピリデン
−α−Ｄ−グルクロノ−６，３−ラクトンから分
離したのち、これを１，２−Ｏ−イソプロピリデ
ン−β−Ｌ−イズロノ−６，３−ラクトンに変化
させる工程を包含することを特徴とする、１，２
−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−イズロノ−
６，３−ラクトンの単離法。２塩基の添加の間、反応混合物の液性をPH６な
いし７に保つことを特徴とする特許請求の範囲第
１項記載の方法。３塩基はアルカリ、有機塩基の中から選ばれる
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項または第
２項記載の方法。４塩基はNaOHであることを特徴とする特許
請求の範囲第３項記載の方法。５添加する塩基の量は反応混合物中の１，２−
Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−イズロノ−６，
３−ラクトンと等モル量あることを特徴とする特
許請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項
に記載の方法。６１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｌ−イ
ズロノ−６，３−ラクトンと１，２−Ｏ−イソプ
ロピリデン−α−Ｄ−グルクロノ−６，３−ラク
トンとの混合物は１，２−Ｏ−イソプロピリデン
−α−Ｄ−グルコフラノースを原料として過ヨウ
素酸による酸化およびシアノヒドリン反応により
合成したものであることを特徴とする特許請求の
範囲第１項ないし第５項のいずれか１項に記載の
方法。