JPS6322161B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPS6322161B2 JPS6322161B2 JP58044351A JP4435183A JPS6322161B2 JP S6322161 B2 JPS6322161 B2 JP S6322161B2 JP 58044351 A JP58044351 A JP 58044351A JP 4435183 A JP4435183 A JP 4435183A JP S6322161 B2 JPS6322161 B2 JP S6322161B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- freeze
- blood cells
- liquid nitrogen
- producing
- red blood
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は凍結乾燥物の製造法に関し、さらに詳
しくいえば、ウイルス、細菌、血球、血清または
酵素を含有する水溶液、水性懸濁液または水性乳
濁液を液体窒素のような低温液体中に滴下するこ
とによつて形成せしめた粒状の氷結物を、０℃以
下の温度において減圧下で乾燥することからなる
凍結乾燥物の製造法に関する。
しくいえば、ウイルス、細菌、血球、血清または
酵素を含有する水溶液、水性懸濁液または水性乳
濁液を液体窒素のような低温液体中に滴下するこ
とによつて形成せしめた粒状の氷結物を、０℃以
下の温度において減圧下で乾燥することからなる
凍結乾燥物の製造法に関する。
本発明の方法を風疹ウイルスの水性懸濁液を例
に用いて詳細に説明する。
に用いて詳細に説明する。
風疹ウイルスを培養したろ液から、風疹ウイル
スを精製したもの（以下 精製ウイルスと省略す
る）に活性の保護剤および賦形剤として牛血清ア
ルブミンを添加し、バルビタール緩衝液を用いて
赤血球凝集活性が４単位になるように精製ウイル
ス水性懸濁液を調製した。
スを精製したもの（以下 精製ウイルスと省略す
る）に活性の保護剤および賦形剤として牛血清ア
ルブミンを添加し、バルビタール緩衝液を用いて
赤血球凝集活性が４単位になるように精製ウイル
ス水性懸濁液を調製した。
適当な容器に入れた液体窒素の中に上記精製ウ
イルス水性懸濁液を、25マイクロリツトルずつマ
イクロドロツパーを用いて滴下すると、瞬時に粒
状の氷結物が形成される。氷結物が互いに結合す
ることをさけるために、液体窒素の容器は外部か
らローテーターなどで振動を与えておく。
イルス水性懸濁液を、25マイクロリツトルずつマ
イクロドロツパーを用いて滴下すると、瞬時に粒
状の氷結物が形成される。氷結物が互いに結合す
ることをさけるために、液体窒素の容器は外部か
らローテーターなどで振動を与えておく。
この氷結物を液体窒素中からすくい上げて、棚
温度を−40℃に冷却した凍結乾燥機に入れ、減圧
下で16時間乾燥して精製風疹ウイルス粒状凍結乾
燥物を得た。このようにして得た粒状氷結物の凍
結乾燥物は、氷結するさいに大きな表面積で瞬時
に氷結し、そのままの形状で乾燥するので、精製
風疹ウイルスの赤血球凝集活性は低下せず、ま
た、復元時の溶解性がすぐれている。
温度を−40℃に冷却した凍結乾燥機に入れ、減圧
下で16時間乾燥して精製風疹ウイルス粒状凍結乾
燥物を得た。このようにして得た粒状氷結物の凍
結乾燥物は、氷結するさいに大きな表面積で瞬時
に氷結し、そのままの形状で乾燥するので、精製
風疹ウイルスの赤血球凝集活性は低下せず、ま
た、復元時の溶解性がすぐれている。
上記精製風疹ウイルス粒状凍結乾燥物は、25マ
イクロリツトルの蒸留水を用いて復元したとき、
凍結乾燥前と同様に４単位の赤血球凝集活性を保
つていることがわかつた。
イクロリツトルの蒸留水を用いて復元したとき、
凍結乾燥前と同様に４単位の赤血球凝集活性を保
つていることがわかつた。
本発明は風疹ウイルスにかぎらず、細菌、血
球、血清または酵素を含む水溶液、水性懸濁液ま
たは水性乳濁液から凍結乾燥物をつくる場合にも
用いることができる。
球、血清または酵素を含む水溶液、水性懸濁液ま
たは水性乳濁液から凍結乾燥物をつくる場合にも
用いることができる。
また、分配の単位は上記のような赤血球凝集活
性単位に限らず、重量、活性、または用量当りの
細胞数などの単位で所望の凍結乾燥物として得ら
れる。
性単位に限らず、重量、活性、または用量当りの
細胞数などの単位で所望の凍結乾燥物として得ら
れる。
氷結の方法としては上記の液体窒素に限らず、
ドライアイス・アセトン、フルオロカーボンなど
を用いることもできる。
ドライアイス・アセトン、フルオロカーボンなど
を用いることもできる。
下記に本発明の実施例を示す。
実施例 １
羊赤血球を洗浄したのちホルムアルデヒドを添
加した生理的食塩液で固定し、次いで10−20ppm
のタンニン酸をカツプリング剤として含有するリ
ン酸緩衝食塩液を用いて処理した。
加した生理的食塩液で固定し、次いで10−20ppm
のタンニン酸をカツプリング剤として含有するリ
ン酸緩衝食塩液を用いて処理した。
上記のように調製した羊赤血球（担体）を2.5
％ｗ／ｖとしてリン酸緩衝食塩液中に浮遊させ、
この１容とヒトイムノグロブリン（30mg／dl）１
容とを37℃の恒温槽中で１時間インキユベート
し、遠心沈澱した後２回洗浄した羊赤血球を2.5
％ｗ／ｖの濃度で凍結乾燥の保護剤としてアミノ
酸、牛血清アルブミンを添加したリン酸緩衝食塩
液に浮遊せしめ、均質になるように撹拌したの
ち、液体窒素中にマイクロドロツパーを用いて25
マイクロリツトルずつ滴下した。この際、液体窒
素浴槽は外部から振動を与えておく。滴下した小
滴は液体窒素浴中で瞬間的に最小体積の形状で氷
結した。この氷結物を液体窒素浴中から金網です
くいあげてバイアル瓶に入れ、棚温度を−40℃に
冷却した真空凍結乾燥機に入れて12時間減圧下で
凍結乾燥をおこない、目的とするヒトイムノグロ
ブリン感作赤血球凍結乾燥物をえた。
％ｗ／ｖとしてリン酸緩衝食塩液中に浮遊させ、
この１容とヒトイムノグロブリン（30mg／dl）１
容とを37℃の恒温槽中で１時間インキユベート
し、遠心沈澱した後２回洗浄した羊赤血球を2.5
％ｗ／ｖの濃度で凍結乾燥の保護剤としてアミノ
酸、牛血清アルブミンを添加したリン酸緩衝食塩
液に浮遊せしめ、均質になるように撹拌したの
ち、液体窒素中にマイクロドロツパーを用いて25
マイクロリツトルずつ滴下した。この際、液体窒
素浴槽は外部から振動を与えておく。滴下した小
滴は液体窒素浴中で瞬間的に最小体積の形状で氷
結した。この氷結物を液体窒素浴中から金網です
くいあげてバイアル瓶に入れ、棚温度を−40℃に
冷却した真空凍結乾燥機に入れて12時間減圧下で
凍結乾燥をおこない、目的とするヒトイムノグロ
ブリン感作赤血球凍結乾燥物をえた。
実施例 ２
鳥類、哺乳類の赤血球を洗浄し２％グルタルア
ルデヒドを添加した生理的食塩液を用いて固定し
たのち残余のグルタルアルデヒドを遠心分離によ
つて洗浄除去し、赤血球の膜構成成分の失活を防
止する目的でアミノ酸、糖、牛血清アルブミンを
保護剤として用い、この中に赤血球を10％ｗ／ｖ
で浮遊させ赤血球懸濁液を得た。これを、ドライ
アイス・アセトン中にマイクロピペツトまたは点
滴装置を用いて50マイクロリツトルずつ滴下し
た。氷結物は、実施例１と同様に金あみを用いて
すくい上げ、棚温度を−40℃に冷却した凍結乾燥
機に入れ、16時間減圧下で凍結乾燥し、目的とす
る赤血球凍結乾燥物を得た。
ルデヒドを添加した生理的食塩液を用いて固定し
たのち残余のグルタルアルデヒドを遠心分離によ
つて洗浄除去し、赤血球の膜構成成分の失活を防
止する目的でアミノ酸、糖、牛血清アルブミンを
保護剤として用い、この中に赤血球を10％ｗ／ｖ
で浮遊させ赤血球懸濁液を得た。これを、ドライ
アイス・アセトン中にマイクロピペツトまたは点
滴装置を用いて50マイクロリツトルずつ滴下し
た。氷結物は、実施例１と同様に金あみを用いて
すくい上げ、棚温度を−40℃に冷却した凍結乾燥
機に入れ、16時間減圧下で凍結乾燥し、目的とす
る赤血球凍結乾燥物を得た。
実施例 ３
溶連菌培養ろ液から硫安法により蛋白質を沈殿
させ、この蛋白部分からさらにカラムロクロマト
グラフイー法によつてストレプトキナーゼを得
た。ストレプトキナーゼ活性10000U／mlに調整
した水溶液を10マイクロリツトルずつ液体窒素中
に滴下し、形成された氷結物を、実施例１と同様
に棚温度を−40℃に冷却した凍結乾燥機に入れ、
16時間減圧下で凍結乾燥し１滴当り100Uストレ
プトキナーゼ活性を有する凍結乾燥生成物を得
た。
させ、この蛋白部分からさらにカラムロクロマト
グラフイー法によつてストレプトキナーゼを得
た。ストレプトキナーゼ活性10000U／mlに調整
した水溶液を10マイクロリツトルずつ液体窒素中
に滴下し、形成された氷結物を、実施例１と同様
に棚温度を−40℃に冷却した凍結乾燥機に入れ、
16時間減圧下で凍結乾燥し１滴当り100Uストレ
プトキナーゼ活性を有する凍結乾燥生成物を得
た。
実施例 ４
コールターカウンターを用いて10個／50mlのＡ
群溶血性連鎖球菌浮遊液を調製した。ミキサーを
用いて均質に分散させながらドライアイス・アセ
トン中に50マイクロリツトルずつ滴下し、氷結し
た微粒子を得た。これを金網を用いて冷媒中から
取り出し冷却した容器中に１つずつ分配し、棚温
度を−30℃以下に冷却した凍結乾燥機を用いて減
圧下で10時間凍結乾燥して所望の凍結乾燥物を得
た。
群溶血性連鎖球菌浮遊液を調製した。ミキサーを
用いて均質に分散させながらドライアイス・アセ
トン中に50マイクロリツトルずつ滴下し、氷結し
た微粒子を得た。これを金網を用いて冷媒中から
取り出し冷却した容器中に１つずつ分配し、棚温
度を−30℃以下に冷却した凍結乾燥機を用いて減
圧下で10時間凍結乾燥して所望の凍結乾燥物を得
た。
上記の方法で50マイクロリツトル中に10個の菌
数を有するＡ群溶血性連鎖球菌凍結乾燥物を得
た。
数を有するＡ群溶血性連鎖球菌凍結乾燥物を得
た。
Claims (1)
- １ 粒状氷結物を、０℃以下の温度において減圧
下で乾燥する凍結乾燥物の製造法において、上記
粒状氷結物が、ウイルス、細菌、血球、血清また
は酵素を含む水溶液、水性懸濁液または水性乳濁
液を液体窒素のような低温液体中に滴下すること
によつて形成せしめたものであることを特徴とす
る上記凍結乾燥物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58044351A JPS59169504A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 凍結乾燥物の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58044351A JPS59169504A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 凍結乾燥物の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59169504A JPS59169504A (ja) | 1984-09-25 |
| JPS6322161B2 true JPS6322161B2 (ja) | 1988-05-11 |
Family
ID=12689089
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58044351A Granted JPS59169504A (ja) | 1983-03-18 | 1983-03-18 | 凍結乾燥物の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59169504A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2062530T3 (es) * | 1989-05-01 | 1994-12-16 | Alkermes Inc | Procedimiento para producir particulas pequeñas de moleculas biologicamente activas. |
| AU2215995A (en) * | 1994-04-07 | 1995-10-30 | Akzo Nobel N.V. | Freeze-dried compositions comprising rna |
| GB2399084B (en) | 2002-07-30 | 2007-01-31 | Univ Liverpool | Porous beads and method of production thereof |
| US7089681B2 (en) | 2002-11-26 | 2006-08-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Method and apparatus for filtering and drying a product |
| US8549768B2 (en) * | 2011-03-11 | 2013-10-08 | Linde Aktiengesellschaft | Methods for freeze drying |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5949801A (ja) * | 1982-09-13 | 1984-03-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | 液状物の凍結乾燥方法 |
-
1983
- 1983-03-18 JP JP58044351A patent/JPS59169504A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59169504A (ja) | 1984-09-25 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees | ||
| S199 | Written request for registration of transfer of right |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313I99 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313199 |
|
| R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |