JPS6327660B2 - - Google Patents
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- JPS6327660B2 JPS6327660B2 JP55074426A JP7442680A JPS6327660B2 JP S6327660 B2 JPS6327660 B2 JP S6327660B2 JP 55074426 A JP55074426 A JP 55074426A JP 7442680 A JP7442680 A JP 7442680A JP S6327660 B2 JPS6327660 B2 JP S6327660B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は脱脂人血清に関し、そして更に詳しく
はそのような血清および混合陰イオン−陽イオン
交換樹脂を利用するその製造法に関する。
はそのような血清および混合陰イオン−陽イオン
交換樹脂を利用するその製造法に関する。
血清をベースとする対照物質の製造のためには
低濁度のおよび高い光学的透明度（低い光散乱水
準）の血清が望ましい。
低濁度のおよび高い光学的透明度（低い光散乱水
準）の血清が望ましい。
「Research Disclosures」第162巻第16229号
（1977年10月）はその中に糖を混入させることに
よる凍結乾燥血清の光学的透明度を改善する方法
を記載している。しかしながらこの添加した糖は
低い凍結（リオフイリゼーシヨン）温度を生じて
その段階をより困難ならしめる。
（1977年10月）はその中に糖を混入させることに
よる凍結乾燥血清の光学的透明度を改善する方法
を記載している。しかしながらこの添加した糖は
低い凍結（リオフイリゼーシヨン）温度を生じて
その段階をより困難ならしめる。
「American Journal of Clinical Pathology」
第18巻第273頁（1948）は25％（重量／体積）の
水性硫酸ナトリウムの添加による血清からのリポ
蛋白の塩析操作を記載している。塩の添加は前記
の困難を招来し、そしてまた蛋白立体化学におけ
る変化の可能性をも招来する。
第18巻第273頁（1948）は25％（重量／体積）の
水性硫酸ナトリウムの添加による血清からのリポ
蛋白の塩析操作を記載している。塩の添加は前記
の困難を招来し、そしてまた蛋白立体化学におけ
る変化の可能性をも招来する。
「Clinical Chemistry」第24巻第931頁（1978）
はデキストランおよびマグネシウムの混合物の添
加による血清からのリポ蛋白の除去方法を報告し
ている。この方法もまた前記の不利点そしてある
場合には添加剤を除去しなくてはならないという
不利点を有している。
はデキストランおよびマグネシウムの混合物の添
加による血清からのリポ蛋白の除去方法を報告し
ている。この方法もまた前記の不利点そしてある
場合には添加剤を除去しなくてはならないという
不利点を有している。
「Clinical Chemistry」第24巻第1504頁
（1978）はカルシウムイオンおよびナトリウムヘ
パリンの使用による低密度リポ蛋白の除去方法を
記載している陰イオン交換樹脂が添加へパリンの
除去に使用されている。
（1978）はカルシウムイオンおよびナトリウムヘ
パリンの使用による低密度リポ蛋白の除去方法を
記載している陰イオン交換樹脂が添加へパリンの
除去に使用されている。
「Clinical Chemistry」第24巻第174頁（1978）
は血清からのリポ蛋白の単離のための密度勾配遠
心法を記載している。この方法は大量のものに対
しては実際的に応用不可能である。
は血清からのリポ蛋白の単離のための密度勾配遠
心法を記載している。この方法は大量のものに対
しては実際的に応用不可能である。
米国特許第3928566号および同第3932943号各明
細書は高い光学透明度の血清ベース物質およびそ
の製造法を開示している。この方法はフルオロカ
ーボン凍結剤の移動浴中にスプレーすることによ
り血清を迅速に凍結させ次いで得られる凍結小滴
を凍結乾燥（リオフイーゼシヨン）させることを
包含する。なおリポ蛋白を含有している血清の高
い光学的透明度は明らかに迅速な凍結段階の間に
リポ蛋白沈澱が生じないという事実に由来する。
細書は高い光学透明度の血清ベース物質およびそ
の製造法を開示している。この方法はフルオロカ
ーボン凍結剤の移動浴中にスプレーすることによ
り血清を迅速に凍結させ次いで得られる凍結小滴
を凍結乾燥（リオフイーゼシヨン）させることを
包含する。なおリポ蛋白を含有している血清の高
い光学的透明度は明らかに迅速な凍結段階の間に
リポ蛋白沈澱が生じないという事実に由来する。
米国特許第4007008号明細書は酵素活性および
イオン水準の低下のために動物血液を処理する方
法を開示している。この方法は一連の正常血清PH
以上の値にPHを上昇させて存在する酵素を変性さ
せ次いで血清を中和して酵素活性低下反応を停止
させ、次いで混合床陰イオン−陽イオン交換樹脂
で処理して電解質水準を低下させて最初の水準に
戻す諸段階を包含している。
イオン水準の低下のために動物血液を処理する方
法を開示している。この方法は一連の正常血清PH
以上の値にPHを上昇させて存在する酵素を変性さ
せ次いで血清を中和して酵素活性低下反応を停止
させ、次いで混合床陰イオン−陽イオン交換樹脂
で処理して電解質水準を低下させて最初の水準に
戻す諸段階を包含している。
効率よくそして経済的な方法で血清ベース対照
物質を製造するための光学的透明度の高い脱脂人
血清または血漿に対する明白な要求が存在してい
る。
物質を製造するための光学的透明度の高い脱脂人
血清または血漿に対する明白な要求が存在してい
る。
本発明によれば、実質的に完全に脱脂した動物
（人を含む）血清または血漿を製造するための方
法が提供されるものであり、而してその方法は次
の段階すなわち (A) 血清から実質的にすべての電解質を除去する
に充分な量で存在させしかも血清のPHを5.2±
0.3に低下させるに充分なだけ陰イオン樹脂よ
り過剰に陽イオン樹脂を存在させた混合陰イオ
ン−陽イオン交換樹脂と血清を迅速に混合する
こと、 (B) PHが5.2±0.3の値に達するまで混合を継続す
ること、そして (C) 混合を停止しそして樹脂および(A)および(B)段
階の間に生じた沈澱を沈降させた後に得られる
上澄血清を分離すること を包含する。
（人を含む）血清または血漿を製造するための方
法が提供されるものであり、而してその方法は次
の段階すなわち (A) 血清から実質的にすべての電解質を除去する
に充分な量で存在させしかも血清のPHを5.2±
0.3に低下させるに充分なだけ陰イオン樹脂よ
り過剰に陽イオン樹脂を存在させた混合陰イオ
ン−陽イオン交換樹脂と血清を迅速に混合する
こと、 (B) PHが5.2±0.3の値に達するまで混合を継続す
ること、そして (C) 混合を停止しそして樹脂および(A)および(B)段
階の間に生じた沈澱を沈降させた後に得られる
上澄血清を分離すること を包含する。
本発明の脱脂方法は人を含む動物の血清または
血漿に適用可能である。簡単のために「血清」な
る語が使用されるがしかしながらこの開示は血清
および血漿の両方を包含することが意図されてい
る。
血漿に適用可能である。簡単のために「血清」な
る語が使用されるがしかしながらこの開示は血清
および血漿の両方を包含することが意図されてい
る。
血清とは、血餅の形成および除去（血餅形成に
伴なわれる因子例えばフイブリンは除去される）
後に残存する血液の細胞不含液体部分を意味して
いる。
伴なわれる因子例えばフイブリンは除去される）
後に残存する血液の細胞不含液体部分を意味して
いる。
全血を動物体から適当な容器例えば試験管中に
採取しそして静置する。数分以内に血餅形成が行
われる。次いでこの全血を遠心分離して血餅を圧
縮しそして流体の血清を絞り出させることができ
るし、またはこれを数時間保存してこの間に血餅
を徐々に収縮させそして血清を絞り出させること
ができる。次いで単に傾瀉することによつて血餅
から血清を分離することができる。
採取しそして静置する。数分以内に血餅形成が行
われる。次いでこの全血を遠心分離して血餅を圧
縮しそして流体の血清を絞り出させることができ
るし、またはこれを数時間保存してこの間に血餅
を徐々に収縮させそして血清を絞り出させること
ができる。次いで単に傾瀉することによつて血餅
から血清を分離することができる。
血漿（plasma）とは、抗凝固剤の使用により
凝固阻止した血液の細胞不含液体部分（凝固因子
はまだ存在している）を意味する。血漿は次のよ
うに製造される。抗凝固剤をも含有する容器中に
全血を体から取出す。しばしば使用される血液抗
凝固剤はヘパリン、蓚酸塩、くえん酸塩、弗化物
およびEDTAである。ヘパリン以外のこれらす
べては血中に通常見出されるカルシウムイオンに
結合しそしてそれによつて凝血機構を阻害するこ
とによつて作用する。ヘパリンはプロトロンビン
のトロンビンへの活性化を阻止し、従つてトロン
ビン誘発されたフイブリノーゲンのフイブリンへ
の変換を阻止する。全血を遠心させまたは静かに
放置して血球細胞をパツクさせまたはそれらを沈
降させる。次いで血漿を細胞から分離する。
凝固阻止した血液の細胞不含液体部分（凝固因子
はまだ存在している）を意味する。血漿は次のよ
うに製造される。抗凝固剤をも含有する容器中に
全血を体から取出す。しばしば使用される血液抗
凝固剤はヘパリン、蓚酸塩、くえん酸塩、弗化物
およびEDTAである。ヘパリン以外のこれらす
べては血中に通常見出されるカルシウムイオンに
結合しそしてそれによつて凝血機構を阻害するこ
とによつて作用する。ヘパリンはプロトロンビン
のトロンビンへの活性化を阻止し、従つてトロン
ビン誘発されたフイブリノーゲンのフイブリンへ
の変換を阻止する。全血を遠心させまたは静かに
放置して血球細胞をパツクさせまたはそれらを沈
降させる。次いで血漿を細胞から分離する。
本発明の方法は血清中リポ蛋白水準の顕著な低
下を生じ、そしてそれによつて、再生させた場合
に許容できない濁りを生ぜしめる凍結乾燥の間に
生成する不溶性粒子を除外させる。対照物質の処
方に有用な光学的に透明な（光散乱の減少した）
美観の点でも好ましい血清ベース物質が得られ
る。
下を生じ、そしてそれによつて、再生させた場合
に許容できない濁りを生ぜしめる凍結乾燥の間に
生成する不溶性粒子を除外させる。対照物質の処
方に有用な光学的に透明な（光散乱の減少した）
美観の点でも好ましい血清ベース物質が得られ
る。
予期せざることに、PHを5.2±0.3まで低下させ
ることを含む注意して制御されたPH条件下に特別
に処方された混合陰イオン−陽イオン交換樹脂と
血清とを混合すると、低分子量イオン化物質
（塩）もまた除去された光学的に透明な脱脂人血
清が得られることが見出された。
ることを含む注意して制御されたPH条件下に特別
に処方された混合陰イオン−陽イオン交換樹脂と
血清とを混合すると、低分子量イオン化物質
（塩）もまた除去された光学的に透明な脱脂人血
清が得られることが見出された。
このイオン交換樹脂は強酸−強塩基または弱酸
−弱塩基の組合せでありうる。どちらの場合にも
それらはそれぞれH+型およびOH-型である。
−弱塩基の組合せでありうる。どちらの場合にも
それらはそれぞれH+型およびOH-型である。
脱脂血清に対する所望の性質を達成するために
は、使用されるべき混合イオン交換樹脂の量を決
定する二つの因子を注意して制御しなくてはなら
ない。第１の因子は処理すべき血清中に存在する
陽イオンおよび陰イオンの水準である。陰イオン
および陽イオンの実質的に完全な交換に充分な樹
脂が必要である。
は、使用されるべき混合イオン交換樹脂の量を決
定する二つの因子を注意して制御しなくてはなら
ない。第１の因子は処理すべき血清中に存在する
陽イオンおよび陰イオンの水準である。陰イオン
および陽イオンの実質的に完全な交換に充分な樹
脂が必要である。
第２の因子は血清がその値まで低下せしめられ
るべき最終PH値により制御される。このPH値は血
清中に通常見出されるリポ蛋白の等電点である。
等電点は「Hackh′s Chemical Dictionary」第
３版第454頁（1944）中に、電気的中和点または
０電位点として定義されており、これは物質例え
ばリポ蛋白が中性となるPH値を意味している。
るべき最終PH値により制御される。このPH値は血
清中に通常見出されるリポ蛋白の等電点である。
等電点は「Hackh′s Chemical Dictionary」第
３版第454頁（1944）中に、電気的中和点または
０電位点として定義されており、これは物質例え
ばリポ蛋白が中性となるPH値を意味している。
イオンの実質的に完全な交換に対して充分な樹
脂量の計算は陰イオンおよび陽イオン交換樹脂の
交換能力に基づいて実施される。交換能力の値は
例えばダウコンパニーの出版物である
「Dowex：Ion exchange」に記載の滴定法によ
り測定される。計算の一例としては以下の実施例
を参照されたい。
脂量の計算は陰イオンおよび陽イオン交換樹脂の
交換能力に基づいて実施される。交換能力の値は
例えばダウコンパニーの出版物である
「Dowex：Ion exchange」に記載の滴定法によ
り測定される。計算の一例としては以下の実施例
を参照されたい。
同時にイオン交換によつて血清からリポ蛋白を
沈澱させつつ前記のPH低下を達成するためには、
混合陰イオン−陽イオン樹脂中に過剰の陽イオン
樹脂を混入する必要がある。過剰量はある一定量
例えば25mlの血清を希塩酸（1.00N）でPH5.0まで
滴定することにより決定される。酸の所要体積は
血清滴定値と称され、そして当量の相当する陽イ
オン交換樹脂量をイオン交換に必要な理論量に加
えて使用する。
沈澱させつつ前記のPH低下を達成するためには、
混合陰イオン−陽イオン樹脂中に過剰の陽イオン
樹脂を混入する必要がある。過剰量はある一定量
例えば25mlの血清を希塩酸（1.00N）でPH5.0まで
滴定することにより決定される。酸の所要体積は
血清滴定値と称され、そして当量の相当する陽イ
オン交換樹脂量をイオン交換に必要な理論量に加
えて使用する。
一般に凍結人血清が本発明の方法のために使用
される。それを好ましくは32〜37℃の水浴中で速
やかに融解させる〔「Clinical Chemistry」第24
巻第1557頁（1978）参照〕。血清を検査して可視
的な脂肪血症または溶血が生じていないことすな
わち血清が透明且つ実質的に無色であることを確
認する。視覚的に赤または桃色の血清または濁つ
た血清は本発明の方法には許容できない。その理
由はそのような血清は対照生成物のためのベース
物質として有用ではないからである。また実験室
での取扱いの安全性のために血清は非病原性
（HAAおよびVDRL陰性）のものであるべきで
ある。
される。それを好ましくは32〜37℃の水浴中で速
やかに融解させる〔「Clinical Chemistry」第24
巻第1557頁（1978）参照〕。血清を検査して可視
的な脂肪血症または溶血が生じていないことすな
わち血清が透明且つ実質的に無色であることを確
認する。視覚的に赤または桃色の血清または濁つ
た血清は本発明の方法には許容できない。その理
由はそのような血清は対照生成物のためのベース
物質として有用ではないからである。また実験室
での取扱いの安全性のために血清は非病原性
（HAAおよびVDRL陰性）のものであるべきで
ある。
イオン交換樹脂と血清とを混合している間PHの
変動を監視する必要がある。最初のPHは血清に樹
脂を添加した後の最初の数分で約9.0〜10.3に上
昇する。所望のPH低下およびイオン除去を完了さ
せるためにはその沈澱の間に樹脂ビーズ上にリポ
蛋白が沈着することにより生ぜしめられる低下し
た樹脂効率を計算に入れて、通常過剰の混合樹脂
が必要である。計算された混合樹脂理輪量の約
1.45±0.15倍が必要でありうる。
変動を監視する必要がある。最初のPHは血清に樹
脂を添加した後の最初の数分で約9.0〜10.3に上
昇する。所望のPH低下およびイオン除去を完了さ
せるためにはその沈澱の間に樹脂ビーズ上にリポ
蛋白が沈着することにより生ぜしめられる低下し
た樹脂効率を計算に入れて、通常過剰の混合樹脂
が必要である。計算された混合樹脂理輪量の約
1.45±0.15倍が必要でありうる。
5.2±0.3のPHに達した後（通常合計時間５〜15
分）に混合を停止させそして上澄血清を樹脂およ
び沈澱リポ蛋白から分離する。分離は任意の通常
の手段例えば上澄血清の過、傾瀉、汲み出しそ
の他により実施できる。
分）に混合を停止させそして上澄血清を樹脂およ
び沈澱リポ蛋白から分離する。分離は任意の通常
の手段例えば上澄血清の過、傾瀉、汲み出しそ
の他により実施できる。
塩酸で分離血清のPHを更に4.0＋1.0の値に調整
して血清中の残存酸素活性を確実に低く保つこと
ができる。例えばクレアチンキナーゼ（CK）活
性を3IU／を越えない値まで低下させることが
望ましい。これを達成するためには、血清を実質
的に変性過程を完了させるに充分な時間約4.0±
0.2のPHに保持する。これはCK活性のアツセーに
よつて追跡できる。
して血清中の残存酸素活性を確実に低く保つこと
ができる。例えばクレアチンキナーゼ（CK）活
性を3IU／を越えない値まで低下させることが
望ましい。これを達成するためには、血清を実質
的に変性過程を完了させるに充分な時間約4.0±
0.2のPHに保持する。これはCK活性のアツセーに
よつて追跡できる。
この血清は約４℃に保存されるならばその最終
PHで１晩保存することができる。しかし好ましく
はバツフアー例えば２−アミノ−２−ヒドロキシ
メチル−１，３−プロパンジオールで7.3±0.3の
最終値にPHを調整する。この脱脂血清は凍結され
た状態では無限に、そして４℃では約48時間保存
できる（抗微生物剤添加なしで）。
PHで１晩保存することができる。しかし好ましく
はバツフアー例えば２−アミノ−２−ヒドロキシ
メチル−１，３−プロパンジオールで7.3±0.3の
最終値にPHを調整する。この脱脂血清は凍結され
た状態では無限に、そして４℃では約48時間保存
できる（抗微生物剤添加なしで）。
本発明の方法により得られる血清は例えば前以
つて定めた量の精製CKMBイソ酵素を添加する
ことによつて、臨床分析用対照製品の製造に使用
することができる。酵素活性を保存するために得
られた物質を凍結させて、再構成させた場合に光
学的に透明な対照物質を生成させることができ
る。凍結乾燥物質は水で再構成させることがで
き、そしてこれは本法により製造された脱脂血清
で適当な時点で希釈して対照物質として使用する
ことができる。
つて定めた量の精製CKMBイソ酵素を添加する
ことによつて、臨床分析用対照製品の製造に使用
することができる。酵素活性を保存するために得
られた物質を凍結させて、再構成させた場合に光
学的に透明な対照物質を生成させることができ
る。凍結乾燥物質は水で再構成させることがで
き、そしてこれは本法により製造された脱脂血清
で適当な時点で希釈して対照物質として使用する
ことができる。
以下に本発明を例によつて説明する。
例 Ａ
混合陰イオン−陽イオン交換樹脂の製造一般目
的高性能強酸（陽イオン）交換樹脂（デユオライ
トGPC−301、ダイアモンド・シヤムロツク・コ
ーポレーシヨンより入手可能）および一般目的高
孔度強塩基（陰イオン）交換樹脂（デユオライト
GPA−316、ダイアモンド・シヤムロツク・コー
ポレーシヨンより入手可能）をブレンドする。必
要量は次のように計算される。
的高性能強酸（陽イオン）交換樹脂（デユオライ
トGPC−301、ダイアモンド・シヤムロツク・コ
ーポレーシヨンより入手可能）および一般目的高
孔度強塩基（陰イオン）交換樹脂（デユオライト
GPA−316、ダイアモンド・シヤムロツク・コー
ポレーシヨンより入手可能）をブレンドする。必
要量は次のように計算される。
製造業者は乾燥重量基準での各樹脂の交換能力
を示している。これら樹脂は予備抱水されて供給
されそしてその水分含量は変動的であるので、そ
の変換能力を湿潤重量基準で測定して適当な処方
を可能ならしめる。次に記載の方法は
「Dowex：Ion Exchange」〔Dow Company
（1958、1959）〕に概略が示されている操作を修正
したものである。
を示している。これら樹脂は予備抱水されて供給
されそしてその水分含量は変動的であるので、そ
の変換能力を湿潤重量基準で測定して適当な処方
を可能ならしめる。次に記載の方法は
「Dowex：Ion Exchange」〔Dow Company
（1958、1959）〕に概略が示されている操作を修正
したものである。
予備抱水樹脂の交換能力の測定
陽イオン
25ｇの陽イオン樹脂（GPC−301）を250mlの
1.0N NaCl溶液に加え、そして混合しつつPH監
親用に較正されたPHメーターを使用して2.5N
NaOHで中和点（PH7.00±0.05）まで滴定する。
この樹脂のある特定のロツトに対しては25mlの
NaOHが必要であつた。
1.0N NaCl溶液に加え、そして混合しつつPH監
親用に較正されたPHメーターを使用して2.5N
NaOHで中和点（PH7.00±0.05）まで滴定する。
この樹脂のある特定のロツトに対しては25mlの
NaOHが必要であつた。
交換能力＝OH-消費量（meq）／樹脂重量（ｇ）＝
62.5meq／25ｇ＝2.5meqH+／ｇ樹脂 陰イオン 25ｇの陰イオン樹脂（GPA−316）を1.0N
NaCl溶液に加えそして混合しつつPH測定用に較
正されたPHメーターを使用して2N HClで中和点
（PH7.00±0.005）まで滴定する。ある特定のこの
樹脂のロツトに対しては16.25mlのHClが必要で
あつた。
62.5meq／25ｇ＝2.5meqH+／ｇ樹脂 陰イオン 25ｇの陰イオン樹脂（GPA−316）を1.0N
NaCl溶液に加えそして混合しつつPH測定用に較
正されたPHメーターを使用して2N HClで中和点
（PH7.00±0.005）まで滴定する。ある特定のこの
樹脂のロツトに対しては16.25mlのHClが必要で
あつた。
交換能力＝H+消費量（meq）／樹脂重量（ｇ）＝3
2.5meq／25ｇ＝1.3meqOH-／ｇ樹脂 混合樹脂中の樹脂比の決定 血清から電解質を除去されるに充分な陽イオン
および陰イオン交換樹脂を有していることの他
に、H+イオンを交換させて得られる生成物をPH
5.2±0.3（リポ蛋白の等電点）に下げるための過
剰の陽イオン樹脂が必要である。血清滴定値であ
るこの量は次のようにして決定される。
2.5meq／25ｇ＝1.3meqOH-／ｇ樹脂 混合樹脂中の樹脂比の決定 血清から電解質を除去されるに充分な陽イオン
および陰イオン交換樹脂を有していることの他
に、H+イオンを交換させて得られる生成物をPH
5.2±0.3（リポ蛋白の等電点）に下げるための過
剰の陽イオン樹脂が必要である。血清滴定値であ
るこの量は次のようにして決定される。
1.0N HClで25mlの人血清を5.0まで滴定する
（人血清に対する平均範囲は35〜45mlである）。人
血清の特定のロツトは41mlの血清滴定値を有して
いた。この血清滴定値（meq）は必要な追加陽イ
オン交換樹脂に等しい。
（人血清に対する平均範囲は35〜45mlである）。人
血清の特定のロツトは41mlの血清滴定値を有して
いた。この血清滴定値（meq）は必要な追加陽イ
オン交換樹脂に等しい。
混合樹脂の処方
理論的交換能力が要求されるのであるから、そ
して人血清は通常陽イオンおよび陰イオンをそれ
ぞれ約150meq／の量で含有してるのであるか
ら、191meq／（150meq＋41meq）の陽イオン
交換樹脂と150meq／の陰イオン交換を必要と
する。使用された特定の樹脂のロツトについては 191meq／／2.5meq／ｇ＝76ｇの陽イオン交換樹脂／
血 清および 150meq／／1.3meq／ｇ＝115ｇの陰イオン交換樹脂
／ 血清が必要である。
して人血清は通常陽イオンおよび陰イオンをそれ
ぞれ約150meq／の量で含有してるのであるか
ら、191meq／（150meq＋41meq）の陽イオン
交換樹脂と150meq／の陰イオン交換を必要と
する。使用された特定の樹脂のロツトについては 191meq／／2.5meq／ｇ＝76ｇの陽イオン交換樹脂／
血 清および 150meq／／1.3meq／ｇ＝115ｇの陰イオン交換樹脂
／ 血清が必要である。
２種の樹脂を商業用ブレンダー中で完全に混合
する。これは乾燥を防ぎそして大気中の二酸化炭
酸とのすべての反応を阻止するために密閉した容
器中で保存することができる。
する。これは乾燥を防ぎそして大気中の二酸化炭
酸とのすべての反応を阻止するために密閉した容
器中で保存することができる。
例 Ｂ
人血清の製造
本法における脱脂血清の収率は出発体積の約80
〜85％であり、そしてそれ故に必要最終血清の量
の約1.25倍量が凍結保存から取出される。
〜85％であり、そしてそれ故に必要最終血清の量
の約1.25倍量が凍結保存から取出される。
32〜37℃に保つた水溶中で血清を迅速に融解さ
せるがしかし多量の製品に対しては一晩の融解も
許容できる。融解した血清について許容しえない
色（溶血）および濁り（脂質血）を検査した後、
添加すべき混合樹脂のための空間を与えそしてオ
ーバーヘツドミキサーによる激しい撹拌を可能な
らしめるに充分なサイズのポリエチレンタンク中
に入れる 例 Ｃ 脱脂血清の製造 7.5〜8.0PHを有しており、そして桃色または赤
色または濁りを示さない融解血清32中に前記Ａ
で製造した混合イオン交換樹脂8.96Kgを速やかに
混合しつつ加える。交換反応の間に生ずるPH変化
を反応タンク中におかれそして較正PHメーターに
接続させられ電柱によつて調べる。
せるがしかし多量の製品に対しては一晩の融解も
許容できる。融解した血清について許容しえない
色（溶血）および濁り（脂質血）を検査した後、
添加すべき混合樹脂のための空間を与えそしてオ
ーバーヘツドミキサーによる激しい撹拌を可能な
らしめるに充分なサイズのポリエチレンタンク中
に入れる 例 Ｃ 脱脂血清の製造 7.5〜8.0PHを有しており、そして桃色または赤
色または濁りを示さない融解血清32中に前記Ａ
で製造した混合イオン交換樹脂8.96Kgを速やかに
混合しつつ加える。交換反応の間に生ずるPH変化
を反応タンク中におかれそして較正PHメーターに
接続させられ電柱によつて調べる。
PHが10.1に達した後（1.5分）、それは徐々に低
下し始めそして全経過時間12分で5.15に達する。
下し始めそして全経過時間12分で5.15に達する。
この12分間の後、樹脂および沈澱したリポ蛋白
を沈降せしめ、そして上澄脱脂血清を汲み出し
（ポンプ操作）により除去する。
を沈降せしめ、そして上澄脱脂血清を汲み出し
（ポンプ操作）により除去する。
前記アミンでこの血清のPHを7.3に調整するが
これには約74ｇを要する。このPH調整は所望の水
準以上にPHが上昇しないことを確認して注意して
実施されなくてはならない。粉末アミンは血清中
には徐々にしか溶解しないから、その添加の間の
良好な混合が重要である。
これには約74ｇを要する。このPH調整は所望の水
準以上にPHが上昇しないことを確認して注意して
実施されなくてはならない。粉末アミンは血清中
には徐々にしか溶解しないから、その添加の間の
良好な混合が重要である。
この脱脂血清は４℃では約48時間保存できる。
より長期の保存が要求される場合には、微生物の
生長を阻止するために凍結状態とすべきである。
より長期の保存が要求される場合には、微生物の
生長を阻止するために凍結状態とすべきである。
例 Ｄ
酸素変性
前記Ｃで製造された上澄血清の89mlの6N HCl
を使用して4.0±0.2に調整しそしてこのPHに１時
間保持する。この時点で25mlの試料を除去しその
PHを粉末の２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−
１，３−プロパンジオールで7.3に調整し、そし
てその残存CK活性をアツセーすると1IU／の
値を示す。
を使用して4.0±0.2に調整しそしてこのPHに１時
間保持する。この時点で25mlの試料を除去しその
PHを粉末の２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−
１，３−プロパンジオールで7.3に調整し、そし
てその残存CK活性をアツセーすると1IU／の
値を示す。
残存CK活性を所望の水準まで低下させた後、
血清のPHを前記アミンで7.3に低下させたがこれ
は112ｇを必要とした。このPH調整はPHが所望の
以上に上昇しないことを確認して注意して実施さ
れなくてはならない。血清中では粉末アミンは
徐々にしか溶解しないのであるから、その添加の
間には良好な混合が重要である。
血清のPHを前記アミンで7.3に低下させたがこれ
は112ｇを必要とした。このPH調整はPHが所望の
以上に上昇しないことを確認して注意して実施さ
れなくてはならない。血清中では粉末アミンは
徐々にしか溶解しないのであるから、その添加の
間には良好な混合が重要である。
脱脂血清は４℃では約48時間保存できる。それ
以上長期の保存が必要な場合には、それを凍結状
態として微生物の増殖を阻止するべきである。
以上長期の保存が必要な場合には、それを凍結状
態として微生物の増殖を阻止するべきである。
例 Ｅ
対照物質の製造
前記Ｄ段階で製造された血清５中に1250IU
の精製CKMBイソ酵素（isoenzyme）を室温で
加える。このイソ酵素は既知の方法により概略が
示されている操作により単離される。それについ
ては例えば、「Clinical Chemistry」第20巻第36
頁（1974）、同第22巻第92頁（1976）および同第
22巻第1753頁（1976）を参照されたい。
の精製CKMBイソ酵素（isoenzyme）を室温で
加える。このイソ酵素は既知の方法により概略が
示されている操作により単離される。それについ
ては例えば、「Clinical Chemistry」第20巻第36
頁（1974）、同第22巻第92頁（1976）および同第
22巻第1753頁（1976）を参照されたい。
定義された酵素活性を有するこのように製造さ
れた対照物質を凍結乾燥させて臨床的CKMB分
析用の対照物質としてこの再構成溶液が使用され
るまでその酵素活性を保存しておくことができ
る。この再構成物質を本発明の方法により得られ
る脱脂血清によつて種々の濃度水準にり希釈する
ことができる。
れた対照物質を凍結乾燥させて臨床的CKMB分
析用の対照物質としてこの再構成溶液が使用され
るまでその酵素活性を保存しておくことができ
る。この再構成物質を本発明の方法により得られ
る脱脂血清によつて種々の濃度水準にり希釈する
ことができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の段階すなわち (A) 血清から実質的にすべての電解質を除去する
に充分な量で樹脂を存在させしかも血清のPHを
5.2±0.3に低下させるに充分なだけ陰イオン樹
脂よりも過剰に陽イオン樹脂を存在させた混合
陽イオン−陰イオン交換樹脂と血清を迅速に混
合させること、 (B) PHが5.2±0.3の値に達するまで混合を続ける
こと、そして (C) 混合を停止させそして樹脂および(A)および(B)
段階の間に生じた沈澱を沈降させた後に得られ
る上澄血清を分離すること を包含する、実質的に完全に脱脂した動物血清ま
たは血漿を製造するための方法。 ２ 動物血清が人血清である、前記特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ３ 陰イオン交換樹脂が強塩基樹脂でありそして
陽イオン交換樹脂が強酸樹脂である、前記特許請
求の範囲第１項記載の方法。 ４ 陰イオン交換樹脂が弱塩基樹脂でありそして
陽イオン交換樹脂が弱酸樹脂である、前記特許請
求の範囲第１項記載の方法。 ５ (C)段階の後で上澄血清のPHを4.0±1.0に調整
しそして酵素活性が3IU／またはそれ以下に低
下するまでこのPHに保持する、前記特許請求の範
囲第１項記載の方法。 ６ PHを4.0±0.2に調整しそしてクレアチンキナ
ーゼ活性が3IU／またはそれ以下に低下するま
でこのPHを保持する、前記特許請求の範囲第５項
記載の方法。 ７ (C)段階の後で前記血清のPHをPH7.3±0.3に調
整する、前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８ 酸素活性の低下後に前記血清のPHを7.3±0.3
に調整する、前記特許請求の範囲第５項記載の方
法。 ９ 酵素活性の低下後に前記血清のPHを7.3±0.3
に調整する、前記特許請求の範囲第６項記載の方
法。 １０ ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，
３−プロパンジオールでPHを調整する、前記特許
請求の範囲第７項記載の方法。 １１ ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，
３−プロパンジオールでPHを調整する、前記特許
請求の範囲第８項記載の方法。 １２ ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，
３−プロパンジオールでPHを調整する、前記特許
請求の範囲第９項記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/045,182 US4264471A (en) | 1979-06-04 | 1979-06-04 | Serum and plasma clarification process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55164360A JPS55164360A (en) | 1980-12-22 |
| JPS6327660B2 true JPS6327660B2 (ja) | 1988-06-03 |
Family
ID=21936452
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7442680A Granted JPS55164360A (en) | 1979-06-04 | 1980-06-04 | Making of defatted serum and plasma |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4264471A (ja) |
| EP (1) | EP0019939B1 (ja) |
| JP (1) | JPS55164360A (ja) |
| CA (1) | CA1133828A (ja) |
| DE (1) | DE3069628D1 (ja) |
| SU (1) | SU928995A3 (ja) |
| ZA (1) | ZA802785B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0484568U (ja) * | 1990-11-30 | 1992-07-22 | ||
| JP2002350449A (ja) * | 2001-05-30 | 2002-12-04 | Fuji Photo Film Co Ltd | 乾式分析素子用の管理血清 |
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| EP0044532B1 (en) * | 1980-07-18 | 1986-04-23 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Monothioglycerol as thiol-protector in lyophilized materials |
| DE3107060A1 (de) * | 1981-02-25 | 1982-09-09 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Kontroll- oder eichserum und verfahren zu seiner herstellung |
| EP0180720B1 (de) * | 1981-09-10 | 1990-06-13 | B. Braun-SSC AG | Vorrichtung zur selektiven extrakorporalen Präzipation von Low Density Lipoprotenen aus Vollserum oder Plasma |
| US4438202A (en) * | 1981-11-30 | 1984-03-20 | Technicon Instruments Corporation | Stable, base serum compositions and preparation thereof |
| DE3324626A1 (de) * | 1983-07-08 | 1985-01-17 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Lagerstabiles universalkontrollserum |
| DE3329952A1 (de) * | 1983-08-19 | 1985-02-28 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur verringerung einer truebung in kontrollseren |
| EP0141879A1 (en) * | 1983-10-18 | 1985-05-22 | Victor A. Bernstam | Surfactant compositions and methods for clarifying and partitioning aqueous lipid-containing specimens |
| US5310679A (en) * | 1985-05-13 | 1994-05-10 | Artiss Joseph D | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids |
| JP3180824B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-06-25 | シスメックス株式会社 | 血液凝固試薬 |
| US5278289A (en) * | 1991-11-12 | 1994-01-11 | Johnson Alan J | Antihemophilic factor stabilization |
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| US6248869B1 (en) | 1997-05-29 | 2001-06-19 | Medical Analysis Systems, Inc. | Troponin I forms and use of the same |
| DE10360628A1 (de) * | 2003-12-19 | 2005-07-21 | Dade Behring Marburg Gmbh | Kontrollplasma für Thrombinaktivitätstests |
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| DE1234417B (de) * | 1963-05-04 | 1967-02-16 | Merck Ag E | Testreagens zur Bestimmung des Fettgehaltes in organischen Substanzen, insbesondere im Blutserum |
| US3928566A (en) * | 1970-08-14 | 1975-12-23 | Du Pont | Lyophilized biological products |
| US3932943A (en) * | 1970-08-14 | 1976-01-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method of preparation of lyophilized biological products |
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| US3706660A (en) * | 1971-03-25 | 1972-12-19 | Squibb & Sons Inc | Process for removal of particle-forming proteins from blood sera |
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| NZ180199A (en) * | 1976-03-04 | 1978-11-13 | New Zealand Dev Finance | Method of testing for the presence of elevated plasma liprotein concentration |
| DE2723070C2 (de) * | 1976-05-24 | 1986-03-06 | Walter Philadelphia Pa. Brummund jun. | Bezugspräparat zur Festlegung einer Halogenid- oder Carbonat-Konzentration bei chemischen Analysen |
| DE2743524C3 (de) * | 1977-09-28 | 1982-04-15 | Claus-Christian Dr.Rer.Nat. Dr.Med. 6901 Wilhelmsfeld Heuck | Verfahren zur direkten Lipid-Bestimmung im Blutserum |
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| JPS5460996A (en) * | 1977-10-22 | 1979-05-16 | Mitsubishi Chem Ind | Method of measuring amount of sugar |
-
1979
- 1979-06-04 US US06/045,182 patent/US4264471A/en not_active Expired - Lifetime
-
1980
- 1980-05-09 ZA ZA00802785A patent/ZA802785B/xx unknown
- 1980-05-29 CA CA353,001A patent/CA1133828A/en not_active Expired
- 1980-06-03 SU SU802932151A patent/SU928995A3/ru active
- 1980-06-04 JP JP7442680A patent/JPS55164360A/ja active Granted
- 1980-06-04 EP EP80103119A patent/EP0019939B1/en not_active Expired
- 1980-06-04 DE DE8080103119T patent/DE3069628D1/de not_active Expired
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA802785B (en) | 1981-07-29 |
| JPS55164360A (en) | 1980-12-22 |
| DE3069628D1 (en) | 1984-12-20 |
| EP0019939B1 (en) | 1984-11-14 |
| SU928995A3 (ru) | 1982-05-15 |
| EP0019939A1 (en) | 1980-12-10 |
| US4264471A (en) | 1981-04-28 |
| CA1133828A (en) | 1982-10-19 |
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