JPS6328591B2

JPS6328591B2 -

Info

Publication number: JPS6328591B2
Application number: JP13222884A
Authority: JP
Inventors: Takayuki Tanonaka; Takashi Yamauchi
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1984-06-26
Filing date: 1984-06-26
Publication date: 1988-06-09
Also published as: DE3523082C2; CH664767A5; DE3523082A1; FR2566425B1; JPS6112294A; GB8515270D0; FR2566425A1; GB2160866B; GB2160866A

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］本発明は下記式（）（式中Ｒは、C_1-4の直鎖又は分枝鎖アルキル基、
CF₃−CH₂−CH₂−基又は

【式】基である）で表わされる２−（置換フエニル）プロピオン酸
の製造方法に関し、詳しくは上記式（）で表わ
される２−（置換フエニル）プロピオン酸を下記
式（）（式中Ｒは、C_1-4の直鎖又は分枝鎖アルキル基、
CF₃−CH₂−CH₂−基又は

【式】基である）で表わされる１−（置換フエニル）−１−フエニル
エタンより微生物的に製造する方法に関する。［従来の技術］２−（置換フエニル）プロピオン酸は、ヒトや
動物に対して消炎作用、鎮痛作用を有し、なかで
も２−（４−イソブチルフエニル）プロピオン酸
は優れた抗炎症剤として汎用されている。従来、
この物質の製造法に関しては化学合成による方法
が知られているに過ぎない。化学的合成法として
は、例えば特公昭40−7491号、特公昭47−18105
号、特開昭50−4040号に開示されるほか、種々の
方法が知られているが、これらの方法は一般に工
程が長く、操作も繁雑で必ずしも満足できるもの
ではない。例えば、比較的工程の短い特開昭50−
4040号の方法は次の工程による。［発明が解決しようとする問題点］本発明の特徴は、従来の化学合成法における工
程の繁雑さを改善すべく、化学合成法によらない
方法を提案することにある。発明の構成［問題点を解決するための手段］本発明は、化学合成法に代わる手段として特定
の菌を利用する方法であり、前記式（）で表わ
される１−（置換フエニル）−１−フエニルエタン
を資化し、前記式（）で表わされる２−（置換
フエニル）プロピオン酸を生産する菌を用いる。
即ち、本発明は、前記式（）で表わされる１−
（置換フエニル）−１−フエニルエタンを資化し、
前記式（）で表わされる２−（置換フエニル）
プロピオン酸を生産する能力を有するシユードモ
ナス属に属する菌を目的物と同じ置換フエニル基
を有する１−（置換フエニル）−１−フエニルエタ
ンを添加した培地に接種して培養し、培養物から
前記式（）で表わされる２−（置換フエニル）
プロピオン酸を採取する方法である。本発明者等は、前記式（）で表わされる１−
（置換フエニル）−１−フエニルエタンの資化性菌
を検索した結果、福島県いわき市内の土壌より新
たに分離した細菌が前記化合物を酸化して前記式
（）で表わされる２−（置換フエニル）プロピオ
ン酸を生産することを見出し、この微生物変換を
利用することにより、従来知られている化学合成
法に比べ、少ない工程数で２−（置換フエニル）
プロピオン酸を得る新規な製造方法を完成させた
ものである。新たに分離された前記細菌は、後述するその菌
学的性質をもとにしてBergy´s Manual of Deter
−minative Bacteriology、第８版及びThe
Prokary−otesを検索した結果、シユードモナス
属に属することが判明した。このものは公知の菌
種と比較した場合に１−（置換フエニル）−１−フ
エニルエタンを資化する点で相異があり、新菌種
と断定し、シユードモナスセパーシア
（Pseudomonas cepacia）KTB−03と命名し
た。本細菌は、工業技術院微生物工業技術研究所
に昭和59年５月25日付で寄託しており、その受託
番号は微工研条寄第534号（FERM BP−534）
である。本細菌の菌学的性質は、次のとおりである。

【表】

【表】本発明において使用する菌株としては、上記菌
株を好適な一例として挙げることができるが、そ
の人工並びに自然変異株は勿論のこと、シユード
モナス属に属し、前記式（）で表わされる１−
（置換フエニル）−１−フエニルエタンから前記式
（）で表わされる２−（置換フエニル）プロピオ
ン酸を生産する全ての菌を使用することができ
る。本発明に使用する微生物の培養には、通常の培
養成分として用いられる炭素源を使用することが
できるが、前記式（）で表わされる２−（置換
フエニル）プロピオン酸を高収率に生産させるた
めには前記式（）で表わされる１−（置換フエ
ニル）−１−フエニルエタンを唯一もしくは主た
る炭素源とする。この場合、目的とする２−（置
換フエニル）プロピオン酸によつて前記ジフエニ
ルエタン誘導体は選択される。即ち、目的プロピ
オン酸誘導体と同じ置換フエニル基を有するもの
が用いられる。炭素源としての１−（置換フエニ
ル）−１−フエニルエタンは培地中に0.01〜0.5重
量％の濃度になるように添加するが、所定の全量
を一度に添加してもよく、数回に分割して添加し
てもよい。前記式（）で表わされる１−（置換フエニル）
−１−フエニルエタンとしてより具体的に好まし
い化合物を例示すると、１−（４−メチルフエニル）−１−フエニルエタン１−（４−エチルフエニル）−１−フエニルエタン１−（４−プロピルフエニル）−１−フエニルエタ
ン１−（４−イソブチルフエニル）−１−フエニルエ
タン１−［４−（３，３，３−トリフルオロプロピル）
−フエニル］−１−フエニルエタン１−［４−（２−トリフルオロメチルプロピル）フ
エニル］−１−フエニルエタン本発明に使用する菌の培養の際、使用する培地
の窒素源としては、特に限定されることはない
が、硝酸カリ、硝安、硫安、塩安、燐安、ポリペ
プトン等を用いることができる。また、無機塩類として、燐酸二ナトリウム、燐
酸一カリウム、燐酸二カリウム等を用い、微量金
属として、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、
塩化第二鉄等を用いることができる。その他の添加物としては、菌株の生育を良好に
するための酵母エキス、コーンステイープリカ
ー、肉エキス等が挙げられる。培養方法としては、振盪培養、撹拌培養あるい
は深部通気培養等があり、更にこれらの混合した
培養法、例えば深部通気撹拌培養等を用いること
ができる。また、培養温度は25〜35℃、培養PHは中性付近
（６〜８）、培養日数は３〜35日が適当である。培養終了後、蓄積された２−（置換フエニル）
プロピオン酸は培養液の過や遠心分離等の操作
により得られる。除菌培養液から抽出、精製する
ことにより、精製２−（置換フエニル）プロピオ
ン酸を得ることができる。精製に際しては、溶媒
抽出、脱水、脱色、分留、カラムクロマトグラフ
イー等の手段を単独又は適宜組み合わせて行なう
ことができる。例えば、培養終了後、培養液を遠心分離するこ
とにより、得られた上澄区分をとり、必要に応じ
PH調整をした後、ジクロロメタン等の有機溶媒を
用いて目的物質を抽出する。次いで、脱水、濃縮
後シリカゲルクロマトグラフイーにかけ、ベンゼ
ン−酢酸エチル（７：１）を用いて溶出、分画す
ることにより目的とする物質を含有する溶出画分
が得られる。この画分を濃縮することによつて、
粗製の目的物質が得られるが、必要に応じて再結
晶等の操作を行なつて精製する。以下、実施例について説明するが、本発明は下
記実施例のみに限定されるものではない。実施例１ K₂HPO₄0.065ｇ、KH₂PO₄0.026ｇ、
Na₂HPO₄・12H₂O0.134ｇ、NH₄Cl0.005ｇ、
MgSO₄・7H₂O0.068ｇ、CaCl₂0.083ｇ、FeCl₃・
6H₂O0.0008ｇ、ポリペプトン0.2ｇ、酵母エキス
0.3ｇ、蒸留水１で示される組成をもつ液体培
地（PH7.2）100mlと特開昭58−29725号に従つて
合成した１−［４−（３，３，３−トリフロロプロ
ピル）−フエニル］−１−フエニルエタン0.05ｇを
300mlの三角フラスコに入れ、121℃、15分間高圧
滅菌した後、シユードモナスセパーシアKTB−
03株（微工研条寄第534号）を接種し、30℃で28
日間回転振盪培養を行なつた。培養液を遠心分離
して菌体を除き、上澄液を６規定塩酸でPH２以下
とし、クロロホルム100mlで抽出する。この抽出
液を１規定の苛性ソーダに転溶し、再度酸性にし
た後、クロロホルムで抽出し、クロロホルム層を
減圧濃縮して溶媒を完全に除いてやや粘性を帯び
た赤褐色の液体を得た。これをシリカゲルクロマ
トグラフイー法（ベンゼン−酢酸エチル）で精製
し、更にｎ−ヘキサンから再結晶することにより
27mg（収率61％、但し１−［４−（３，３，３−ト
リフルオロプロピル）フエニル］−１−フエニル
エタンに対し）の白色結晶を得た。得られた結晶
の融点は、75〜76.5℃でNMR、赤外線吸収スペ
クトル、質量分析の結果は化学合成で得られた２
−［４−（３，３，３−トリフルオロプロピル）フ
エニル］−プロピオン酸（特開昭58−65237号）と
一致した。実施例２実施例１で示した液体培地100mlに特開昭58−
29725号と同様にして合成した１−［４−２−トリ
フルオロメチルプロピル）フエニル］−１−フエ
ニルエタン0.05ｇを300mlの三角フラスコに入れ、
121℃、15分間高圧滅菌した後、シユードモナス
セパーシアKTB−03株を接種し、30℃で28日間
回転振盪培養を行なつた。培養液を実施例１と同
様に処理することにより、精製白色結晶12mg（収
率27％、但し１−［４−（２−トリフルオロメチル
プロピル）フエニル］−１−フエニルエタンに対
し）を得た。実施例３実施例１で示した液体培地100mlに１−（４−イ
ソブチルフエニル）−１−フエニルエタン0.1ｇを
300mlの三角フラスコに入れ、121℃、15分間高圧
滅菌した後、シユードモナスセパーシアKTB−
03株を接種し、30℃で28日間回転振盪培養を行な
つた。培養液を実施例１と同様に処理することに
より、精製白色結晶61mg（収率70.5％、但し１−
４（−イソブチルフエニル）−１−フエニルエタン
に対し）を得た。このものの融点は、75〜77℃で
NMR、赤外線吸収スペクトル、質量スペクトル
の結果は、２−（４−イソブチルフエニル）プロ
ピオン酸のものと一致した。実施例４短期培養データ実施例１に示した液体培地50mlに１−（４−イ
ソブチルフエニル）−１−フエニルエタン0.01ｇ
を300mlの三角フラスコに入れ、121℃、15分間高
圧滅菌した後、シユードモナスセパーシアKTB
−03株を接種し、30℃で３日間回転振盪培養し
た。培養液を遠心分離して菌体を除き、上澄液を
６規定塩酸でPH２以下とし、クロロホルム50mlで
抽出する。クロロホルム層を減圧濃縮後、10mlに
メスアツプし、高速液体クロマトグラフイーで定
量したところ４mg（収率46％、但し１−（４−イ
ソブチルフエニル）−１−フエニルエタンに対し）
の２−（４−イソブチルフエニル）プロピオン酸
が生成していることが判つた。実施例５実施例１と同様にして上記式で示される基質１
−イソプロピルフエニル−１−フエニルエタン
0.2ｇをシユードモナスセパーシアKTB−03株で
資化させた。 21日間の培養後に得られた生成物２−イソプロ
ピルフエニルプロピオン酸の収量は49mg（収率
28.6％、但し１−イソプロピルフエニル−１−フ
エニルエタンに対し）であつた。

Claims

【特許請求の範囲】１シユードモナス属に属する菌で、下記式
（）（式中、ＲはC_1-4の直鎖又は分枝鎖アルキル基、
CF₃−CH₂−CH₂−基又は【式】基である）で表わされる１−（置換フエニル）−１−フエニル
エタンを酸化して下記式（）（式中、Ｒは式（）のＲと同じ）で表わされる２−（置換フエニル）プロピオン酸
を生産する能力を有する菌を、上記式（）で表
わされる１−（置換フエニル）−１−フエニルエタ
ンを添加した培地に接種培養して、培養物から上
記式（）で表わされる２−（置換フエニル）プ
ロピオン酸を採取することを特徴とする２−（置
換フエニル）プロピオン酸の製造方法。