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JPS6331733B2 - - Google Patents
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JPS6331733B2 - - Google Patents

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Publication number
JPS6331733B2
JPS6331733B2 JP55059290A JP5929080A JPS6331733B2 JP S6331733 B2 JPS6331733 B2 JP S6331733B2 JP 55059290 A JP55059290 A JP 55059290A JP 5929080 A JP5929080 A JP 5929080A JP S6331733 B2 JPS6331733 B2 JP S6331733B2
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JP
Japan
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stirrer
optical
cell
measurement method
sample
Prior art date
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Expired
Application number
JP55059290A
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JPS56155836A (en
Inventor
Shinichiro Matsumoto
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mitsubishi Chemical Corp
Original Assignee
Mitsubishi Chemical Industries Ltd
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Publication date
Application filed by Mitsubishi Chemical Industries Ltd filed Critical Mitsubishi Chemical Industries Ltd
Priority to JP5929080A priority Critical patent/JPS56155836A/ja
Publication of JPS56155836A publication Critical patent/JPS56155836A/ja
Publication of JPS6331733B2 publication Critical patent/JPS6331733B2/ja
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G01N21/03Cuvette constructions

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液状試料の光学的測定法に関するもの
である。特に本発明は極めて少量の試料を用い
て、その光学的特性を精度よく測定する方法に関
するものである。 光学測定用セル内で反応を行なわせ、反応の進
行に伴う試料の光学的特性、例えば吸光度の変化
と光学的に追跡して、反応の進行状態を知ること
は公知であり、この手法は各種の分析方法に応用
されている。例えば最近脚光をあびている、感作
ラテツクスを使用する抗原―抗体反応による抗原
又は抗体の測定はその一例である。抗原―抗体反
応の典型的な例では、平均粒径が1.6ミクロン以
下の不溶性担体に抗原又は抗体を支持させた感作
ラテツクスを光学測定用セルに入れ、これに抗体
及び/又は抗原を含む試料を添加して、撹拌下に
抗原―抗体反応を生起させる。セルには波長が
0.6〜2.4μでラテツクスの平均粒径の1.1倍以上、
特に1.5倍以上の光を照射し、ラテツクスの光学
的特性、通常は透過光量の変化を測定する。測定
は通常、吸光度又は透過率の変化速度、一定時間
後の吸光度又は一定吸光度に達する時間のいずれ
かの測定として行なわれる(U.S.P.No.4118192参
照)。 このような抗原―抗体反応の測定に於ては、セ
ル内を均一にし且つ反応を促進させるためにセル
内の液体を適度な強さで撹拌することが必要であ
る。通常用いられる撹拌子は、セルの容積の一部
分を占めるのみであり、且つ照射される光の光路
外に設けられている。また光路内に設ける場合に
は、測定時に撹拌子を光路外に取出し、撹拌子に
より光が吸収されたり散乱されたりして測定が不
正確とならないように配慮している。しかし、こ
のような方法は、一般に微量の試料を用いる測定
法としては不適当である。 本発明者は、先に、微量の試料の光学的特性を
精度よく測定する方法として、内部に大きな角柱
状で透光性のある撹拌子を備えたセルに試料を入
れ、測定用光線の光路内で撹拌子を回転させつつ
測定を行なう方法を提案した(特願昭54−
74253)。 この方法は微量試料の測定法として優れたもの
ではあるが、撹拌子の回転により気泡の巻込みが
起り、これが時として測定を妨害することがある
ことが判明した。この現象は、セル中の溶液量を
著るしく削減したり、撹拌子を高速回転すると顕
著となる。 本発明は気泡巻込みによる妨害を受けることの
少ない測定方法を提供するものである。 本発明によれば、光学測定用セル内で感作ラテ
ツクスを使用して抗原―抗体反応を行なわせ、反
応の進行に伴う該反応混合物の光学的特性を追跡
して反応の進行状態を測定する方法において、下
部が透光性の材料で太い多角柱状に形成されてお
り、かつ上部が円柱状に形成されている撹拌子を
備えた光学測定用セルに液状試料を入れ、撹拌子
の該多角柱状部分を測定用光線の光路内に、また
該円柱状部分を該試料を液面にそれぞれ位置さ
せ、撹拌子を回転させつつ該試料の光学的特性を
測定することにより、微量の試料を用いてその光
学的特性を精度よく測定することができる。 本発明について詳細に説明すると、本発明で用
いる測定装置は、試料溶液を収容する光学測定用
セルと、セル内に挿入された撹拌子と、セルに測
定用光線を照射する光源部と、セルを通過した測
定用光線を測定する受光部とを備えている。光源
部と受光部とは、類似の一般の光学測定装置で用
いられているものをそのまま用いることができ
る。セルも通常は、一般の光学測定装置で用いる
長方形ないし正方形の断面形状を有するものを用
いる。これに対し、撹拌子は通常用いられている
ものとは異なり、その試料溶液中に浸漬する部分
の少くとも一部が、ガラスやポリエチレン、ポリ
スチレン、ポリメチルメタクリレート等の合成樹
脂のような透光性の材料で、その断面が多角形の
柱状に形成されている。断面が多角形の撹拌子
は、断面が円形の撹拌子に比して高い撹拌効果を
上げることができる。断面が多角形の部分の長さ
は、溶液中に浸漬したときに、通常、溶液の深さ
の30%以上を占める長さとするのが好ましい。こ
の多角形の部分の断面の形状としては、対向する
辺が互に平行な形状である長方形または正六角形
が好ましい。このような形状は撹拌子による光の
散乱を少なくするのに有効である。撹拌効果およ
び光の散乱の点からして、最も好ましいのは断面
が正方形の撹拌子であると考えられる。 撹拌子のうち液面に位置する部分は、その断面
を円形とする。液面付近に位置する部分が多角柱
状の撹拌子を高速回転すると、液面で気泡の巻込
みがおこり測定に誤差を生ずることがある。しか
し液面付近が円柱状の撹拌子は、気泡の巻込みが
著るしく減少する。通常は液面から少くとも1mm
下の部分まで、好ましくは液面から1〜5mmまで
の部分を円柱状とすれば、気泡の巻込みによる障
害を回避することができる。 撹拌子はセル内で回転し得る限度で、できるだ
け大きいことが好ましい。通常は撹拌子の断面積
がセルの断面積の25%以上、好ましくは30%以上
の断面積となるようにする。撹拌子の断面積が大
きいと、少量の試料溶液でセルの空間部分を満す
ことができる。また、測定用光線が溶液中を通過
する距離が減少するので、溶液による光の散乱、
吸収が減少する。従つて、光の散乱や吸収の大き
い試料溶液をも精度よく測定することができる。
通常は、回転状態において、撹拌子とセル内壁と
の最小間隙を0.5〜2mmとすれば、撹拌子の自由
な回転と、大きな撹拌子を用いる上述の利点とを
両立させることができる。 本発明方法でセル内の溶液の光学的特性を測定
するには、上述の如き撹拌子をセル内に挿入し、
多角柱状部分を測定用光線の光路内に位置させ、
撹拌子を回転させつつセルに光を照射する。光線
が溶液中を通過する距離すなわち光路長及び撹拌
子により散乱される光の割合は、撹拌子の回転に
依存して周期的に変化する。従つて各瞬間におい
て測定される光学的特性は、試料に全く変化が生
じなくても、周期的に変化する。しかし回転数が
毎分数百〜数千回転と大きい場合には、通常の測
定装置では周期的変化の平均値が自動的に測定さ
れるので測定には全く支障がない。回転数が小さ
くて回転に伴う周期的変化が測定に影響する場合
には、光学的特性を一定時間にわたり積分して測
定すればよい。なお、当然のことながら、回転速
度は試料の光学的特性の変化速度よりも十分に大
きくし、回転の影響を消除するに際し試料の光学
的特性の変化が影響しないようにする。 本発明方法によれば、撹拌子の存在が測定の障
害とならないので、撹拌子で直後に撹拌している
部分で測定を行なうことができ、測定に及ぼす撹
拌の影響を最少限に抑えることができる。 また有効な光路長が短くなるので、単位光路長
当りの試料の吸光度や散乱度を大きくすることが
できる。従つて感作ラテツクスを用いる本願発明
の抗原―抗体反応の場合には、ラテツクスの濃度
を高くしたり、粒径の大きいラテツクスを用いた
りして測定の感度を向上させることができる。 更に最も一般的に用いられているプロペラ型
(タービン型)撹拌翼は、回転に伴い液の内部に
剪断力が加わるが、本発明方法で使用する多角柱
状の撹拌機では剪断力はあまり強くない。従つて
感作ラテツクスを用いる抗原―抗体反応の場合に
は、回転速度を上げるとプロペラ型撹拌翼では反
応により生成した凝集塊が破壊されることがある
が、本発明方法ではこのようなことは殆んど起ら
ない。 次に実施例により本発明を更に詳細に説明する
が、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実
施例に限定されるものではない。 なお、以下の実施例において、光学測定用セル
としては、断面形状が7mm角の正方形である透明
プラスチツク製セルを用いた。撹拌子としては、
断面形状が4mm角の正方形で底面が平らな透明プ
ラスチツク製の角柱(=撹拌子A)と、撹拌子A
の底面を丸くし、かつ角柱部の高さを6.5mmとし
てその上部を直径4mmの円柱とした撹拌子(=撹
拌子B)とを用いた。撹拌子をセルに挿入する際
は、撹拌子の中心とセルの中心とを一致させ、か
つ撹拌子の底面がセルの底から2mmの高さの位置
になるようにした。 光源は赤外線発光ダイオード(モンサント社製
ME7124、中心波長0.94μ、波長半値幅0.05μ)を
用いた。光束は直径3m/mで、その中心がセル
の底から6mmの高さの位置にあるようにした。透
過光の検出にはシリコンフオトデイテクター(ベ
ルハウエル社製509―10)を用いた。 抗AFP抗体感作ラテツクスは下記の方法によ
り調製したものを用いた。 抗AFP抗体感作ラテツクスの調製 (AFP=α―fetoprotein) 抗AFP抗体のグリシン緩衝溶液(濃度:2
mg/ml)10mlに、平均粒径が0.234μのポリスチレ
ンラテツクス(ダウケミカル社製、固形分濃度:
10重量%)1mlを加え、室温において30分間撹拌
し、次いで40℃に加温してさらに30分間撹拌した
のち、2〜4℃の冷却下に50分間遠心分離
(12000rpm)した。沈澱を傾瀉し、分離した抗
AFP抗体感作ラテツクスを牛血清アルブミン溶
液(濃度:0.2重量%)に懸濁させ、感作ラテツ
クス粒子濃度が1.0重量%の抗AFP抗体感作ラテ
ツクス試薬を得た。 実施例 1 セルに0.1mlの0.2%牛血清アルブミン含有生理
食塩水と、0.05mlの抗AFP抗体感作ラテツクス及
び0.25mlのグリシン緩衝溶液を加えた(これによ
り、撹拌子Bを用いた場合には、円柱状が液面に
位置する)。撹拌子で1000rpmで撹拌を行ないな
がら、透過率の時間変化を測定した。撹拌子Bを
用いた場合には、透過率の時間による変化は殆ん
ど認められなかつた。しかし、撹拌子Aを用いた
場合には気泡の巻込みにより透過率が不規則に変
化し、測定に著るしい障害を与える場合のあるこ
とが認められた。撹拌子AおよびBを用いた場合
の透過率のチヤートの1例をそれぞれ第3図およ
び第4図に示す。 なお、上記の実施例において、撹拌子の回転速
度を800rpmとした場合、およびセルに入れる0.2
%牛血清アルブミン含有生理食塩水を0.2mlとし
た場合には、いずれの撹拌子を用いても透過率の
時間による変化は殆んど認められなかつた。 実施例 2 ラテツクスの凝集反応の測定 (1) 基準透過率の測定 セルに0.2mlの0.2%牛血清アルブミン含有生理
食塩水と0.05mlの抗AFP抗体感作ラテツクスを入
れ、さらに0.25mlのグリシン緩衝溶液を加えた。
撹拌子Bで1000rpmで撹拌を行ないながら透過率
(T0)を測定した。 (2) 透過率の測定 セルに0.2mlの標準AFP溶液と、0.05mlの抗
AFP抗体感作ラテツクスと、0.25mlのグリシン緩
衝溶液を入れた。撹拌子Bで1000fpmで撹拌を行
ないながら、撹拌開始後20秒から24秒までの間の
平均透過率(T1)と44秒から48秒までの間の平
均透過率(T2)とを測定した。吸光度の平均変
化速度Vを V=60/24log(T1/T2) として算出した。結果を第1表に示す。 【表】
【図面の簡単な説明】
第1図は実施例で用いた撹拌子Aの正面図およ
び平面図である。第2図は実施例で用いた撹拌子
Bの正面図および平面図である。底面の曲率は
2.5Rであり、角柱部(図中のL)の長さは6.5mm
である。第3図は第1図の撹拌子を用いた場合の
透過率のチヤートの1例である。第4図は第2図
の撹拌子を用いた場合の透過率のチヤートの1例
である。 1……回転軸、2……円柱部、3……角柱部、
4……底面。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 光学測定用セル内で感作ラテツクスを使用し
    て抗原―抗体反応を行なわせ、反応の進行に伴う
    該反応混合物の光学的特性を追跡して反応の進行
    状態を測定する方法において、下部が透光性の材
    料で太い多角柱状に形状されており、かつ上部が
    円柱状に形成されている撹拌子を備えた光学測定
    用セルに液状試料を入れ、撹拌子の該多角柱状部
    分を測定用光線の光路内にまた該円柱状部分を該
    試料液面にそれぞれ位置させ、撹拌子を回転させ
    つつ該試料の光学的特性を測定することを特徴と
    する液状試料の光学的測定法。 2 撹拌子の円柱状部分が、液面下少くとも1mm
    の深さまで続いていることを特徴とする特許請求
    の範囲第1項記載の光学的測定法。 3 撹拌子の円柱状部分が液面下1〜5mmまで続
    いていることを特徴とする特許請求の範囲第1項
    記載の光学的測定法。 4 撹拌子の多角柱状の部分の長さが、セル内の
    液深の少くとも30%を占めることを特徴とする特
    許請求の範囲第1項ないし第3項のいずれかに記
    載の光学的測定法。 5 撹拌子の回転時における撹拌子とセル内壁と
    の最短距離が0.5〜2.0mmであることを特徴とする
    特許請求の範囲第1項ないし第4項のいずれかに
    記載の光学的測定法。 6 撹拌子の多角柱状部分の断面積が、その位置
    する部分のセルの断面積の25%以上であることを
    特徴とする特許請求の範囲第1項ないし第5項の
    いずれかに記載の光学的測定法。 7 撹拌子の多角柱状部分の断面形状が長方形で
    あることを特徴とする特許請求の範囲第1項ない
    し第6項のいずれかに記載の光学的測定法。 8 撹拌子の多角柱状部分の断面形状が正方形で
    あることを特徴とする特許請求の範囲第1項ない
    し第6項のいずれかに記載の光学的測定法。 9 セルの断面が長方形であることを特徴とする
    特許請求の範囲第1項ないし第8項のいずれかに
    記載の光学的測定法。 10 セルの断面が正方形であることを特徴とす
    る特許請求の範囲第1項ないし第8項のいずれか
    に記載の光学的測定法。 11 試料溶液中の光の透過率を測定することを
    特徴とする特許請求の範囲第1項ないし第10項
    のいずれかに記載の光学的測定法。
JP5929080A 1980-05-02 1980-05-02 Optical measuring method for liquid sample Granted JPS56155836A (en)

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