JPS6333666B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

（技術分野） 本発明は、ナンベイハブの毒を主成分とする血
清分離用血液凝固促進剤及びナンベイハブ毒を主
成分とする血清分離用血液凝固促進剤の製造方法
に関する。 （背景技術） 一般に、ハブと呼ばれる蛇は、分類学上、クサ
リヘビ科（Viperidae）、マムシ亜科（Cro−
talinae）、ハブ属（Bothrops、Trimeresurus等）
に分類され、例えば、ナンベイハブ（Bothrops
alternatus、B.asper、B.cotiara.B.jararaca、B.
jararacussu、B.lanceolatus、B.neuwiedii、B.
marajoensis、B.moojeni）、ハブ（Trimer−
esurus flavoviridis）、ヒメハブ（T.okinav−
ensis）、サキシマハブ（T.elegans）、トカラハブ
（T.tokarensis）、タイワンハブ（T.
mucrosquamatus）、アオハブ（T.stejnegeri）等
がある。 現在、血清成分の臨床検査成積は診断及び治療
上不可欠なものとなつており、報告の迅速化が要
求されているが、従来の血清凝固剤は、血液が凝
固するまでに長時間を要すること、或は抗凝固剤
使用患者の血液の凝固時間が著しく長くなること
等の欠点を有していた。かかる点に鑑み、ヒメハ
ブの粗毒を血液凝固の主成分とした血液凝固促進
剤が本発明者によつて開発されている（特願昭55
−8260号）。 （背景技術における解決すべき課題） ヒメハブの粗毒を主成分とする血液凝固促進剤
は、赤血球を浴血する（赤血球破壊作用）という
不都合を生ずる。かかる溶血作用は、本発明者の
研究によれば、ヒメハブの粗毒に含まれるホスホ
リパーゼＡの関与により生ずることがわかつた。
しかしながら、ホスホリパーゼＡの除去は分画精
製により行なわなければならず、しかもこの方法
による精製物は収量が粗毒の約1/4程度に減少し、
経済性の点で大きな問題を生ずるのである。 （発明の開示） 本発明は叙上の点に鑑みてなされたもので、赤
血球溶血作用を行なわず、しかも血液凝固特性の
点でヒメハブの毒液を主成分とした凝固促進剤と
同等の効能を有する血清分離用血液凝固促進剤及
びかかる促進剤の製造方法を提供することを目的
とするものである。 本発明の一の特徴によれば、ナンベイハブの粗
毒又は精製毒を主成分とする血清分離用血液凝固
促進剤が提供されている。 本発明の別の特徴によれば、ナンベイハブの粗
毒から血液凝固活性を有する分画を採取し、該分
画を凍結乾燥して血清分離用血液凝固促進剤を製
造する方法が提供されている。 以下、本発明について詳細に説明する。尚、こ
こで「ハブ毒」あるいは「粗毒」（蛇毒）とは、
ナンベイハブの毒を云うものとする。 本発明者は、ハブ毒についての治療血清の改
良、無毒化（トキソイド）の研究を長年に亘つて
行なつてきたが、ハブ毒の生化学的分析中に、あ
る分画に強力な血液凝固促進作用があることを認
め、この分画部分又はその精製物質を人間の血液
に微量添加すると、赤血球を溶血することなく、
臨床検査上必要な血清の分離を短時間（30分以
内）で処理することができ、しかもかかる精製物
質は高収率で得られることを見出した。 かかる物質は、ハブ毒の乾燥粗毒を水に溶解し
た後、有機溶媒を用いて脂質を抽出除去し、水層
部を透析した後、透析内液をセフアデツクス（商
品名）のカラムに吸着させてから緩衝液で溶出
し、血液凝固活性の強い分画を採取し、凍結乾燥
することにより得られる。この分画は更に、イオ
ン交換によるカラムクロマトグラフイ処理を行な
つて、血液凝固活性の最も高い分画を採取してか
ら凍結乾燥を行なつてもよい。更に、得られた乾
燥物質に所定量のゼラチン水解物、塩化ナトリウ
ム及びグリシン等を加えて真空凍結等の凍結乾燥
処理を施こしてもよい。また、上記乾燥物質は、
これら添加物質の添加に先立つて、人間の血漿を
20±２秒の時間内で凝固させるように調節するこ
ともできる。 上記手順によつて得られた物質は、トロンビワ
様作用を有する酵素であつて、使用に際しては、
必要量を生理食塩水に溶解した後、無菌凝血酵素
液とする。この酵素液に安定剤、分散剤等を添加
することもできる。 かくして得られた酵素液１ml中の組成を例示す
ると、次の通りである。 無菌凝血酵素液 100μｇ ゼラチン水解物 １mg 塩化ナトリウム 8.76mg グリシン 50mg 上記酵素液は、そのまま、あるいは凍結乾燥し
て血液凝固促進剤として保存することができる。
なお、凍結乾燥品は25℃以下に保持すれば、半永
久的に保存することができる。 次に、本発明の実施例及び試験例を示す。 実施例 ナンベイハブ（Bothrops asper）の乾燥粗毒
１ｇを生理食塩水３mlに溶解し、４℃、20000回
転／分で２時間遠心分離し、上澄液を馬鈴薯殿粉
ゾーン電気泳動（トリスバルビタール緩衝液PH
8.8、４℃、４時間、ゾーン１m²に対し毒量2.0
mg）処理した後、陽極部分の殿粉を集めた。次
に、この殿粉を４℃生理食塩水100mlで溶出し、
液を24時間生理食塩水で透析した後、3000回転／
分で15分間遠心分離処理し、上澄液を４℃で限外
過器を用いて適当に濃縮した後、凍結乾燥を行
なつて、乾燥品250mgを得た。 次に、乾燥品を生理食塩水に溶解し、食塩水１
ml中５mgの濃度とし、硫酸アンモニウム0.3飽和
で生じた沈殿を除去し、上澄液に硫酸アンモニウ
ム0.8を飽和させて生じた沈殿を集め、生理食塩
水に溶解し、４℃、外液0.3％食塩水中で透析し
た後、４℃で限外過して適宜濃縮した。濃縮
後、凍結乾燥を行なつて、微黄白色の粉末を得
た。収率は約70％であつた。この粉末100μｇを
ゼラチン水解約１mg、塩化ナトリウム8.76mg及び
グリシン50mgと混合し、再蒸留水を加えて全量を
1.0mlとし、凍結乾燥を行なつて血清分離用血液
凝固促進剤とした。 この促進剤は、白色粉末であり、蒸留水１mlに
加えたとき、10分以内で溶解して無色透明となつ
た。 試験例 １ 本発明に係る血液凝固促進剤とヒメハブから得
た血液凝固促進剤に関して、赤血球の溶血作用に
ついて試験を行なつた。試験に供した各促進剤の
化学組成及び試験結果を第１表に示す。

【表】

【表】 試験は、各試料１バイアルを蒸留水1.0mlに溶
解して得た溶液約30μlを、ヘパリン２単位／mlを
含む人間の血液５mlに加えた後、転倒混和して室
温で約30分間静置してから遠心分離（3000回転／
分、５分間）処理して行なつた。ヒメハブから得
た凝固促進剤のうち、精製処理を行なつた試料
４、８及び９は溶血を生じなかつたが、精製毒の
収量はいずれも粗毒の約1/4程度に減少した。試
料７は同様の精製処理を行なつたが、溶血現象を
生じるとともに、収量も約1/4に減少した。 試験例 ２ 前記実施例に従つて得た血液凝固促進剤を人間
の正常血漿に添加して血漿凝固時間を測定した。 市販の標準正常クエン酸加血漿及び10人以上の
クエン酸化血漿を混合したものをそれぞれ用い、
血漿及び促進剤を37℃に予備保温した後、それぞ
れの血漿0.1mlに対し促進剤0.025mlを加えて傾斜
試験管法により凝固時間を測定したところ、いず
れも20秒以内で凝固した。 試験例 ３ 前記実施例に従つて得た血液凝固促進剤を再蒸
留水1.0mlで溶解し、25μを採血直後の血液5.0
mlに添加したところ、室温で30分以内に凝固させ
ることができた。 （効果） 以上のように、本発明に係る血液凝固促進剤
は、赤血球の溶血作用を全く起さず、しかも凝固
時間もヒメハブから得た凝固促進剤と同等のもの
となるという優れた効果を有するものである。ま
た、本発明によれば、かかる凝固促進剤を高収率
で得ることができると云う非常に優れた効果を有
するものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ナンベイハブの粗毒又は精製毒を主成分とす
   る血清分離用血液凝固促進剤。 ２ ナンベイハブの粗毒から血液凝固活性を有す
   る分画を採取し、該分画を凍結乾燥することを特
   徴とする血清分離用血液凝固促進剤の製造方法。