【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
本発明は式（）
で示される化合物またはその塩を有効成分として
含有する抗血栓剤に関する。
脳卒中や心筋硬塞発作の主な原因の一つに血栓
症がある。種々の原因で生成した血栓は、壁圧血
栓として動脈硬化を促進したり、流血中に流れ出
た血栓が塞栓になると、循環障害を引きおこす。
これら動脈硬化、循環障害は上記脳卒中や心筋硬
塞発作の原因と考えられている。近年の進歩した
血小板機能に関する研究によれば、血小板が血栓
形成過程において中心的な役割を持つていること
が明らかになつた。
即ち、流血中に存在する血小板は正常な血管壁
とは平衡状態を保ち、凝集塊を生じることはない
が損傷部が生じると血管壁に内膜下組織に点在す
るコラーゲンや基底膜と粘着する。その粘着は血
小板のdense bodyからのADPやセロトニンの放
出反応を引きおこす。放出されたADPやセロト
ニンは、血小板相互の凝集反応を引きおこし、血
小板塊をつくる。
同時に、血小板第３因子の放出も引き起こし、
放出された血小板第３因子はトロンピンの生成を
促進する。その結果、血液凝固過程を活性化し、
血栓が形成されると考えられている。
以上の様な血栓形成における重要な血小板の役
割に注目し、血小板の粘着、放出、凝集の諸機能
を抑制する薬剤を血栓症の予防および治療に用い
る試みがなされている。
従来、血小板凝集抑制剤としては、アスピリ
ン、インドメサチンなどのような非ステロイド系
消炎剤、スルフインピラゾンのようなピラゾール
誘導体、ジピリダールなどのピリミドピリミジン
誘導体、アデノシン誘導体、パパペリンなどが知
られているが、薬理効果、安全性の面から、より
優れた薬剤の開発が望まれている。
本発明者らは4000種以上の化合物のスクリーニ
ング・テストを行つた結果、一般式（）で表わ
される化合物が強力な血小板凝集抑制作用を有
し、且つ毒性も低いことを見い出し本発明を完成
した。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明は式（）で示される化合物またはその
塩を有効成分として含有する抗血栓剤を提供する
ものである。
式（）で示される化合物（化合物）はジヤ
ーナル・オブ・オーガニツク・ケミストリイ（J.
Organic Chem.）18、1392（1953）に記載された
化合物である。
式（）で示される化合物の硫酸塩、塩酸塩、
臭化水素酸塩などの鉱酸塩、ナトリウム塩、カリ
ウム塩などのアルカリ金属塩、安息香酸、フマル
酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸などの有機酸塩
などがあげられる。
次に、本発明に用いる化合物が血小板凝集抑制
作用を有することを以下の実験例によつて示す。
実験例 １
ウサギ多血小板血漿における血小板凝集抑制作
用（in vitro実験）
ａ 方法
家兎（２―2.5Kg）の総頚動脈より、９容量
の血液を採血し、3.8％クエン酸ナトリウム１
容量を含むシリコン処理フラスコに入れる。該
血液を1000rpmで15分遠心分離して、多血小板
血漿（platelet rich plasma.以下PRPと略称
する）を得た。
血小板凝集の観察はAggregometer（Bryston
社製）を用いて行なつた。諸種の凝集惹起（誘
発）物質の添加後の凝集の度合を比濁法により
透光度の増加としてとらえた。
ｂ 操作
PRP0.9mlをAggregometer用のシリコン処
理キユベツトに入れ、これに各種濃度の薬剤
（検体）または対照抑制薬物を含む生理食塩水
溶液0.05mlを添加後、１分間ふ置し、次いで、
各種凝集惹起物質を加えてその後の血小板含有
液の状態を観測し、吸光度を測定する、凝集抑
制率は次式より求める。
凝集抑制率（％）＝Ｃ−Ｄ／Ｃ×100
ここでＣは、生理食塩水を添加した時の最大
凝集率を示す透光度変化を示し、Ｄは薬剤添加
時の最大凝集率を示す透光度変化を示す。
ｃ 結果
ADPおよびコラーゲン誘発血小板凝集抑制
作用
ADP（10-5M）をPRPに添加すると直ちに血
小板の形態変化に伴う一過性の透光度の減少に
続き、明らかな凝集が認められる。
コラーゲンをPRPに添加すると、１―２分の
潜伏期間を置いてから凝集が認められる。これら
の血小板凝集に対する各薬剤による抑制効果を第
１表に示す。
第１表の結果は、化合物１が各種薬剤惹起血小
板凝集に対して抑制作用を有することを示してい
る。
The present invention is based on the formula () The present invention relates to an antithrombotic agent containing the compound or a salt thereof as an active ingredient. Thrombosis is one of the main causes of stroke and myocardial infarction. Thrombi generated for various reasons promote arteriosclerosis as wall-pressure thrombi, or cause circulatory disorders when thrombi that flow out during blood flow become emboli.
These arteriosclerosis and circulatory disorders are thought to be the causes of the above-mentioned strokes and myocardial infarction attacks. Recent advances in research on platelet function have revealed that platelets play a central role in the blood clot formation process. In other words, platelets present in blood flow maintain a state of equilibrium with normal blood vessel walls and do not form aggregates, but when an injury occurs, platelets adhere to the collagen and basement membrane scattered in the subintimal tissue on the blood vessel wall. do. This adhesion triggers the release of ADP and serotonin from platelet dense bodies. The released ADP and serotonin cause platelets to aggregate with each other, forming platelet clumps. At the same time, it also causes the release of platelet factor 3,
The released platelet factor 3 promotes the production of thrompin. As a result, it activates the blood coagulation process,
It is thought that a blood clot may form. Focusing on the important role of platelets in thrombus formation as described above, attempts have been made to use drugs that suppress platelet adhesion, release, and aggregation functions for the prevention and treatment of thrombosis. Conventionally known platelet aggregation inhibitors include nonsteroidal anti-inflammatory drugs such as aspirin and indomethatine, pyrazole derivatives such as sulfinpyrazone, pyrimidopyrimidine derivatives such as dipyridal, adenosine derivatives, and papaperine. However, in terms of pharmacological effects and safety, the development of better drugs is desired. As a result of screening and testing over 4,000 types of compounds, the present inventors discovered that the compound represented by the general formula () has a strong platelet aggregation inhibitory effect and low toxicity, and completed the present invention. . The present invention will be explained in detail below. The present invention provides an antithrombotic agent containing a compound represented by formula () or a salt thereof as an active ingredient. The compound (compound) represented by the formula () is listed in the Journal of Organic Chemistry (J.
Organic Chem.) 18 , 1392 (1953). Sulfate, hydrochloride of the compound represented by formula (),
Examples include mineral acid salts such as hydrobromide, alkali metal salts such as sodium salts and potassium salts, and organic acid salts such as benzoic acid, fumaric acid, succinic acid, tartaric acid, and citric acid. Next, the following experimental examples demonstrate that the compounds used in the present invention have a platelet aggregation inhibiting effect. Experimental example 1 Platelet aggregation inhibitory effect in rabbit platelet-rich plasma (in vitro experiment) a Method Nine volumes of blood were collected from the common carotid artery of a domestic rabbit (2-2.5 kg), and 3.8% sodium citrate was added to the blood.
Place into a siliconized flask containing the volume. The blood was centrifuged at 1000 rpm for 15 minutes to obtain platelet rich plasma (hereinafter abbreviated as PRP). Platelet aggregation can be observed using an Aggregometer (Bryston
(manufactured by KK). The degree of aggregation after the addition of various aggregation-inducing substances was determined by the nephelometric method as an increase in light transmittance. b. Procedure: Put 0.9 ml of PRP into a silicon-treated cuvette for Aggregometer, add 0.05 ml of physiological saline solution containing various concentrations of drug (sample) or control inhibitory drug, incubate for 1 minute, and then
After adding various aggregation-inducing substances, the state of the platelet-containing solution is observed and the absorbance is measured. The aggregation inhibition rate is determined by the following formula. Aggregation inhibition rate (%) = C - D / C × 100 Here, C indicates the change in light transmittance indicating the maximum aggregation rate when physiological saline is added, and D indicates the maximum aggregation rate when the drug is added. Indicates changes in light transmittance. c Results ADP and collagen-induced platelet aggregation inhibitory effect When ADP (10 -5 M) is added to PRP, a transient decrease in light transmittance accompanied by a change in platelet morphology is immediately followed by clear aggregation. When collagen is added to PRP, aggregation is observed after a 1-2 minute incubation period. Table 1 shows the inhibitory effects of each drug on platelet aggregation. The results in Table 1 show that Compound 1 has an inhibitory effect on platelet aggregation induced by various drugs.
【表】
実験例２ 急性毒性
方法
レーベンス・ケルベー法に準拠して、雄性dd
系マウス（20±１ｇ）一群５匹に検体の0.3％
CMC懸濁液（検体濃度100mg／ml）を用いて経口
投与により行つた。
この結果、化合物のLD50値は＞300mg／Kgで
あつた。
この結果より、化合物はかなりLD50値の高
い、安全な薬剤であることが判かる。
以上、説明した如く、本発明によつて提供され
る薬剤は、血小板凝集を阻害、抑制し、抗血栓剤
としての利用が期待される。
尚、化合物は、通常の処方により錠剤、散
剤、カプセル、または注射剤などにして用いるこ
とができる。
この時、通常の賦形剤、崩壊剤、結合剤、展着
剤、滑沢剤、色素、剤皮成分、希釈剤などが用い
られる。
好ましく用いられる賦形剤としてはブドウ糖、
乳糖など、崩壊剤としてはデンプン、アルギン酸
ナトリウムなど、滑沢剤としてはステアリン酸マ
グネシウム、硫酸パラフイン・タルクなど結合剤
としては、単シロツプ、エタノール、ゼラチンな
ど、剤皮としては、分散剤と可塑剤があげられる
が、分散剤としては、メチルセルロース、エチル
セルロースなど、可塑剤としては、グリセリン、
デンプンなどが用いられる。
また結晶セルロースは崩壊、滑沢、結合および
賦形剤としての性質を全て有するものとして使用
される。
投与方法は、経口もしくは注射により行なわれ
化合物の、LD50値が極めて高い安全な化合物
であるので、かなり高用量まで可能であるが最低
有効用量は、１回10〜500mg／成人病である。
実施例１ 錠剤の製法
１ 用いる材料
化合物 2000ｇ
乳 糖 100ｇ
殿 粉 150ｇ
カルボキシメチルセルローズ・カルシユウム
（CMC―Ca） 150ｇ
ポリビニルアルコール（PVA） 100ｇステアリン酸マグネシウム 25ｇ
2525ｇ
２ 方法
化合物、乳頭、殿粉およびCMC―Caを上
記分量秤量し、混合機中でよく混合し混合粉末
をつくる。この粉末にPVAを含む練合液を加
えて、通常の湿式造粒法に従つて造粒し、次い
で乾燥、整粒する。これにステアリン酸マグネ
シウムを加えて混合し、錠剤用顆粒を製造す
る。これをロータリー・タブレツト・プレスを
用いて、９ミリ径の糖衣面の杵を使用して、直
径９ミリ、厚み４ミリ、重量252.5mgの錠剤を
製造する。
実施例２ カプセル剤の製法
１ 用いる材料（剤皮）
ハイドロキシプロピルメチルセルローズ 48ｇ
ポリエチレングリコール―4000 10ｇ
酸化チタン（TiO2） 30ｇ
２ 方法
上記剤皮成分を、アセトン―ジクロルメタン
混合液（容量比１：１）に溶解し、コーテイン
グ液を製造する。
通常の方法で上記コーテイング液を、実施例
１で得られた錠剤にコーテイングし、コーテイ
ング錠とする。
実施例３ 注射液の製法
化合物500mg、グルコース50ｇを秤取し、蒸
留水を加えて溶解し、全量を１とする。この溶
液をボア・サイズ0.22μのメンブランフイルター
（ミリボア社製、FGLP14200）を用いて、N2ガ
スによる加圧（0.5Kg／cm2）過を行ない、液
を20ml容白色アンプルに分注し熔封する。[Table] Experimental Example 2 Acute Toxicity Method Male dd
0.3% of the sample for each group of 5 mice (20±1g)
The test was carried out by oral administration using a CMC suspension (specimen concentration 100 mg/ml). As a result, the LD 50 value of the compound was >300 mg/Kg. This result shows that the compound is a safe drug with a fairly high LD 50 value. As explained above, the drug provided by the present invention inhibits and suppresses platelet aggregation, and is expected to be used as an antithrombotic agent. Incidentally, the compound can be used in the form of tablets, powders, capsules, injections, etc. according to conventional formulations. At this time, conventional excipients, disintegrants, binders, spreading agents, lubricants, pigments, coating components, diluents, etc. are used. Preferably used excipients include glucose,
Disintegrants such as lactose, starch and sodium alginate, lubricants such as magnesium stearate, paraffin sulfate and talc, binders such as simple syrup, ethanol, and gelatin, and coatings such as dispersants and plasticizers. Dispersants include methyl cellulose, ethyl cellulose, etc., and plasticizers include glycerin,
Starch etc. are used. Crystalline cellulose is also used as having disintegrating, lubricating, binding and excipient properties. The administration method is oral or injection, and since the compound is a safe compound with an extremely high LD 50 value, considerably high doses are possible, but the lowest effective dose is 10 to 500 mg/adult patient. Example 1 Tablet manufacturing method 1 Materials used Compound 2000g Lactose 100g Starch powder 150g Carboxymethylcellulose calcium (CMC-Ca) 150g Polyvinyl alcohol (PVA) 100g Magnesium stearate 25g 2525g 2 Method Compound, papilla, starch, and CMC- Weigh the above amount of Ca and mix well in a mixer to make a mixed powder. A kneading solution containing PVA is added to this powder and granulated according to a conventional wet granulation method, followed by drying and sizing. Magnesium stearate is added and mixed to produce granules for tablets. Using a rotary tablet press and a 9 mm diameter sugar-coated punch, tablets with a diameter of 9 mm, a thickness of 4 mm, and a weight of 252.5 mg are produced. Example 2 Capsule manufacturing method 1 Materials used (shell) Hydroxypropyl methyl cellulose 48 g Polyethylene glycol-4000 10 g Titanium oxide (TiO 2 ) 30 g 2 Method The above shell components were mixed with an acetone-dichloromethane mixture (volume ratio 1:1). ) to produce a coating liquid. The tablets obtained in Example 1 are coated with the above coating liquid in a conventional manner to obtain coated tablets. Example 3 Method for producing injection solution 500 mg of the compound and 50 g of glucose are weighed out, and distilled water is added to dissolve them to bring the total amount to 1. This solution was pressurized with N 2 gas (0.5 Kg/cm 2 ) using a membrane filter with a bore size of 0.22μ (manufactured by Millibore, FGLP14200), and the solution was dispensed into 20 ml white ampoules and melted. Seal.