JPS637556B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規なＮ−アセチルノイラミン酸誘
導体およびその製造法に関する。更に詳細には、
癌細胞の転移反応を顕著に阻害するという作用を
もつ、医薬として有用な新規なＮ−アセチルノイ
ラミン酸誘導体並びにその製造法に関する。 Ｎ−アセチルノイラミン酸（すなわちシアル
酸）は、細胞表面に存在する複合糖質すなわち糖
蛋白および糖脂質の糖鎖末端を占め、細胞の分
化、成熟、機能、細胞間相互作用に於いて重要な
役割を果たすことが知られており、既に幾つかの
Ｎ−アセチルノイラミン酸誘導体が合成され研究
されている。 ところで、本願発明者らはＮ−アセチルノイラ
ミン酸に対してα配置でヌクレオシドまたはグル
コースを結合せしめたＮ−アセチルノイラミン酸
誘導体が優れた生理活性をもつことを見出し、か
かる誘導体及びその製法につき既に出願した（特
願昭56−77672号）。 今般、本願発明者らは上記製法に更に特別の再
クロマトグラフイー法を適用することにより、上
記誘導体のみならずＮ−アセチルノイラミン酸に
対してβ配置でヌクレオシドが結合した新規なＮ
−アセチルノイラミン酸誘導体が単離、精製し得
ること、加えて驚くべきことにこの新規誘導体が
特異的に癌転移を阻害するという格別の薬効をも
つことを見出し、本願発明に到つたものである。
即ち、本発明は、 一般式 （式中、R¹は夫々独立に水素、アセチルを表
わし、R²はヌクレオシド残基を表わし、R³はカ
ルボキシルまたはメトキシカルボニルを表わす）
のＮ−アセチルノイラミン酸誘導体並びにその製
造法に関する。 本明細書において「ヌクレオシド残基」という
用語は、リボースとプリンまたはピリミジン塩基
がグリコシド結合しているものである。前記に於
いてリボース及び夫々の塩基は、置換基および／
又は縮合環を有していてもよい。

【式】

【式】 例えば、次のようなものが好適である。

【式】

【式】

【式】 前記化学式で示す各種の具体例は、後述する実
施例により一層明瞭となろう。 しかして一般式〔〕で示される本発明の化合
物は例えば、次のような化学式で示すように製造
し、ついで後述の再クロマトグラフイー法により
単離、精製し得る。尚、式〔〕の化合物は公知
化合物であり、本発明の各種化合物の合成に有用
な中間体である。 上記反応に於いて、式〔〕の化合物を式
〔〕の化合物とKoenigs−Knorr反応に使用さ
れる通常の反応条件下で反応せしめる。例えば、
両者を触媒の存在下で常圧で約20〜25℃の温度で
約36〜48時間反応させる。 尚、上記反応に際し、β配置の誘導体の収率を
一層高めるという観点から式〔〕の化合物は式
〔〕の化合物に対し少なくとも約1.2倍モル使用
することが好ましい。また、同様の観点から反応
の途中（反応開始後、約12〜24時間後）に式
〔〕の化合物と触媒とを新たに追加することが
好ましい。この場合には、該化合物と触媒の使用
量は勿論本明細書に規定する量とする必要があ
る。 上記触媒としては、Koenigs−Knorr反応に一
般に使用されるものの中で、臭化第二水銀、シア
ン化第二水銀、過塩素酸銀を使用すべきである。
就中、臭化第二水銀、シアン化第二水銀が収率、
選択率向上の点から好ましい。尚、上記触媒は化
合物（）に対して約１当量〜４当量の範囲で使
用する。 また、溶媒としてはアセトニトリル、ニトロメ
タン、アセトン、塩化メチレン等が挙げられる。
就中、アセトン、アセトニトリルが好ましい溶媒
である。 かくして得られた反応生成物は、再クロマトグ
ラフイー法により単離、精製される。本明細中、
“再クロマトグラフイー法”とは、分配クロマト
グラフイー及び吸着クロマトグラフイーを異なる
条件で２回以上行う精製方法をいう。前記の如
く、本件出願人の特許出願（特願昭56−77672号）
に記載の方法によればＮ−アセチルノイラミン酸
に対してα配置でヌクレオシドを結合せしめた誘
導体しか得られなかつたが、上記再クロマトグラ
フイー法を適用することによりβ配置の誘導体が
α配置の誘導体と共に単離、精製することが始め
て可能になつたのである。 上記再クロマトグラフイーに使用するクロマト
グラフイーの組合せとしては、吸着クロマトグラ
フイー−吸着クロマトグラフイー、吸着クロマト
グラフイー−分配クロマトグラフイー、分配クロ
マトグラフイー−吸着クロマトグラフイー、分配
クロマトグラフイー−分配クロマトグラフイーの
各種組合せが使用し得る。就中、分配クロマトグ
ラフイー−吸着クロマトグラフイーの組合せが分
離能の点から好ましい。 吸着クロマトグラフイーに用いるカラム充填材
としては、例えばシリカゲル、アルミナ等が使用
し得る。特に、シリカゲルが好ましい。また、展
開剤としてはクロロホルム、メタノール、酢酸エ
チル、エタノール、ベンゼン、アセトン、トルエ
ン等が使用し得る。また、分配クロマトグラフイ
ーに用いるカラム充填材としては、例えばシリカ
ゲル、アルミナ等が使用し得る。特に、シリカゲ
ルが好ましい。展開剤としては、吸着クロマトグ
ラフイーに使用するのと同様のものが使用し得
る。 再クロマトグラフイー法の詳細な操作条件は、
後述する実施例により一層明瞭となろう。 本発明に於いて、一般式〔〕で示される化合
物は夫々、癌転移を阻害するという顕著な薬効を
有する。 この癌転移阻害作用は、後記する参考例に記載
の方法により確認することができた。 以下、本発明の実施例により説明する。これら
の実施例は、単に本発明を説明するためのもので
あり、従つて勿論本発明を限定するためのもので
はない。 実施例 １ 2′，3′−イソプロピリデン−5′−０−（４−Ｎ−
アセチル−２，４−ジデオキシ−３，６，７，
８−テトラ−０−アセチル−１−メトキシカル
ボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−ガラクト−オ
クタピラノシル）ウリジンの製法 2′，3′−イソプロピリデンウリジン１ｇ，シア
ン化第二水銀300mg，臭化第二水銀600mg及びモレ
キユラーシーブ（4A）１ｇをアセトニトリル50
ml中に添加、懸濁させ、室温で30分間撹拌した。 上記懸濁液にメチル−２−クロロ−４，７，
８，９−テトラ−０−アセチル−β−Ｄ−Ｎ−ア
セチルノイラミネート（以下、化合物〔〕とい
う）1.5ｇを作用させ、室温で16時間撹拌後、更
に化合物〔〕510mgとシアン化第二水銀150mg、
臭化第二水銀300mgを加え24時間撹拌した。反応
液を濾過し、溶媒を留去し、乾固した。 得られた粉末状物質を水100mlに溶かし、不溶
物を除き、さらにエーテル可溶物を除き、次いで
残つた水溶液を塩化カリウムで飽和し、酢酸エチ
ルで抽出した。酢酸エチル溶液を芒硝で乾燥、濾
過後溶媒を留去し粗生成物2.3ｇを得た。 得られた固体2.3ｇをアルミナ200ｇを酢酸エチ
ルによつて充填したアルミナカラムクロマトグラ
フイー（Merk，Aluminiumoxid90，70〜230メ
ツシユASTM）を酢酸エチル、酢酸エチル：エ
タノール（５：１）、酢酸エチル：エタノール
（３：１）、次いでエタノールの順に溶出し、標題
の化合物（β体という）と2′，3′−イソプロピリ
デン−5′−０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジ
デオキシ−３，６，７，８−テトラ−０−アセチ
ル−１−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−α
−ガラクト−オクタピラノシル）ウリジン（α体
という）との混合物が溶出された。 この混合物1.9ｇを、再度アルミナカラムクロ
マトグラフイー（アルミナ100ｇ）を溶媒酢酸エ
チル：エタノール（６：１）を用いて溶出し、β
体120mg（収率4.5％）、α体300mg（収率11.2％）
を夫々無色の粉末として単離した。他はα体とβ
体の混合物として溶出した。 これをクロマトグラフイーによる分離法を、ア
ルミナカラムクロマトグラフイーに代えてシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー〔Merk、Lober，
pre−packed column size Ｂ（310−25）
Lichroprep Si60（40〜63μｍ）〕を用いて行うと、
β体830mg（収率31.1％）、α体210mg（収率7.9
％）を単離することが出来た。尚、溶出溶媒とし
てクロロホルム：メタノール（60：１）を用い流
量は５ml／分であつた。 β体の物理的性質 〔α〕²² _D＋3.4゜（Ｃ＝１，メタノール中） 元素分析 C₃₂H₄₃O₁₈N₃ 分子量757.70 計算値 Ｃ；50.73，Ｈ；5.72，Ｎ；5.55 実測値 Ｃ；50.42，Ｈ；5.80，Ｎ；5.36 質量分析ｍ／Ｚ 757（M⁺）742（M⁺−15） 714（M⁺−43）698（M⁺−59） IRν^KBr _nax1735，1680及び1535cm^{-1 1}HNMR（CDCl₃）δ_H （TMS） 1.37（ｓ，3H），1.56（ｓ，3H），1.88（ｓ，3H），
1.99（ｓ，3H），2.01（ｓ，3H），2.05（ｓ，3H），
2.12（ｓ，3H），2.46（dd，1H，Ｊ＝4.8及び12.9
Hz），3.82（ｓ，3H），5.72（ｄ，1H，Ｊ＝2.1
Hz），5.83（ｄ，1H，Ｊ＝8.4Hz），7.35（ｄ，
1H，Ｊ＝8.4Hz），9.83（broad ｓ，1H） 実施例 ２ 2′，3′−イソプロピリデン−5′−０−（４−Ｎ−
アセチル−２，４−ジデオキシ−１−カルボキ
シル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−ガラクト−オク
タピラノシル）ウリジンの製法 実施例１で得たβ体185mgを1N−NaOH10mlを
加え室温で２時間撹拌後、水20mlを加え、氷冷
し、Dowex−50（H⁺）PH3.0とし濾過後、氷結乾
燥した。得られた粉末をメタノール20mlに溶か
し、活性炭処理し、濾過後、５mlまで濃縮し、こ
れに酢酸エチルを加え、無色の粉末を得た。これ
を五酸化リンを用いて乾燥し標題の化合物を82％
の収率で得た。 物理的性質 〔α〕²⁵ _D−12゜（Ｃ＝１，メタノール中） 元素分析 C₂₃H₃₃O₁₄N₃ 計算値 Ｃ；48.00，Ｈ；5.78，Ｎ；7.30 実測値 Ｃ；47.91，Ｈ；5.84，Ｎ；7.25 UV λ^MeOH _naxnm（log ε）；260（3.96） IR ν^fiLm _nax1660，1530cm^{-1 1}H−NMR D₂ Ｏ δ_H （DSS） 1.40（ｓ，3H），1.58（ｓ，3H），1.70（dd，1H，
Ｊ＝12.8および11.5Hz），2.03（ｓ，3H），2.43
（dd，1H，Ｊ＝12，８および3.8Hz），５，82
（broad ｓ，1H），5.85（ｄ，1H，Ｊ＝8.1Hz），
7.72（ｄ，1H，Ｊ＝8.1Hz） 実施例 ３ ５−フロロ−2′，3′−イソプロピリデン−５−
０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジデオキシ
−３，６，７，８−テトラ−０−アセチル−１
−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ
−ガラクト−オクトピラノシル）ウリジンの製
法 ５−フロロ−2′，3′−イソプロピリデンウリジ
ン500mg，シアン化第二水銀300mg，臭化第二水銀
600mg及びモレキユラーシーブ（4A）１ｇをアセ
トニトリル50mlに懸濁させた。この懸濁液に化合
物〔〕（実施例１で使用）1.2ｇを作用させ室温
で16時間撹拌後、更に化合物〔〕510mgとシア
ン化第二水銀150mgと臭化第二水銀300mgを加え24
時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧下40
℃で溶媒を留去すると油状物が残つた。この油状
物に水100mlを加え不溶物を除き、さらにエーテ
ル可溶物を除き、ついで水溶液を塩化カリウムで
飽和させ酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液
を芒硝で乾燥し、溶媒を留去すると油状物1.5ｇ
を得た。 この油状物を、クロロホルム溶媒を用いたシリ
カゲル（200ｇ，Merk，Silica gel 60，70〜230
メツシユASTM）を充填したシリカゲルカラム
クロマトグラフイーを使用しCHCl₃：メタノール
（30：１）で分離を行うと、標題の化合物とその
異性体との混合物が溶出した。この画分を濃縮乾
固すると粗生成物580mgを得た。 これをシリカゲルカラムクロマトグラフイー
（Merk，Lobar，size Ｃ，Lichroprep Si60）を
用いて、溶出液CHCl₃：メタノール（60：１）、 流量10ml／分、検出器UV（290nm）で分離、
精製し標題の化合物300mg（収率23％）を得た。
尚、異性体｛５−フロロ−2′，3′−イソプロピリ
デン−5′−０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジ
デオキシ−３，６，７，８−テトラ−０−アセチ
ル−１−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−α
−Ｄ−ガラクト−オクトピラノシル）ウリジン｝
が210mg（収率16％）得られた。尚、異性体の収
量は85mg（収率11％）であつた。 標題の化合物の物理的性質 〔α〕²⁵ _D＋11.0゜（Ｃ＝１，メタノール中） 元素分析 C₃₂H₄₂O₁₈N₃F 計算値 Ｃ；49.55，Ｈ；5.42，Ｎ；5.45 実測値 Ｃ；49.34，Ｈ；5.65，Ｎ；5.22 質量分析ｍ／Z775（M⁺），760（M⁺−15） 732（M⁺−43），716（M⁺−59） IR ν^KBr _nax1735，1680，1530cm^{-1 1}H−NMR（CDCl₃）δ_H（TMS） 1.37（ｓ，3H），1.56（ｓ，3H），1.87（ｓ，3H），
1.99（ｓ，6H），2.02（ｓ，3H），2.13（ｓ，3H），
2.50（dd，1H，Ｊ＝14および3.5Hz），3.77（ｓ，
3H），5.54（broad ｓ，1H），7.44（dd，1H，Ｊ
＝８Hz） 実施例 ４ ５−フロロ−2′，3′−イソプロピリデン−5′−
０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジデオキシ
−１−カルボキシル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−
ガラクト−オクトピラノシル）ウリジンの製法 実施例３で得られた化合物を用いて実施例２に
記載のようにして標題の化合物を80％の収率で得
た。 物理的性質 〔α〕²⁵ _D−9.2゜（Ｃ＝１，メタノール中） 元素分析 C₂₃H₃₂O₁₄N₃F 計算値 Ｃ；48.08，Ｈ；5.61，Ｎ；7.31 実測値 Ｃ；48.05，Ｈ；5.48，Ｎ；7.42 IR ν^KBr _nax3400，1688，1580cm^{-1 1}H−NMR（D₂O）δ_H（DSS） 1.40（ｓ，3H），1.58（ｓ，3H），1.74（ｔ，1H，
Ｊ＝14Hz），2.04（ｓ，3H），2.48（dd，1H，Ｊ
＝14および3.5Hz），5.86（broad ｓ，1H），7.95
（ｄ，1H，Ｊ＝８Hz） 実施例 ５ 2′，3′−イソプロピリデン−5′−０−（４−Ｎ−
アセチル−２，４−ジデオキシ−１−メトキシ
カルボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−ガラクト
−オクトピラノシル）ウリジンの製法 実施例１で得た2′，3′−イソプロピリデン−
5′−０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジデオキ
シ−３，６，７，８−テトラ−０−アセチル−１
−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−β−Ｄ−
ガラクト−オクタピラノシル）ウリジン500mg
（0.66ｍ mole）のメタノール10ml溶液に、金属
ナトリウム100mg（4.35ｍ mole）のメタノール
10ml溶液を氷冷下加え、20分間撹拌した。これ
に、ダウエツクス50−X8（H⁺）１ｇを用いて、
中和、濾過し、濃縮、乾固後、少量の水に溶か
し、凍結乾燥、真空乾燥と順次行ない無色無定形
晶350mg（収率90％）を得た。その200mgをシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイーに付し、クロロホ
ルム：メタノール＝10：１分画にて標題化合物の
無色無定形晶150mg（回収率75％）を得た。 分解点165℃ 〔α〕²⁰ _D−3.4゜（Ｃ＝１，メタノール） 分析値 C₂₄H₃₅N₃O₁₄・3H₂O 計算値 Ｃ；44.79，Ｈ；6.42，Ｎ；6.53 実験値 Ｃ；45.23，Ｈ；5.51，Ｎ；6.38 IR ν^KBr _nax1730cm^-1（COO Me） ¹H NMR^ppm _400MHz（D₂O，TSP） 1.413（ｓ，3H），1.605（ｓ，3H） 2.061（ｓ，3H），3.807（ｓ，3H） 実施例 ６ 5′−０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジデオ
キシ−１−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ
−β−Ｄ−ガラクト−オクトピラノシル）ウリ
ジンの製法。 実施例５で得た、化合物150mg（0.273ｍ
mole）の90％トリフロロ酢酸水溶液２mlを室温
下、２時間撹拌した。反応終了後溶媒留去し、少
量の水を加え、凍結乾燥、真空乾燥と順次行い、
無色無定形晶150mgを得た。さらにこの結晶150mg
をシリカゲルカラムクロマトグラフイーに付し、
クロロホルム：メタノール＝20：１分画にて、標
題化合物の無色無定形晶120mg（収率80％）を得
た。 分解点158℃ 〔α〕²⁰ _D4.1゜（Ｃ＝１，メタノール） 分析値 C₂₁H₃₁N₃O₁₄・2H₂O 計算値 Ｃ；43.08，Ｈ；6.07，Ｎ；7.18 実験値 Ｃ；42.72，Ｈ；5.26，Ｎ；7.03 ¹H−NMR^ppm _400MHz（D₂O，TSP） 1.83（1H，３−Hax），2.06（3H，−NHAc） 2.49（1H，３−Heq），3.86（3H，COOMe） 実施例 ７ 5′−０−（４−Ｎ−アセチル−２，４−ジデオ
キシ−３，６，７，８−テトラ−０−アセチル
−１−メトキシカルボニル−Ｄ−グリセロ−β
−Ｄ−ガラクト−オクトピラノシル）ウリジン
の製法 実施例１で得た、化合物50mg（0.07ｍ mole）
の90％トリフロロ酢酸水溶液1.5mlを室温下、２
時間撹拌た。反応終了後溶媒留去し、少量の水を
加え、凍結乾燥、真空乾燥と順次行い、標題化合
物の無色無定形晶50mgを得た。 分解点133℃ IR ν^KBr _nax1735，1680cm^{-1 1}H−NMR（D₂O） δ_H（DSS） 2.62（1H，3Heq），3.85（3H，COOMe） 参考例 この参考例は本発明の化合物の癌転移阻害作用
を示すものである。 試験方法 癌細胞は、Balb／ｃマウスのクローン化腺癌
26由来である高転移性細胞株NL−17および低転
移性株NL−44を用いた〔鶴尾隆等、Cancer.
Res.43，5437（1983）〕。 各癌細胞を化合物〔〕0.1mM存在下で炭酸
ガスインキユベーター中で24時間培養後、同系マ
ウスに尾静脈より５×10⁴個の癌細胞を移植する
とともに、化合物〔〕0.25mgあるいは0.5mgを
同時に静脈内投与した。以後、化合物〔〕0.25
mgあるいは0.5mgを週２回の割合で静脈内投与し
た。癌細胞移植後、22日目にマウスを屠殺して肺
を摘出し、肺の重量を測定するとともに形成され
た転移結節数の算定を行なつた。 この結果は、次の表に示す様に、NL−17、
NL−44とともに本化合物〔〕による前処理お
よび移植後の化合物〔〕投与により肺転移形成
能は有意に抑制された。また、この抑制効果は薬
物の用量に依存することも認められた。

【表】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中、R¹は夫々独立に水素、アセチルを表
   わし、R²はヌクレオシド残基を表わし、R³はカ
   ルボキシルまたはメトキシカルボニルを表わす）
   のＮ−アセチルノイラミン酸誘導体。 ２ R¹がアセチル、R²が2′，3′−イソプロピリデ
   ンウリジン、R³がメトキシカルボニルである特
   許請求の範囲第１項記載のＮ−アセチルノイラミ
   ン酸誘導体。 ３ R¹が水素、R²が2′，3′−イソプロピリデンウ
   リジン、R³がメトキシカルボニルである特許請
   求の範囲第１項記載のＮ−アセチルノイラミン酸
   誘導体。 ４ R¹が水素、R²がウリジン、R³がカルボキシ
   ルである特許請求の範囲第１項記載のＮ−アセチ
   ルノイラミン酸誘導体。 ５ R¹が水素、R²が５−フロロ−2′，3′−イソプ
   ロピリデンウリジン、R³がメトキシカルボニル
   である特許請求の範囲第１項記載のＮ−アセチル
   ノイラミン酸誘導体。 ６ R¹がアセチル、R²が５−フロロ−2′，3′−イ
   ソプロピリデンウリジン、R³がメトキシカルボ
   ニルである特許請求の範囲第１項記載のＮ−アセ
   チルノイラミン酸誘導体。 ７ R¹が水素、R²が５−フロロウリジン、R³が
   メトキシカルボニルである特許請求の範囲第１項
   記載のＮ−アセチルノイラミン酸誘導体。 ８ R¹が水素、R²が５−フロロウリジン、R³が
   カルボキシルである特許請求の範囲第１項記載の
   Ｎ−アセチルノイラミン酸誘導体。 ９ R¹が水素、R²がウリジン、R³がメトキシカ
   ルボニルである特許請求の範囲第１項記載のＮ−
   アセチルノイラミン酸誘導体。 １０ R¹がアセチル、R²がウリジン、R³がメト
   キシカルボニルである特許請求の範囲第１項記載
   のＮ−アセチルノイラミン酸誘導体。 １１ 一般式 の化合物と、 式R²−Ｈ〔〕（式中、R²はヌクレオシド残基
   を表わす。）の化合物とを触媒存在下に反応せし
   め、必要により加水分解した後反応生成物を再ク
   ロマトグラフイー法により単離、精製することを
   特徴とする、 一般式 （式中、R¹は夫々独立に水素、アセチルを表
   わし、R³はカルボキシルまたはメトキシカルボ
   ニルを表わし、R²は前記と同じである）のＮ−
   アセチルノイラミン酸誘導体の製造法。 １２ 単離、精製を吸着クロマトグラフイー−吸
   着クロマトグラフイー、吸着クロマトグラフイー
   −分配クロマトグラフイー、分配クロマトグラフ
   イー−吸着クロマトグラフイー、分配クロマトグ
   ラフイー−分配クロマトグラフイーの組合せのい
   ずれかを用いる再クロマトグラフイー法により行
   う特許請求の範囲第１１項記載の製造法。 １３ 式〔〕の化合物が、 一般式 （式中、Ｒは水素またはフツ素を表わしMeは
   メチルを表わす）の化合物である特許請求の範囲
   第１１項記載の製造法。