JPS644492B2 - - Google Patents
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Description
本発明は無毒化したイー・コリ（E.coli）神経
毒、その製法およびそれを含有する免疫学的調製
物に関する。 エシエリヒア・コリ（Escherichia coli）の病
原性株によつて生成されるある種の毒素、すなわ
ち、神経毒は激しい子ブタの疾患である子ブタ浮
腫病（piglet oedema disease）の病因であるこ
とが知られている。 子ブタの浮瘍病は腸浮腫または腸性中毒症とも
呼ばれ、殆んどの国に広範にみられる急性の病気
で、子ブタの死因の５〜80％を占める。この病気
は子ブタの離乳後２週間以内に発現し、その臨床
症状としては、運動失調、痙攣、局部または全身
麻痺、前頭部またはまぶたの皮下組織における浮
腫、特に胃壁、螺旋状結腸および脳などの種々の
器管の病理的解剖像にみられる浮腫などが挙げら
れる。 該神経毒は種々のよく知られたイー・コリ血清
型により生成される。 ダブリユー・ジエイ・ソジカ（W.J.Sojka、
Res.Vet.sci.、１：17〜27、1960）は、子ブタ浮
腫病例から分離した最も一般的なイー・コリ血清
型について記載しており、また、エイチ・シムメ
ルフエニツヒ（H.Schimmelpfennig、Zbl.Vet.
Med. 〔Ｂ〕18：622〜633、1971）は、子ブタ浮腫病
より分離した優性なイー・コリ血清型、つまり、
O138、O139およびO141血清型によつて該神経毒
が生成されることを示している。 このようなイー・コリ株が感染すると、子ブタ
の腸内に神経毒が放出され、吸収され、神経症状
および浮腫の原因となる全身的な動脈病を引き起
こす。 現在まで、イー・コリの全菌体またはその溶解
物からなる種々のイー・コリ調製物を使つて、子
ブタ浮腫に対する活性な免疫を付すことが試みら
れている（W.J.Sojka、the Commonwealth
Agricultural Bureau ed.、E.coli in demestic
amimals and poulty、1965、p124；E.Kauker、
Deuts、Tieraerzt.Wochensch.、78：182〜184、
1971；K.Lutter.Monatsh.Veterinaermed.29：
694〜699、1974）。しかし、これらの調製物は子
ブタを防御するに至らず、調製物に用いられてい
るイー・コリ血清型に対応する血清型特異免疫を
誘引するだけであつた。 米国特許第4136181号は、子ブタ浮腫病に対し
て有効なるワクチンに関する。これらのワクチン
は部分的に精製した神経毒をアジユバントで補足
したもので、筋肉内または皮下経路によつて投与
される。 エイチ・シムメルフエニツヒおよびアール・ウ
エーバー（H.Schimmelpfennig and R.Weber
“Studies on the oedema discase producing
toxin of Escherichia coli.”Advanced in Vct.
Med.Supple.to Sb1.Vet.Med.29：25〜32、1978）
は、毒素をホルムアルデヒドで処理したものは完
全に無毒化されるが、該ホルマリン処理毒素には
抗体反応の向上を示さないことを報告し、彼らは
またホルモルートキソイドが形成された根拠は何
もないと結論している。さらにこの結果は、天然
の毒素に比較してホルマリン処理毒素が中和抗体
の生産促進能力を著しく喪失していることを示し
ている。 米国特許第3983229号は、緩やかな操作条件下
で毒性生成物をグルタルアルデヒドと接触させ、
不活化段階に達した時、速やかに反応を停止させ
ることからなるワクチンの製造方法に関する。 イー・コリ神経毒を緩やかな操作条件下でグル
タルアルデヒドと処理し、すなわち、例えば、力
価57マウスED50／mlであるイー・コリ神経毒の
水溶液をグルタルアルデヒドの0.01M溶液で室温
にて処理し、90％の毒性不活化レベルに達する
前、好ましくは不活化レベルが50〜90％、さらに
は70〜90％に達した時、すなわち、５分〜２時間
の期間で反応を停止させると、本明細書にいう無
毒化毒素なる生成物が得られ、これは実質的には
非毒性であるがなお高い免疫原性を有し、それ
故、若年性（つまり、約１週令）の子ブタに浮腫
に対する免疫を付与するのに有効であることが判
明し、これが本発明の目的とするものである。 グルタルアルデヒドは、抗原と反応して架橋重
合反応生成物を形成することがすでに知られてい
る薬剤でありまた、不活化反応を停止させる方法
を含めてグルタルアルデヒドによる不活化処理技
術も知られている。この方法には、例えば無機塩
（例えば亜硫酸水素ナトリウム）またはアミノ酸
（好ましくはリジンまたはグリシン）の如き反応
遮断剤を添加する方法が包含される。 本発明の無毒化イー・コリ神経毒は米国特許第
4136181号の精製神経毒よりもさらに無害であり、
本発明の無毒化神経毒の調製にあたつては出発物
質として該精製神経毒を用いることができる。 驚くべきことに、本発明の無毒化神経毒の免疫
原能力は、免疫原性でない90％以上の高い不活化
レベルを示すグルタルアルデヒド処理生成物とき
わだつて対比される。 子ブタに浮腫に対する免疫を付与するために
は、該無毒化神経毒を、好ましくは、アジユバン
トと一緒に、またもつとも好ましくはチメロサー
ルのような防腐剤を補足して筋肉内または皮下経
路用に処方する。適当なアジユバントとしては水
酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムから
なる群のもの、例えばアルヒドロゲル
（Alhydrogel、Superfos Export Co.、
Copenhagen.Denmark製造、販売）の水酸化ア
ルミニウムゲル）が挙げられ、また無毒化神経
毒／補助剤の割合は、例えば、シンポジウム・シ
リーズ・イムノバイオロジー・スタンダード
Symp.Series.Immunobiol.Standard.6：177〜
180、1967）に示されるように、アジユバントに
対する吸収が最大になるように算定するのが好ま
しい。 つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説
明するが、これに限定されるものではない。 例えば、以下の実施例に挙げる神経毒の調製に
おいては、臨床的感染症例より分離したイー・コ
リO139血清型菌株を用いているが、神経毒産生
体として知られるその他いずれのイー・コリ菌株
も同じ目的に使用できる。 実施例 １ 神経毒調製 (a) 種菌調製 典型的な子ウシ浮腫病より分離し、凍結乾燥
状態に保持したイー・コリO139血清型菌株を
滅菌食塩水で復元させ、トリプトース・ブロス
26ｇ、デイフコ寒天30ｇ（トリプトース・ブロ
スおよびデイフコ寒天はDifco Labsにより製
造販売されている）および全量を１とする量
の水を混合し、該混合液を115℃にて45分間加
熱して調製されたトリプトース寒天固体培地を
各々20ml含むペトリ皿中で、37℃にて18時間イ
ンキユベートする。 ついで、液体培地を以下のように調製する。 プロテオース・ペプトンNo.３（Difco Labsに
より製造販売されている製品）30ｇ、酵母エキ
ス４ｇおよびデキストロース５ｇを60℃にて水
１に溶解する。冷却後、NaCl5ｇ、
NaHPO45.05ｇおよびKH2PO41.2ｇを添加す
る。該培養液はPH6.9〜7.0であり、ザイツ・
EKSフイルターで過し、100mlの培養フラス
コに分注する。 該培養フラスコにペトリ皿上で得たコロニー
を前記液体培地20mlに付き１個のコロニー数と
なるように接種し、振とう棚（22〜24揺れ／
分）上で振とうしながら37℃にて６時間インキ
ユベートする。 (b) イー・コリの生産および神経毒の抽出 イー・コリ含有培養液の６ml（すなわち、約
6.109菌体）を同様な液体培地300mlを含有する
生産用フラスコに接腫し、該培養液を振とう棚
（22〜24揺れ／分）上にて振とうしながら１日
インキユベートする。 生産フラスコ５個（１シリーズ）の収集物を
集め、各シリーズの収集物を2000Gにて２時間
遠心分離し、沈殿物を蒸留水150mlに再懸濁さ
せる。 該細胞懸濁液を融氷浴中に保持しながら、ブ
ランソン・ユーロツパ・ソニケータJ22
（Branson Europa sonicator model J22、
Branson Europa N.V.、Soest.The
Netherlands）で30分間超音波処理する。 菌体を破壊した後、該懸濁液を５℃にて
2000Gで２時間遠心分離させて菌体の破片を除
去する。上情液を0.45μミリポアフイルター
（MilliporeはMillipore Corporationの商標）
に通し、力価が57マウスED50（Reed and
Muench終点法によつて測定する）の液100
mlを得る。 実施例 ２ 神経毒の無毒化およびワクチンの製造 前記で得られた神経毒の溶液900mlを、発熱因
子を含まない蒸留水100ml中グルタルアルデヒド
25ｇの溶液4.8mlと共に室温にて１時間インキユ
ベートする。１時間後、発熱因子を含まない蒸留
水10ml中Ｌ−リジン・モノ塩酸塩48mgの溶液１ml
を添加して反応を止める。 該不活化毒素に水酸化アルミニウム（アルヒド
ロゲル）の２％滅菌溶液446ml、セーレンセン緩
衝液（Na2HPO4M／10：22％、KH2PO4M／
10：78％）446mlおよび蒸留水10ml中チメロサー
ル１mg溶液1.8mlを補足する。該混合液を室温に
て暗所で48時間滅菌した後、遠心分離する。 遠心分離による沈殿物を分離し、上清で希釈し
て最終容量を446mlとする。この生成物をガラス
バイアルに分注し、用量単位（つまり、
256ED50）またはその倍数量の無毒性神経毒を含
むようにする。 ワクチンとして使用するには、該生成物を筋肉
内または皮下経路により投与し、１用量単位は２
mlである。 実施例 ３ 神経毒不活性レベルと抗原性との関係 グルタルアルデヒドの量および神経毒とグルタ
ルアルデヒドの反応時間を種々変更して実施例２
の方法を行なうと、残余の神経毒の力価（つまり
不活化レベル）が異なつた生成物が得られ、各々
についてその防御効果をマウスでテストする。 このテストでは、種々の生成物の不活化レベル
をエイチ・シムメルフエニツヒ（H.
Schimmerpfennig.Fortshr.Vet.Med.13：49〜50、
1970）が記載している方法に従い、マウスにおけ
る毒性試験（麻痺および麻痺による死亡率）によ
つて評価し、その各々のマウスにおける防御レベ
ルを、マウス１匹あたり0.45ED50の投与単位量で
静脈内投与し、さらに６日後にマウス１匹あたり
2.8ED50の静脈内チヤレンジ（Challenge）投与
を行なうことにより評価する。 結果を第１表に示す。防御効果は約50〜90％の
毒性不活化レベルに伴なうことがわかる。
毒、その製法およびそれを含有する免疫学的調製
物に関する。 エシエリヒア・コリ（Escherichia coli）の病
原性株によつて生成されるある種の毒素、すなわ
ち、神経毒は激しい子ブタの疾患である子ブタ浮
腫病（piglet oedema disease）の病因であるこ
とが知られている。 子ブタの浮瘍病は腸浮腫または腸性中毒症とも
呼ばれ、殆んどの国に広範にみられる急性の病気
で、子ブタの死因の５〜80％を占める。この病気
は子ブタの離乳後２週間以内に発現し、その臨床
症状としては、運動失調、痙攣、局部または全身
麻痺、前頭部またはまぶたの皮下組織における浮
腫、特に胃壁、螺旋状結腸および脳などの種々の
器管の病理的解剖像にみられる浮腫などが挙げら
れる。 該神経毒は種々のよく知られたイー・コリ血清
型により生成される。 ダブリユー・ジエイ・ソジカ（W.J.Sojka、
Res.Vet.sci.、１：17〜27、1960）は、子ブタ浮
腫病例から分離した最も一般的なイー・コリ血清
型について記載しており、また、エイチ・シムメ
ルフエニツヒ（H.Schimmelpfennig、Zbl.Vet.
Med. 〔Ｂ〕18：622〜633、1971）は、子ブタ浮腫病
より分離した優性なイー・コリ血清型、つまり、
O138、O139およびO141血清型によつて該神経毒
が生成されることを示している。 このようなイー・コリ株が感染すると、子ブタ
の腸内に神経毒が放出され、吸収され、神経症状
および浮腫の原因となる全身的な動脈病を引き起
こす。 現在まで、イー・コリの全菌体またはその溶解
物からなる種々のイー・コリ調製物を使つて、子
ブタ浮腫に対する活性な免疫を付すことが試みら
れている（W.J.Sojka、the Commonwealth
Agricultural Bureau ed.、E.coli in demestic
amimals and poulty、1965、p124；E.Kauker、
Deuts、Tieraerzt.Wochensch.、78：182〜184、
1971；K.Lutter.Monatsh.Veterinaermed.29：
694〜699、1974）。しかし、これらの調製物は子
ブタを防御するに至らず、調製物に用いられてい
るイー・コリ血清型に対応する血清型特異免疫を
誘引するだけであつた。 米国特許第4136181号は、子ブタ浮腫病に対し
て有効なるワクチンに関する。これらのワクチン
は部分的に精製した神経毒をアジユバントで補足
したもので、筋肉内または皮下経路によつて投与
される。 エイチ・シムメルフエニツヒおよびアール・ウ
エーバー（H.Schimmelpfennig and R.Weber
“Studies on the oedema discase producing
toxin of Escherichia coli.”Advanced in Vct.
Med.Supple.to Sb1.Vet.Med.29：25〜32、1978）
は、毒素をホルムアルデヒドで処理したものは完
全に無毒化されるが、該ホルマリン処理毒素には
抗体反応の向上を示さないことを報告し、彼らは
またホルモルートキソイドが形成された根拠は何
もないと結論している。さらにこの結果は、天然
の毒素に比較してホルマリン処理毒素が中和抗体
の生産促進能力を著しく喪失していることを示し
ている。 米国特許第3983229号は、緩やかな操作条件下
で毒性生成物をグルタルアルデヒドと接触させ、
不活化段階に達した時、速やかに反応を停止させ
ることからなるワクチンの製造方法に関する。 イー・コリ神経毒を緩やかな操作条件下でグル
タルアルデヒドと処理し、すなわち、例えば、力
価57マウスED50／mlであるイー・コリ神経毒の
水溶液をグルタルアルデヒドの0.01M溶液で室温
にて処理し、90％の毒性不活化レベルに達する
前、好ましくは不活化レベルが50〜90％、さらに
は70〜90％に達した時、すなわち、５分〜２時間
の期間で反応を停止させると、本明細書にいう無
毒化毒素なる生成物が得られ、これは実質的には
非毒性であるがなお高い免疫原性を有し、それ
故、若年性（つまり、約１週令）の子ブタに浮腫
に対する免疫を付与するのに有効であることが判
明し、これが本発明の目的とするものである。 グルタルアルデヒドは、抗原と反応して架橋重
合反応生成物を形成することがすでに知られてい
る薬剤でありまた、不活化反応を停止させる方法
を含めてグルタルアルデヒドによる不活化処理技
術も知られている。この方法には、例えば無機塩
（例えば亜硫酸水素ナトリウム）またはアミノ酸
（好ましくはリジンまたはグリシン）の如き反応
遮断剤を添加する方法が包含される。 本発明の無毒化イー・コリ神経毒は米国特許第
4136181号の精製神経毒よりもさらに無害であり、
本発明の無毒化神経毒の調製にあたつては出発物
質として該精製神経毒を用いることができる。 驚くべきことに、本発明の無毒化神経毒の免疫
原能力は、免疫原性でない90％以上の高い不活化
レベルを示すグルタルアルデヒド処理生成物とき
わだつて対比される。 子ブタに浮腫に対する免疫を付与するために
は、該無毒化神経毒を、好ましくは、アジユバン
トと一緒に、またもつとも好ましくはチメロサー
ルのような防腐剤を補足して筋肉内または皮下経
路用に処方する。適当なアジユバントとしては水
酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムから
なる群のもの、例えばアルヒドロゲル
（Alhydrogel、Superfos Export Co.、
Copenhagen.Denmark製造、販売）の水酸化ア
ルミニウムゲル）が挙げられ、また無毒化神経
毒／補助剤の割合は、例えば、シンポジウム・シ
リーズ・イムノバイオロジー・スタンダード
Symp.Series.Immunobiol.Standard.6：177〜
180、1967）に示されるように、アジユバントに
対する吸収が最大になるように算定するのが好ま
しい。 つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説
明するが、これに限定されるものではない。 例えば、以下の実施例に挙げる神経毒の調製に
おいては、臨床的感染症例より分離したイー・コ
リO139血清型菌株を用いているが、神経毒産生
体として知られるその他いずれのイー・コリ菌株
も同じ目的に使用できる。 実施例 １ 神経毒調製 (a) 種菌調製 典型的な子ウシ浮腫病より分離し、凍結乾燥
状態に保持したイー・コリO139血清型菌株を
滅菌食塩水で復元させ、トリプトース・ブロス
26ｇ、デイフコ寒天30ｇ（トリプトース・ブロ
スおよびデイフコ寒天はDifco Labsにより製
造販売されている）および全量を１とする量
の水を混合し、該混合液を115℃にて45分間加
熱して調製されたトリプトース寒天固体培地を
各々20ml含むペトリ皿中で、37℃にて18時間イ
ンキユベートする。 ついで、液体培地を以下のように調製する。 プロテオース・ペプトンNo.３（Difco Labsに
より製造販売されている製品）30ｇ、酵母エキ
ス４ｇおよびデキストロース５ｇを60℃にて水
１に溶解する。冷却後、NaCl5ｇ、
NaHPO45.05ｇおよびKH2PO41.2ｇを添加す
る。該培養液はPH6.9〜7.0であり、ザイツ・
EKSフイルターで過し、100mlの培養フラス
コに分注する。 該培養フラスコにペトリ皿上で得たコロニー
を前記液体培地20mlに付き１個のコロニー数と
なるように接種し、振とう棚（22〜24揺れ／
分）上で振とうしながら37℃にて６時間インキ
ユベートする。 (b) イー・コリの生産および神経毒の抽出 イー・コリ含有培養液の６ml（すなわち、約
6.109菌体）を同様な液体培地300mlを含有する
生産用フラスコに接腫し、該培養液を振とう棚
（22〜24揺れ／分）上にて振とうしながら１日
インキユベートする。 生産フラスコ５個（１シリーズ）の収集物を
集め、各シリーズの収集物を2000Gにて２時間
遠心分離し、沈殿物を蒸留水150mlに再懸濁さ
せる。 該細胞懸濁液を融氷浴中に保持しながら、ブ
ランソン・ユーロツパ・ソニケータJ22
（Branson Europa sonicator model J22、
Branson Europa N.V.、Soest.The
Netherlands）で30分間超音波処理する。 菌体を破壊した後、該懸濁液を５℃にて
2000Gで２時間遠心分離させて菌体の破片を除
去する。上情液を0.45μミリポアフイルター
（MilliporeはMillipore Corporationの商標）
に通し、力価が57マウスED50（Reed and
Muench終点法によつて測定する）の液100
mlを得る。 実施例 ２ 神経毒の無毒化およびワクチンの製造 前記で得られた神経毒の溶液900mlを、発熱因
子を含まない蒸留水100ml中グルタルアルデヒド
25ｇの溶液4.8mlと共に室温にて１時間インキユ
ベートする。１時間後、発熱因子を含まない蒸留
水10ml中Ｌ−リジン・モノ塩酸塩48mgの溶液１ml
を添加して反応を止める。 該不活化毒素に水酸化アルミニウム（アルヒド
ロゲル）の２％滅菌溶液446ml、セーレンセン緩
衝液（Na2HPO4M／10：22％、KH2PO4M／
10：78％）446mlおよび蒸留水10ml中チメロサー
ル１mg溶液1.8mlを補足する。該混合液を室温に
て暗所で48時間滅菌した後、遠心分離する。 遠心分離による沈殿物を分離し、上清で希釈し
て最終容量を446mlとする。この生成物をガラス
バイアルに分注し、用量単位（つまり、
256ED50）またはその倍数量の無毒性神経毒を含
むようにする。 ワクチンとして使用するには、該生成物を筋肉
内または皮下経路により投与し、１用量単位は２
mlである。 実施例 ３ 神経毒不活性レベルと抗原性との関係 グルタルアルデヒドの量および神経毒とグルタ
ルアルデヒドの反応時間を種々変更して実施例２
の方法を行なうと、残余の神経毒の力価（つまり
不活化レベル）が異なつた生成物が得られ、各々
についてその防御効果をマウスでテストする。 このテストでは、種々の生成物の不活化レベル
をエイチ・シムメルフエニツヒ（H.
Schimmerpfennig.Fortshr.Vet.Med.13：49〜50、
1970）が記載している方法に従い、マウスにおけ
る毒性試験（麻痺および麻痺による死亡率）によ
つて評価し、その各々のマウスにおける防御レベ
ルを、マウス１匹あたり0.45ED50の投与単位量で
静脈内投与し、さらに６日後にマウス１匹あたり
2.8ED50の静脈内チヤレンジ（Challenge）投与
を行なうことにより評価する。 結果を第１表に示す。防御効果は約50〜90％の
毒性不活化レベルに伴なうことがわかる。
【表】
実施例 ４
子ブタにおける免疫反応
実施例２のワクチンの投与単位量（２ml中
256ED50）を、７日令の子ブタ７匹ずつからなる
３群（ａ、ｂ、および群）に皮下または筋
肉内のいずれかの経路によつて投与し、ついで同
用量の増強投与をａ群には皮下経路により、ま
たｂ群には筋肉内経路により２週間後に、また
群には筋肉内経路によつて１週間後に行なう。 ５週令になつた時、粗神経毒のチヤレンジ接種
を、ａ群の子ブタには体重１Kg当り2.2ED50、
ｂおよび群の子ブタには体重１Kg当り
1.1ED50の用量で各子ブタに筋肉内経路により行
なう。 対照群、すなわち５週令の子ブタからなるａ
対照群およびｂ／対照群には各々、ａ、
ｂおよび群と同量のチヤレンジ接種を筋肉内経
路によつて行なう。 全ての子ブタの神経症状（運動失調、痙攣、麻
痺）および１週間の死亡率を調べる。血液試料を
ワクチン接種前および接種後に採取し、ブエロ
（Vero）細胞における血清中和テストにより抗神
経毒抗体の検出を行なう。かかる目的のために、
血清を56℃にて30分間加熱し、組織培養保存培地
中、血清の２倍希釈系列を少なくとも50％のブエ
ロ細胞に細胞毒性効果を引き起こす所定の希釈度
の、等容量の標準神経毒の存在下に37℃にて１時
間インキユベートする。 ２つの該毒素−血清混合物の0.2ml試料を細胞
単層上で37℃にて24時間インキユベートし、抗毒
素の力価測定の終点を、該標準毒素の細胞毒性効
果を阻止する血清の最大希釈度の逆数として表わ
す。 各子ブタおよび各群について得られた結果を第
２表に示す。ワクチン接種後、何ら害となる反応
はみられなかつた。
256ED50）を、７日令の子ブタ７匹ずつからなる
３群（ａ、ｂ、および群）に皮下または筋
肉内のいずれかの経路によつて投与し、ついで同
用量の増強投与をａ群には皮下経路により、ま
たｂ群には筋肉内経路により２週間後に、また
群には筋肉内経路によつて１週間後に行なう。 ５週令になつた時、粗神経毒のチヤレンジ接種
を、ａ群の子ブタには体重１Kg当り2.2ED50、
ｂおよび群の子ブタには体重１Kg当り
1.1ED50の用量で各子ブタに筋肉内経路により行
なう。 対照群、すなわち５週令の子ブタからなるａ
対照群およびｂ／対照群には各々、ａ、
ｂおよび群と同量のチヤレンジ接種を筋肉内経
路によつて行なう。 全ての子ブタの神経症状（運動失調、痙攣、麻
痺）および１週間の死亡率を調べる。血液試料を
ワクチン接種前および接種後に採取し、ブエロ
（Vero）細胞における血清中和テストにより抗神
経毒抗体の検出を行なう。かかる目的のために、
血清を56℃にて30分間加熱し、組織培養保存培地
中、血清の２倍希釈系列を少なくとも50％のブエ
ロ細胞に細胞毒性効果を引き起こす所定の希釈度
の、等容量の標準神経毒の存在下に37℃にて１時
間インキユベートする。 ２つの該毒素−血清混合物の0.2ml試料を細胞
単層上で37℃にて24時間インキユベートし、抗毒
素の力価測定の終点を、該標準毒素の細胞毒性効
果を阻止する血清の最大希釈度の逆数として表わ
す。 各子ブタおよび各群について得られた結果を第
２表に示す。ワクチン接種後、何ら害となる反応
はみられなかつた。
【表】
【表】
＊：最終活性血清希釈の逆数
第２表の数値は、非常に若い子ブタに256ED50
を２週間隔で２回注入してワクチン接種を行なつ
た場合、優れた免疫応答が得られることを示して
いる。 防御効果は、チヤレンジした対照動物の100％
致死用量に対して57％であり、チヤレンジした動
物に各々、14％の死亡率および79％の疾病率を起
す用量に対して82％である。 第２表からはまた、浮腫病に対する防御効果が
対照動物の場合と著しく異なる血清変換率（57
％）と非常に関係のあること、および１週間間隔
で２回注入するワクチン接種計画はあまり効果の
ないことがわかる。 実施例 ５ ５〜８週令の子ブタにおける無毒化神経毒によ
る免疫応答 実施例２のワクチン調製物の投与単位量および
それより少ない用量を、５〜８週令の子ブタから
なる２群に皮下経路により投与し、３週間後に増
強を投与する。５〜８週令の子ブタからなる別の
２群を同様な条件下でアルヒドロゲル上に吸着さ
せた神経毒を同じ方法で処理する。 ワクチン接種後の抗神経毒抗体力価を、増強投
与14日後のブエロ細胞における血清中和によつて
測定する。 ワクチン接種計画および得られた結果を第３表
にまとめる。これから無毒化神経毒投与後に良好
な血清転換レベルがみられることがわかる。
第２表の数値は、非常に若い子ブタに256ED50
を２週間隔で２回注入してワクチン接種を行なつ
た場合、優れた免疫応答が得られることを示して
いる。 防御効果は、チヤレンジした対照動物の100％
致死用量に対して57％であり、チヤレンジした動
物に各々、14％の死亡率および79％の疾病率を起
す用量に対して82％である。 第２表からはまた、浮腫病に対する防御効果が
対照動物の場合と著しく異なる血清変換率（57
％）と非常に関係のあること、および１週間間隔
で２回注入するワクチン接種計画はあまり効果の
ないことがわかる。 実施例 ５ ５〜８週令の子ブタにおける無毒化神経毒によ
る免疫応答 実施例２のワクチン調製物の投与単位量および
それより少ない用量を、５〜８週令の子ブタから
なる２群に皮下経路により投与し、３週間後に増
強を投与する。５〜８週令の子ブタからなる別の
２群を同様な条件下でアルヒドロゲル上に吸着さ
せた神経毒を同じ方法で処理する。 ワクチン接種後の抗神経毒抗体力価を、増強投
与14日後のブエロ細胞における血清中和によつて
測定する。 ワクチン接種計画および得られた結果を第３表
にまとめる。これから無毒化神経毒投与後に良好
な血清転換レベルがみられることがわかる。
【表】
＊：最終活性血清希釈の逆数
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ イー・コリ神経毒をグルタルアルデヒドと反
応させて得られ、不活性化レベルが90％以下であ
ることを特徴とする無毒化され、かつ、免疫原性
のイー・コリ神経毒。 ２ 不活性化レベルが50〜90％の間にある前記第
１項の神経毒。 ３ イー・コリ神経毒を穏やかな操作条件下でグ
ルタルアルデヒドと接触させ、該神経毒の90％が
不活化される前に反応を停止させることを特徴と
する無毒化され、かつ、免疫原性のイー・コリ神
経毒の製法。 ４ 該神経毒の50〜90％が不活化されたときに反
応を停止させる第３項の製法。 ５ イー・コリ神経毒とグルタルアルデヒドの反
応をグルタルアルデヒドの濃度0.01Mにて、室温
で５分〜１時間行ない、未だ免疫原性を有する無
毒化イー・コリ神経毒を得る前記第３項または第
４項の製法。 ６ イー・コリ神経毒をグルタルアルデヒドと反
応させて得られ、不活性化レベルが90％以下であ
る無毒化され、かつ、免疫原性のイー・コリ神経
毒の有効量からなることを特徴とする子ブタ浮腫
病用ワクチン。 ７ 水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウ
ムからなる群から選ばれるアジユバント上に吸着
された、イー・コリ神経毒をグルタルアルデヒド
と反応させて得られ、不活性化レベルが90％以下
である無毒化され、かつ、免疫原性のイー・コリ
神経毒の有効量からなることを特徴とする子ブタ
浮腫病用ワクチン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US354880 | 1982-03-04 | ||
| US06/354,880 US4465665A (en) | 1982-03-04 | 1982-03-04 | Detoxified E. coli neurotoxin, preparation thereof and immunological preparations containing it |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58162532A JPS58162532A (ja) | 1983-09-27 |
| JPS644492B2 true JPS644492B2 (ja) | 1989-01-25 |
Family
ID=23395298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58031713A Granted JPS58162532A (ja) | 1982-03-04 | 1983-02-26 | 無毒化イ−・コリ神経毒、その製法およびそれを含有する免疫学的調製物 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4465665A (ja) |
| EP (1) | EP0088302B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58162532A (ja) |
| AT (1) | ATE17083T1 (ja) |
| AU (1) | AU550303B2 (ja) |
| CA (1) | CA1188220A (ja) |
| DE (1) | DE3361597D1 (ja) |
| DK (1) | DK158033C (ja) |
| ES (1) | ES8403725A1 (ja) |
| GR (1) | GR77912B (ja) |
| IE (1) | IE54590B1 (ja) |
| PH (1) | PH19648A (ja) |
| PT (1) | PT76178A (ja) |
| ZA (1) | ZA831501B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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