JPH0132240B2

JPH0132240B2 -

Info

Publication number: JPH0132240B2
Application number: JP56168511A
Authority: JP
Inventors: Aaru Nuusutatsudo Baanaado; Etsuchi Goorudo Erya; Emu Sumisu Erizabesu
Original assignee: Schering Plough Corp
Current assignee: Schering Plough Corp
Priority date: 1980-10-23
Filing date: 1981-10-21
Publication date: 1989-06-29
Also published as: US4808573A; JPS57112359A; US4587258A; ZA817261B

Description

【発明の詳細な説明】本発明はカルボキシルアルキルジペプチドに関
する。カルボキシアルキルジペプチドはアンギオ
テンシン変換酵素の阻害剤として、また、抗高血
圧剤として有用である。本発明の化合物は次式の化合物およびその薬
学的に受容できる塩類である。（式中、Ｒはヒドロキシまたは低級アルコキシ
であり； R¹はフエニル置換低級アルキルであり； R²は水素であり； R³は水素または低級アルキルであり； R⁴及びR⁵は、R⁴とR⁵がそれぞれ結合している
炭素及び窒素原子と一緒になて、【式】または【式】であり； R⁶はヒドロキシであり； R⁷は水素である）特に好ましいのは、下記の化合物である。式の化合物は可能な限りの全ての立体異性体
を包含する。低級アルキルは特にことわらない限り、炭素原
子を１個〜６個有する直鎖および分枝鎖炭化水素
基から成る置換基を示す。例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチ
ル、ｔ―ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキ
シルまたはビニル、アリル、ブテニル等である。式の化合物において、R¹，R³およびR⁷が結
合される炭素原子は不斉炭素原子である。従つ
て、該化合物はジアステレオマーの形で、または
ジアステレオマーの混合物の形で存在する。一般に、次式【式】【式】および【式】で示される式の化合物のアミノ酸の部分構造は天然
のＬ―アミノ酸類の配置に最も近似しているので
好ましい配置である。通常、天然のＬ―アミノ酸
はＳ―配置を有する。特別な例外は天然のアミノ
酸のＬ―システインである。これはＲ―配置を有
する。本発明の化合物は下記の反応式示される様な一
種類以上の方法および副次的経路によつて製造で
きる。下記の縮合反応に関与しないアミノ、カル
ボキシ、メルカプト等の反応性基はカツプリング
反応に先立つて、ペプチド化学で標準的な方法に
よつて保護し、その後脱保護して所望の生成物を
得ることができる。換言すれば、下記の方法の記
載中の式で、Ｒ，R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶およ
びR⁷は式について定義したとおりのものであ
り、必要に応じて適当な保護基を有する。Ａ還元条件下で式のケト化合物を式の
ジペプチドと縮合させる：式のケト化合物は式のジペプチドと水
溶液、最適にはほぼ中性の水溶液中で、若しくは
適当な有機溶剤（例えば、CH₃OH）中で、例え
ば、水素化シアノホウ素ナトリウムのような還元
剤の存在下で縮合させることができ、斯くして式
の目的化合物を直接生成させることができる。
別法として、中間体のシツク塩基、エナミンまた
はアミノ―ルを接触的に還元し、式の化合物を
製造できる。例えば、パラジウム―炭素（例え
ば、10％Pd／Ｃ）またはラネー・ニツケルの存
在下で水素によつて接触還元する。この方法によ
り生成されるジアステレオマー生成物の比率は触
媒を適当に選択することによつて変化させること
ができる。Ｂ式のジペプチドを式XIIの化合物によつ
てアルキル化する：（式中、Ｘは塩素、臭素、沃素、アルカンスル
ホニルオキシまたはアレンスルホニルオキシであ
る。）この反応は塩基性条件下で、水中または有
機溶剤中で実施できる。Ｃ還元条件下で式のアミノ化合物を式
のケト化合物と縮合させる：この反応は前記の方法Ａについて述べた条件下
で行なわれる。Ｄ式のアミノ化合物を式の化合物に
よつてアルキル化する：（式中、Ｘは塩素、臭素、沃素、アルカンスル
ホニルオキシまたはアレンスルホニルオキシであ
る。）この反応は方法Ｂについて述べた条件下で
実施できる。Ｅ式XIのアミノ酸を式のアミノ酸と縮合
させる：この反応はペプチド化学で周知である。この反
応は例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド
（DCC）、ジフエニルホスホリルアジド（DPPA）
およびＮ，Ｎ―ジスクシニミジルカルボネートの
ような縮合剤の存在下でCH₃CN中において実施
できる。前記のようにＲ，R¹，R³，R⁴，R⁵，お
よびR⁶の中の反応性基をカツプリング反応実施
前に保護するが、式の化合物のアミノ基は例
えば、テトラエチルジホスフアイトによつて活性
化させることができ、および／または、式XIの
化合物のカルボキシ基は１―ヒドロキシベンゾト
リアゾール、その混合無水物（クロルカルボン酸
エステルから誘導）、そのアジドまたはジシクロ
ヘキシルカルボジイミドから誘導される中間体の
ような活性エステルの中間体によつて活性化させ
ることができる。この反応における出発化合物は公知化合物であ
り、および／または公知の方法によつて製造でき
る。式XIの化合物は例えば、式のケト化合
物を式のアミノ酸と、前記方法Ａで述べた条
件に従つて反応させることによつて製造できる。別法として、式XIの化合物は式の化合物
を式のケト酸と縮合させるか、または、前記方法Ｂで述べた条件下で式
の化合物と式XIIの化合物または式の化合物
と式の化合物を縮合させる。（式中、Ｘは方法Ｂで定義したとおりのもので
ある。）ことによつて製造できる。前記の方法Ａ〜Ｅのうちのいずれの方法によつ
て得られた式の化合物も当業界で公知の方法に
より別の式の化合物に変換できる。前記の方法
につづいて、公知の方法につて保護基を脱保護さ
せる。例えば、Ｒがアルコキシ（メチキシ、エト
キシ、ｔ―ブチルオキシ）である場合、保護基の
カルボキシ基は加水分解または水素添加によつて
脱保護される。加水分解は酸性条件下（例えば、
ハロゲン化水素酸またはトリフルオロ酢酸を使
用）、塩基性条件下もしくは光化学的加水分解手
段で実施できる。アミノ基は例えば、ホルミル、ｔ―ブトキシカ
ルボニル、カルボベンジルオキシ、トリフエニル
メチルおよびニトロフエニルスルフエニルのよう
な保護基で保護できる。これらの保護基は酸性条
件下、例えば、ハロゲン化水素酸および／または
トリフルオロ酢酸によつて除去できる。式の化合物において、R¹，R³およびR⁷に結
合している炭素原子は不斉炭素原子である。従つ
て、該化合物はジアステレオマーのような異性体
の形または、これらの異性体類の混合物の形で存
在する。前記の合成では出発物質としてラセミ
体、エナンチオマー、またはジアステレオマーを
使用できる。当業界で公知の分割方法によつてエ
ナンチオマー中間体を得ることができる。前記の
合成方法によつてジアステレオマー生成物は生成
される場合、該ジアステレオマー生成物は常用の
クロマトグラフ法または分別結晶法によつて分離
できる。本発明の化合物は各種の無機酸および有機酸な
らびに塩基と共に塩を形成する。これら塩類も本
発明の目的化合物である。このような塩類は例え
ば、アンモニウム塩類、ナトリウム塩およびカリ
ウム塩（好ましい塩である。）のようなアルカリ
金属塩類、カルシウムおよびマグネシウム塩類の
ようなアルカリ土類金属塩類、有機塩基による塩
類、例えば、ジシクロヘキシルアミン塩類、Ｎ―
メチル―Ｄ―グルカミン、アルギニン、リジン等
のようなアミノ酸による塩類などである。また、
有機酸および無機酸によつて塩類を生成させるこ
ともできる。例えば、HCl，HBr，H₂SO₄，
H₃PO₄，メタンスルホン酸、トルエンスルホン
酸、マレイン酸、フマール酸およびカンフルスル
ホン酸などを使用できる。非毒性で生理学的に受
容できる塩類が好ましい。しかし、これら以外の
塩類もまた、例えば、生成物の単離および精製に
有用である。前記のような塩類は常法によつて生
成できる。例えば、遊離酸または遊離塩基タイプ
の生成物を１当量以上の適当な塩基または酸と、
生成される塩が不溶性の溶剤または溶媒中、若し
くは、水のような溶剤中で反応させ、その後真空
中で溶剤を除去するか、または凍結乾燥させる
か、若しくは存在する塩のカチオンを別のカチオ
ンと適当なイオン交換樹脂で交換することによつ
て製造できる。本発明の化合物は、in vivo，in vitroのいず
れにおいても従来のアンギオテンシン阻害剤に比
べ、非常に高いアンギオテンシン阻害作用を有す
る。R⁴とR⁵がそれぞれ結合する炭素、窒素原子
と一緒になつて形成する環、すなわち
【式】および【式】が異なるだけの従来化合物と比較しても、その効果の差は顕著であ
る。例えば、１―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―
３―フエニルプロピル）―（Ｓ）―アラニル］オ
クタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール―２（Ｓ）
―カルボン酸（実施例１）と、従来化合物のＮ―
［１―（Ｓ）―カルボエトキシ―３―フエニルプ
ロピル］―（Ｓ）―アラニル―（Ｓ）―プロリン
のIC₅₀を比較すると、前者のIC₅₀は後者の1/15で
ある。本発明の化合物は有効なアンギオテンシン
阻害作用を有し、高血圧の治療に有用である。更に、本発明化合物の排泄は主として胆汁を経
由して糞便からなされ、従来の腎経由で尿中に排
泄する化合物に比し、腎への負担が少ないので腎
障害を有する高血圧症患者の治療にも用いること
ができる。本発明の化合物類は製剤用担体と組合わせるこ
とができ、また、、経口あるいは非経口投与に適
した様々な周知の剤形で投与することができる。
従つて、本発明の化合物は心臓脈管系疾患、特に
哺乳動物の高血圧の治療に有用な組成物とするこ
とができる。本発明の化合物の投与量は例えば、哺乳動物の
体重１Kgあたり約0.01〜約30mg、好ましくは約
0.1〜約10mgである。これを１回または数回にわ
けて投与する。投与すべき正確な投与量は前記に
例示した範囲内にある特定の化合物、患者の年
令、体重および状態に依存する。一般的に、人間
を治療する場合、本発明の化合物は前記のような
治療を必要とする患者に５〜500mgの範囲内の投
与量で通常、数回投与できる。従つて、１日あた
りの総日用量が５〜2000mgとなる。また、本発明
の化合物は利尿剤または他の抗高血圧剤と併用で
きる。例えば、併用剤を構成する各薬剤の投与量
が、その薬剤に指示された最小薬用量の1/5量か
らその薬剤を単独で使用する場合の各薬剤の指示
された最大薬用量までの範囲内であるようにして
併用できる。このような利尿剤または他の抗高血圧剤は例え
ば、ヒドロクロロサイアザイド、エタクリン酸、
アミロライド、フロセミド、プロパロノール、チ
モロール、メチルドーパおよびクロロサイアザイ
ドなどである。本発明の化合物を含有する組成物は好ましくは
単位投与量あたり活性化合物を約５〜約250mg含
有する。本発明の医薬組成物は経口投与すること
が最も好ましい。経口投与用の代表的な製剤は例
えば、錠剤、カプセル剤、シロツプ剤、エリキシ
ル剤または懸濁液剤などである。代表的な注射製
剤は溶液および懸濁注射剤である。前記の製剤で使用するための代表的な受容でき
る製剤用担体は例えば、乳糖、白糖、マンニトー
ルおよびソルビトールのような糖類；トウモロコ
シデンプン、タピオカデンプン、およびバレイシ
ヨデンプンのようなデンプン類；カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよ
びメチルセルロースのようなセルロースおよびそ
の誘導体類；リン酸二カルシウムおよびリン酸三
カルシウムのようなリン酸カルシウム類；硫酸ナ
トリウム；硫酸カルシウム；ポリビニルピロリド
ン；ポリビニルアルコール；ステアリン酸；ステ
アリン酸マグネシウムおよびステアリン酸のアル
カリ土類金属塩類；落花生油、綿実油、ゴマ油、
オリーブ油およびトウモロコシ油のような植物油
類；非イオン界面活性剤、カチオン界面活性剤お
よびアニオン界面活性剤；エチレングリコールポ
リマー類；β―サイクロデキストリン；脂肪アル
コール類および水解穀粉類；ならびに、製剤中で
常用される、その他の混和性希釈剤、結合剤、崩
壊剤、緩衝剤、保存剤、酸化防止剤、滑沢剤、着
香剤などのような添加剤などである。以下、実施例をあげて本発明の化合物の製造を
例証する。下記の実施例で述べたようにして製造
されるジアステレオマーはカラムクロマトグラフ
または分別結晶によつて単離できる。実施例１１―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―３―フエニ
ルプロピル）―（Ｓ）―アラニル］オクタヒド
ロシクロペンタ［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カ
ルボン酸 (A) ２―ケトオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピ
ロールをテトラヒドロフラン中で水素化アルミ
ニウムリチウムで還元することによつて製造し
たオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロールお
よび酢酸水銀を10％酢酸水溶液中で還流させな
がら20時間加熱した。この生成物を水に溶解さ
せ、シアン化カリウムで処理し、続いて2N塩
酸で０℃で２時間、また、室温で20時間処理
し、１―シアノーオクタヒドロシクロペンタ
［ｂ］ピロールを得た。このシアノ化合物を6N
塩酸中で還流させながら６時間加熱し、続いて
この反応混合物を濃縮し、残留物をXAD―２
樹脂カラムに吸収させた。メタノールで溶離
し、オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール
―２―カルボン酸を得た。 (B) 前記工程(A)で述べたようにして製造された酸
をエタノールでエステル化することによつて製
造したオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロー
ル―２―カルボン酸エチルを酢酸エチルにとか
して作つた溶液にＮ―ベンジルオキシカルボニ
ル―（Ｓ）―アラニン、Ｎ―ヒドロキシスクシ
ンイミドエステルを添加した。この反応混合物
を室温で20時間攪拌し、真空中で濃縮した。残
留物をシリカゲル（3000ｇ，60〜200メツシユ）
の入つたカラムに入れクロロホルム／酢酸エチ
ル（10対１）混液で溶離し、１―［Ｎ―ベンジ
ルオキシカルボニル―（Ｓ）―アラニル］―オ
クタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール―２
（Ｒ）―カルボン酸、エチルエステルおよび１
―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―（Ｓ）―
アラニル］オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピ
ロール―２（Ｓ）―カルボン酸、エチルエステ
ルを得た。 (C) １―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］オクタヒドロシクロペンタ
［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カルボン酸、エチル
エステルをメタノールにとかして作つた溶液に
2.5N水酸化ナトリウムを添加し、この混合物
を室温で18時間攪拌した。この混合物をチツ素
雰囲気下で濃縮し、残留物を氷水で希釈し、次
いで、この混合物を濃塩酸で酸性化させた。こ
の水溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を硫酸
マグネシウムで乾燥させた。有機相を濃縮し、
残留物をシリカゲル（500ｇ，60〜200メツシ
ユ）カラムに入れクロロホルム／氷酢酸（９：
１）混液で溶離し、１―［Ｎ―ベンジルオキシ
カルボニル―（Ｓ）―アラニル］オクタヒドロ
シクロペンタ［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カル
ボン酸を得た。 (D) １―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］―オクタヒドロシクロペン
タ［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カルボン酸をメ
タノールに溶解させた。10％パラジウム／炭素
を添加し、反応混合物を大気圧で水素化させ
た。混合物を過し、真空中で濃縮し、１―
［（Ｓ）―アラニル］オクタヒドロシクロペンタ
［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カルボン酸を得た。 (E) 前記工程(D)で得られた１―［（Ｓ）―アラニ
ル］オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール
２（Ｓ）カルボン酸を無水エタノールに溶解さ
せた。２―オキソ―４―フエニル酪酸、エチル
エステルおよび３Å分子篩ペレツトを添加し、
得られた混合物を室温で18時間攪拌した。反応
混合物を過し、液や水素化シアノホウ素ナ
トリウムで室温で２時間処理した。混合物をチ
ツ素雰囲気下で濃縮し、生成物を希塩酸で希釈
し、室温で１時間攪拌した。この水溶液を
XAD―２（ローム・アンド・ハース社製樹脂）
に吸収させた。この樹脂を初めに水で溶離し、
次いで、メタノールで溶離した。メタノール溶
出液を濃縮し、残留物をシリカゲル（400ｇ，
60〜200メツシユ）カラムに入れ、クロロホル
ム／イソプロパノール／７％水酸化アンモニウ
ム（１：１：１）混液の有機層で溶離し、無色
の油状物である１―［Ｎ―（１―カルボエトキ
シ―３―フエニルプロピル）―（Ｓ）―アラニ
ル］オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール
２（Ｓ）カルボン酸を得た。［α］²⁶ _D−5.8℃（エ
タノール）実施例２１―［Ｎ―（１―カルボキシ―３―フエニルプ
ロピル）―（Ｓ）―アラニル］オクタヒドロシ
クロペンタ［ｂ］ピロール―２（Ｓ）―カルボ
ン酸実施例１に述べたようにして製造したエステル
のメタノール溶液に2.5N水酸化ナトリウムを添
加した。３時間後、反応混合物を濃縮し、XAD
―２樹脂カラムに吸収させ、初めに水で溶離し、
次いでメタノールで溶離した。メタノール溶出液
を濃縮し残留物を得た。この残留物をシリカゲル
カラムに吸収させ、クロロホルム／メタノール／
14％水酸化アンモニウム（１：１：１）混液で溶
離した。所望の溶出液画分を濃縮し標記の化合物
を得た。ｍ／ｅ＝388amu 実施例３１―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―３―フエニ
ルプロピル）―（Ｓ）―アラニル］―オクタヒ
ドロシクロペンタ［ｂ］ピロール２（Ｒ）―カ
ルボン酸実施例１で述べた方法と同様にして、無色油状
物として標記の化合物を製造した。［α］²⁶ _D−2.4゜
（エタノール）実施例４７―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―３―フエニ
ルプロピル）―（Ｓ）―アラニル］―１，４―
ジチア―７―アザスピロ［４，４］ノナン―８
（Ｓ）―カルボン酸 (A) １―ベンジルオキシカルボニル―４―ケト―
（Ｓ）―プロリン、メチルエステル7.0ｇを氷酢
酸75mlに溶解させた。ｐ―トルエンスルホン酸
0.7ｇおよび１，２―エタンジオール2.8ｇを添
加し、還流温度で攪拌しながら18時間加熱し
た。この反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水
溶液に添加し、そして、酢酸エチルで抽出し
た。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃
縮した。残留物をシリカゲル（300ｇ，60〜200
メツシユ）カラムに入れ、ヘキサン／酢酸エチ
ル（１：１）混液で溶離し、黄色の油状物であ
る７―ベンジルオキシカルボニル―１，４―ジ
チア―７―アザスピロ［４，４］ノナン―８
（Ｓ）―カルボン酸、メチルエステルを得た。
［α］²⁶ _D−12.6゜（ジオキサン） (B) ７―ベンジルオキシカルボニル―１，４―ジ
チア―７―アザスピロ［４，４］ノナン―８
（Ｓ）―カルボン酸、メチルエステル3.0PHを20
％臭化水素酸の氷酢酸溶液20mlに溶解させ、攪
拌しながら、この反応混合物をジエチルエーテ
ル中に０〜５℃で滴下して加え、かつ色の固形
分である１，４―ジチア―７―アザスピロ
［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、メチル
エステル、臭化水素酸塩を得た。m.p.156〜158
℃ (C) 前記工程(B)で得られた１，４―ジチア―７―
アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン
酸、メチルエステル、臭化水素酸塩を
0.1NNaOHに溶解させ、酢酸エチルで抽出し
た。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真
空中で濃縮し、１，４―ジチア―７―アザスピ
ロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、メチ
ルエステル（1.35ｇ）を得た。これを酢酸エチ
ル100mlに溶解させ、Ｎ―ベンジルオキシカル
ボニル―（Ｓ）―アラニル、Ｎ―ヒドロキシス
クシンイミドエステル2.07ｇで処理した。この
反応混合物を室温で18時間攪拌し、真空中で濃
縮した。残留物をシリカゲル（300ｇ、60〜200
メツシユ）カラムに入れ、ヘキサン／酢酸エチ
ル（４：１）混液で溶離し、黄色の油状物であ
る、７―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチア―７―ア
ザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン
酸、メチルエステルを得た。［α］²⁶ _D−14.8゜（エ
タノール） (D) ７―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチア―７―ア
ザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン
酸、メチルエステル1.05ｇをメタノール100ml
に溶解させた。2.5N水酸化ナトリウム10mlを
添加し、この混合物を室温で16時間攪拌した。
この混合物をチツ素雰囲気下で濃縮し、得られ
た油状物を0.1N水酸化ナトリウムに溶解させ、
氷水で希釈した。この水溶液を酢酸エチルで抽
出した。水溶液を濃塩酸で酸性化させ、次い
で、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグ
ネシウムで乾燥させ、濃縮した。残留物をシリ
カゲル（100ｇ，60〜200メツシユ）カラムに入
れ、クロロホルム／氷酢酸（19:1）混液で溶難
し、７―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチア―７―ア
ザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ―カルボン酸を
得た。［α］²⁶ _D−15.8゜（エタノール） (E) ７―［Ｎ―ベンジルオキシカルボニル―
（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチア―７―ア
ザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸
を20％臭化水素酸塩の氷酢酸溶液20mlに溶解さ
せ、の混合物を室温で２時間攪拌した。この混
合物を０〜５℃でジエチルエーテルに滴下して
加え、７―［（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジ
チア―７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）
―カルボン酸、臭化水素酸塩を得た。この化合
物を下記の工程(F)でそのまま使用した。 (F) 前記の工程(E)で製造した７―［（Ｓ）―アラ
ニル］―１，４―ジチア―７―アザスピロ
［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、臭化素
酸塩を無水メタノール100mlに溶解させた。２
―オキソ―４―フエニル酪酸、エチルエステル
0.5ｇおよび３Å分子篩ペレツト10mlを添加し、
この混合物を室温で18時間攪拌した。この反応
混合物を過し、液を水素化シアノホウ素ナ
トリウム0.30ｇで室温で２時間処理した。この
混合物をチツ素雰囲気下で濃縮し、得られた油
状物を５％塩酸でPH２〜４まで希釈し、室温で
１時間攪拌した。溶液のPHを2.5N水酸化ナト
リウム溶液でPH８にあわせ、この溶液をXAD
―２樹脂150mlに吸着させた。樹脂を水80ml、
次いでメタノール80mlで溶離した。メタノール
溶液を濃縮し、残留物をシリカゲル（100ｇ，
60〜200メツシユ）カラムに入れ、クロロホル
ム／イソプロパノール／７％水酸化アンモニウ
ム（１：１：１）混液の有機相で溶離し、白色
の固形物である７―［Ｎ―（１―カルボエトキ
シ―３―フエニルプロピル）―（Ｓ）―アラニ
ル］―１，４―ジチア―７―アザスピロ［4.4］
ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸を得た。m.p.56
〜60℃、［α］²⁶ _D−25.5゜（エタノール）。実施例５７―［Ｎ―（１―カルボキシ―３―フエニルプ
ロピル）―（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチ
ア―７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―
カルボン酸実施例４で述べたようにして製造した７―［Ｎ
―（１―カルボエトキシ―３―フエニルプロピ
ル）―（Ｓ）―アラニル］―１，４―ジチア―７
―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン
酸0.18ｇをメタノール600ml中で2.5N水酸化ナト
リウム10mlで加水分解し、反応混合物を濃縮し、
残留物をXAD―２樹脂カラムに吸収させ、初め
に水、次いで、メタノールで溶離させた。メタノ
ール溶出液を濃縮し、残留物を得た。これをシリ
カゲルカラム（100ｇ，60〜200メツシユ）に吸収
させた。このカラムをクロロホルム／メタノー
ル／14％水酸化アンモニウム（１：１：１）混液
で溶離し、所望の溶出液画分を濃縮して標記の化
合物を得た。ｍ，p.115〜117℃，［α］²⁶ _D−2.4゜
（H₂O），＋1.9（エタノール）。実施例６７―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―３―フエニ
ルプロピル）グリシル］―１，４―ジチア―７
―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボ
ン酸 (A) 実施例４で述べたように、１―ベンジルオキ
シカルボニル―４―ケト―（Ｓ）―プロリン、
エチルエステル（酸をエタノール中でエステル
化させることによつて製造した）を１，２―エ
タンジオールと反応させ、黄色の油状物である
７―ベンジルオキシカルボニル―１，４―ジチ
ア―７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―
カルボン酸、エチルエステルを得た。［α］²⁶ _D−
21.0゜（エタノール） (B) 前記工程(A)で述べたようにして製造された７
―ベンジルオキシカルボニル―１，４―ジチア
―７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カ
ルボン酸、エチルエステル2.22ｇを実施例４で
述べたようにして１，４―ジチア―７―アザス
ピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、エ
チルエステルに変換し、この化合物を実施例４
で述べたようにしてＮ―ベンジルオキシカルボ
ニルグリシン、Ｎ―ヒドロキシスクシンイミド
エステル1.5ｇとカツプリングさせ、黄色の油
状物である７―（Ｎ―ベンジルオキシカルボニ
ルグリシル）―１，４―ジチア―７―アザスピ
ロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、エチ
ルエステルを得た。［α］²⁶ _D−21.0゜ (C) 前記工程(B)で述べたようにして製造された７
―（Ｎ―ベンジルオキシカルボニルグリシル）
―１，４―ジチア―７―アザスピロ［4.4］ノ
ナン―８（Ｓ）―カルボン酸、エチルエステル
を実施例４で述べたようにして水酸化ナトリウ
ムで加水分解し、無色の油状物である７―（Ｎ
―ベンジルオキシカルボニルグリシル）―１，
４―ジチア―７―アザスピロ［4.4］ノナン―
８（Ｓ）―カルボン酸を得た。［α］²⁶ _D−7.9゜ (D) 前記工程(C)で述べた方法で得られた酸0.95ｇ
を実施例４で述べたように20％臭化水素酸の氷
酢酸溶液で処理し、７―グリシル―１，４―ジ
チア―７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）
―カルボン酸、臭化水素酸塩を得た。［α］²⁶ _D
18.7゜ (E) 前記工程(D)で述べたようにして製造された７
―グリシル―１，４―ジチア―７―アザスピロ
［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボン酸、臭化水
素酸塩0.76ｇを実施例４で述べたようにして２
―オキソ―４―フエニル酪酸、エチルエステル
0.50ｇとカツプリングさせ淡褐色油状物である
７―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―３―フエニ
ルプロピル）グリシジル］―１，４―ジチア―
７―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カル
ボン酸を得た。［α］²⁶ _D−39.0 製造された７―［Ｎ―（１―カルボエトキシ―
３―フエニルプロピル）グリシル］―１，４―ジ
チア―７―アザスピロ［4.4］―ノナン―８（Ｓ）
―カルボン酸を実施例５で述べたようにして水酸
化ナトリウムで加水分解し、７―［Ｎ―（１―カ
ルボキシ―３―フエニルプロピル）グリシル］―
１，４―ジチア―７―アザスピロ［4.4］ノナン
―８（Ｓ）―カルボン酸を得た。実施例に示した以外の、下記の化合物について
も、同様にして製造することができきる。７―［Ｎ―（１―カルボメトキシ―３―フエニ
ルプロピル）グリシル］―１，４―ジチア―７
―アザスピロ［4.4］ノナン―８（Ｓ）―カルボ
ン酸試験例１実施例４の化合物の1/2水和物と、従来の化合
物Ｎ―［１―（Ｓ）―カルボエトキシ―３―フエ
ニルプロピル］―（Ｓ）―アラニル―（Ｓ）―プ
ロリン（エナラプリル、No.１）のマレイン酸塩に
ついてID₅₀（μｇ／Kg）を求めた。各化合物の構
造式は次の通りである。 ID₅₀（μｇ／Kg）とは、麻酔された正常血圧ラ
ツトにおいて、静脈内アンギオテンシンに対す
る血圧増進応答を50％まで抑制するのに必要な静
脈内投与量（平均値）である。各化合物について
３〜11匹のラツトを用いた。得られたID₅₀を表１に示す。【表】上記に示した通り、本発明の化合物は化合物１
の約1/3のID₅₀であり、少ない投与量で血圧の上
昇を抑制できる。試験例２本発明の二酸化合物（実施例５）の1/2水和物
と、同じく二酸化合物である、Ｎ―（１―カルボ
キシ―３―フエニルプロピル）―（Ｓ）―アラニ
ル―（Ｓ）―プロリン（No.２）の1/2水和物のin
vitroにおけるアンギオテンシン変換酵素
（ACE）の阻害作用を比較した。各化合物の構造
式は下記の通りである。阻害活性はクツシユマン（Cushman）とチエ
ング（Cheung）の方法（クツシユマン，D.W.，
チエング，H.S.Biochem.Pharmacol.，1971，
20，1673.）によつて測定した。粗ACEを家兎肺アセトン粉末（シグマ社）10
ｇを50mMリン酸カリウム緩衝液（PH8.3）100ml
中に混合し、40000ｇで40分間遠心分離して調製
した。澄明な上清を冷蔵庫内に保存した。ACE
によるヒプリルーＬ―ヒスチジル―Ｌ―ロイシン
（HHL；シグマ社から入手）加水分解の分光光度
検定のためのインキユベーシヨンを使い捨ての13
×100mmの試験管中で37℃で行つた。各検定試料
0.25mlは表示された最終濃度で次の成分を含んで
いる：リン酸カルシウム緩衝液（PH8.3） 100mM NaCl 300mM HHL 5mM 反応を開始させるために容量0.1mlの酵素を最
後に加え、試験管を30分間インキユベートした。
0.1N HCl0.25mlの添加によつて酵素反応を停止
した；０時間コントロール用には酵素の前にHCl
を加えた。HHLに対するACEの反応によつて生
成されたヒプル酸を15秒間渦状攪拌をすることに
よつて酢酸エチル（EtO Ac）1.5mlで抽出した。
短時間遠心分離をした後に、EtOAc層のアリコ
ート1.0mlを清浄な試験管に移し、テンプ―ブロ
ツクモジユールヒーター（Temp―Block
module heater）中で30分間120℃で加熱して蒸
発させた。ヒプル酸を水1.0mlに再溶解し、
228mμにおける吸収率から生成された量を測定し
た。阻害活性はID₅₀（コントロールACE活性の50
％抑制をひきおこすのに必要とされた化合物の適
当なモル濃度）で求めた。得られたI₅₀nMを表２に示した。【表】本発明の化合物は従来の化合物（No.２）の4/10
のIC₅₀値であつた。試験に用いた２種の化合物は前記構造式から明
らかなように本発明化合物は、従来化合物のプロ
リン環【式】が【式】にかわつたものであるが、その効果は上記のとおり、従来化合物に
比し非常に高いACE阻害作用を有する。試験例３下記構造を有する本発明（実施例１）および同
じく一酸化合物である前記のNo.１の化合物のin
vitroでのACE抑制活性（IC₅₀）を求めた。【表】方法はクツシユマンとチエングの方法を用い
た。各化合物のDMSO溶液10μを、リン酸カリ
ウム115mmol／中にNaCl750mmol／を含む
緩衝液（PH8.3）40μとリン酸カリウム緩衝液
（PH8.3）115mmol／中の³H―HHL（Fa.
Paesel，西ドイツ、フランクフルト市）40μに
加えた。家兎肺から調製したACE20μによつて
反応を開始させた。37℃で60分間反応させた後、
0.1N HCl／mlで反応を停止させた。溶液を酢酸
エチル１mlと４〜５秒間渦状混合することにより
³H―ヒプル酸を抽出した。10分間遠心分離した
後、上清200μをシンチレーシヨンカクテル10
mlに加えた。抽出された放射活性ヒプル酸を
Tricarb シンチレーシヨンカウンター2660（パ
ツカード・インスツルメント、西ドイツ、フラン
クフルト市）を用いて計測した。得られたIC₅₀（nM）は表４の通りである。【表】以上のように本発明化合物は、従来の化合物の
約1/15のIC₅₀を有しており、極めてACE活性の抑
制能が大きいことが確められた。本発明化合物と、従来の化合物は構造中の環が
異なるだけであるが、【式】を本発明の【式】にかえることによつて顕著な効果の増加を得ることができる。試験例４本発明外化合物（エナラプリル）と本発明化合
物（スピラプリル）との生物学的差異実施例４の化合物（スピラプリル）のマレイン
酸塩と従来の化合物No.１（エナラプリル）のマレ
イン酸塩の吸収と排出を、イヌとラツトにおいて
当該医薬品の経口および静脈内投与の場合、並び
にヒトにおいて経口投与の場合について以下のよ
うな研究がされた。エナラプリルマレイン酸の経口的吸収はラツト
において約34％およびイヌにおいて61％であると
報告がある［D.J.トツコ（Tocco），Ｆ，A.デル
ナ（deLuna），A.E.W.ダンカン（Duncan），T.
C.バシル（Vassil）およびE.H.ウルム（Ulm）：
実験動物におけるエナラプリルマレイン酸塩の生
理学的性質および代謝：Drug Metabolism and
Disposition.10，15―19（1982）］。両医薬品ともに
主にエステル加水分解を経由して代謝され、対応
する二酸代謝物［エナラプリラツト
（endlaprilat）およびスピラプリラツト
（spiraprilat）］になる。２種の医薬品の間に主な
る相違は排出経路の点である。エナラプリルおよ
び／またはその代謝物は、ラツトおよびイヌに
¹⁴C―エナラプリルマレイン酸の静脈内投与の後、
主として腎経由で排出されることが示されてい
る。反対に、スピラプリルおよび／またはその代
謝物は、ラツトおよびイヌ両者に¹⁴C―ラピラプ
リルの静脈内投与の後、主として胆汁経由で排出
される（表５）。【表】ヒト（ボランテイア）にエナラプリルマレイン
酸塩の経口投与をした場合には、投与量の約60〜
77％（エナラプリル＋エナラプリラツトとして表
現）は尿中で再回収された。［A.E.チル（Till），
H.J.ゴメツ（Gomez），M.エケンス（Hichens），
J.A.ボログニーズ（Bolognese），W.R.マクナブ
（McNabb），B.A.ブロツクス（Brooks），F.ノー
ルモハメツド（Noor mohamed）およびA.F.ラ
ント（Lanh）：正常人におけるエナラプリルマレ
イン酸塩（MK―421）の反復経口投与の薬品運
動学（phamcokinetics），Biopharm.and Drug
Dispo.５，273―280（1984）］。尿排出が優勢であ
ることの結果として、血漿中の濃度の著しい上昇
と、腎障害のある患者における排出速度の低下が
表わされる［S.サリス（Saris），D.ロウエンター
ル（Lowenthal），L.クライン（Klein），J.D.ア
ーヴイン（Irvin），D.マーレル（Marrell），A.E.
テル（Till）、ヒケンズ（Hichens）およびK.E.
ハリス（Harris）腎疾患におけるエナラプリル
マレイン酸塩．Clin.Pharmacol.Therp.35，272
（1984）］。反対にヒト（ボランテイア）に¹⁴C―ス
ピラプリルの経口投与量の約40％だけが尿中に排
出された。排出経路故にエナラプリルマレイン酸とスピラ
プリルとの相違は、エナラプリルマレイン酸に比
較してスピラプリルの優れた腎性安全性という側
面をもたらす。以上のように本発明の化合物スピラプリルは、
従来の化合物エナラプリルマレイン酸（化合物
１）に比べ抗高血圧剤として優れている。

Claims

【特許請求の範囲】１次式の化合物またはその薬学的に受容でき
る塩。（式中、Ｒはヒドロキシまたは低級アルコキシ
であり； R¹はフエニル置換低級アルキルであり； R²は水素であり； R³は水素または低級アルキルであり； R⁴及びR⁵は、R⁴とR⁵がそれぞれ結合している
炭素及び窒素原子と一緒になつて、【式】または【式】であり； R⁶はヒドロキシであり； R⁷は水素である）２ R⁴及びR⁵は、R⁴とR⁵がそれぞれ結合してい
る炭素及び窒素原子と一緒になつて、【式】である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。３ R¹がフエニルエチルであり、R³がメチルで
ある、特許請求の範囲第１項または第２項記載の
化合物。４Ｒがヒドロキシまたはエトキシである、特許
請求の範囲第１〜３項のいずれか１項記載の化合
物。５である、特許請求の範囲第１〜４項のいずれか１
項記載の化合物。６である、特許請求の範囲第１〜４項のいずれか１
項記載の化合物。７である、特許請求の範囲第１項記載の化合物。