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JPH0134599B2 - - Google Patents
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JPH0134599B2 - - Google Patents

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JPH0134599B2
JPH0134599B2 JP56213193A JP21319381A JPH0134599B2 JP H0134599 B2 JPH0134599 B2 JP H0134599B2 JP 56213193 A JP56213193 A JP 56213193A JP 21319381 A JP21319381 A JP 21319381A JP H0134599 B2 JPH0134599 B2 JP H0134599B2
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JP
Japan
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trp
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escherichia coli
atcc
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Tatsuya Nishi
Tamio Mizukami
Tadashi Matsumoto
Tetsuo Oka
Koreaki Taniguchi
Haruo Sugano
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KH Neochem Co Ltd
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Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
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    • C07K14/565—IFN-beta
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明はヒトβ型インターフエロン（以下β−
IFNと略記する）をコードするDNAを含む組か
え体プラスミドおよびこれを用いるβ−IFNの製
造法に関する。 生物の遺伝情報の発現は、DNAを鋳型とした
RNAの合成、すなわち転写過程と、RNAを鋳型
としたポリペプチド合成、すなわち翻訳過程を含
む一連の生化学反応である。遺伝子組みかえに関
する研究技術が発達し、その産業への応用が可能
となつた現在、外来の遺伝子をプラスミドベクタ
ー上にいかにして組みこみ、どのようにして微生
物中で外来遺伝子上にコードされたポリペプチド
を効率よく合成させるかは重要な開発課題であ
る。 微生物、特に大腸菌において外来遺伝子を効率
よく発現させるため、これまでに種々の工夫がな
されている。まず転写の効率を高めるために、プ
ロモーター（RNAポリメラーゼによる転写開始
部位）としてlac系、trp系などが使用され、また
翻訳過程の効率を高めるために、シヤイン・ダル
ガノ配列（以下SD配列と略記する）と翻訳開始
部位との距離（通常３〜15塩基）を種々かえた組
みかえ体がつくられている〔ケイイチ・イタク
ラ、サイエンス（Science）第198巻、第1056〜第
1063頁（1977）、シーバーグ（A.H.Seeburg）
ら：ネイチヤー（Nature）276巻795−798頁
（1978）、マーシヤル（J.A.Martial）ら：サイエ
ンス（Science）205巻、602−607頁（1979）〕。上
記の例のうち多くのものは、タンパク質は２種類
以上のタンパク質からなる融合タンパク質として
生産されるので実用上問題がある。すでに直接イ
ンタクトなタンパク質をつくらせることも可能に
なつているが〔ゲーデル（David.V.Goeddel）
ら：ネイチヤー（Nature）281巻、544−548頁
（1979）、ゲーデルら：ネイチヤー（Nature）287
巻411−416頁（1980）、ゲーデルら：ニユクレイ
ツク・アシド・リサーチ（Nucleic Acid
Research）８巻4057−4074頁（1980）〕、この場
合は外来遺伝子をプロモーターの下流に翻訳開始
の遺伝暗号であるATGを付与して組みこむため
に特殊な合成DNAを中継ぎ役として使うために
不便である。本発明者らは、これら既知のプラス
ミドベクターがもつ難点を解消しえるベクターを
開発し、これらを用いてβ−IFNの大腸菌におけ
る効率よい発現を確認することにより、本発明を
完成するに至つた。 以下本発明を詳細に説明する。 本発明によれば大腸菌形質導入フアージ
（λcI857trp ED10）に由来する大腸菌トリプトフ
アンプロモーター（以下trpプロモーターと略記
する）とトリプトフアンリーダーペプチドのSD
配列の下流に制限酵素Cla部位とHind部位を
有するプラスミドベクターを造成し、上記２種の
制限酵素部位を用いて、合成DNAなどの中継ぎ
役を用いることなく、容易にβ−IFN遺伝子（構
造遺伝子のはじめにATGを有する。）を組みこ
み、しかもSD配列とβ−IFN遺伝子の翻訳開始
点との距離を種々変化させた組みかえ体を造成
し、これらの組みかえ体を用いて形質転換させた
大腸菌を培養することにより、極めて効率のよい
β−IFNの製造ができる。 大腸菌trpプロモーターを有するプラスミドベ
クターはいくつか知られているが〔ノーマン・ヘ
ンリー・ケアリーら：特開昭56−36500、ハルウ
エル（R.A.Hallewell）ら：ジーン（Gene）９巻
27−47頁（1980）、エムテジ（Emtage）ら：ネ
イチヤー（Nature）283巻171−174頁（1980）、
エドマン（J.C.Edman）ら：ネイチヤー
（Nature）291巻503−506頁（1981）〕本発明にか
かわるプラスミドベクターは、プロモーターと
SD配列の直後（０〜20塩基まで）にたとえばCla
部位、Hind部位、EcoR部位、BamH部
位、Pst部位などから選ばれる２種以上の制限
酵素部位を有し、しかもこれら制限酵素部位を用
いて外来遺伝子の翻訳開始点までの距離を調節す
ることにより翻訳の効率を高めることができる点
に特徴がある。 以下にプラスミドベクターの製造法につき詳細
をのべる。 trpプロモーター領域のDNA配列は既知であり
〔ベンネツト（G.N.Bennett）ら：J.Mol.Biol.121
113−137（1978）、リー（F.Lee）ら：J.Mol.
Biol.121 193−217（1978）〕第１図に示した。 目的とするtrpプロモーターを含有するプラス
ミドベクターは第１図のプロモーターおよびSD
配列を含むDNA断片（例えば第１図の１〜139塩
基まで）を pBR322、 pBR325、 pGA22、 p
ACYC184、 pACYC177などのベクターにクロー
ン化することによつて完成する。 trpプロモーターを含むDNAの供給源として、
トリプトフアンオペロンを運ぶ形質導入フアージ
（以下、λ ptrpと略記する）を用いる。このλ p
trpDNAから第１図に示したプロモーターとSD
配列を含むDNA断片のみを制限酵素を用いて直
接切り出すことはむずかしいので、第２図に示し
た３段階の過程を経てtrpプロモーターを有する
プラスミドベクターを造成する。以下(a)〜(d)にそ
のプラスミドベクターの造成法を述べる。 (a) λ ptrpDNAの精製 λ ptrpを大腸菌菌株に溶原化させた菌株を
培養しフアージの誘発を行なう。フアージ溶菌
液を常法により精製しλ ptrpDNAを得る。 (b) trpプロモーターのプラスミドへのクローニ
ング 上記のごとくして得たλ ptrpDNAを下記の
ごとく処理してtrpオペロンのクローニングを
行なう。
【表】 ↓ ↓

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ ヒトβ型インターフエロンをコードする
    DNA断片を３連結トリプトフアンプロモーター
    の下流に組み込んだ組かえ体プラスミドであつ
    て、Escherichia coli ILE−３ ATCC 39010か
    ら得られるプラスミドpLE−３、Escherichia
    coli ILV−１ ATCC 39025から得られるプラ
    スミドpLV−１およびEscherichia coli IMZ−
    ２ ATCC 39023から得られるプラスミドpMZ
    −２から選ばれる組かえ体プラスミド。
JP56213193A 1981-12-25 1981-12-25 ヒトβ型インタ−フエロン遺伝子を含む組みかえ体プラスミド Granted JPS58110600A (ja)

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