JPH0151998B2 - - Google Patents
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- JPH0151998B2 JPH0151998B2 JP60122769A JP12276985A JPH0151998B2 JP H0151998 B2 JPH0151998 B2 JP H0151998B2 JP 60122769 A JP60122769 A JP 60122769A JP 12276985 A JP12276985 A JP 12276985A JP H0151998 B2 JPH0151998 B2 JP H0151998B2
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- acid
- salt
- reaction
- cholic acid
- ketocholic
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明はコール酸（3α，7α，12α−トリヒドロ
キシ−5β−コラン酸）から、胆石溶解剤として
あるいは利胆剤ウルソデオキシコール酸（UDC）
の合成原料として有用なケノデオキシコール酸
（CDC）の製造中間体である12−ケト−3α，7α−
ジヒドロキシ−5β−コラン酸（以下12−ケトコ
ール酸と略称する）を、微生物を用いて効率よく
製造する方法に関する。 〔従来の技術〕 従来、微生物を用いてコール酸より12−ケトコ
ール酸を製造する方法には、アルスロバクター属
の微生物を用いる方法（特開昭57−8796号など）、
プレビバクテリウム属の微生物を用いる方法（特
開昭56−29998号など）などが公知である。本発
明者等もミクロコツカス属及びコリネバクテリウ
ム属に属する特定の微生物が培地中に添加された
コール酸塩より12−ケトコール酸塩を生成するこ
とを見出し特許出願をした（特願昭57−227487号
等）。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかし、これらのいずれの方法においても短時
間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得るの
は困難であり、本発明者等の知見によれば、微生
物の培養の際の培地中に直接コール酸塩を添加し
て培養し12−ケトコール酸塩を得る方法では、12
−ケトコール酸の生成速度、残存するコール酸の
量、得られる12−ケトコール酸の着色度合等にお
のずと限界があり、効率よい方法とは判断できな
い。本発明の目的は、高濃度のコール酸から短時
間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得るこ
とにある。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者等は、長年、コール酸から12−ケトコ
ール酸を生成する微生物及びその微生物を用いた
12−ケトコール酸の製造方法について研究を重ね
てきた。その結果、ミクロコツカス属に属する特
定の微生物を培養し、その菌体又は菌体を含む培
養液をホウ酸緩衝液の共存下にコール酸及び／又
はその塩と混合して反応させ、反応液中に12−ケ
トコール酸及び／又はその塩を生成せしめこれを
採取する方法により高収量、高純度の12−ケトコ
ール酸が得られることを知見し、本発明を完成す
るに到つた。 本発明で使用される微生物は、例えば、ミクロ
コツカスSD−101（微工研菌寄第6841号）及びそ
の突然変異株並びに遺伝子組替え株等が挙げられ
るが、特にこれらの微生物に限定するものでな
く、ミクロコツカス属に属する微生物でコール酸
及び／又はその塩より12−ケトコール酸及び／又
はその塩を生成するものであれば特に限定はな
い。 本発明で使用される培地は、前記微生物が培養
により増殖し得るものならば任意のものでよく、
例えば、炭素源としてはグルコース、フラクトー
ス、シユクロース、酢酸、エチルアルコール、グ
リセリンなど、窒素源としてペプトン、内エキ
ス、酵母エキス、コーンステイープリカー等の有
機窒素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の無機窒素が用いられる。また、このほかにリン
酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸
第一鉄、硫酸マンガン、硫酸マグネシウムなどの
無機塩が添加される。 本発明における培養は好気的条件下に例えば通
気撹拌法や往復振盪法によつて培養することがで
きる。温度は20〜38℃のいずれでもよいが、好ま
しくは22〜27℃が適当である。この範囲より低温
では微生物の生育速度が遅く、またこの範囲より
高温では、微生物がコール酸及び／又はその塩か
ら12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する
変換活性が著しく悪化する。培養時のPHは6.0〜
9.0のいずれでもよいが、好ましくは培養初期に
PH7.0〜8.0とし、或る程度培養が進んだ段階でPH
5.8〜6.2とすることが適当である。この範囲より
低PHでは微生物の生育速度が遅く、またこの範囲
より高PHでは微生物がコール酸及び／又はその塩
から12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る変換活性が悪化する。培養時間は８〜30時間程
度で実施する。 菌体は培養液を遠心分離などの方法で処理し、
集菌した後、あるいはさらに生理食塩水等で洗浄
したのち、コール酸及び／又はその塩を含む緩衝
液に懸濁してもよく、集菌せずに菌体の浮遊した
培養液とコール酸及び／又はその塩を含む緩衝液
を直接混合してもよい。得られる生成物は集菌の
のち懸濁して反応させたもののほうが着色が少な
いが、工業的には集菌せずに混合する方法がより
容易である。 本発明の変換反応時のコール酸及び／又はその
塩の濃度は５〜500ｇ／でよく、反応時間、操
作法などの条件を考慮し、10ｇ〜100ｇ／程度
が好ましい。緩衝液はホウ酸緩衝液、具体的には
ホウ酸〔オルトホウ酸（H3BO3）、メタホウ酸
（HBO2）、四ホウ酸（H2B4O7）等〕をその水溶
性塩類、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩等との混合液又はホウ酸と水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム
等との混合液が用いられる。反応時の濃度は10ミ
リモル／〜500ミリモル／の濃度で用いるの
が好ましい。ホウ酸、四ホウ酸又はそれらの塩の
添加により、副生物の生成は極めて低い割合にお
さえられる。尚、他の緩衝液、例えば、リン酸
塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタンの塩を
使用した場合、無使用の時よりは12−ケトコール
酸の収率は向上するが、副生物が少量生成し、ホ
ウ酸塩の使用程著しい効果は認められない。 交換反応時のPHは6.7〜9.0でよいが、特に、6.7
〜7.2の範囲が好ましい。ホウ酸緩衝液を用いた
場合でもこの範囲より高PHでは副生物が少量生成
する。一方、この範囲より低PHではコール酸が析
出し、変換活性が失なわれる。PHの調整は水酸化
ナトリウム等のアルカリ金属水酸化物の水溶液
と、塩酸、硫酸等の酸で行なう。変換反応時の温
度は20〜45℃でよいが、特に、35〜41℃の範囲が
好ましい。この範囲より低温では残存するコール
酸及び／又はその塩が多く、この範囲より高温で
は変換活性の失活が短時間で起こる。変換反応の
時間はコール酸濃度等の条件によつて異なるが２
〜72時間程度で実施する。 反応液からの生成物すなわち12−ケトコール酸
の回収は公知の方法によつて収率よく行なうこと
ができる。例えば、反応液のPHを酸の添加により
低下させ得られた12−ケトコール酸の沈澱をろ過
後、乾燥してもよく、PHを低下させた後、酢酸エ
チルなどの有機溶媒によつて12−ケトコール酸を
抽出した後、溶媒を留去してもよい。 〔作用〕 本発明においては、微生物をコール酸塩を含む
培地中で培養することなく、コール酸及び／又は
その塩を含まない培地中で培養し、その菌体をコ
ール酸及び／又はその塩を含む緩衝液に懸濁又は
混合し反応させる方法により、微生物のコール酸
及び／又はその塩から12−ケトコール酸及び／又
はその塩への変換活性を最も高らしめる条件での
培養を可能とし、また変換反応時の温度、PH等の
条件を正確に制御することを可能としたため、短
時間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得る
ことができるものである。 培養温度は22〜27℃の範囲でコール酸及び／又
はその塩から12−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する酵素の菌体内での合成が最も活発であ
るものと推定される。また培養時PHも5.8〜6.2で
当該酵素の合成が最も活発であると推定される。 また、変換反応温度については、高温ほどコー
ル酸又はその塩と12−ケトコール酸又はその塩と
の化学平衡が、12−ケトコール酸又はその塩側に
存在すると推定され、コール酸及び／又はその塩
から12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る酵素の至適温度が40℃付近であり、コール酸及
び／又はその塩から副生物を生成する酵素及び12
−ケトコール酸及び／又はその塩から副生物を生
成する酵素の至適温度は37℃より低温にあると考
えられる。 変換反応時のPHについては、コール酸及び／又
はその塩から12−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する酵素の至適PHが6.8付近に存在しコー
ル酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素
及び12−ケトコール酸及び／又はその塩から副生
物を生成する酵素の至適PHは7.2〜7.5にあるもの
と考えられる。 さらに、ホウ酸（オルトホウ酸、四ホウ酸等）
及び／又はその塩はPHが5.8〜6.2の範囲でコール
酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素及
び12−ケトコール酸及び／又はその塩から副生物
を生成する酵素を強く阻害するものと推定され
る。 〔効果〕 本発明によればミクロコツカス属に属する特定
の微生物を培養しその菌体あるいは菌体を含む培
養液をホウ酸緩衝液の共存下にコール酸及び／又
はその塩と混合して反応させることにより、高濃
度のコール酸及び／又はその塩より高収量、高純
度の12−ケトコール酸を得ることが可能である。
さらにまた、このような微生物菌体を一種の媒触
として用いる方法は、菌体のくり返しの使用によ
り経費の節減、あるいは他の微生物において公知
の方法による菌体の固定化などの可能性を強く示
唆するものである。 以下、本発明の実施例を示すが、本発明はこれ
に限定されるものではない。 実施例 １ 下記組成の培地を５ジヤーフアーメンターに
入れ、120℃、40分のオートクレーブ加熱滅菌を
行なつた。冷却後、２規定水酸化ナトリウム溶液
によりPHを7.2に調整し、無菌的にグルコース40
ｇを加えた。この培地に、予め同一培地で500ml
三角フラスコにより前培養しておいたミクロコツ
カスSD−101の培養液50mlを加え、25℃で24時間
培養した。菌の生育とともにPHは低下し、PH6.0
になつた時点から14％アンモニア水の添加を開始
し、PHを6.0〜6.2に保つた。次に、この培養液１
をとり、コール酸40ｇを含む200ミリモル／
のホウ酸緩衝液（PH7.0）１に加え、PHを7.0に
した。この反応液を37℃で26時間通気撹拌した
後、遠心分離した。上清のPHを１規定塩酸でPH２
まで際下させ、生成物を析出させた。吸引ろ過
後、風乾して12−ケトコール酸を得た。変換反応
の進行度合は、反応開始後各時間の反応液を下記
の方法で分析することにより確かめられた。結果
は表１に示す通りである。 培地組成 グルコース ２％（別に滅菌して添加） 硫酸アンモニウム 0.2％ リン酸水素１カリウム 0.2％ リン酸水素２カリウム 0.5％ 酵母エキス 0.2％ 硫酸マグネシウム 0.05％ 硫酸第一鉄 4ppm 硫酸マンガン 4ppm 水道水 分析方法 液体クロマトグラフによる定量。試料をCDC
を内部標準とした修正内部標準法及び単純面積百
分率法で定量した。 カラム；Shodex OPS pak F411 ポンプ；日本分光(株)製BIP−１型 デイテクタ；Shodex−RI SE−31型 移動相；75：25メタノール−水混合液、 リン酸0.02モル／ カラム温度；30℃ 送液；１ml／min 試料量；20μl
キシ−5β−コラン酸）から、胆石溶解剤として
あるいは利胆剤ウルソデオキシコール酸（UDC）
の合成原料として有用なケノデオキシコール酸
（CDC）の製造中間体である12−ケト−3α，7α−
ジヒドロキシ−5β−コラン酸（以下12−ケトコ
ール酸と略称する）を、微生物を用いて効率よく
製造する方法に関する。 〔従来の技術〕 従来、微生物を用いてコール酸より12−ケトコ
ール酸を製造する方法には、アルスロバクター属
の微生物を用いる方法（特開昭57−8796号など）、
プレビバクテリウム属の微生物を用いる方法（特
開昭56−29998号など）などが公知である。本発
明者等もミクロコツカス属及びコリネバクテリウ
ム属に属する特定の微生物が培地中に添加された
コール酸塩より12−ケトコール酸塩を生成するこ
とを見出し特許出願をした（特願昭57−227487号
等）。 〔発明が解決しようとする問題点〕 しかし、これらのいずれの方法においても短時
間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得るの
は困難であり、本発明者等の知見によれば、微生
物の培養の際の培地中に直接コール酸塩を添加し
て培養し12−ケトコール酸塩を得る方法では、12
−ケトコール酸の生成速度、残存するコール酸の
量、得られる12−ケトコール酸の着色度合等にお
のずと限界があり、効率よい方法とは判断できな
い。本発明の目的は、高濃度のコール酸から短時
間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得るこ
とにある。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者等は、長年、コール酸から12−ケトコ
ール酸を生成する微生物及びその微生物を用いた
12−ケトコール酸の製造方法について研究を重ね
てきた。その結果、ミクロコツカス属に属する特
定の微生物を培養し、その菌体又は菌体を含む培
養液をホウ酸緩衝液の共存下にコール酸及び／又
はその塩と混合して反応させ、反応液中に12−ケ
トコール酸及び／又はその塩を生成せしめこれを
採取する方法により高収量、高純度の12−ケトコ
ール酸が得られることを知見し、本発明を完成す
るに到つた。 本発明で使用される微生物は、例えば、ミクロ
コツカスSD−101（微工研菌寄第6841号）及びそ
の突然変異株並びに遺伝子組替え株等が挙げられ
るが、特にこれらの微生物に限定するものでな
く、ミクロコツカス属に属する微生物でコール酸
及び／又はその塩より12−ケトコール酸及び／又
はその塩を生成するものであれば特に限定はな
い。 本発明で使用される培地は、前記微生物が培養
により増殖し得るものならば任意のものでよく、
例えば、炭素源としてはグルコース、フラクトー
ス、シユクロース、酢酸、エチルアルコール、グ
リセリンなど、窒素源としてペプトン、内エキ
ス、酵母エキス、コーンステイープリカー等の有
機窒素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の無機窒素が用いられる。また、このほかにリン
酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸
第一鉄、硫酸マンガン、硫酸マグネシウムなどの
無機塩が添加される。 本発明における培養は好気的条件下に例えば通
気撹拌法や往復振盪法によつて培養することがで
きる。温度は20〜38℃のいずれでもよいが、好ま
しくは22〜27℃が適当である。この範囲より低温
では微生物の生育速度が遅く、またこの範囲より
高温では、微生物がコール酸及び／又はその塩か
ら12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成する
変換活性が著しく悪化する。培養時のPHは6.0〜
9.0のいずれでもよいが、好ましくは培養初期に
PH7.0〜8.0とし、或る程度培養が進んだ段階でPH
5.8〜6.2とすることが適当である。この範囲より
低PHでは微生物の生育速度が遅く、またこの範囲
より高PHでは微生物がコール酸及び／又はその塩
から12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る変換活性が悪化する。培養時間は８〜30時間程
度で実施する。 菌体は培養液を遠心分離などの方法で処理し、
集菌した後、あるいはさらに生理食塩水等で洗浄
したのち、コール酸及び／又はその塩を含む緩衝
液に懸濁してもよく、集菌せずに菌体の浮遊した
培養液とコール酸及び／又はその塩を含む緩衝液
を直接混合してもよい。得られる生成物は集菌の
のち懸濁して反応させたもののほうが着色が少な
いが、工業的には集菌せずに混合する方法がより
容易である。 本発明の変換反応時のコール酸及び／又はその
塩の濃度は５〜500ｇ／でよく、反応時間、操
作法などの条件を考慮し、10ｇ〜100ｇ／程度
が好ましい。緩衝液はホウ酸緩衝液、具体的には
ホウ酸〔オルトホウ酸（H3BO3）、メタホウ酸
（HBO2）、四ホウ酸（H2B4O7）等〕をその水溶
性塩類、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩等との混合液又はホウ酸と水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム
等との混合液が用いられる。反応時の濃度は10ミ
リモル／〜500ミリモル／の濃度で用いるの
が好ましい。ホウ酸、四ホウ酸又はそれらの塩の
添加により、副生物の生成は極めて低い割合にお
さえられる。尚、他の緩衝液、例えば、リン酸
塩、トリスヒドロキシメチルアミノメタンの塩を
使用した場合、無使用の時よりは12−ケトコール
酸の収率は向上するが、副生物が少量生成し、ホ
ウ酸塩の使用程著しい効果は認められない。 交換反応時のPHは6.7〜9.0でよいが、特に、6.7
〜7.2の範囲が好ましい。ホウ酸緩衝液を用いた
場合でもこの範囲より高PHでは副生物が少量生成
する。一方、この範囲より低PHではコール酸が析
出し、変換活性が失なわれる。PHの調整は水酸化
ナトリウム等のアルカリ金属水酸化物の水溶液
と、塩酸、硫酸等の酸で行なう。変換反応時の温
度は20〜45℃でよいが、特に、35〜41℃の範囲が
好ましい。この範囲より低温では残存するコール
酸及び／又はその塩が多く、この範囲より高温で
は変換活性の失活が短時間で起こる。変換反応の
時間はコール酸濃度等の条件によつて異なるが２
〜72時間程度で実施する。 反応液からの生成物すなわち12−ケトコール酸
の回収は公知の方法によつて収率よく行なうこと
ができる。例えば、反応液のPHを酸の添加により
低下させ得られた12−ケトコール酸の沈澱をろ過
後、乾燥してもよく、PHを低下させた後、酢酸エ
チルなどの有機溶媒によつて12−ケトコール酸を
抽出した後、溶媒を留去してもよい。 〔作用〕 本発明においては、微生物をコール酸塩を含む
培地中で培養することなく、コール酸及び／又は
その塩を含まない培地中で培養し、その菌体をコ
ール酸及び／又はその塩を含む緩衝液に懸濁又は
混合し反応させる方法により、微生物のコール酸
及び／又はその塩から12−ケトコール酸及び／又
はその塩への変換活性を最も高らしめる条件での
培養を可能とし、また変換反応時の温度、PH等の
条件を正確に制御することを可能としたため、短
時間で高収量、高純度の12−ケトコール酸を得る
ことができるものである。 培養温度は22〜27℃の範囲でコール酸及び／又
はその塩から12−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する酵素の菌体内での合成が最も活発であ
るものと推定される。また培養時PHも5.8〜6.2で
当該酵素の合成が最も活発であると推定される。 また、変換反応温度については、高温ほどコー
ル酸又はその塩と12−ケトコール酸又はその塩と
の化学平衡が、12−ケトコール酸又はその塩側に
存在すると推定され、コール酸及び／又はその塩
から12−ケトコール酸及び／又はその塩を生成す
る酵素の至適温度が40℃付近であり、コール酸及
び／又はその塩から副生物を生成する酵素及び12
−ケトコール酸及び／又はその塩から副生物を生
成する酵素の至適温度は37℃より低温にあると考
えられる。 変換反応時のPHについては、コール酸及び／又
はその塩から12−ケトコール酸及び／又はその塩
を生成する酵素の至適PHが6.8付近に存在しコー
ル酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素
及び12−ケトコール酸及び／又はその塩から副生
物を生成する酵素の至適PHは7.2〜7.5にあるもの
と考えられる。 さらに、ホウ酸（オルトホウ酸、四ホウ酸等）
及び／又はその塩はPHが5.8〜6.2の範囲でコール
酸及び／又はその塩から副生物を生成する酵素及
び12−ケトコール酸及び／又はその塩から副生物
を生成する酵素を強く阻害するものと推定され
る。 〔効果〕 本発明によればミクロコツカス属に属する特定
の微生物を培養しその菌体あるいは菌体を含む培
養液をホウ酸緩衝液の共存下にコール酸及び／又
はその塩と混合して反応させることにより、高濃
度のコール酸及び／又はその塩より高収量、高純
度の12−ケトコール酸を得ることが可能である。
さらにまた、このような微生物菌体を一種の媒触
として用いる方法は、菌体のくり返しの使用によ
り経費の節減、あるいは他の微生物において公知
の方法による菌体の固定化などの可能性を強く示
唆するものである。 以下、本発明の実施例を示すが、本発明はこれ
に限定されるものではない。 実施例 １ 下記組成の培地を５ジヤーフアーメンターに
入れ、120℃、40分のオートクレーブ加熱滅菌を
行なつた。冷却後、２規定水酸化ナトリウム溶液
によりPHを7.2に調整し、無菌的にグルコース40
ｇを加えた。この培地に、予め同一培地で500ml
三角フラスコにより前培養しておいたミクロコツ
カスSD−101の培養液50mlを加え、25℃で24時間
培養した。菌の生育とともにPHは低下し、PH6.0
になつた時点から14％アンモニア水の添加を開始
し、PHを6.0〜6.2に保つた。次に、この培養液１
をとり、コール酸40ｇを含む200ミリモル／
のホウ酸緩衝液（PH7.0）１に加え、PHを7.0に
した。この反応液を37℃で26時間通気撹拌した
後、遠心分離した。上清のPHを１規定塩酸でPH２
まで際下させ、生成物を析出させた。吸引ろ過
後、風乾して12−ケトコール酸を得た。変換反応
の進行度合は、反応開始後各時間の反応液を下記
の方法で分析することにより確かめられた。結果
は表１に示す通りである。 培地組成 グルコース ２％（別に滅菌して添加） 硫酸アンモニウム 0.2％ リン酸水素１カリウム 0.2％ リン酸水素２カリウム 0.5％ 酵母エキス 0.2％ 硫酸マグネシウム 0.05％ 硫酸第一鉄 4ppm 硫酸マンガン 4ppm 水道水 分析方法 液体クロマトグラフによる定量。試料をCDC
を内部標準とした修正内部標準法及び単純面積百
分率法で定量した。 カラム；Shodex OPS pak F411 ポンプ；日本分光(株)製BIP−１型 デイテクタ；Shodex−RI SE−31型 移動相；75：25メタノール−水混合液、 リン酸0.02モル／ カラム温度；30℃ 送液；１ml／min 試料量；20μl
【表】
実施例 ２
反応温度を24時間目から41℃にしたほかは全て
実施例１と同様に行なつた。結果は表２に示すと
うりであつた。
実施例１と同様に行なつた。結果は表２に示すと
うりであつた。
【表】
実施例 ３
実施例１と同じ方法で培養した培養液１をと
り、遠心分離により集菌してコール酸40ｇを含む
100ミリモル／のホウ酸緩衝液１に菌体を懸
濁しPHを7.0とした。その後実施例２と同じ方法
で反応させた。結果は表３に示すとうりであつ
た。
り、遠心分離により集菌してコール酸40ｇを含む
100ミリモル／のホウ酸緩衝液１に菌体を懸
濁しPHを7.0とした。その後実施例２と同じ方法
で反応させた。結果は表３に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 ４
培養温度を35℃にしたほかは全て実施例１と同
様に行なつた。結果は表４に示すとうりであつ
た。
様に行なつた。結果は表４に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 ５
培養温度を27℃にしたほかは全て実施例１と同
様になつた。結果は表５に示すとうりであつた。
様になつた。結果は表５に示すとうりであつた。
【表】
実施例 ６
培養時PHを7.0に保つたほかは全て実施例１と
同様になつた。結果は表６に示すとうりであつ
た。
同様になつた。結果は表６に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 ７
反応にコール酸40ｇを含む200ミリモル／の
四ホウ酸緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは、
全て実施例１と同様に行なつた。結果は表７に示
すとうりであつた。
四ホウ酸緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは、
全て実施例１と同様に行なつた。結果は表７に示
すとうりであつた。
【表】
実施例 ８
反応にコール酸40ｇを含む１モル／のホウ酸
緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは全て実施例
１と同様に行なつた。結果は表８に示すとうりで
あつた。
緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは全て実施例
１と同様に行なつた。結果は表８に示すとうりで
あつた。
【表】
実施例 ９
反応時PHを7.3に保つたほかは全て実施例１と
同様に行なつた。結果は表９に示すとうりであつ
た。
同様に行なつた。結果は表９に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 10
反応温度を32℃にしたほかは全て実施例１と同
様に行なつた。結果は表10に示すとうりであつ
た。
様に行なつた。結果は表10に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 11
反応温度を45℃にしたほかは全て実施例１と同
様に行なつた。結果は表11に示すとうりであつ
た。
様に行なつた。結果は表11に示すとうりであつ
た。
【表】
実施例 12
反応にコール酸100ｇを含む200ミリモル／の
ホウ酸緩衝液（PH7.0）を用い、反応時間を48時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行な
つた。結果は表12に示すとうりであつた。
ホウ酸緩衝液（PH7.0）を用い、反応時間を48時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行な
つた。結果は表12に示すとうりであつた。
【表】
実施例 13
反応にコール酸300ｇを含む200ミリモル／の
ホウ酸緩衝液（PH7.0）を用い、反応時間を72時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行な
つた。結果は表13に示すとうりであつた。
ホウ酸緩衝液（PH7.0）を用い、反応時間を72時
間まで延長したほかは全て実施例１と同様に行な
つた。結果は表13に示すとうりであつた。
【表】
比較例 １
実施例１に示す培地に、濃度20mg／mlとなるよ
うにコール酸を加えて、PHを7.0としてから滅菌
し、実施例１に示す方法で前培養した同一菌を同
一量を加え、35℃で24時間培養した。培養各時間
の培地中のコール酸及び12−ケトコール酸の濃度
は表14のようであつた。
うにコール酸を加えて、PHを7.0としてから滅菌
し、実施例１に示す方法で前培養した同一菌を同
一量を加え、35℃で24時間培養した。培養各時間
の培地中のコール酸及び12−ケトコール酸の濃度
は表14のようであつた。
【表】
比較例 ２
反応にコール酸40ｇを含む200ミリモル／の
リン酸緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは全て
実施例１と同様に行なつた。結果は表15に示すと
うりであつた。
リン酸緩衝液（PH7.0）１を用いたほかは全て
実施例１と同様に行なつた。結果は表15に示すと
うりであつた。
【表】
比較例 ３
反応にコール酸40ｇを含む200ミリモル／の
トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（PH
7.0）１を用いたほかは全て実施例１と同様に
行なつた。結果は表16に示すとうりであつた。
トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液（PH
7.0）１を用いたほかは全て実施例１と同様に
行なつた。結果は表16に示すとうりであつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ミクロコツカス属に属し、コール酸及び／又
はその塩から、12−ケト−3α，7α−ジヒドロキ
シコラン酸及び／又はその塩を生成する能力を有
する微生物を栄養培地で培養し、その菌体又は菌
体を含む培養液をホウ酸緩衝液の共存下にコール
酸及び／又はその塩と混合して反応させ、反応液
中に12−ケト−3α，7α−ジヒドロキシコラン酸
及び／又はその塩を生成せしめ、これを採取する
ことを特徴とする12−ケト−3α，7α−ジヒドロ
キシコラン酸及び／又はその塩の製造方法。 ２ 用いる微生物がミクロコツカスSD−101又は
その変異株である特許請求の範囲第１項記載の製
造方法。 ３ 微生物の培養温度が22〜27℃、培養時PHが
5.8〜6.2である特許請求の範囲第１項記載の製造
方法。 ４ コール酸及び／又はその塩の反応温度が35〜
41℃、反応時PHが6.7〜7.2である特許請求の範囲
第１項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12276985A JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12276985A JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61282099A JPS61282099A (ja) | 1986-12-12 |
| JPH0151998B2 true JPH0151998B2 (ja) | 1989-11-07 |
Family
ID=14844157
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12276985A Granted JPS61282099A (ja) | 1985-06-07 | 1985-06-07 | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61282099A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5451510A (en) * | 1991-10-24 | 1995-09-19 | Tokyo Tanabe Company, Limited | Process for preparing 3α, 7α-dihydroxy-12-keto-5β-cholanic acid using bacillus spp. FERM BP-3394 and FERM BP-3397 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59120098A (ja) * | 1982-12-28 | 1984-07-11 | Showa Denko Kk | １２−ケト−３α，７α−ジヒドロキシコラン酸の製造法 |
-
1985
- 1985-06-07 JP JP12276985A patent/JPS61282099A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5451510A (en) * | 1991-10-24 | 1995-09-19 | Tokyo Tanabe Company, Limited | Process for preparing 3α, 7α-dihydroxy-12-keto-5β-cholanic acid using bacillus spp. FERM BP-3394 and FERM BP-3397 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61282099A (ja) | 1986-12-12 |
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