JPH0256635B2 - - Google Patents
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Description
本発明は一般に、化学的プロセスを行なうため
の改良装置及び方法に関し、さらに詳細には多数
のアミノ酸単位を含有する蛋白質又はペプチド鎖
の順次減成をこれら単位の順序を決定するために
自動的に行なう改良装置に関するものである。 蛋白質及びペプチドにおけるアミノ酸単位の線
順序は、それらの生物学的機能を理解しかつ最終
的には同じ機能を示む化学物を合成する手段とし
て極めて興味がある。アミノ酸の線順序を決定す
るため各種の技術が使用されているが、恐らく最
も成功しているものはエドマン法として知られて
いるものであろう。種々な形のエドマン法及びこ
れら方法を自動的に行なうための装置が下記の刊
行物に記載されている。 エドマン及びペツグ、「蛋白質順序決定装置」、
ヨーロピアン・ジヤーナル・バイオケミストリ
ー、第１巻（1967）、第80〜91頁；ホイツトマン
−リーブオールド、「自動変換装置を備えた改良
順序決定装置による大腸菌における10種のリボソ
ーム蛋白質のアミノ酸順序研究」、ホツペセイラ
ース・ツアイトシユリフト・フイジオロジツシ
エ・ヘミー、第354巻、第1415頁（1973）；ホイツ
トマン−リーブオールド等、「アニリノチアゾリ
ノンからPTHアミノ酸への自動変換に対する改
良順序決定装置に結合した装置」、アナリテイカ
ル・バイオケミストリー、第75巻、第621頁
（1976）；1976年５月25日付「アミノ酸順序の自動
決定法」と題する米国特許第3959307号；フンカ
ピラー及びフード、「改良順序決定装置と非蛋白
質キヤリア（ポリプレン）と高圧液体クロマトグ
ラフイーとを使用するポリペプチドの直接搭ミク
ロ順序分析」、バイオケミストリー第2124頁
（1978）；アール・エー・ラウルセン、ヨーロピア
ン・ジヤーナル・バイオケミストリー、第20頁
（1971）；イー・ワツハター、エツチ・マツハライ
ト、エツチ・ホフナー及びジエー・オツト、
FEBSレター第35巻、第97頁（1973）；1973年４
月３日付「化学過程を自動的に行なうための装
置」と題する米国特許第3725010号；1973年２月
20日付「ペプチド鎖の順次減成方法」と題する米
国特許第3717436号；1975年７月１日付「ペプチ
ド及び蛋白質の順序決定装置」と題する米国特許
第3892531号；1977年12月27日付「ペプチド又は
蛋白質の順序決定方法及び装置」と題する米国特
許第4065412号。さらに特記すべき装置は、1979
年12月26日付で出願された「化学過程の実施装
置」と題する米国特許出願番号第106828号明細書
に記載されている。 簡単に云えば、上記刊行物において検討されて
いるように、エドマンの順次減成方法は３つの工
程、すなわち結合（coupling）と開裂
（cleavage）と変換（conversion）とを含んでい
る。結合工程においては、フエニルイソチオシア
ネートがペプチドのＮ−末端αアミノ基と反応し
てフエニルチオカルバミル誘導体を生成する。開
裂工程においては、無水酸を使用してフエニルチ
オカルバミル誘導体を開裂させることによりアニ
リノチアゾリノンが生成される。チアゾリノンを
抽出した後、残部ペプチドは次サイクルの結合及
び開裂反応に使用される。酸水溶液を使用してチ
アゾリノンをフエニルチオヒダントインに変換さ
せ、これをたとえばクロマトグラフイーのような
適当な方法で分析することができる。 米国特許第3725010号の自動化装置、更には上
記に挙げたホイツトマン−リーブオールドの論文
並びに米国特許出願第106828号で改良された自動
化装置は、通常「回転カツプ」として知られそし
て密閉反応室内に置かれる回転反応セルの内壁に
形成させた薄膜において、反応を行なうような自
動化順序決定装置である。室に対し調節した量の
液体試薬を導入及び除去する手段を設けて、不活
性雰囲気中で蛋白質又はペプチドの試料と反応さ
せる。分析すべき試料は最初に回転カツプ中に置
かれ、次いで結合及び開裂反応を行なうのに必要
な各種の試薬及び溶剤が順次して導入及び除去さ
れる。カツプが回転する際、液体試薬と溶剤とは
それ自身でカツプ壁部上に薄膜を形成して、試料
薄膜中に浸透してこれと反応する。試薬は試料薄
膜を溶解させ、エドマン法の結合及び開裂工程を
遂行する。結合及び開裂工程の完了後、反応室を
排気して試薬の揮発成分を除去する。結合後の排
気に続いて、残存する試料薄膜を溶剤で抽出する
ことにより不揮発成分を除去する。開裂後の排気
に続いて、生成したチアゾリノンを溶剤により試
料薄膜から抽出しかつ別のフラスコに移して変換
工程を行なうか又は各種フラクシヨンを集めて乾
燥する装置に移す。変換工程を変換フラスコ中で
直ちに行なわない場合は、この工程を後に多数の
フラクシヨンについて同時に行なうことができ
る。 回転カツプに対する流体の導入及び導出は、反
応室の上壁部の開口部を封止しそこからカツプ内
のある位置まで垂下する栓を貫通する流体用導管
によつて達成される。流体は回転カツプ中へその
底部に隣接する個所において直接に導入され、カ
ツプの円筒状内表面における環状溝から抜き取ら
れる。抜き取るべき流体はカツプが高速回転する
とき遠心力により環状溝中に強制送入され、溝中
に突入した内方端部を有する導管を介して抜き取
られる。したがつて、この流出導管は、反応生成
物と副生物並びに抽出用溶剤を除去するための掬
出し器として作用する。 回転カツプ装置中の蛋白質又はペプチド試料自
体が凝集性薄膜を形成するのに充分な量を持たな
い場合は、操作は、しばしばカツプの内壁上で溶
剤抽出の際に比較的厚い層の非蛋白質キヤリア材
料内にて行なわれる。次いで、結合及び開裂反応
が起こりうるよう、反応工程の際にキヤリア材料
と試料とを液体試薬中に溶解させる。化学組成
１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチ
レンポリメトブロマイドを有する高分子第４アン
モニウム塩がこの目的で使用されている。試料を
確実に保持するにはキヤリアが相当量で使用せね
ばならず、そしてキヤリアと試料の両者は液体試
薬により溶解させて、試料と試薬との間で反応を
可能ならしめられる。 回転カツプ型の装置は多くの場合許容しうる実
験結果を与えることもあるが、幾つかの欠点を有
する。たとえば、主として使用する試薬が液状で
あり、これを多量に使用せねばならないため、適
当に多量の蛋白質又はペプチド試料を取得しかつ
必要試薬の充分な供給を確保する経費が極めて高
くつく。液体試料と溶剤とは、これらがカツプ壁
上を通過する際試料部分を薄膜から分離させてカ
ツプの壁部から洗い流す傾向を有し、装置の各連
続サイクルで得られる末端アミノ酸単位の収率を
減少させる。したがつて、充分な試料が最後のサ
イクルまで残留して有用な結果を得ることを確保
するには、試料の初期量を充分大にせねばならな
い。さらに、この型式の装置は、反応室の容積が
大きくかつそこに存在する試料を減圧乾燥するこ
とにより準揮発性の液体試薬と溶剤とを反復除去
する必要があるため、かなり長いサイクル時間を
必要とする。さらに、回転カツプ順序決定装置は
製造及び修理が共に極めて複雑で高価につく。 異なる型式の順序決定装置が上記ラウルセン及
びワツハターの文献に開示されており、この場合
試料は共有結合により複数の小ビーズの表面に不
動化される。これらビーズは反応塔内に収納され
て多孔性充填物を形成し、この反応塔に液体試薬
を満たして化学プロセスを遂行する。使用する開
裂試薬は蛋白質及びペプチドに対し優れた溶剤で
あるため、試料をその場に保持するには共有結合
が完全でなければならない。しかしながら、共有
結合は実際上達成困難である。また、充填塔は洗
浄困難であつて、そこに存在するビーズは使用中
に崩壊する傾向がある。 従来、静止反応室内に試料を入れてこの試料を
気体若しくは蒸気状の少なくとも１種の試薬にか
けることにより、これら装置の欠点を克服するよ
う設計した順序決定装置が提案されている。上記
の米国特許第3892531及び4065412号はこのような
２種の装置を開示しているが、そのいずれも充分
満足には作動しない。 米国特許第3892531号の装置は反応室内に閉鎖
指状伸長部を備えており、これによりペプチド若
しくは蛋白質試料を順次して気体試薬と溶剤とに
曝露する間調節された温度に保持する。試薬を導
入する都度、伸長部を内部から冷却してそこで凝
縮を生ぜしめる。次いで伸長部を加温して試料を
液体中に溶解させ、反応を進行させる。試料と反
応させた後、望ましくない準揮発性薬品を熱と不
活性ガス流との組合せにより試料から乾燥させ、
或いは伸長部上に凝縮する溶剤により末端アミノ
酸と共に伸長部から滴下するまで洗浄することが
できる。 米国特許第4065412号の装置及び方法において
は、蛋白質又はペプチド試料は、化学的結合又は
直接吸着により反応塔内の多数の小さな巨孔執ビ
ーズの内表面と外表面との両者に被覆される。各
種の試薬及び溶剤を気体状又は液状のいずれかで
順次に充填塔に通して所望の減成反応を生ぜしめ
る。反応塔に対する試薬と溶剤との流れは、10位
置回転面封止弁により制御される。 残念ながら、これら特許の装置は、多数の減成
サイクルにおいて、許容しうる結果を達成するの
に充分な汚染のない環境を与えない。たとえば、
これら装置においては蛋白質又はペプチド試料を
効率的に洗浄するのが困難である。溶剤が試料か
ら滴下する点まで溶剤を凝縮させることにより試
料を洗浄する上記方法は、種々の反応生成物の微
量を試料上に残し、その後の化学反応を汚染する
傾向がある。同様に、反応塔内に試料を保持する
のに使用する充填物は、汚染を避けるため各種の
化学生成物を塔中に完全に移動させて塔から除去
せねばならないため洗浄困難である。これは、多
量の溶剤を使用してさえ容易に行なわれない。何
故なら、溶剤は蛋白質試料の大部分が存在するビ
ーズ内部の小孔部を通過せずに、ビーズ間の間隙
を通過する傾向を有するからである。これら装置
の流体供給管路及び流れ弁は、また充分な排気が
困難であり、化学残留物を捕捉する傾向を有し、
これら残留物はその後の反応サイクルにおける目
的とする化学反応を妨げることがある。 さらに、反応塔に充填物として使用されるガラ
ス若しくはプラスチツクビーズは、多数の減成サ
イクルにおいての使用中崩壊する傾向を有し、こ
の装置系をそこを通しての流体の流過を妨げる点
にまで閉塞させてしまう。かくして、実際上サイ
クル間で系を洗浄するのは不可能となり、塔内に
おける化学反応が不可能となるまでに汚染される
ようになる。 上記した幾つかの因子により惹起される汚染
は、順次の減成過程の継続中の累積的に進行す
る。したがつて、反応セル内の試料と試薬とは
増々汚染されるようになり、所望の結合及び開裂
反応を妨げると共に、多くの望ましくない反応を
ひき起こさせる。かくして、装置の各完結サイク
ルからの収率は減少し、一連の汚染物がフラクシ
ヨン中に入り込む。 収率は、たとえば充填物の崩壊、洗落し用溶剤
中への試料の溶解、及び充填物と試料との間の吸
着結合の破れを含む種々の理由に基づく試料の直
接的損失によりさらに低下する。 これらの作用は、多量の蛋白質又はペプチド試
料が使用できる場合或いは連鎖が比較的少数の単
位しか有しない場合には看過することもできる
が、連鎖が極めて多数の単位を有する場合或いは
極めて少量の特定蛋白質又はペプチドが入手され
る場合には状況が厳しくなる。インターフエロン
の場合にはこれら両者の状況が存在する。このイ
ンターフエロンとは或る種のウイルス感染に呼応
してひと細胞内に生成される小型蛋白質である。
インターフエロンは臨床医学の分野で最近多くの
話題を呼んでいる。何故なら、これはウイルス感
染を抑制する有効物質であると有望視されかつ抗
癌剤として極めて有望と思われるからである。イ
ンターフエロンは極めて少量しか生産されず、し
たがつて少量しか入手できない。現在、２種のひ
とインターフエロンの実際的な全世界における生
産は、多量のひと白血球（白血球インターフエロ
ン）又は或る種のひと組織培養細胞（繊維芽細胞
インターフエロン）を入手しうる比較的少数の先
進国に限られる。この制約されたインターフエロ
ンの生産能力のため、充分管理された臨床研究及
びこの分子がどのように作用するかについての基
礎的解析を行なうことが困難である。さらに状況
を複雑にしていることは、インターフエロンが約
150個のアミノ酸単位の連鎖で構成され、分析の
為にはこれら単位を個々に連鎖から開裂させねば
ならないことである。上記した種類の汚染損失
は、使用しうる蛋白質が極めて少量であるためイ
ンターフエロンにおける最初の数個のアミノ酸単
位の順序決定を妨げる。最初の数個の開裂サイク
ルを越えると、少量の試料は有意の結果がもはや
得られない点まで汚染されるようになる。 試料から開裂された各種のチアゾリノンをより
安定なフエニルチオヒダントインまで変換させる
ための、本出願人の知る最も精巧な従来の装置
は、ホイツトマン−リーブオールドの上記論文に
記載され、そして上記の米国特許出願番号第
106828号で改良されたような変換フラスコであ
る。しかしながら、本出願人は、試薬と溶剤とを
適当な毛細管により導入する場合このフラスコが
内壁部の非効率的洗浄により障害を呈することを
知つた。試薬と溶剤とを不活性ガスの流れと共に
供給してフラスコ壁部の液体を飛散させることに
よりフラスコ壁を洗浄できることが示唆されてい
る。しかしながら、この技術はフラスコへの液体
の乱調な流れをもたらし、液体供給容量の調節を
極めて困難にする。 さらに、本出願人は、もつと小容量の液体を収
容するよう従来の変換フラスコの寸法を著しく減
寸すると、変換反応の際内容物を撹拌しかつその
準揮発性成分を蒸発させるためフラスコの液体内
容物中に不活性ガス気泡を最適度に分散させるの
が困難になることを見出した。これらの目的でフ
ラスコの底部に導入される不活性ガスは比較的大
きな気泡として液体の表面まで上昇する傾向を有
し、液体を均一に撹拌せずにむしろフラスコ頂部
への液体の飛散を促進してしまう。 したがつて、多くの用途において、たとえば蛋
白質又はペプチドの順序決定のような化学過程を
実施するための、効率よく操作できかつ最小の装
置汚染でもつて最大限の順序決定サイクルを極め
て少量の試料により成功裡に実施しうるような装
置を提供することが望まれている。 概述すると、本発明は、反応室を画成する内部
表面を備えた室手段を含み、この室は流体を加圧
流れとして導通させるための入口及び出口手段を
備える。さらに、複数の流体に対し拡散により透
過性でありかつ室内に位置づけられる固体マトリ
ツクス手段が含まれる。このマトリツクス手段中
に埋入された試料は不動化されると共に、室を通
過する複数の流体のいずれにも露曝されてこれら
と化学的に反応する。 室手段は、固体マトリツクス手段を薄膜として
担持する表面手段を含むことができ、そしてマト
リツクス手段はたとえば１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンボリメトブロマイド
又は（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，５−ジメチレン−
ピペリジニウムクロライド）のような高分子第４
アンモニウム塩から構成することができる。 表面手段は室手段の内壁の全体又は一部として
構成することができるし、また室をほぼ横方向に
横断して延在しかつ流体を貫通させうる多孔質シ
ート手段からなることもできる。シート手段は複
数のガラス繊維で作られたシートから構成するこ
とができる。 室手段はその対向係合表面上にそれぞれ第１及
び第２空洞部を備えた一対の隣接室要素から構成
することができ、これらの第１及び第２空洞部は
互いに整列して反応室を形成する。第１及び第２
空洞部は係合面から離れる方向に、空洞部がそれ
ぞれ入口及び出口手段と連通する位置までテーパ
づけることができる。多孔質シート手段を使用す
る場合は、これを係合表面の少なくとも一方にお
ける凹部に収容し、第１及び第２空洞部を実質的
に分離する配向をもつて室内に保持する。室手段
は、封止関係で係合表面間に挾持された少なくと
も１枚の屈撓性材料のシートを含むことができ、
この屈撓性材料は複数の流体に対し透過性であ
る。また、室要素の少なくとも１つはその係合表
面上に空洞部の周囲に延在する隆起部分を備える
ことができ、これにより屈撓材料のシートを室要
素の係合表面に対し圧接し、かくして封止効果を
向上させる。 入口及び出口手段はそれぞれ室要素を貫通して
延びかつその内方端部において多孔質シート手段
の両側で反応室と連通する一対の毛細管通路から
構成することができる。これら毛細管は反応室と
同軸的であり、そこから室要素のほぼ平坦な外部
表面における外方毛細管開口部まで延在すること
ができる。 室中に複数の流体を順次に流過させる手段は、
表面上に複数のほぼ平坦なバルブ部位を備え２つ
の端部間で連続して形成されそして第１開口部を
介してバルブ部位のそれぞれに連通する第１通路
とそれぞれ第２開口部を介してバルブ部位の１つ
に連通する複数の第２通路とを具備する弁ブロツ
ク手段、及び各バルブ部位を覆う複数の弾性かつ
実質的に不透過性のダイヤフラムを包含し、各ダ
イヤフラムはバルブ部位の１つに圧接されてその
部位に連通する第１及び第２開口部を閉鎖する第
１封止状態と、その部位から引き離されて弁ブロ
ツク手段の外部を通して第１開口部と第２開口部
との間に流体流路を与える第２状態との間で作動
し、それにより第１通路と第２通路との間の流体
流れを選択的に調節することができる。接続手段
は少なくとも１つの傾斜フエルールを含み、これ
を管部材周囲に滑り係合にて密接嵌装すると共
に、通路の１つに連通する弁ブロツク手段におけ
る異なる傾斜の凹部に圧接させて、フエルールに
かかる内向きの力がフエルールと凹部との間の比
較的小さい接触面積に集中してこれらの間に流体
シールをもたらすようにする。凹部は好ましくは
前記フエルールよりも大きな角度で傾斜する。さ
らに、接続手段は、第１通路を装置の他の部分に
接続するため第１通路の一端部に取付け部を備え
ることができ、かくして第１通路はこの取付け部
と取付け部から最も離間した第２通路との間の流
体流れをフラツシユさせうるようなマニホールド
として作用する。第１通路は、鋸歯形状を有しか
つ交互の交差部において各バルブ部位に連通する
導管を形成するよう端部対端部で接続した複数の
直線通路から構成することができる。 装置は、各種の流体を導入及び除去するため内
部に突入する複数の毛細管を備えた変換フラスコ
を含むことができ、これら毛細管の少なくとも１
本は孔部を閉鎖しかつ複数の半径方向に離間した
制限オリフイスを設けた内方端部を備え、かくし
て毛細管を通る流体の流れはフラスコの内壁部に
対しスプレー作用を与えて内壁部を洗浄する。さ
らに、フラスコの底部に近接する個所で終端する
毛細管は閉鎖端部を備えると共にそれに近接して
複数の半径方向に離間した制限オリフイスを備
え、かくして毛細管通を通るガスの内方流れは複
数の小気泡を発生してフラスコ内の液体を撹拌し
或いはその乾燥を促進する。 化学物質の試料につき化学的プロセスを順次実
施する本発明の方法は、複数の流体に対し拡散に
より透過性である固体マトリツクスに試料を埋込
み、入口と出口とを備える密閉室の内部に固体マ
トリツクスを包入し、複数の流体を室中に加圧流
として入口から出口まで試料が各流体に露曝され
るように順次流過させ、それにより試料を不動化
させると共に試料と流体との間の化学的相互作用
を達成することからなつている。固体マトリツク
スは、密閉室の内壁部上に薄膜として支持するこ
とができる。その他の方法として、固体マトリツ
クスは多孔質シート上に支持させることもでき、
このシートを入口から出口まで通過する流体がこ
のシートを必らず通過するように入口と出口との
間の位置に室をほぼ横断して延在させる。固体マ
トリツクス中に試料を埋入する工程は、固体マト
リツクスを支持表面に薄膜として施こし、次いで
試料を含有する溶液をこの薄膜に、試料溶液がマ
トリツクスを溶解するように施こす工程からなる
ことができる。次いで、液体を溶液から蒸発させ
て、試料が埋入された薄膜を残留させる。 本発明の目的は、化学物質の試料につき最小の
試料損失と最小の系汚染とでもつて化学的プロセ
スを順次実施するための装置及び方法を提供する
ことである。 さらに、本発明の目的は、極めて少量の試料に
つき化学的プロセスを最小量の試薬と溶剤との使
用により順次実施するための経済的装置及び方法
を提供することである。 本発明の他の目的は、化学的プロセスを順次実
施するための極めて短いサイクル時間を有する改
良装置及び方法を提供することである。 さらに、本発明の目的は、試料をサイクル間で
より効果的に洗浄しうるような、試料に対し化学
的プロセスを順次実施するための改良装置及び方
法を提供することである。 本発明の装置及び方法は、減成過程に使用され
る試薬と溶剤との両者に対し拡散により透過しう
る薄膜として形成した固体マトリツクスの内部に
蛋白質又はペプチド試料を不動化させることによ
り、従来の順序決定装置に関する多くの問題を解
決する。かくして、完全な共有結合を達成する困
難な問題が回避され、同様に試料が支持体表面上
に直接吸着されて移動液体相の機械的剪断力に曝
されたとき遭遇するような試料損失の問題も回避
される。試料はマトリツクスによりしつかり固定
される一方、それより小さい試薬と溶剤とアミノ
酸誘導体とはマトリツクス中に拡散することがで
き、減成過程における種々な工程を行なうのに充
分な濃度までマトリツクス中に効果的に溶解する
ことができる。固体マトリツクスは気体試薬に露
呈された際にも試料を極めて効果的に保持するの
で、実際上如何なる形状の試料支持体表面をも何
らの試料損失なしに使用することができる。反応
室の内壁部自身を充分な支持体表面とすることが
できる。 系の完全洗浄を著しく容易化させる支持体表面
は、複数の重なつたガラス繊維で作られ、流過反
応室を横断して延在する多孔質シートである。多
孔性は繊維間の空隙によつて与えられる。この構
造は流体流れ方向に最小の寸法でもつて比較的大
きい総表面積を有する。固体マトリツクスは繊維
表面上に薄膜を形成し、試薬と溶剤とが薄膜中に
容易に拡散してそこに埋設された試料と反応する
のを可能にする。これは、最小限量の試薬と溶剤
とを用いて比較的短時間に化学過程と洗浄サイク
ルとを試料について行なうことを可能にする。試
薬と溶剤とは、その或る物は気体又は蒸気の形態
であるが、薄膜を透過して試料と接触し、これと
最大限に完全かつ効果的に反応する。 ここに開示した多孔質シートの比較的薄い形態
は、さらに、比較的少量の溶剤により試料から残
留試薬と反応生成物とを完全に洗浄する能力を高
める。溶剤は、試薬と反応生成物とをこれらを系
から除去するにはシートの表面から比較的短距離
だけ移動させればよい。シート表面から外れた個
所からは、それらを容易に室外に誘導して試料を
次回の反応工程用の状態にすることができる。少
量の溶剤使用は溶剤費用の節約となるだけでな
く、試料が反応室から洗い出されて損失する傾向
をも減少させる。 さらに、気体又は蒸気状の試薬を使用すること
は、試薬に対する試料の完全露出にも貢献し、必
要とされる試薬の量を最小にする。試薬の使用を
少なくすることは、エドマン減成技術に使用され
る試薬が極めて汚染を嫌いしたがつて極めて高価
であるため重要である。さらに、試料とこれを含
有する固体マトリツクスとは気体試薬により溶解
されず、支持体表面からの試料の分離による試料
損失の問題を除去する。 本発明の反応室は、気体及び液体の両試薬を試
料を保持した多孔質シート中に通過させしかも試
料が外部不純物により又は一反応工程若しくはサ
イクルから次の工程若しくはサイクルへと運ばれ
る化学物質により汚染されないように構成され
る。たとえば、当接する室要素が２つ組合され
て、多孔質シート各例に第１及び第２空洞部を構
成する低容積の反応室を形成する。室自身から各
室要素を介して反対方向に延びる一対の毛細管通
路は、気体又は液体状の複数の流体が加圧流とし
て室を通過しかつ試料マトリツクスを通過するの
を可能にする。室と通路との容積が小さいことは
試薬と溶剤との必要量を最小限にすると共に、サ
イクル間における系の減圧乾燥を容易にする。２
つの室要素は、その係合表面においてこれら係合
表面間に挾持された屈撓性材料のシートによつて
封着される。この材料は室を通過する複数の流体
に対し透過性であり、実際にガスがより均一に多
孔質シートと接触するよう分散させることにより
室を通過するガスの流れを向上させる。 反応室の別の具体例は、単一の毛細管又は毛細
管型通路であつてその内部表面上すなわち孔部上
に薄膜として形成された固体マトリツクスを有す
る。蛋白質又はペプチド試料を多孔質シートの場
合と同様にマトリツクス中に埋入し、試薬と溶剤
とを毛細管中に順次通過させて試料と相互作用さ
せる。上記した室構造は、多孔質シート部材なし
でこの目的に使用することができる。次いで、試
料含有マトリツクスを第１及び第２空洞部の表面
上に形成させる。同様に、固体マトリツクスを支
持する表面は、試薬と溶剤の流体をマトリツクス
上に流しうるような実質的に任意の方法で製作す
ることができる。 室及び変換フラスコ両者に対して導入及び導出
される流体の流れを調節するための本発明の新規
な弁アセンブリは、流体の相互汚染を避けるよう
に特に製作される。各弁手段は単一の導管を複数
の他の導管と対峙させて、この単一の導管を他の
導管のそれぞれに選択的に接続する。単一の導管
は弁ブロツクにおいて第１通路の一端部と連通す
るように作られる一方、他の導管のそれぞれは第
２通路の１つに接続される。常閉状態において、
各バルブ部位を覆うダイヤフラムのそれぞれはガ
ス圧により弁ブロツクの表面に圧接されて第１通
路と特定バルブ部位に到る第２通路との連通を防
止する。単一導管と他の導管との流体連通は、ダ
イヤフラムの１つ若しくはそれ以上に減圧をかけ
てダイヤフラムをバルブ部位から引き離すと共に
流体を各通路に対する開口部間に存在する弁ブロ
ツクの表面上に流すことにより選択的に与えるこ
とができる。第１通路の遠隔端部においてバルブ
部位に通じる第２通路は、弁に対する各流体の供
給を完全にする目的で、たとえば不活性ガスのよ
うなフラツシング流体の加圧源に接続することが
できる。かくして、特定の試薬又は溶剤を供給弁
の対応ダイヤフラムに減圧をかけて反応室中に導
入した後、第１通路の遠隔端部におけるダイヤフ
ラムを開放して、第１通路内に残存する試薬又は
溶剤を全て室へと押し込むことにより供給を完全
にすることができる。これは、第１通路の連続性
により可能となり、マニホールドを形成すること
により次の試薬又は溶剤の供給が開始される前に
特定の試薬又は溶剤がパージされる。反応室に対
する出口に弁が存在する場合は、第１通路を出口
に接続する一方、第２通路をそれぞれ変換フラス
コと真空源と排棄部とに接続する。第１通路の連
続性は、完全な排気を可能にすると共に、サイク
ル間において準揮発性物質がそこに捕捉される可
能性を実質的に除去する。 ここに開示した第１弁通路の「鋸歯」形状は順
序決定装置の分野で他の弁アセンブリに従来使用
されている。しかしながら、本出願人が知つてい
る従来の鋸歯弁アセンブリは、主ブロツク内にお
ける通路の連通及び非連通の状態間を往復して摺
動するよう、主弁ブロツク上のバルブ部位に対し
て装着された複数の個々のブロツクを組込んでい
る。摺動ブロツクは磨耗する傾向を有し、大気と
通路間との両者に対して漏れを生ぜしめる。ここ
に開示した新規な弁アセンブリは、従来の鋸歯マ
ニホールドを一連のダイヤフラムと組合せて各通
路に連通する開口部対の間の流れを確立及び遮断
することにより、磨耗の問題を解決する。ダイヤ
フラムは、たとえば市販のフルオロカーボン重合
体のような実質的に不活性の材料で作ることがで
き、劣化することなく長期にわたつて機能する。
さらに、弁通路を外部導管に接続する従来の手段
は、弁ブロツクの側部に過剰圧力を及ぼす傾向が
あり、弁ブロツクの上部封止表面の歪を促進する
と共に密封作用能力の喪失をも促進する。特に、
本出願人が知つている従来の鋸歯弁は、各導管と
関連するほぼ平坦なフランジ表面を弁ブロツクの
側部に圧接して平滑表面対の間における一連の封
止を行なうことにより、外部導管を弁通路に接続
する。これら部品のそれぞれは実際に加工するこ
とが極めて困難なたとえばフルオロカーボン重合
体のような材料で作られるため、各封止表面を互
いに一致させて所要の封止を形成するには非常に
大きな圧力をかけねばならない。圧力は弁ブロツ
クによつて支えられるため、その上部封止表面の
歪をもたらす。 本発明の弁アセンブリは、弁ブロツクに対し不
当な圧力をかけることなく封止を行なうよう、弁
ブロツクにおける異なるテーパの凹部に部分的に
収容しうる複数のテーパつきフエルールを備え
る。比較的小さい封止力をフエルールの特定部分
に集中させて、ブロツクを歪めることなくフエル
ールに対応するテーパつき凹部に対し封着する。 フエルールの各側で異なるテーパを有する表面
間において界面を設ければ、得られる封止がさら
に向上する。異なるテーパの表面間におけるこの
種の界面は、好ましくは最適の封止特性を得るよ
うフエルールの両側に設けられる。 本発明の変換フラスコは、フラスコの内壁部に
衝突するスプレーの形で試薬と力剤とを導入し、
そこに凝縮又は飛散している全ての化学物質を壁
部からフラスコ内の液体中へと洗い流すことを可
能にする。サイクル間で系の相互汚染となる主原
因がかくして除去される。さらに、変換フラスコ
はガスが液体中を小気泡の形態で上方に移動して
液体を均一に撹拌し、その準揮発性成分を乾燥す
るのを可能にし、しかも過度の激しいバブリング
と飛散とによる試料の損失をもたらすことがな
い。これは、敏感なアミノ酸誘導体からの急速か
つ穏かな液体除去を促進する。かくして、アミノ
酸誘導体を変換フラスコ中に移送するのに使用し
た溶剤を、上記したホイツトマン−リーブオール
ド特許におけるよりもずつと短時間（５〜10分間
でなく１〜２分間）かつより低温度（50〜80℃で
なく40〜50℃）で除去することができる。これ
は、たとえばセリン、スレオニン、ヒスチジン、
アルギニン及びトリプトフアンのような最も不安
定なアミノ酸誘導体の収率を著しく向上させる。
変換フラスコ中に使用される試薬は、不活性ガス
気泡の微細な流れと、ホイツトマン−リーブオー
ルド特許において必要とされる30〜40分間でなく
３〜５分間の低減圧との組合せにより除去するこ
とができる。ホイツトマン−リーブオールドの方
法においては、試薬の乾燥を、変換フラスコ総サ
イクル時間が第１反応室の総サイクル時間以下と
なるような要件る満たすため、変換フラスコ内の
アミノ酸残留物に対して導入した直後に開始せね
ばならない。変換用試薬の酸成分、すなわちトリ
フルオロ酢酸若しくは塩酸はそれが溶解されてい
る水よりもずつと揮発聖が大であるため、この酸
成分はホイツトマン−リーブオールドの乾燥工程
で早く除去されて、変換工程の大部分において水
溶液以外の何物にもアミノ酸誘導体を残留させな
い傾向を有する。これは、グリシン及びプロリン
の誘導体の不完全変換と他の誘導体の分解とをも
たらす。本発明の変換装置において、変換用試薬
は完全変換に充分な時間、すなわち30〜40分間に
わたりアミノ酸誘導体と接触させ続け、次いで３
〜５分間内に急速に乾燥させることができ、しか
も変換フラスコの内部全体に試料を飛散させるこ
とがない。 以下、図面を参照して本発明の具体例について
説明する。 図面を参照すれば、第１図及び第２図には、本
発明を具現した装置が全体を参照符号１０で示さ
れている。装置１０は、室装置１２と、変換フラ
スコ１４と、フラクシヨンコレクター１６とを含
み、そのそれぞれは自動制御装置１８により操作
される。加圧された溶剤及び試薬の貯槽の配列体
２０がダイヤフラム型流れ弁の列２２を介して反
応室１２と変換フラスコ１４とに接続される。第
２の弁列２４は、反応室から変換フラスコ１４及
びその他位置への液体の流れを調節する。第３の
列のダイヤフラム弁２６は、変換フラスコとフラ
クシヨンコレクターとを排棄又は真空手段に接続
しかつフラスコからフラクシヨンコレクターへの
流体流れを調節する作用を行なう。 過された不活性ガス源２８は高度に精製され
た不活性ガス、好ましくはアルゴンを装置１０に
供給し、溶剤及び試薬の貯槽を加圧し、酸素含有
空気を装置系から掃気し、様々の時点における系
内の試薬及び溶剤の乾燥過程を促進する。圧力調
節弁と計器の群列３０は、各溶剤及び各試薬の貯
槽に対するガス圧並びに装置１０の他の部分のそ
れぞれに対する圧力を個々に調節する役目をな
す。 装置１０の操作態様を第３図に示す。室装置１
２は加熱環境３２内に存在し、好ましい具体例に
おいては入口通路及び出口通路３６及び３８にそ
れぞれ連通する反応室３４を画成する。入口通路
３６は、流体導管４０を介して複数の貯槽列２
０、すなわち試薬貯槽４２，４４，４６及び４８
並びに溶剤貯槽５０，５２及び５４に接続するこ
とができる。貯槽４２乃至５４は不活性ガス圧源
２８により個々のガス圧調節器５６と電磁弁５８
との列を介して加圧される。貯槽４２乃至５４の
それぞれは、さらに個々の流れ弁６２と個々の流
れ調節器６４とを介してその内部の流体レベルの
上方の個所にて排棄トラツプ６０に接続すること
ができる。不活性ガス源２８から貯槽に導入され
た加圧不活性ガスは、かくして流れ調節器６４に
より調節された速度で排棄トラツプ６０に排気す
ることができる。貯槽４２乃至５４の流出量は、
流体導管４０に一端が接続された連続マニホール
ド６８と連通するダイヤフラム弁６６を介して
個々に調節される。かくして、加圧貯槽４２乃至
５４からの流体は、弁６６の選択的作動により導
管４０と室入口通路３６とを経て反応室３４に移
送することができる。試薬と溶剤との送給を助成
すると共に、供給後にマニホールド６８と導管４
０とをフラツシユするため、不活性ガス源２８か
らの加圧不活性ガスを、圧力調節器７０とダイヤ
フラム弁７２とを介して導管４０とは反対の端部
にてマニホールド６８に導入することができる。
かくして弁７２の作動は加圧ガスをマニホールド
６８の最外端から導入して、その中の全ての試薬
又は溶剤を導管４０と通路３６とを介して反応室
３４に移動させる。 貯槽４４，４６及び４８の流体出口には、流れ
調節器７６に対し直列にガス流量計７４を設け
る。何故なら、それらに貯蔵された試薬は気体又
は蒸気状で使用される一方、残りの溶剤と試薬と
は液状で使用されるからである。ガス放出速度を
対応する弁６６により正確に調節するには、流量
計７４と流れ調節器７６とが必要である。 反応室３４からの流体流れは、連続マニホール
ド８４を介して出口通路３８に連通するダイヤフ
ラム弁７８，８０及び８２によつて調節される。
弁７８を開くと、所望の反応生成物、代表的には
蛋白質又はペプチド試料のＮ−末端アミノ酸単位
が導管８６を通過して変換フラスコ１４へと移動
する。弁８２を開いて出口通路３８を排棄トラツ
プ６０に接続することにより、望ましくない試薬
と溶剤と反応生成物とを廃棄することができ、ま
た弁８０は出口通路３８を真空トラツプ８８と真
空ポンプ９０とに接続して反応室３４、出口通路
３８、マニホールド８４を排気する。 同様に、変換フラスコ１４及びフラクシヨンコ
レクター１６も、それぞれ弁９２及び９４を介し
て排棄トラツプ６０にそして弁９６及び９８を、
介して真空トラツプに接続することができる。 試薬貯槽１００及び１０１と溶剤貯槽１０２と
は、導管１０４を介し試薬と溶剤とを変換フラス
コ１４に供給する為に用意される。貯槽１００，
１０１及び１０２は圧力調節器１０６と電磁弁１
０８とを介して不活性ガス源２８により加圧さ
れ、かつ個々の排気弁１１０と流れ調節器１１１
とを介して排棄トラツプ６０に接続される。貯槽
１００，１０１及び１０２の流体出口は、導管１
０４に一端を連通した連続マニホールド１１４に
ダイヤフラム弁１１２を介して接続される。かく
して、加圧貯槽からの流体の流れが弁１１２の選
択的開放によりもたらされて、試薬又は溶剤のい
ずれかをマニホールド１１４中に排出することが
できる。不活性ガス源は圧力調節器１１６とダイ
ヤフラム弁１１８とを介し導管１０４とは反対側
のマニホールド端部に接続して、試薬又は溶剤を
マニホールドと導管とを介して変換フラスコ１４
へのその移動を推進させることができる。 さらに、不活性ガス源２８は圧力調節器１２０
とダイヤフラム弁１２２と導管１２４とを介して
変換フラスコに接続され、そして圧力調節器１２
６と弁１２８とを介してフラクシヨンコレクター
１６にも接続される。フラスコ１４内において、
所期の態様で特定フラクシヨンが変換された時、
これをガス圧により導管１２４と弁１３１とを介
してフラスコからフラクシヨンコレクター１６へ
と放出してその内部の容器内に貯蔵することがで
きる。フラクシヨンを放出した後、フラスコ１４
には比較的高いレベルまで溶剤を満たして、そこ
に存在する全ての残留化学物質を溶解させること
ができる。次いで、溶剤をガス圧により導管１２
４と弁１２５とを介して排棄トラツプ６０に排出
し、次のアミノ酸誘導体を供給しうる態勢にフラ
スコをフラツシユする。 フラクシヨンコレクター１６は、装置１０の各
サイクルの都度、次回のアミノ酸単位のフラクシ
ヨンをフラスコ１４から受入れるよう空容器を位
置決めするため制御装置１８により割出し作動さ
れる、容器を円形に配列した回転盤から基本的に
構成される。 制御装置１８は好ましくは完全自動化装置であ
つて、ダイヤフラム弁６６，７２，７８，８０，
８２，９２，９４，９６，９８，１１２，１１
８，１２２，１２５，１２８及び１３１と電磁弁
５８，６２，１０８及び１１０とを制御する。さ
らに制御装置１８は、加熱環境３２を所望温度に
保つ機構（図示せず）、フラクシヨンコレクター
１６、真空ポンプ９０、並びに系全体の各種セン
サーを制御する。上記した各ガス圧調節器及び流
量調節器は始動の際手動により調整されて、対応
する流体導管内に所望の圧力と流れとを確立す
る。 室装置１２を第４図及び第５図に詳細に示す
が、これはスリーブ１３２を支持する２部片式基
部１３０からなり、スリーブは第１及び第２室要
素１３４及び１３６を内蔵する。スリーブ１３２
には、スリーブの軸線と心合しかつ基部１３０の
円筒状凹部にぴつたりと収容される拡大円筒状部
１３８が設けられる。この円筒状部１３８は、基
部１３０と螺合する保持カラー１４２によつて所
定位置に保たれる。 室要素１３４及び１３６は円筒状のガラス部材
であつて、それぞれ対向する合着面１４４及び１
４６を備えると共に、スリーブ１３２内に心合状
態で密接して収容される。上記した入口及び出口
通路３６及び３８はそれぞれ室要素１３４及び１
３６を貫通して軸線方向に延在し、好ましくは１
mm程度の直径を有する毛細管通路である。室要素
１３４及び１３６の軸線方向外端部１４８及び１
５０は一般に平坦であつて、スリーブ１３２に対
し軸線方向に室要素に緩衝を与える為実質的に不
活性な材料で作られた一対の薄い弾性ワツシヤー
と当接される。上方弾性ワツシヤー１５２の上部
に位置する金属ワツシヤー１５４には、スリーブ
１３２の上端部におけるスロツト１５８に係合す
る対向固定耳部１５６を設ける。この金属ワツシ
ヤー１５４は、スリーブ１３２の上端部に螺着さ
れたキヤツプ１６０により所定位置に保たれて、
室要素をスリーブに対して所定の位置に正しく保
持する。耳部１５６とスロツト１５８との嵌合
は、キヤツプ１６０が装着されたときワツシヤー
１５４が回転するのを防止し、かくして室要素の
回転によりキヤツプが組体を破損するのを防止す
る。流体導管４０には末広下端部１６２が設けら
れ、これは導管４０の孔部が入口通路３６に連通
するよう室要素１３４の外端部１４８に当接す
る。導管４０は、支持ワツシヤー１６４と取付け
部材１６６とを備え、後者をキヤツプ１６０中に
軸線方向に螺着することによつて、末広端部１６
２を封止状態で室要素１３４に圧接する。導管４
０は、たとえば市販のフルオロカーボン重合体の
ような任意の弾性かつ実質的に不活性の材料で製
作することができる。導管４０の孔部と入口通路
３６との整列は、共通軸線の周囲に各種の相互取
付け部品を精密に組立てることにより確保され
る。 出口通路３８は、鋼製スリーブ１７４内に収納
された実質的に不活性な材料の部材１７２によ
り、上記の連続マニホールド８４に連通して設置
される。スリーブ１７４は平滑な外面を有し、拡
大円筒部１３８と基部１３０との整列した軸線方
向開口部１７６及び１７８内に収容される。部材
１７２は鋼製スリーブ１７４を越えて上下し、軸
線方向に延在して、第２室要素１３６の外端部１
５０とマニホールド８４を画成する弁ブロツク１
８２のテーパつき凹部１８０とに係合する。部材
１７２内部の軸線通路１８４は、出口通路３８及
びマニホールド８４の一端部に正確に整列して、
室要素１３６から弁ブロツク１８２まで単一の連
続毛細管通路を形成する。上記した導管４０の場
合と同様、共通軸線を中心としての関連部品を精
度よく製作することによつて、各通路間の正確な
整列と完全な密閉とが保証される。かくして室装
置１２は、各通路の整列又は各密閉部の完全性を
害することなく極めて短時間で容易に解体及び再
組立てすることができる。 弁ブロツク１８２は新規な構造であつて、これ
を第９図乃至第１３図と関連して詳細に説明す
る。今の段階では、弁７８，８０及び８２の部分
が、室装置１２からの流体の流れを調節すべく弁
ブロツク１８２内に含まれることを銘記すれば充
分である。 第６Ａ図において明示されるように、室３４は
２つの室要素の対向しあう合致面１４４及び１４
６における整列空洞部１８６及び１８８によつて
形成される。２つの空洞部は入口通路及び出口通
路３６及び３８に対し同軸的に配置されかつ好ま
しくは断面円形であつて、入口通路から出口通路
まで移動する流体に対し軸対称通路を形成する。
多孔質シート部材１９０が反応室３４を横断して
延在しそして空洞部１８６の凹部１９２内に少な
くとも部分的に収容することができる。かくし
て、多孔質シート部材１９０は、入口通路３６と
出口通路３８を一方から他方へ流動する流体が必
らずシート部材を通過するよう分離する。多孔質
シート部材１９０は好ましくはたとえばガラスの
ような圧縮繊維材料で作られたシート又はマツト
からなつている。市販のガラス繊維フイルターが
この目的に適しており、使用中の分解又はその他
の損傷に対し高い耐性を有する。この種の多孔質
シートは蛋白質又はペプチド試料を埋入しうる薄
膜を支持するためのかなり大きい表面積を与える
ことが見出された。薄膜が流体透過性材料、すな
わち液体及び気体をそこに拡散させうる材料で作
成されるならば、この材料は、試料を確実に保持
すると共に、試薬及び溶剤と試料との化学的相互
作用を可能にする固体マトリツクスを形成しう
る。たとえば１，５−ジメチル−１，５−ジアザ
ウンデカメチレンポリメトブロマイド又はポリ
（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，５−ジメチレンピペリ
ジニウムクロライド）のような高分子第４アンモ
ニウム塩がこの目的に理想的である。これらは流
体の拡散を可能にし、使用溶剤に対し不溶性であ
りかつ試薬と溶剤との両者に対し化学的に安定で
ある。さらに、これらは凝集薄膜を形成すると共
に正電荷を有してこれらがガラス支持体表面にイ
オン的に結合するのを可能とする。 従来の順序決定装置において行なわれた試料保
持形態と本発明のそれとの基本的相違は、第１７
Ａ図、第１７Ｂ図及び第１７Ｃ図を参照すること
により明瞭に理解されるであろう。第１７Ａ図及
び第１７Ｂ図は、試料支持体表面３０２又は３０
４に対し蛋白質又はペプチド試料３００を固定す
るためのもつとも一般的な２種の従来方法を図示
している。 第１７Ａ図は、試料を共有結合３０６によりガ
ラス支持体表面３０２に化学的に結合させる場合
を示す。たとえば、表面３０２は、ガラスのシリ
カ部位の幾つかがそこから延出して試料鎖上のカ
ルボキシル基３１０と反応するアミノ官能基３０
８を有するよう特別に処理することができる。適
切な条件下において基３０８及び３１０の幾つか
が反応し、ガラスに共有結合している試料を残存
させると共に多数の水分子を遊離する。この種の
結合は非常に強力であり、試料を所定位置に保持
するには１分子当り１個若しくは２個の結合で充
分である。しかしながら、共有結合は蛋白質及び
ペプチド試料について得るのは困難である。さら
に、共有結合は、連鎖中の極めて少数の分離され
た単位を介して連鎖を保持する。減成過程がこれ
らの単位まで到達してこれらを連鎖から開裂させ
ると、連鎖の残部が未結合として残され、これが
室から洗い出されることがある。 第１７Ｂ図は、試料３００を支持体表面３０４
上に直接吸着させる場合を示す。次いで、試料
は、試料と表面との間の極めて多数の比較的弱い
非共有相互作用３１２によつて所定位置に保たれ
る。分子レベルにおいて、表面は試料上の多くの
異なる部位と相互作用する。これは大型の蛋白質
及びペプチドの場合にはうまくいくが、試料がず
つと小さい寸法まで減成されるにつれて、表面か
ら切り離され又は引き離され易くなる。この結
果、著しい試料損失が生ずる。 第１７Ｃ図は、薄膜として形成された固体マト
リツクス３１６中に試料を埋入することによる支
持体表面３１４に対する試料３００の不動化を図
示している。上記したように、マトリツクス３１
６は正電荷を有する高分子第４アンモニウム塩と
することができる。かくして、マトリツクスは極
めて多数のイオン相互作用により酸性ガラス表面
に堅固に保持され、試料がこの中に埋入されてい
るためこの試料を確実に所定位置に保持する。試
料と表面との間の直接的な結合の相互作用に頼る
ものでないため、不動化の効果は試料寸法の減少
により影響されない。 本発明は、埋入試料との化学的相互作用を行な
うため固体マトリツクス３１６中への試料、溶剤
及びアミノ酸誘導体の拡散乃至浸透に依存してい
る。マトリツクスは薄膜として形成されて、その
上を通過する試薬と溶剤とを吸収する。薄膜中で
溶解されると、試薬及び溶剤は薄膜の厚さを横切
つて容易に拡散して減成過程を行なうことができ
る。 第６Ａ図に戻り、反応室３４は、合着しあう表
面１４４と１４６との間に挾持された屈撓性の封
止材料の少なくとも１枚のシート１９４により空
洞部１８６及び１８８の周辺部において封止され
る。一対の屈撓性シート１９４が多孔質シート部
材１９０の各側に一枚づつ配して好適に使用され
る。これらシート１９４は極めて薄いものであつ
て、室３４を通過させる複数の試薬及び溶剤の流
体に対し透過性である。空洞部１８８の周辺部に
おける環状封止用隆起部又はビード１９６が封止
用シート１９４に当接して、空洞部１８６の周辺
近傍の表面１４４に対しより効果的な封止を与え
る。封止用シート１９４は、シール劣化の可能性
を最小限にするよう、たとえば市販のフルオロカ
ーボン重合体のような任意の実質的に化学不活性
の材料で作ることができる。これらは室３４に対
し密閉効果を与えるだけでなく、多孔質シート部
材１９０を支持し、しかも気体及び液体の流れが
部材１９０全体により均一に分配されるよう室中
を通過する気体及び液体を分散させるのに役立
つ。装置系の使用寿命の延長及び試料との最適な
化学的相互作用がこのようにして助成される。 本発明による反応室の別の具体例３４′を第６
Ｂ図に示し、ここでは２つの室要素の対向係合表
面における整列空洞部１８６′及び１８８′は空洞
部１８６及び１８８よりも幾分狭くかつ長いもの
とされる。その他の点においては、室３４及び３
４′は同一であり、図面における室３４′の各部材
には室３４の対応部分と同じ参照符号にダツシユ
（′）を付てある。反応室３４′は入口３６′から出
口３８′への若干多い流体の直接流れを可能にす
るが、そこにおける多孔質シート部材１９０′の
直径を制限する。 第６Ｃ図は、多孔質シート部材１９０′を除去
した状態の第６Ｂ図の室３４′を示している。さ
らに、封止用シート１９４′は、室の直径に等し
い中央開口部を有する屈撓性材料の単一の環状シ
ート３１６で代替されている。この具体例におい
て、蛋白質又はペプチド試料を埋入した固体の流
体透過性マトリツクス３１８は、室３４′を通過
する試薬と溶剤とに露呈されるよう、この室の壁
部に薄膜として形成される。かくして、室３４′
中を通る流体の流れが相当な薄膜表面積が保持し
たまま向上される。 本発明による室装置の別の具体例を第１８Ａ，
１８Ｂ及び１８Ｃ図に示し、ここでは先の２つの
室要素１３４及び１３６はスリーブ１３２内の単
一の毛細管型室要素３２０により代表される。室
装置１２の残余の部材は第４図及び第５図に関し
て記載したものと同じであり、したがつて同じ参
照符号を付した。室装置に対する外部の構造及び
接続も全て上記のものと同一である。 室要素３２０は、軸線方向の毛細管状の室３２
４を画成する内壁３２２を備えた筒状ガラス構造
からなつている。室３２４はその２つの端部３２
６から中央３２８の方向に直径を一様に増大し、
蛋白質又はペプチド試料は、壁部３２２上に薄膜
として形成された固体マトリツクス３３０の内部
に担持される。 本発明の反応室は、複数の試薬及び溶剤の流体
を通過させうる試料支持体表面を備えた実質的に
任意の形態にしうることが了解されるであろう。
たとえば、室装置１２には内部表面すなわち孔部
に流体透過性の固体マトリツクスを形成させた単
一の長形毛細管（図示せず）で充分である。毛細
管を通過する流体は薄膜中に埋入された蛋白質又
はペプチド試料と相互作用して減成過程を行な
う。 反応室３４，３４′又は３２４への液体試薬の
供給及び貯蔵のための本発明による典型的な貯槽
即ち溜め１９８を第７図に示す。貯槽１９８は第
３図の貯槽４２，５０，５２，５４，１００，１
０１及び１０２に対応する。加圧不活性ガスは導
管２０２により貯槽１９８の内部２００に供給さ
れ、この導管２０２は槽内の液体試薬又は溶剤の
レベル２０４より下方の個所において槽内部に連
通する。かくして、導入された加圧ガスは全ての
溶存酸素を液体から連行して、排気導管２０６を
介し制御された速度で放出されて内部２００内に
動的平衡状態を生成する。試薬又は溶剤を内部ガ
ス圧により貯槽１９８から制御下で押出すため液
体出口２０８が設けられる。各貯槽１９８の不活
性ガス供給路２０２は不活性ガス源２８からの加
圧不活性ガスを圧力調節器５６又は１０６と電磁
弁５８又は１０８とを介して受け入れる。排気導
管２０６を通してのガスの放出も同様に、電磁弁
６２又は１１０の１つと流れ調節器６４又は１１
１の１つとによつて調節される。導管２０８を通
る液体試薬又は溶剤の流れは弁６６又は１１２の
１つによつて調節される。液体試薬又は溶剤の１
種を反応室又は変換フラスコに供給する都度、対
応するアルゴン供給弁と排気弁とを開いて特定貯
槽内に動的平衡状態を確立させる。次いで、液状
の試薬又は溶剤は導管２０８中の弁と排棄トラツ
プ６０への弁との開放により導入することができ
る。液体は一定速度で貯槽から排出され、供給路
２０８中の弁を開放状態に保つ時間の長さを調節
することにより供給液量を正確に調節することが
できる。 気体又は蒸気状で試薬を供給するための本発明
による代表的な貯槽２１０を第８図に示す。ガラ
スフリツト製散気用部材２１３を終端に有する不
活性ガス入口２１２を設けて、不活性ガスを貯槽
２１０の内部２１４にその底部近傍かつ内部の液
体試薬のレベル２１６より相当下方の点から導入
する。排気導管２１８と出口すなわち供給路２２
０とは液体レベル２１６より上方の個所で内部２
１４に連通する。貯槽２１０は第３図の貯槽４
４，４６及び４８の代表的なものであり、ガス圧
源２８から導管２１２を介するガスの流れを調節
する圧力調節器５６の１つと弁５８の１つとを備
えている。同様に、排気導管２１８への加圧ガス
の逸散は流れ調節器６４及び流れ弁６２の１つに
よつて調節され、供給路２２０に沿つて試薬の供
給は流量計７４と流れ調節器７６と並んだダイヤ
フラム弁６６の１つによつて調節される。 かくして、試薬R2、R3及びR3Aは気体又は蒸気
状で反応室に供給されるが、それらは液体として
貯蔵され、必要に応じて気化される。気化は、液
体試薬中に不活性ガスを上方にバブリングさせて
行なわれる。このようにして、貯槽２１０の内部
２１４における不活性ガスは試薬蒸気によつて飽
和されるようになる。試薬が必要とされる都度、
導管２１２及び２１８に接続された弁を開いて試
薬中に不活性ガスをバブリングさせかつ動的平衡
状態を確立させる。次いで供給導管２２０内の弁
６６を所定時間開いて所望量の試薬蒸気を反応槽
に供給する。特定の弁６６と並んだ流れ調節器７
６は、流量計７４で示される一定速度にて蒸気を
貯槽により供給させる。 第９図乃至第１３図は、第３図の弁６６及び７
２と連続マニホールド６８とを具体化する弁アセ
ンブリ２２２の構造及び操作を示している。弁ア
センブリ２２２は、第１１図及び第１２図に最も
明瞭に見られる弁ブロツク２２４を備える。この
弁ブロツク２２４は矩形断面の長形ブロツクであ
つて、この弁ブロツクをその表面から斜めに穿孔
することにより形成された鋸歯模様の連続第１通
路２２６を有する。かくして第１通路２２６は単
一の連続通路となり、その一つおきの交差部にお
いて対応する開口部２３２を介し表面２２８上の
複数のバルブ部位２３０に連通する。テーパ付き
の接続口部２３４が第１通路２２６の一端部に連
通する。複数の第２通路２３６が、弁ブロツク２
２４の反対側におけるテーパつき接続口部２３８
から各バルブ部位２３０における開口部２３２近
傍の対応開口部２４０まで延在する。弁ブロツク
２２４は基部２４４の長手方向スロツト２４２内
に収容され、この基部は連結取付具２４８を受容
する接続口部２３４及び２３８と整列する複数の
ねじ切り開口部２４６を備えている。取付具２４
８は、弾性の、２つのテーパ面を有するフエルー
ル（嵌め輪）２５０をそれぞれ接続口部２３４及
び２３８に対し圧縮当接させて、フエルールを通
して延在する管２５２を弁ブロツク２２４の各通
路と封止接続させるのに適する。このようにし
て、第１通路の接続子口部２３４は第３図の流体
導管４０を介して室装置１２の入口通路３６に連
通し、８本の第２通路のうち最初の７本はそれぞ
れ貯槽４２乃至５４の流体出口２０８及び２２０
に連通する。接続子口部２３４から最も離れた第
２通路は第３図に示した圧力調節器７０を介して
不活性ガス圧源２８に連通する。 弁ブロツク２２４の口部に対する２つのテーパ
面を有するフエルール接続部の構造が口部２３４
を例として第９Ａに詳細に示してある。 第９Ａ図のフエルール２５０はその内側２４３
が接続子口部２３４内に収容されると共に、その
外側２４５が取付具２４８のテーパつき凹部２４
７内に収容され、口部２３４と凹部２４７とはフ
エルールの各側のテーパ角度より大きい角度でテ
ーパづけられている。フエルールは好ましくは両
側が同じ角度でテーパづけられ口部２３４と凹部
２４７とはフエルールよりも3゜大きい角度でテー
パづけられる。異なるテーパづけ表面間における
この固定は圧縮力をフエルール２５０の先端部２
４９に集中させ、弁ブロツク２２４の側部に対す
る圧力を最小にしながら効果的な封止をもたら
す。かくしてバルブ部位２３０を歪めうるような
弁ブロツク２２４に対する過度の圧力が避けられ
る。 一連のダイヤフラム保持ブロツク２５４が、弁
ブロツク２２４の表面２２８に対しダイヤフラム
２５６を両者間に挾持してボルト固定される。各
ダイヤフラム保持ブロツクの上端部を、凹部２６
０と連通しかつバルブ部位２３０の１つと同水準
に延在する空気接続口２５８を受け入れるようね
じ付けする。効果的な空気封止を与えるには、凹
部２６０を包囲する環状溝部内Ｏ−リング２６２
を収容することができる。 ダイヤフラム２５６は、実質的に化学的不活性
な気密材料で製作され、空気接続口２５８を介し
て減圧したり又は空気圧をかけることによりこれ
らダイヤフラムはバルブ部位２３０に対し選択的
にそこから引き離され又はそこに圧接せしめられ
る。ダイヤフラム２５６の２つの状態を第１３Ａ
図と第１３Ｂ図とに示す。第１３Ａ図の状態にお
いて、空気接続口２５８にかけられる空気圧又は
ガス圧は特定のバルブ部位においてダイヤフラム
２５６を第１通路の開口部２３２と第２通路の開
口部２４０とに対し圧接させる。かくして、開口
部２３２及び２４０はダイヤフラム２５６により
閉鎖されて、その間の連通を不能にする。これ
は、特定バルブ部位に存在する弁の閉鎖状態を相
当する。第１３Ｂ図の状態においては空気接続口
２５８における減圧がダイヤフラム２５６を開口
部２３２及び２４０から引き離して、その個所に
おける弁ブロツクの表面にわたる第１通路と第２
通路との間の連通を可能にする。これは特定弁の
開放状態に相当し、貯槽の１つから又は不活性ガ
ス圧源２８からの流体が第１通路を２２６を介し
て入口通路３６まで流動するのを可能にする。 上記した弁アセンブリ２２２の新規な構成は、
試薬と溶剤とを各流体間の実質的な汚染なしに正
確な量で反応室に供給することを可能にする。第
１通路２２６の連続性と室装置１２の入口通路に
対してその一端部において接続されていることが
この有利な操作の主要因である。７種の試薬及び
溶剤のうちいずれか１種の供給は、ダイヤフラム
２５６の１つに減圧をかけかつ他のものに加圧す
ることにより行なうことができ、所望の試薬又は
溶剤を第１通路２２６中に流しそして流体導管４
０を介して反応室に移送することができる。所望
量の流体が特定ダイヤフラムの下を通過した後、
ガス圧を空気接続口２５８を介して再びそのダイ
ヤフラムにかけ、かくしてアセンブリ２２２にお
ける７個の試薬弁及び溶剤弁の各々が閉鎖され
る。次いで弁ブロツク２２４の一番端で不活性ガ
ス口部に連携したダイヤフラムに減圧をかけて第
１通路２２６全体に不活性ガスをフラツシユさせ
ると共に経路内に残留した試薬又は溶剤流体を反
応室３４中に押し込むことにより、流体の供給を
完了することができる。第１通路２２６には不連
続個所も死点分枝部も存在しないので、試薬又は
溶剤のいずれかが供給過程間において捕捉残留さ
れるような余地がない。かくして、後続の順序決
定工程で供給される試薬と溶剤は最大限高純度に
保持され、反応槽内における化学反応を意図する
通りに進行させることができ、しかも汚染された
試薬又は溶剤に起因する不必要な収率ロスが何ら
生じない。 この弁アセンブリ２２２は、単一の口部を他の
複数の口部に選択的に接続せねばならない場合に
生ずる汚染を最小にするよう装置における多くの
他の部分に組込まれうる弁設計の一例でもある。
たとえば、試薬及び溶剤を変換フラスコ１４に供
給するための弁１１２及び１１８は連続マニホー
ルド１１４と組合せた弁アセンブリを形成し、ま
た室装置１２の出口通路３８からの流体を導くた
めの弁７８，８０及び８２は連続マニホールド８
４と組合せた同様な弁装置を形成する。同様に、
変換フラスコ及びフラクシヨンコレクターに排棄
部及び減圧部を接続するための弁並びに変換フラ
スコからフラクシヨンコレクターへの流れを調節
する弁も、弁アセンブリ２２２と同様に製作され
る。これらの弁アセンブリのそれぞれにおける主
たる相違点は、それらと連携するバルブ部位の個
数である。 マニホールド６８，８４及び１１４をそれらに
関連する各ダイヤフラム弁の近傍に一連の小さな
不連続個所又は分枝を有するように図示したが、
各マニホールドは実際上第１１図及び第１２図の
第１通路２２６のように製作された単一の連続通
路である。 開放状態と閉鎖状態との間でダイヤフラム弁を
作動させる減圧及び加圧手段は第３図では省略し
たが、これらは好ましくはここに記載された不活
性ガス源２８及び真空ポンプ９０とは別のものと
される。 変換フラスコ１４を第１４図乃至第１６図に詳
細に示す。このフラスコ１４は、たとえば水のよ
うな加熱用流体を循環させるため二重壁間に空間
２６４を有する二重壁ガラス型式のものである。
加熱用流体は、標準的な可撓性配管の端部を受け
入れるようにした一対のニツプル２６６を介して
空間２６４に対し流入及び流出する。弁９６を介
して真空トラツプ８８と真空ポンプ９０とに接続
できかつ弁９２を介して排棄トラツプ６０に接続
できる大孔管２６８はフラスコの内室２７０に対
しその上端部近傍で連通する。毛細管２７２，２
７４及び２７６がフラスコの上端部を通して内室
２７０内の個所まで延在する。毛細管２７２及び
２７６の孔部はその内方端部が閉鎖され、毛細管
のそれぞれには複数の比較的制限された半径方向
に離間するオリフイス２７８又は２８０がその内
方端部近傍に設けられる。 装置１０を設計した目的である比較的少量の蛋
白質又はペプチド試料のため、並びにそこで使用
される比較的小容量の試薬及び溶剤のため、変換
フラスコ１４は従来のフラスコよりもずつと小さ
い内部容積を有する。フラスコ１４の容積は僅か
１ml程度のものであるのに対し、本出願人の知つ
ている従来の自動変換フラスコは全て100mlの容
積を有している。 反応室３４において試料から開裂されたフラク
シヨンは、弁７８と毛細管２７４とを介して順次
にフラスコ１４に移送される。試薬と溶剤とは毛
細管２７６を介してフラスコの内室に入り、そこ
から制限オリフイス２８０を通し室２７０の壁部
に衝突するスプレーとして強送され、それにより
壁部上の全ての残留物をフラスコの底部へと洗い
落す。変換反応の間、不活性ガスを毛細管２７２
により導入して液体を撹拌すると共に、そこから
の溶剤の蒸発を助成する。ガスは制限オリフイス
２７８を介し極めて小さなバルブとして管体２７
２から流出し、フラスコの寸法及びガスの使用量
と無関係に液体中を通してのガスの最適の分散を
与える。変換反応が完結した後、このフラクシヨ
ンをフラスコ内の正圧により長い毛細管２７２を
介してフラクシヨンコレクター１６における各容
器へと上方に強制移送する。これは、このフラク
シヨンがフラクシヨンコレクター１６へより完全
に移送されるよう２回に分けて即ち２つのアリコ
ートとして行なうことができる。第１回の分量は
約200μであつて、最初にフラクシヨンコレク
ターに移送される。次いで、追加50μの溶剤を
導入して、フラスコの下壁部又は底部に存在する
残留物を溶解させる。次いで、第２回分を移送さ
せる。このようにして、各フラクシヨンの高収率
を達成することができる。 特定のフラクシヨンが移送され終つた後、追加
750〜900μの溶剤が前回のサイクルでフラスコ
１４の上壁部上に残留する全ての残留物を溶解さ
せる為に導入されうる。この追加溶剤は排棄トラ
ツプへ排出され、フラスコ壁部は清浄となる。 毛細管２６８，２７２，２７４及び２７６の外
方端部は、装置１０のその他各部品に到るそれぞ
れの可撓性導管２８２に対しねじ接続具２８４に
より相互に嵌合することにより封着される。各導
管２８２の端部には弾性Ｏ−リング２８８を有す
る半径方向フランジ部２８６を設け、このＯ−リ
ングはガラス管の１つにおける半径方向フランジ
２９０の平担な研磨ガラス面に当接して密封作用
を与える。内面ねじ付きカラー２９２が導管２８
２周囲に摺り嵌められて、ガラスフランジ２９０
を収容すると共に、ガラス管の周囲に位置する２
片外ねじ取付け部２９４に螺合する。取付け部２
９４上にカラー２９２を前進させると、フランジ
部２８６がガラスフランジ２９０に圧接されて極
めて効果的な封止が形成される。接続子２８４の
各部分はたとえば市販フルオロカーボン重合体の
ような実質的に化学的不活性の材料で作り、劣化
及び後の漏れの可能性を実質的に排除することが
できる。 フラスコ１４の別の構造は空間部２６４とニツ
プル２６６とを除去して、加熱環境３２内に設置
して高温度に保ちうるような単一壁容器を与える
ようなものである。この構造はガラス管と接続子
２８４との全長さを高温度に維持するという利点
を有し、その内部での準揮発性流体の凝縮を最小
にするが、室装置１２とフラスコ１４を別々の温
度に保つことはできない。 蛋白質又はペプチド鎖の順次減成を行なうため
装置１０で使用される試薬及び溶剤は次の通りで
ある： R1 フエニルイソチオシアネート（PITC）（ヘ
プタン中17％溶液） R2 トリメチルアミン又はトリエチルアミン
（水中25％溶液） R3 トリフルオロ酢酸又はヘプタフルオロ酪酸 R3A 水蒸気 R4 トリフルオロ酢酸（水中25％溶液） R4A 塩化水素（メタノール中1N溶液） S1 ベンゼン S2 0.1％酢酸を含む酢酸エチル S3 塩化ブチル S4 アセトニトリル又はメタノール 操作において、好ましくは装置１０の各弁及び
その他機構は自動制御装置１８により制御され
て、人間の介入なして蛋白質又はペプチド試料に
つき無限回数の減成サイクルを行なう。制御装置
１８は米国特許第3725010号明細書に開示された
プログラミング装置の一般的形態に装置１０によ
り必要とされる特定の工程順序を与えるよう変更
を行つてもよいし、或いは特殊若しくは汎用デジ
タルコンピユーターによりより複雑な電子制御と
することもできる。更には、各減成サイクルにお
ける各過程を所定スケジユールに従つて操作員に
より手動で行ない、同じ結果を得ることもでき
る。 減成過程を開始する前に、研究すべき蛋白質又
はペプチドの試料を適当な試料支持体表面に設置
せねばならない。マトリツクス材料を最初に支持
体表面に被覆し、その後下記に詳細に記載する如
くその中に試料を埋入する。部材１９０又は１９
０′を試料支持体表面として使用する場合は、こ
れは部材１９０が凹部１９２の位置で反応室３４
内に収容されるよう少なくとも１枚の封止用シー
ト１９４と共に室要素１３４と１３６との間に設
置する。本発明の好適具体例においては、一対の
封止用シート１９４を使用し、それらの間に部材
１９０を介在させる。室要素１３４及び１３６を
次いでスリーブ１３２中に挿入しかつ他の各部品
と組合せて室装置１２を形成する。 試料含有薄膜を室３４′又は室３２４の内表面
によつて支持する場合には、これは下記の例２に
記載するようにして被覆される。 先ず、室要素をスリーブ１３２内に組立てた
後、キヤツプ１６０により所定位置に保持され
る。室３４′の場合には、屈撓性材料の環状シー
ト３１６の組立の際に室要素１３４′と１３６′と
の間に設置する。次いで、固体マトリツクス材料
と試料とが例２に記載するように室３４′又は３
２４の壁部に被覆され、スリーブ１３２を他の部
品と組合せて装置を完成させる。 試薬R1乃至R3Aと溶剤S1乃至S3とガス源２８か
らの不活性ガスとを順次導入する準備として、先
ず最初に弁８２を真空トラツプ８８及び真空ポン
プ９０の側に開くことにより反応室３４と関連流
体導管とが排気される。試薬又は溶剤の１種を導
入する都度、対応する不活性ガス供給弁５８と排
気弁６２とを開いて特定貯槽を加圧すると共に、
その内部に動的平衡状態を確立させる。不活性ガ
スが貯槽内に一定圧力を維持するよう逆排され
る。貯槽４４，４６及び４８の場合、供給の際の
そこからの飽和ガスの流れは流れ調節器７６の１
つによつて調節される。 供給すべき特定試薬又は溶剤を含有する貯槽が
加圧されて上記のように平衡に達した後、補助減
圧源（図示せず）により対応する流れ弁６６のダ
イヤフラムに減圧をかけてこの弁を開き、連続マ
ニホールド６８と導管４０とを介して室入口通路
への試薬又は溶剤の流れを生ぜしめる。弁６６を
所定長さの時間にわたり開放に保つて所望量の試
薬又は溶剤を正確に移送させ、次いでそのダイヤ
フラムにガス圧をかけて閉鎖させる。次いで、補
助減圧源からの減圧を連続マニホールド６８の一
番端における弁７２のダイヤフラムにかけて、マ
ニホールドから残留試薬又は溶剤を除去し、室に
対するその供給を完了する。次いで、弁７２をそ
のダイヤフラムに正圧をかけることにより閉鎖
し、マニホールド６８を次回の供給過程に対する
準備として溶剤及び試薬に対し解放する。 ダイヤフラム弁８０は一般に、室３４中に各試
薬及び溶剤を通す間、室出口通路とマニホールド
８４とを介して排棄トラツプ６０へ排出を行なう
よう開放に保たれる。特定試薬又は溶剤を供給し
た後、ダイヤフラム弁８２を真空ポンプ９０側に
開いて室と関連導管とを排気することができる。
別様には室とその中の試料とは、弁７２により室
中に不活性ガスを通して適当な時期に乾燥させる
ことができる。次いで室から出たガスを排棄トラ
ツプ６０に移送することができ、或いは所望に応
じて真空ポンプ９０で吸引して乾燥工程を加速す
ることもできる。 結合及び開裂過程を完了した後、抽出溶剤S3を
反応室３４に供給して、減成の特定サイクルの際
生成された開裂アミノ酸誘導体を溶解させると共
に、この溶液を導管８６を介して変換フラスコ１
４に供給する。この目的で弁７８を開きかつ弁８
０及び８２を閉鎖状態に保つ。次いで、変換試薬
R4及びR4A（使用するならば）と溶剤S4とを適当
な時期に変換フラスコ１４に供給できるが、これ
は対応する弁１１２を開いて液体をマニホールド
１１４と導管１０４とを介して変換フラスコに移
送することにより行なわれる。各供給の前に他の
試薬及び溶剤の供給に関して上記した加圧と排気
の操作を行ない、次いで弁１１８を開いてマニホ
ールド１１４と導管１０４とをパージする。 変換フラスコ１４に移送されるフラクシヨンは
蛋白質又はペプチド試料のＮ−末端アミノ酸のア
ニリノチアゾリノン誘導体であり、これは反応室
３４における次の結合及び開裂サイクルの際ホイ
ツトマン−リーブオールドによる上記論文の記載
に一部従つてより安定なフエニルチオヒダントイ
ンアミノ酸まで自動的に変換される。つまり、変
換フラスコ内のアミノ酸フラクシヨンは、短い毛
細管２７６を通しての溶液上方への不活性ガスの
通過と毛細管２７２による液体中への不活性ガス
のバブリングとに続いて管２６８を通して減圧す
ることによつて蒸発させることができる。次いで
変換試薬R4を毛細管２７６により導管１０４と
弁１１２の１つ（第３図参照）とを介して所望量
だけ導入することができる。所望の変換時間後に
おける変換フラスコの急速蒸発は、変換フラスコ
へ管２６８を介して減圧をかけさらに毛細管２７
２及び２７６を介して不活性ガスを同時に適用す
ることにより達成できる。Pth−アスパラギン酸
及びPth−グルタミン酸の酸性側鎖をさらに安定
させるには、試薬R4Aを毛細管２７６により導管
１０４と弁１１２の１つとを介して所望量だけ導
入することにより変換フラスコ中の残留物をさら
に溶解させることができる。変換フラスコの蒸発
を再び、管２６８を通しての減圧と毛細管２７２
及び２７６を通しての不活性ガスの使用によつて
行なう。次いで、変換フラスコ内に残存するPth
−アミノ酸を、導管１０４を介して導入された溶
剤S4に再溶解させ、このフラクシヨンをフラクシ
ヨンコレクター１６における適当な容器へ移送す
る。フラクシヨンの移送は、変換フラスコの長い
中央毛細管２７２に接続された弁１３１を開きか
つ加圧不活性ガスを毛細管２７６により導入して
フラクシヨンをフラスコから押し出すことによつ
て行なわれる。 フラクシヨンコレクター１６の円形に配列され
た容器は、それぞれ到来するフラクシヨンが別々
の容器中に収集されるよう、各減成サイクルの間
所定角度だけ回転される。減成サイクルの適当な
時点においてフラクシヨンコレクター内のフラク
シヨンをさらに乾燥させることができ、これは弁
９８を減圧側に開くか又は弁１２８及び９４を開
いて源泉２８からの不活性ガスをフラクシヨン上
方に流しかつ最終的に排棄トラツプ６０へ流すこ
とによつて行なわれる。 装置１０の各種部品は好ましくは、実質的に不
活性かつ劣化に対して高度に耐性の材料で製作さ
れる。この種の材料には硼珪酸ガラス、或る種の
フルオロカーボン重合体並びに或る場合にはステ
ンレス鋼及びアルミニウムが包含される。装置１
０の封止構造及びその他部品も、殆んどこれら材
料から製造されうるように設計された。得られる
装置はこれまでの装置のうちで最大限に清浄であ
りそして最も汚染の無い系として永久的に機能す
る。 典型的な減成及び変換サイクルにおいて装置１
０により行なわれる各種の工程を末尾に添付する
第１表に示す。各工程の持続時間及び各工程の際
の装置の作動状態をも同表に示す。ここでの作動
状態は装置における各弁の状態に対応し、欄中の
印は適当な弁が開放している時を意味する。たと
えば、欄“R1”、“R2”、“R3”、“R3A”、“S1”、
“S2”及び“S3”は、選択的に加圧しかつ貯槽４
２乃至５４内に動的平衡状態を確立するための各
対の弁５８及び６２の状態を示す。これらの欄の
１つに印が存在する場合は常に、特定試薬又は溶
剤を反応室に供給する準備として或いは供給中の
いずれかにおいて、特定貯槽に関連する弁５８及
び６２が開放している。その他全ての時点におい
て弁は閉鎖状態に留まる。同様に、“アルゴン”
の欄はたとえばアルゴンのような不活性ガスをマ
ニホールド６８を介して反応室に供給するための
弁７２の状態を示し、“供給”の欄はその時点で
加圧される任意の貯槽に対応する弁６６の状態を
示し、また“排棄”、“収集”及び“減圧”と記し
た欄はそれだれ弁８２，７８及び８０の状態を示
している。上記したように、溶剤又は試薬供給の
各工程に先立つて適当な溶剤又は試薬貯槽の加圧
が行なわれ、次いで弁７２を介して不活性ガスが
導入されて溶剤又は試薬の供給を完了しかつ供給
路をフラツシユする。欄“R4A”及び“S4”は、
選択的に加圧しかつ貯槽１００乃至１０２内に動
的平衡を確立するための各対の弁１０８及び１１
０の状態を示し、“供給／アルゴン”の欄は経路
１２４を介して不活性ガスを変換フラスコ中に導
入する弁１２２と、その時点で加圧される貯槽に
対応する弁１１２との両者の状態を意味する。欄
“アルゴン”、“排棄１”、“減圧”、“収集”、及び
“排棄２”はそれぞれ弁１１８，９２，９６，１
３１及び１２５の状態を示している。 表示したフラクシヨンコレクター機能のうち、
欄“アルゴン”、“排棄”及び“減圧”はそれぞれ
弁１２８，９４及び９８の状態を示している。 上記を除いて第１表に示した工程の順序は引用
文献に記載したエドマン減成法に実質的に一致す
るので詳細には説明しない。一般的実施法から外
れたものは全て工程の名称と第１表に示した対応
する作動状態とから明瞭であろう。 実際には、特定使用者の要望にプログラムを合
わせるため第１表の順序プログラムにおいて次の
変更を行なうことができる： (1) 工程１８乃至５８を最初の順序サイクルで１
回又は２回循環して蛋白質に対する全アミノ基
の完全結合を確保することができる。 (2) 工程６５に続いて反応室中に水蒸気（R3A）
を20〜60秒間供給してセリン及びスレオニンの
側鎖の脱水を減少させることができる。 (3) 工程６５に続いてメタノール（R4A）中の1N
塩酸0.05mlを変換フラスコに供給してアスパラ
ギン酸及びグルタミン酸の側鎖をメチル化する
ことができる。これを行なう場合、S4は好まし
くはメタノールである。 (4) 工程７６に続いて0.7〜１mlのS4（アセトニト
リル又はメタノール）を供給し、これをその後
に排棄部へ移送して変換フラスコを充分に清浄
することができる。 (5) 工程８の持続時間を増加して（500〜1000秒
間）、アミノ末端プロリン残部の開裂を促進す
ることができる。 本発明の本質は、本発明の実施に関する以下の
特定例によりさらに明瞭となるであろう。開示し
たデータは本発明の装置及び方法を用いて実施し
た処理の例としてのみ役立ち、決して本発明の範
囲を限定する意図でないことを了解すべきであ
る。 以下の例で示すアミノ酸順序は１文字のアミノ
酸記号で示され、これは次のように定義される： Ａ：アラニン Ｌ：ロイシン Ｒ：アルギニン Ｋ：リジン Ｎ：アスパラギン Ｍ：メチオニン Ｄ：アスパラギン酸 Ｆ：フエニルアラニン Ｃ：システイン Ｐ：プロリン Ｅ：グルタミン酸 Ｓ：セリン Ｑ：グルタミン Ｔ：スレオニン Ｇ：グリシン Ｗ：トリプトフアン Ｈ：ヒスチジン Ｙ：チロシン Ｉ：イソロイシン Ｖ：バリン 例 １ 順次決定する蛋白質試料を埋入するのに適した
高分子第４アンモニウム塩の固体マトリツクスは
上記の繊維質シート部材１９０及び１９０′の上
で調製することができ、蛋白質試料は次のように
マトリツクス中に埋入されうる。 直径12mmかつ厚さ0.25〜0.5mmのガラス繊維円
板を、ニユージヤーシー州、クリフトン所在のワ
ツトマン社より市販されているガラスミクロフア
イバーフイルターのシートから切り取る。この円
板を室要素１３４の凹部１９２に設置する。1.5
mgの１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカ
メチレンポリメトブロマイドと0.0033mgのグリシ
ルグリシンとを含有する水溶液25μを注射器又
はピペツトからガラス繊維円板上に滴下する。減
圧下又は温窒素の流れ中で加熱することにより水
を蒸発させる。室装置１２の残部を組立てて、装
置１０中に装着する。蛋白質順序決定プログラム
を工程１８から開始し、蛋白質試料と化学反応す
るか或いはエドマン法を妨げる可能性のある不純
物を１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカ
メチレンポリメトブロマイドから除去するため４
〜６回の減成サイクルを行なう。室装置１２を部
分的に解体して25μの蛋白質溶液をガラス繊維
円板上に滴下する。蛋白質溶液は１，５−ジメチ
ル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブ
ロマイドを溶解させ、液体を蒸発により除去して
蛋白質試料が埋設された１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド
の薄膜を残入させる。最初の蛋白質試料容量が
25μより大であれば、この試料を25μ分だけ
施こし、分割施用の間に蒸発により液体を除去す
ることができる。室装置１２を再組立てし、装置
１０中に再装着する。次いで蛋白質順序決定プロ
グラムを工程１８から開始し、所望に応じて多数
回の減成サイクルを行なう。 例 ２ 順序決定する蛋白質試料を埋入するのに適する
高分子第４アンモニウム塩の固体マトリツクスは
ガラス毛細管容器の内壁上で調製することがで
き、蛋白質試料を次のようにしてマトリツクス中
に埋入することができる。 室要素３２４又は室要素１３４′及び１３６′を
先ず最初に図面に示すようにスリーブ１３２及び
キヤツプ１６０と組立てて小型のカートリツジ式
小組体を形成し、これはマトリツクス及び試料を
導入するための操作を容易化する。この小組立体
を水平に保ち、0.6mgの１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド
と0.0013mgのグリシルグリシンとを含有する水溶
液10μを注射器から反応室中に注入する。 室３２０は、その２端部の直径が1/16インチと
なりかつ中央の直径が1/8″となるように製作し、
水平状態においてこれら端部からこぼれることな
く25μまでの溶液を収容する室を作るのが好ま
しい。水平状態で溶液を保持する室３２４のこの
形状を第１８Ｂ図に示し、この場合簡単化のため
スリーブ１３２とこれに関連する構造とを省略し
てある。次いで、この小組立体をその軸を中心と
して回転させ、その間室中に空気又は窒素の流れ
を流入させることにより反応室内の液体を蒸発さ
せて、室の壁部上に１，５−ジメチル−１，５−
ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイドの薄
膜を残留させる。次いで、小組立体を装置１０内
に装着し、蛋白質順序決定プログラムを工程１８
から開始し、そして４〜６回の完全減成サイクロ
を行なう。次いで、小組立体を装置１０から取り
出して水平に保ち、10μの蛋白質溶液を注射器
から反応室中に適下する。小組立体を再びその軸
を中心として回転させ、その間室中に向けた窒素
の流れにより反応室内の液体を蒸発させて、第１
８Ｃ図に示したように蛋白質試料が埋入された
１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチ
レンポリメトブロマイドの薄膜を残留させる。次
いでこの小組立体を装置１０内に再装着し、蛋白
質順序決定プログラムを工程１８から開始して所
望の回数だけ減成サイクルを行なう。 例 ３ 20％蟻酸水溶液25μ中に含有させたアンギオ
テンシン0.0005mgを、予め環化させた１，５−ジ
メチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメ
トブロマイドの固体マトリツクス中に例１の方法
に従つて埋め込んだ。アンギオテンシンを８サイ
クルのエドマン減成にかけ、各サイクルで生成さ
れたフエニルチオヒダントインアミノ酸をジヨン
ソン等により記載された方法〔「デユポン・ゾル
バツクスCNカラム上での高圧液体クロマトグラ
フイーによるフエニルチオヒダントインアミノ酸
の分析」、アナリテイカル・バイオケミストリー、
第100巻、第335頁（1979）〕に従つて高圧液体ク
ロマトグラフイーにより分析した。「実験」とし
て下記する順序が得られた。既知順序をも比較の
ため下記する。 実験：１ Ｄ −Ｒ−３ Ｖ −Ｙ−５ Ｉ −Ｈ−７ Ｐ −Ｆ 既知：Ｄ−Ｒ−Ｖ−Ｙ−Ｉ−Ｈ−Ｐ−Ｆ この結果は、少量のペプチドでさえ本発明の方
法で順序決定できることを示しているので意義が
ある。このような少量のペプチドを順序決定しう
る性能は、試料を支持体表面上に直接吸着させる
のでなく薄膜中に埋設して保持し、したがつて寸
法に無関係にしつかり保持されうるという事実に
よつて生ずる。吸着結合は試料と表面との間にお
ける多数の非共有相互作用からなり、分子の寸法
によつて著しく左右されるのに対し、ここに開示
した薄膜の保持力は試料寸法により比較的影響さ
れない。 例 ４ 20％酢酸水溶液25μ中に含有させた鯨精子ア
ポミオグロビン0.01mgを、予め環化させた１，５
−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポ
リメトブロマイドの固体マトリツクス中に例１の
方法に従つて埋め込んだ。このアポミオグロビン
を40サイクルのエドマン減成にかけ、フエニルチ
オヒダントインアミノ酸を例３の方法に従つて分
析し、「実験」として下記に示す順序を得た。鯨
精子アポミオグロビンの既知順序をも比較のため
下記に示す。 実験：１ Ｖ −Ｌ−Ｓ−Ｅ−５ Ｇ −Ｅ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−10 Ｖ 既知：Ｖ−Ｌ−Ｓ−Ｅ−Ｇ−Ｅ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−Ｖ 実験：−Ｌ−Ｈ−Ｖ−Ｗ−15 Ａ −16 Ｋ −Ｖ−Ｅ−Ａ 既知：−Ｌ−Ｈ−Ｖ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｖ−Ｅ−Ａ 実験：−20 Ｄ −Ｖ−Ａ−25 Ｇ −Ｈ−Ｇ−Ｑ−Ｄ−Ｉ− 既知：−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｇ−Ｈ−Ｇ−Ｑ−Ｄ−Ｉ− 実験：Ｌ−30 Ｉ −Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−35 Ｓ −Ｈ−Ｐ 既知：Ｌ−Ｉ−Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−Ｓ−Ｈ−Ｐ 実験：−Ｅ−Ｔ−40 Ｌ − 既知：−Ｅ−Ｔ−Ｌ 例 ５ 0.1％のドデシル硫酸ナトリウムと0.05M重炭
酸アンモニウムとの水溶液25μ中に含有させた
未知構造のしようじようばえ
（Drosophilamelano−gaster）幼虫のキユーチク
ル蛋白質を、予め環化させた１，５−ジメチル−
１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマ
イドの固定マトリツクス中に例１の方法に従つて
埋め込んだ。このキユーチクル蛋白質を36サイク
ルのエドマン減成にかけ、フエニルチオヒダント
インアミノ酸の例３の方法に従つて分析し、「実
験」として下記に示す順序を得た。 実験：１ Ｎ −Ａ−Ｎ−Ｖ−５ Ｅ −Ｖ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｖ −11 Ｎ −Ｄ−Ｖ−Ｑ−15 Ｐ −Ｄ−Ｇ−Ｆ−Ｖ− Ｓ−21 Ｋ −Ｌ−Ｖ−Ｌ−25 Ｄ −Ｄ−Ｇ−Ｓ− Ａ−Ｓ−31 Ｓ −Ａ−Ｔ−Ｇ−35 Ｄ −Ｉ− 例 ６ 0.1％のドデシル硫酸ナトリウムと0.05M重炭
酸アンモニウムとの水溶液10μ中に含有させた
未知構造のしようじようばえ幼虫のキユーチクル
蛋白質を、予め環化させた１，５−ジメチル−
１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマ
イドの固定マトリツクス中に例２の方法に従つて
埋め込んだ。このキユーチクル蛋白質を24サイク
ルのエドマン減成にかけ、フエニルチオヒダント
インアミノ酸の例３の方法に従つて分析し、「実
験」として下記に示す順序を得た。 実験：１ Ｎ −Ａ−Ｎ−Ｖ−５ Ｅ −Ｖ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｖ −11 Ｎ −Ｄ−Ｖ−Ｑ−15 Ｐ −Ｄ−Ｇ−Ｆ−Ｖ− Ｓ−21 Ｋ −Ｌ−Ｖ−Ｌ− 例５及び例６において達成された結果は、本発
明の装置及び方法がドデシル硫酸酸ナトリウム
（以下、「SDS」と云う）、すなわち有力な陰イオ
ン洗剤の溶液に溶解された蛋白質及びペプチドを
順序決定するのに適することを示している。この
ことは、分析用の大型蛋白質又はペプチドに対し
少量の媒体を分離するポリアクリルイミドゲル電
気泳動として知られた最も一般的な方法がSDS溶
液中にて試料を生ずるので重要である。この一般
的な洗剤は支持体表面に対する試料の吸着結合に
基づいて試料が装置を洗浄するようにさせるにも
拘らず、本発明の固体マトリツクスはSDSの存在
により影響を受けない。 上記から判るように、極めて少量の試料につき
最少量の試薬及び溶剤と比較的短いサイクル時間
との使用により化学過程を順次実施する改良装置
及び方法が提供された。
の改良装置及び方法に関し、さらに詳細には多数
のアミノ酸単位を含有する蛋白質又はペプチド鎖
の順次減成をこれら単位の順序を決定するために
自動的に行なう改良装置に関するものである。 蛋白質及びペプチドにおけるアミノ酸単位の線
順序は、それらの生物学的機能を理解しかつ最終
的には同じ機能を示む化学物を合成する手段とし
て極めて興味がある。アミノ酸の線順序を決定す
るため各種の技術が使用されているが、恐らく最
も成功しているものはエドマン法として知られて
いるものであろう。種々な形のエドマン法及びこ
れら方法を自動的に行なうための装置が下記の刊
行物に記載されている。 エドマン及びペツグ、「蛋白質順序決定装置」、
ヨーロピアン・ジヤーナル・バイオケミストリ
ー、第１巻（1967）、第80〜91頁；ホイツトマン
−リーブオールド、「自動変換装置を備えた改良
順序決定装置による大腸菌における10種のリボソ
ーム蛋白質のアミノ酸順序研究」、ホツペセイラ
ース・ツアイトシユリフト・フイジオロジツシ
エ・ヘミー、第354巻、第1415頁（1973）；ホイツ
トマン−リーブオールド等、「アニリノチアゾリ
ノンからPTHアミノ酸への自動変換に対する改
良順序決定装置に結合した装置」、アナリテイカ
ル・バイオケミストリー、第75巻、第621頁
（1976）；1976年５月25日付「アミノ酸順序の自動
決定法」と題する米国特許第3959307号；フンカ
ピラー及びフード、「改良順序決定装置と非蛋白
質キヤリア（ポリプレン）と高圧液体クロマトグ
ラフイーとを使用するポリペプチドの直接搭ミク
ロ順序分析」、バイオケミストリー第2124頁
（1978）；アール・エー・ラウルセン、ヨーロピア
ン・ジヤーナル・バイオケミストリー、第20頁
（1971）；イー・ワツハター、エツチ・マツハライ
ト、エツチ・ホフナー及びジエー・オツト、
FEBSレター第35巻、第97頁（1973）；1973年４
月３日付「化学過程を自動的に行なうための装
置」と題する米国特許第3725010号；1973年２月
20日付「ペプチド鎖の順次減成方法」と題する米
国特許第3717436号；1975年７月１日付「ペプチ
ド及び蛋白質の順序決定装置」と題する米国特許
第3892531号；1977年12月27日付「ペプチド又は
蛋白質の順序決定方法及び装置」と題する米国特
許第4065412号。さらに特記すべき装置は、1979
年12月26日付で出願された「化学過程の実施装
置」と題する米国特許出願番号第106828号明細書
に記載されている。 簡単に云えば、上記刊行物において検討されて
いるように、エドマンの順次減成方法は３つの工
程、すなわち結合（coupling）と開裂
（cleavage）と変換（conversion）とを含んでい
る。結合工程においては、フエニルイソチオシア
ネートがペプチドのＮ−末端αアミノ基と反応し
てフエニルチオカルバミル誘導体を生成する。開
裂工程においては、無水酸を使用してフエニルチ
オカルバミル誘導体を開裂させることによりアニ
リノチアゾリノンが生成される。チアゾリノンを
抽出した後、残部ペプチドは次サイクルの結合及
び開裂反応に使用される。酸水溶液を使用してチ
アゾリノンをフエニルチオヒダントインに変換さ
せ、これをたとえばクロマトグラフイーのような
適当な方法で分析することができる。 米国特許第3725010号の自動化装置、更には上
記に挙げたホイツトマン−リーブオールドの論文
並びに米国特許出願第106828号で改良された自動
化装置は、通常「回転カツプ」として知られそし
て密閉反応室内に置かれる回転反応セルの内壁に
形成させた薄膜において、反応を行なうような自
動化順序決定装置である。室に対し調節した量の
液体試薬を導入及び除去する手段を設けて、不活
性雰囲気中で蛋白質又はペプチドの試料と反応さ
せる。分析すべき試料は最初に回転カツプ中に置
かれ、次いで結合及び開裂反応を行なうのに必要
な各種の試薬及び溶剤が順次して導入及び除去さ
れる。カツプが回転する際、液体試薬と溶剤とは
それ自身でカツプ壁部上に薄膜を形成して、試料
薄膜中に浸透してこれと反応する。試薬は試料薄
膜を溶解させ、エドマン法の結合及び開裂工程を
遂行する。結合及び開裂工程の完了後、反応室を
排気して試薬の揮発成分を除去する。結合後の排
気に続いて、残存する試料薄膜を溶剤で抽出する
ことにより不揮発成分を除去する。開裂後の排気
に続いて、生成したチアゾリノンを溶剤により試
料薄膜から抽出しかつ別のフラスコに移して変換
工程を行なうか又は各種フラクシヨンを集めて乾
燥する装置に移す。変換工程を変換フラスコ中で
直ちに行なわない場合は、この工程を後に多数の
フラクシヨンについて同時に行なうことができ
る。 回転カツプに対する流体の導入及び導出は、反
応室の上壁部の開口部を封止しそこからカツプ内
のある位置まで垂下する栓を貫通する流体用導管
によつて達成される。流体は回転カツプ中へその
底部に隣接する個所において直接に導入され、カ
ツプの円筒状内表面における環状溝から抜き取ら
れる。抜き取るべき流体はカツプが高速回転する
とき遠心力により環状溝中に強制送入され、溝中
に突入した内方端部を有する導管を介して抜き取
られる。したがつて、この流出導管は、反応生成
物と副生物並びに抽出用溶剤を除去するための掬
出し器として作用する。 回転カツプ装置中の蛋白質又はペプチド試料自
体が凝集性薄膜を形成するのに充分な量を持たな
い場合は、操作は、しばしばカツプの内壁上で溶
剤抽出の際に比較的厚い層の非蛋白質キヤリア材
料内にて行なわれる。次いで、結合及び開裂反応
が起こりうるよう、反応工程の際にキヤリア材料
と試料とを液体試薬中に溶解させる。化学組成
１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチ
レンポリメトブロマイドを有する高分子第４アン
モニウム塩がこの目的で使用されている。試料を
確実に保持するにはキヤリアが相当量で使用せね
ばならず、そしてキヤリアと試料の両者は液体試
薬により溶解させて、試料と試薬との間で反応を
可能ならしめられる。 回転カツプ型の装置は多くの場合許容しうる実
験結果を与えることもあるが、幾つかの欠点を有
する。たとえば、主として使用する試薬が液状で
あり、これを多量に使用せねばならないため、適
当に多量の蛋白質又はペプチド試料を取得しかつ
必要試薬の充分な供給を確保する経費が極めて高
くつく。液体試料と溶剤とは、これらがカツプ壁
上を通過する際試料部分を薄膜から分離させてカ
ツプの壁部から洗い流す傾向を有し、装置の各連
続サイクルで得られる末端アミノ酸単位の収率を
減少させる。したがつて、充分な試料が最後のサ
イクルまで残留して有用な結果を得ることを確保
するには、試料の初期量を充分大にせねばならな
い。さらに、この型式の装置は、反応室の容積が
大きくかつそこに存在する試料を減圧乾燥するこ
とにより準揮発性の液体試薬と溶剤とを反復除去
する必要があるため、かなり長いサイクル時間を
必要とする。さらに、回転カツプ順序決定装置は
製造及び修理が共に極めて複雑で高価につく。 異なる型式の順序決定装置が上記ラウルセン及
びワツハターの文献に開示されており、この場合
試料は共有結合により複数の小ビーズの表面に不
動化される。これらビーズは反応塔内に収納され
て多孔性充填物を形成し、この反応塔に液体試薬
を満たして化学プロセスを遂行する。使用する開
裂試薬は蛋白質及びペプチドに対し優れた溶剤で
あるため、試料をその場に保持するには共有結合
が完全でなければならない。しかしながら、共有
結合は実際上達成困難である。また、充填塔は洗
浄困難であつて、そこに存在するビーズは使用中
に崩壊する傾向がある。 従来、静止反応室内に試料を入れてこの試料を
気体若しくは蒸気状の少なくとも１種の試薬にか
けることにより、これら装置の欠点を克服するよ
う設計した順序決定装置が提案されている。上記
の米国特許第3892531及び4065412号はこのような
２種の装置を開示しているが、そのいずれも充分
満足には作動しない。 米国特許第3892531号の装置は反応室内に閉鎖
指状伸長部を備えており、これによりペプチド若
しくは蛋白質試料を順次して気体試薬と溶剤とに
曝露する間調節された温度に保持する。試薬を導
入する都度、伸長部を内部から冷却してそこで凝
縮を生ぜしめる。次いで伸長部を加温して試料を
液体中に溶解させ、反応を進行させる。試料と反
応させた後、望ましくない準揮発性薬品を熱と不
活性ガス流との組合せにより試料から乾燥させ、
或いは伸長部上に凝縮する溶剤により末端アミノ
酸と共に伸長部から滴下するまで洗浄することが
できる。 米国特許第4065412号の装置及び方法において
は、蛋白質又はペプチド試料は、化学的結合又は
直接吸着により反応塔内の多数の小さな巨孔執ビ
ーズの内表面と外表面との両者に被覆される。各
種の試薬及び溶剤を気体状又は液状のいずれかで
順次に充填塔に通して所望の減成反応を生ぜしめ
る。反応塔に対する試薬と溶剤との流れは、10位
置回転面封止弁により制御される。 残念ながら、これら特許の装置は、多数の減成
サイクルにおいて、許容しうる結果を達成するの
に充分な汚染のない環境を与えない。たとえば、
これら装置においては蛋白質又はペプチド試料を
効率的に洗浄するのが困難である。溶剤が試料か
ら滴下する点まで溶剤を凝縮させることにより試
料を洗浄する上記方法は、種々の反応生成物の微
量を試料上に残し、その後の化学反応を汚染する
傾向がある。同様に、反応塔内に試料を保持する
のに使用する充填物は、汚染を避けるため各種の
化学生成物を塔中に完全に移動させて塔から除去
せねばならないため洗浄困難である。これは、多
量の溶剤を使用してさえ容易に行なわれない。何
故なら、溶剤は蛋白質試料の大部分が存在するビ
ーズ内部の小孔部を通過せずに、ビーズ間の間隙
を通過する傾向を有するからである。これら装置
の流体供給管路及び流れ弁は、また充分な排気が
困難であり、化学残留物を捕捉する傾向を有し、
これら残留物はその後の反応サイクルにおける目
的とする化学反応を妨げることがある。 さらに、反応塔に充填物として使用されるガラ
ス若しくはプラスチツクビーズは、多数の減成サ
イクルにおいての使用中崩壊する傾向を有し、こ
の装置系をそこを通しての流体の流過を妨げる点
にまで閉塞させてしまう。かくして、実際上サイ
クル間で系を洗浄するのは不可能となり、塔内に
おける化学反応が不可能となるまでに汚染される
ようになる。 上記した幾つかの因子により惹起される汚染
は、順次の減成過程の継続中の累積的に進行す
る。したがつて、反応セル内の試料と試薬とは
増々汚染されるようになり、所望の結合及び開裂
反応を妨げると共に、多くの望ましくない反応を
ひき起こさせる。かくして、装置の各完結サイク
ルからの収率は減少し、一連の汚染物がフラクシ
ヨン中に入り込む。 収率は、たとえば充填物の崩壊、洗落し用溶剤
中への試料の溶解、及び充填物と試料との間の吸
着結合の破れを含む種々の理由に基づく試料の直
接的損失によりさらに低下する。 これらの作用は、多量の蛋白質又はペプチド試
料が使用できる場合或いは連鎖が比較的少数の単
位しか有しない場合には看過することもできる
が、連鎖が極めて多数の単位を有する場合或いは
極めて少量の特定蛋白質又はペプチドが入手され
る場合には状況が厳しくなる。インターフエロン
の場合にはこれら両者の状況が存在する。このイ
ンターフエロンとは或る種のウイルス感染に呼応
してひと細胞内に生成される小型蛋白質である。
インターフエロンは臨床医学の分野で最近多くの
話題を呼んでいる。何故なら、これはウイルス感
染を抑制する有効物質であると有望視されかつ抗
癌剤として極めて有望と思われるからである。イ
ンターフエロンは極めて少量しか生産されず、し
たがつて少量しか入手できない。現在、２種のひ
とインターフエロンの実際的な全世界における生
産は、多量のひと白血球（白血球インターフエロ
ン）又は或る種のひと組織培養細胞（繊維芽細胞
インターフエロン）を入手しうる比較的少数の先
進国に限られる。この制約されたインターフエロ
ンの生産能力のため、充分管理された臨床研究及
びこの分子がどのように作用するかについての基
礎的解析を行なうことが困難である。さらに状況
を複雑にしていることは、インターフエロンが約
150個のアミノ酸単位の連鎖で構成され、分析の
為にはこれら単位を個々に連鎖から開裂させねば
ならないことである。上記した種類の汚染損失
は、使用しうる蛋白質が極めて少量であるためイ
ンターフエロンにおける最初の数個のアミノ酸単
位の順序決定を妨げる。最初の数個の開裂サイク
ルを越えると、少量の試料は有意の結果がもはや
得られない点まで汚染されるようになる。 試料から開裂された各種のチアゾリノンをより
安定なフエニルチオヒダントインまで変換させる
ための、本出願人の知る最も精巧な従来の装置
は、ホイツトマン−リーブオールドの上記論文に
記載され、そして上記の米国特許出願番号第
106828号で改良されたような変換フラスコであ
る。しかしながら、本出願人は、試薬と溶剤とを
適当な毛細管により導入する場合このフラスコが
内壁部の非効率的洗浄により障害を呈することを
知つた。試薬と溶剤とを不活性ガスの流れと共に
供給してフラスコ壁部の液体を飛散させることに
よりフラスコ壁を洗浄できることが示唆されてい
る。しかしながら、この技術はフラスコへの液体
の乱調な流れをもたらし、液体供給容量の調節を
極めて困難にする。 さらに、本出願人は、もつと小容量の液体を収
容するよう従来の変換フラスコの寸法を著しく減
寸すると、変換反応の際内容物を撹拌しかつその
準揮発性成分を蒸発させるためフラスコの液体内
容物中に不活性ガス気泡を最適度に分散させるの
が困難になることを見出した。これらの目的でフ
ラスコの底部に導入される不活性ガスは比較的大
きな気泡として液体の表面まで上昇する傾向を有
し、液体を均一に撹拌せずにむしろフラスコ頂部
への液体の飛散を促進してしまう。 したがつて、多くの用途において、たとえば蛋
白質又はペプチドの順序決定のような化学過程を
実施するための、効率よく操作できかつ最小の装
置汚染でもつて最大限の順序決定サイクルを極め
て少量の試料により成功裡に実施しうるような装
置を提供することが望まれている。 概述すると、本発明は、反応室を画成する内部
表面を備えた室手段を含み、この室は流体を加圧
流れとして導通させるための入口及び出口手段を
備える。さらに、複数の流体に対し拡散により透
過性でありかつ室内に位置づけられる固体マトリ
ツクス手段が含まれる。このマトリツクス手段中
に埋入された試料は不動化されると共に、室を通
過する複数の流体のいずれにも露曝されてこれら
と化学的に反応する。 室手段は、固体マトリツクス手段を薄膜として
担持する表面手段を含むことができ、そしてマト
リツクス手段はたとえば１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンボリメトブロマイド
又は（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，５−ジメチレン−
ピペリジニウムクロライド）のような高分子第４
アンモニウム塩から構成することができる。 表面手段は室手段の内壁の全体又は一部として
構成することができるし、また室をほぼ横方向に
横断して延在しかつ流体を貫通させうる多孔質シ
ート手段からなることもできる。シート手段は複
数のガラス繊維で作られたシートから構成するこ
とができる。 室手段はその対向係合表面上にそれぞれ第１及
び第２空洞部を備えた一対の隣接室要素から構成
することができ、これらの第１及び第２空洞部は
互いに整列して反応室を形成する。第１及び第２
空洞部は係合面から離れる方向に、空洞部がそれ
ぞれ入口及び出口手段と連通する位置までテーパ
づけることができる。多孔質シート手段を使用す
る場合は、これを係合表面の少なくとも一方にお
ける凹部に収容し、第１及び第２空洞部を実質的
に分離する配向をもつて室内に保持する。室手段
は、封止関係で係合表面間に挾持された少なくと
も１枚の屈撓性材料のシートを含むことができ、
この屈撓性材料は複数の流体に対し透過性であ
る。また、室要素の少なくとも１つはその係合表
面上に空洞部の周囲に延在する隆起部分を備える
ことができ、これにより屈撓材料のシートを室要
素の係合表面に対し圧接し、かくして封止効果を
向上させる。 入口及び出口手段はそれぞれ室要素を貫通して
延びかつその内方端部において多孔質シート手段
の両側で反応室と連通する一対の毛細管通路から
構成することができる。これら毛細管は反応室と
同軸的であり、そこから室要素のほぼ平坦な外部
表面における外方毛細管開口部まで延在すること
ができる。 室中に複数の流体を順次に流過させる手段は、
表面上に複数のほぼ平坦なバルブ部位を備え２つ
の端部間で連続して形成されそして第１開口部を
介してバルブ部位のそれぞれに連通する第１通路
とそれぞれ第２開口部を介してバルブ部位の１つ
に連通する複数の第２通路とを具備する弁ブロツ
ク手段、及び各バルブ部位を覆う複数の弾性かつ
実質的に不透過性のダイヤフラムを包含し、各ダ
イヤフラムはバルブ部位の１つに圧接されてその
部位に連通する第１及び第２開口部を閉鎖する第
１封止状態と、その部位から引き離されて弁ブロ
ツク手段の外部を通して第１開口部と第２開口部
との間に流体流路を与える第２状態との間で作動
し、それにより第１通路と第２通路との間の流体
流れを選択的に調節することができる。接続手段
は少なくとも１つの傾斜フエルールを含み、これ
を管部材周囲に滑り係合にて密接嵌装すると共
に、通路の１つに連通する弁ブロツク手段におけ
る異なる傾斜の凹部に圧接させて、フエルールに
かかる内向きの力がフエルールと凹部との間の比
較的小さい接触面積に集中してこれらの間に流体
シールをもたらすようにする。凹部は好ましくは
前記フエルールよりも大きな角度で傾斜する。さ
らに、接続手段は、第１通路を装置の他の部分に
接続するため第１通路の一端部に取付け部を備え
ることができ、かくして第１通路はこの取付け部
と取付け部から最も離間した第２通路との間の流
体流れをフラツシユさせうるようなマニホールド
として作用する。第１通路は、鋸歯形状を有しか
つ交互の交差部において各バルブ部位に連通する
導管を形成するよう端部対端部で接続した複数の
直線通路から構成することができる。 装置は、各種の流体を導入及び除去するため内
部に突入する複数の毛細管を備えた変換フラスコ
を含むことができ、これら毛細管の少なくとも１
本は孔部を閉鎖しかつ複数の半径方向に離間した
制限オリフイスを設けた内方端部を備え、かくし
て毛細管を通る流体の流れはフラスコの内壁部に
対しスプレー作用を与えて内壁部を洗浄する。さ
らに、フラスコの底部に近接する個所で終端する
毛細管は閉鎖端部を備えると共にそれに近接して
複数の半径方向に離間した制限オリフイスを備
え、かくして毛細管通を通るガスの内方流れは複
数の小気泡を発生してフラスコ内の液体を撹拌し
或いはその乾燥を促進する。 化学物質の試料につき化学的プロセスを順次実
施する本発明の方法は、複数の流体に対し拡散に
より透過性である固体マトリツクスに試料を埋込
み、入口と出口とを備える密閉室の内部に固体マ
トリツクスを包入し、複数の流体を室中に加圧流
として入口から出口まで試料が各流体に露曝され
るように順次流過させ、それにより試料を不動化
させると共に試料と流体との間の化学的相互作用
を達成することからなつている。固体マトリツク
スは、密閉室の内壁部上に薄膜として支持するこ
とができる。その他の方法として、固体マトリツ
クスは多孔質シート上に支持させることもでき、
このシートを入口から出口まで通過する流体がこ
のシートを必らず通過するように入口と出口との
間の位置に室をほぼ横断して延在させる。固体マ
トリツクス中に試料を埋入する工程は、固体マト
リツクスを支持表面に薄膜として施こし、次いで
試料を含有する溶液をこの薄膜に、試料溶液がマ
トリツクスを溶解するように施こす工程からなる
ことができる。次いで、液体を溶液から蒸発させ
て、試料が埋入された薄膜を残留させる。 本発明の目的は、化学物質の試料につき最小の
試料損失と最小の系汚染とでもつて化学的プロセ
スを順次実施するための装置及び方法を提供する
ことである。 さらに、本発明の目的は、極めて少量の試料に
つき化学的プロセスを最小量の試薬と溶剤との使
用により順次実施するための経済的装置及び方法
を提供することである。 本発明の他の目的は、化学的プロセスを順次実
施するための極めて短いサイクル時間を有する改
良装置及び方法を提供することである。 さらに、本発明の目的は、試料をサイクル間で
より効果的に洗浄しうるような、試料に対し化学
的プロセスを順次実施するための改良装置及び方
法を提供することである。 本発明の装置及び方法は、減成過程に使用され
る試薬と溶剤との両者に対し拡散により透過しう
る薄膜として形成した固体マトリツクスの内部に
蛋白質又はペプチド試料を不動化させることによ
り、従来の順序決定装置に関する多くの問題を解
決する。かくして、完全な共有結合を達成する困
難な問題が回避され、同様に試料が支持体表面上
に直接吸着されて移動液体相の機械的剪断力に曝
されたとき遭遇するような試料損失の問題も回避
される。試料はマトリツクスによりしつかり固定
される一方、それより小さい試薬と溶剤とアミノ
酸誘導体とはマトリツクス中に拡散することがで
き、減成過程における種々な工程を行なうのに充
分な濃度までマトリツクス中に効果的に溶解する
ことができる。固体マトリツクスは気体試薬に露
呈された際にも試料を極めて効果的に保持するの
で、実際上如何なる形状の試料支持体表面をも何
らの試料損失なしに使用することができる。反応
室の内壁部自身を充分な支持体表面とすることが
できる。 系の完全洗浄を著しく容易化させる支持体表面
は、複数の重なつたガラス繊維で作られ、流過反
応室を横断して延在する多孔質シートである。多
孔性は繊維間の空隙によつて与えられる。この構
造は流体流れ方向に最小の寸法でもつて比較的大
きい総表面積を有する。固体マトリツクスは繊維
表面上に薄膜を形成し、試薬と溶剤とが薄膜中に
容易に拡散してそこに埋設された試料と反応する
のを可能にする。これは、最小限量の試薬と溶剤
とを用いて比較的短時間に化学過程と洗浄サイク
ルとを試料について行なうことを可能にする。試
薬と溶剤とは、その或る物は気体又は蒸気の形態
であるが、薄膜を透過して試料と接触し、これと
最大限に完全かつ効果的に反応する。 ここに開示した多孔質シートの比較的薄い形態
は、さらに、比較的少量の溶剤により試料から残
留試薬と反応生成物とを完全に洗浄する能力を高
める。溶剤は、試薬と反応生成物とをこれらを系
から除去するにはシートの表面から比較的短距離
だけ移動させればよい。シート表面から外れた個
所からは、それらを容易に室外に誘導して試料を
次回の反応工程用の状態にすることができる。少
量の溶剤使用は溶剤費用の節約となるだけでな
く、試料が反応室から洗い出されて損失する傾向
をも減少させる。 さらに、気体又は蒸気状の試薬を使用すること
は、試薬に対する試料の完全露出にも貢献し、必
要とされる試薬の量を最小にする。試薬の使用を
少なくすることは、エドマン減成技術に使用され
る試薬が極めて汚染を嫌いしたがつて極めて高価
であるため重要である。さらに、試料とこれを含
有する固体マトリツクスとは気体試薬により溶解
されず、支持体表面からの試料の分離による試料
損失の問題を除去する。 本発明の反応室は、気体及び液体の両試薬を試
料を保持した多孔質シート中に通過させしかも試
料が外部不純物により又は一反応工程若しくはサ
イクルから次の工程若しくはサイクルへと運ばれ
る化学物質により汚染されないように構成され
る。たとえば、当接する室要素が２つ組合され
て、多孔質シート各例に第１及び第２空洞部を構
成する低容積の反応室を形成する。室自身から各
室要素を介して反対方向に延びる一対の毛細管通
路は、気体又は液体状の複数の流体が加圧流とし
て室を通過しかつ試料マトリツクスを通過するの
を可能にする。室と通路との容積が小さいことは
試薬と溶剤との必要量を最小限にすると共に、サ
イクル間における系の減圧乾燥を容易にする。２
つの室要素は、その係合表面においてこれら係合
表面間に挾持された屈撓性材料のシートによつて
封着される。この材料は室を通過する複数の流体
に対し透過性であり、実際にガスがより均一に多
孔質シートと接触するよう分散させることにより
室を通過するガスの流れを向上させる。 反応室の別の具体例は、単一の毛細管又は毛細
管型通路であつてその内部表面上すなわち孔部上
に薄膜として形成された固体マトリツクスを有す
る。蛋白質又はペプチド試料を多孔質シートの場
合と同様にマトリツクス中に埋入し、試薬と溶剤
とを毛細管中に順次通過させて試料と相互作用さ
せる。上記した室構造は、多孔質シート部材なし
でこの目的に使用することができる。次いで、試
料含有マトリツクスを第１及び第２空洞部の表面
上に形成させる。同様に、固体マトリツクスを支
持する表面は、試薬と溶剤の流体をマトリツクス
上に流しうるような実質的に任意の方法で製作す
ることができる。 室及び変換フラスコ両者に対して導入及び導出
される流体の流れを調節するための本発明の新規
な弁アセンブリは、流体の相互汚染を避けるよう
に特に製作される。各弁手段は単一の導管を複数
の他の導管と対峙させて、この単一の導管を他の
導管のそれぞれに選択的に接続する。単一の導管
は弁ブロツクにおいて第１通路の一端部と連通す
るように作られる一方、他の導管のそれぞれは第
２通路の１つに接続される。常閉状態において、
各バルブ部位を覆うダイヤフラムのそれぞれはガ
ス圧により弁ブロツクの表面に圧接されて第１通
路と特定バルブ部位に到る第２通路との連通を防
止する。単一導管と他の導管との流体連通は、ダ
イヤフラムの１つ若しくはそれ以上に減圧をかけ
てダイヤフラムをバルブ部位から引き離すと共に
流体を各通路に対する開口部間に存在する弁ブロ
ツクの表面上に流すことにより選択的に与えるこ
とができる。第１通路の遠隔端部においてバルブ
部位に通じる第２通路は、弁に対する各流体の供
給を完全にする目的で、たとえば不活性ガスのよ
うなフラツシング流体の加圧源に接続することが
できる。かくして、特定の試薬又は溶剤を供給弁
の対応ダイヤフラムに減圧をかけて反応室中に導
入した後、第１通路の遠隔端部におけるダイヤフ
ラムを開放して、第１通路内に残存する試薬又は
溶剤を全て室へと押し込むことにより供給を完全
にすることができる。これは、第１通路の連続性
により可能となり、マニホールドを形成すること
により次の試薬又は溶剤の供給が開始される前に
特定の試薬又は溶剤がパージされる。反応室に対
する出口に弁が存在する場合は、第１通路を出口
に接続する一方、第２通路をそれぞれ変換フラス
コと真空源と排棄部とに接続する。第１通路の連
続性は、完全な排気を可能にすると共に、サイク
ル間において準揮発性物質がそこに捕捉される可
能性を実質的に除去する。 ここに開示した第１弁通路の「鋸歯」形状は順
序決定装置の分野で他の弁アセンブリに従来使用
されている。しかしながら、本出願人が知つてい
る従来の鋸歯弁アセンブリは、主ブロツク内にお
ける通路の連通及び非連通の状態間を往復して摺
動するよう、主弁ブロツク上のバルブ部位に対し
て装着された複数の個々のブロツクを組込んでい
る。摺動ブロツクは磨耗する傾向を有し、大気と
通路間との両者に対して漏れを生ぜしめる。ここ
に開示した新規な弁アセンブリは、従来の鋸歯マ
ニホールドを一連のダイヤフラムと組合せて各通
路に連通する開口部対の間の流れを確立及び遮断
することにより、磨耗の問題を解決する。ダイヤ
フラムは、たとえば市販のフルオロカーボン重合
体のような実質的に不活性の材料で作ることがで
き、劣化することなく長期にわたつて機能する。
さらに、弁通路を外部導管に接続する従来の手段
は、弁ブロツクの側部に過剰圧力を及ぼす傾向が
あり、弁ブロツクの上部封止表面の歪を促進する
と共に密封作用能力の喪失をも促進する。特に、
本出願人が知つている従来の鋸歯弁は、各導管と
関連するほぼ平坦なフランジ表面を弁ブロツクの
側部に圧接して平滑表面対の間における一連の封
止を行なうことにより、外部導管を弁通路に接続
する。これら部品のそれぞれは実際に加工するこ
とが極めて困難なたとえばフルオロカーボン重合
体のような材料で作られるため、各封止表面を互
いに一致させて所要の封止を形成するには非常に
大きな圧力をかけねばならない。圧力は弁ブロツ
クによつて支えられるため、その上部封止表面の
歪をもたらす。 本発明の弁アセンブリは、弁ブロツクに対し不
当な圧力をかけることなく封止を行なうよう、弁
ブロツクにおける異なるテーパの凹部に部分的に
収容しうる複数のテーパつきフエルールを備え
る。比較的小さい封止力をフエルールの特定部分
に集中させて、ブロツクを歪めることなくフエル
ールに対応するテーパつき凹部に対し封着する。 フエルールの各側で異なるテーパを有する表面
間において界面を設ければ、得られる封止がさら
に向上する。異なるテーパの表面間におけるこの
種の界面は、好ましくは最適の封止特性を得るよ
うフエルールの両側に設けられる。 本発明の変換フラスコは、フラスコの内壁部に
衝突するスプレーの形で試薬と力剤とを導入し、
そこに凝縮又は飛散している全ての化学物質を壁
部からフラスコ内の液体中へと洗い流すことを可
能にする。サイクル間で系の相互汚染となる主原
因がかくして除去される。さらに、変換フラスコ
はガスが液体中を小気泡の形態で上方に移動して
液体を均一に撹拌し、その準揮発性成分を乾燥す
るのを可能にし、しかも過度の激しいバブリング
と飛散とによる試料の損失をもたらすことがな
い。これは、敏感なアミノ酸誘導体からの急速か
つ穏かな液体除去を促進する。かくして、アミノ
酸誘導体を変換フラスコ中に移送するのに使用し
た溶剤を、上記したホイツトマン−リーブオール
ド特許におけるよりもずつと短時間（５〜10分間
でなく１〜２分間）かつより低温度（50〜80℃で
なく40〜50℃）で除去することができる。これ
は、たとえばセリン、スレオニン、ヒスチジン、
アルギニン及びトリプトフアンのような最も不安
定なアミノ酸誘導体の収率を著しく向上させる。
変換フラスコ中に使用される試薬は、不活性ガス
気泡の微細な流れと、ホイツトマン−リーブオー
ルド特許において必要とされる30〜40分間でなく
３〜５分間の低減圧との組合せにより除去するこ
とができる。ホイツトマン−リーブオールドの方
法においては、試薬の乾燥を、変換フラスコ総サ
イクル時間が第１反応室の総サイクル時間以下と
なるような要件る満たすため、変換フラスコ内の
アミノ酸残留物に対して導入した直後に開始せね
ばならない。変換用試薬の酸成分、すなわちトリ
フルオロ酢酸若しくは塩酸はそれが溶解されてい
る水よりもずつと揮発聖が大であるため、この酸
成分はホイツトマン−リーブオールドの乾燥工程
で早く除去されて、変換工程の大部分において水
溶液以外の何物にもアミノ酸誘導体を残留させな
い傾向を有する。これは、グリシン及びプロリン
の誘導体の不完全変換と他の誘導体の分解とをも
たらす。本発明の変換装置において、変換用試薬
は完全変換に充分な時間、すなわち30〜40分間に
わたりアミノ酸誘導体と接触させ続け、次いで３
〜５分間内に急速に乾燥させることができ、しか
も変換フラスコの内部全体に試料を飛散させるこ
とがない。 以下、図面を参照して本発明の具体例について
説明する。 図面を参照すれば、第１図及び第２図には、本
発明を具現した装置が全体を参照符号１０で示さ
れている。装置１０は、室装置１２と、変換フラ
スコ１４と、フラクシヨンコレクター１６とを含
み、そのそれぞれは自動制御装置１８により操作
される。加圧された溶剤及び試薬の貯槽の配列体
２０がダイヤフラム型流れ弁の列２２を介して反
応室１２と変換フラスコ１４とに接続される。第
２の弁列２４は、反応室から変換フラスコ１４及
びその他位置への液体の流れを調節する。第３の
列のダイヤフラム弁２６は、変換フラスコとフラ
クシヨンコレクターとを排棄又は真空手段に接続
しかつフラスコからフラクシヨンコレクターへの
流体流れを調節する作用を行なう。 過された不活性ガス源２８は高度に精製され
た不活性ガス、好ましくはアルゴンを装置１０に
供給し、溶剤及び試薬の貯槽を加圧し、酸素含有
空気を装置系から掃気し、様々の時点における系
内の試薬及び溶剤の乾燥過程を促進する。圧力調
節弁と計器の群列３０は、各溶剤及び各試薬の貯
槽に対するガス圧並びに装置１０の他の部分のそ
れぞれに対する圧力を個々に調節する役目をな
す。 装置１０の操作態様を第３図に示す。室装置１
２は加熱環境３２内に存在し、好ましい具体例に
おいては入口通路及び出口通路３６及び３８にそ
れぞれ連通する反応室３４を画成する。入口通路
３６は、流体導管４０を介して複数の貯槽列２
０、すなわち試薬貯槽４２，４４，４６及び４８
並びに溶剤貯槽５０，５２及び５４に接続するこ
とができる。貯槽４２乃至５４は不活性ガス圧源
２８により個々のガス圧調節器５６と電磁弁５８
との列を介して加圧される。貯槽４２乃至５４の
それぞれは、さらに個々の流れ弁６２と個々の流
れ調節器６４とを介してその内部の流体レベルの
上方の個所にて排棄トラツプ６０に接続すること
ができる。不活性ガス源２８から貯槽に導入され
た加圧不活性ガスは、かくして流れ調節器６４に
より調節された速度で排棄トラツプ６０に排気す
ることができる。貯槽４２乃至５４の流出量は、
流体導管４０に一端が接続された連続マニホール
ド６８と連通するダイヤフラム弁６６を介して
個々に調節される。かくして、加圧貯槽４２乃至
５４からの流体は、弁６６の選択的作動により導
管４０と室入口通路３６とを経て反応室３４に移
送することができる。試薬と溶剤との送給を助成
すると共に、供給後にマニホールド６８と導管４
０とをフラツシユするため、不活性ガス源２８か
らの加圧不活性ガスを、圧力調節器７０とダイヤ
フラム弁７２とを介して導管４０とは反対の端部
にてマニホールド６８に導入することができる。
かくして弁７２の作動は加圧ガスをマニホールド
６８の最外端から導入して、その中の全ての試薬
又は溶剤を導管４０と通路３６とを介して反応室
３４に移動させる。 貯槽４４，４６及び４８の流体出口には、流れ
調節器７６に対し直列にガス流量計７４を設け
る。何故なら、それらに貯蔵された試薬は気体又
は蒸気状で使用される一方、残りの溶剤と試薬と
は液状で使用されるからである。ガス放出速度を
対応する弁６６により正確に調節するには、流量
計７４と流れ調節器７６とが必要である。 反応室３４からの流体流れは、連続マニホール
ド８４を介して出口通路３８に連通するダイヤフ
ラム弁７８，８０及び８２によつて調節される。
弁７８を開くと、所望の反応生成物、代表的には
蛋白質又はペプチド試料のＮ−末端アミノ酸単位
が導管８６を通過して変換フラスコ１４へと移動
する。弁８２を開いて出口通路３８を排棄トラツ
プ６０に接続することにより、望ましくない試薬
と溶剤と反応生成物とを廃棄することができ、ま
た弁８０は出口通路３８を真空トラツプ８８と真
空ポンプ９０とに接続して反応室３４、出口通路
３８、マニホールド８４を排気する。 同様に、変換フラスコ１４及びフラクシヨンコ
レクター１６も、それぞれ弁９２及び９４を介し
て排棄トラツプ６０にそして弁９６及び９８を、
介して真空トラツプに接続することができる。 試薬貯槽１００及び１０１と溶剤貯槽１０２と
は、導管１０４を介し試薬と溶剤とを変換フラス
コ１４に供給する為に用意される。貯槽１００，
１０１及び１０２は圧力調節器１０６と電磁弁１
０８とを介して不活性ガス源２８により加圧さ
れ、かつ個々の排気弁１１０と流れ調節器１１１
とを介して排棄トラツプ６０に接続される。貯槽
１００，１０１及び１０２の流体出口は、導管１
０４に一端を連通した連続マニホールド１１４に
ダイヤフラム弁１１２を介して接続される。かく
して、加圧貯槽からの流体の流れが弁１１２の選
択的開放によりもたらされて、試薬又は溶剤のい
ずれかをマニホールド１１４中に排出することが
できる。不活性ガス源は圧力調節器１１６とダイ
ヤフラム弁１１８とを介し導管１０４とは反対側
のマニホールド端部に接続して、試薬又は溶剤を
マニホールドと導管とを介して変換フラスコ１４
へのその移動を推進させることができる。 さらに、不活性ガス源２８は圧力調節器１２０
とダイヤフラム弁１２２と導管１２４とを介して
変換フラスコに接続され、そして圧力調節器１２
６と弁１２８とを介してフラクシヨンコレクター
１６にも接続される。フラスコ１４内において、
所期の態様で特定フラクシヨンが変換された時、
これをガス圧により導管１２４と弁１３１とを介
してフラスコからフラクシヨンコレクター１６へ
と放出してその内部の容器内に貯蔵することがで
きる。フラクシヨンを放出した後、フラスコ１４
には比較的高いレベルまで溶剤を満たして、そこ
に存在する全ての残留化学物質を溶解させること
ができる。次いで、溶剤をガス圧により導管１２
４と弁１２５とを介して排棄トラツプ６０に排出
し、次のアミノ酸誘導体を供給しうる態勢にフラ
スコをフラツシユする。 フラクシヨンコレクター１６は、装置１０の各
サイクルの都度、次回のアミノ酸単位のフラクシ
ヨンをフラスコ１４から受入れるよう空容器を位
置決めするため制御装置１８により割出し作動さ
れる、容器を円形に配列した回転盤から基本的に
構成される。 制御装置１８は好ましくは完全自動化装置であ
つて、ダイヤフラム弁６６，７２，７８，８０，
８２，９２，９４，９６，９８，１１２，１１
８，１２２，１２５，１２８及び１３１と電磁弁
５８，６２，１０８及び１１０とを制御する。さ
らに制御装置１８は、加熱環境３２を所望温度に
保つ機構（図示せず）、フラクシヨンコレクター
１６、真空ポンプ９０、並びに系全体の各種セン
サーを制御する。上記した各ガス圧調節器及び流
量調節器は始動の際手動により調整されて、対応
する流体導管内に所望の圧力と流れとを確立す
る。 室装置１２を第４図及び第５図に詳細に示す
が、これはスリーブ１３２を支持する２部片式基
部１３０からなり、スリーブは第１及び第２室要
素１３４及び１３６を内蔵する。スリーブ１３２
には、スリーブの軸線と心合しかつ基部１３０の
円筒状凹部にぴつたりと収容される拡大円筒状部
１３８が設けられる。この円筒状部１３８は、基
部１３０と螺合する保持カラー１４２によつて所
定位置に保たれる。 室要素１３４及び１３６は円筒状のガラス部材
であつて、それぞれ対向する合着面１４４及び１
４６を備えると共に、スリーブ１３２内に心合状
態で密接して収容される。上記した入口及び出口
通路３６及び３８はそれぞれ室要素１３４及び１
３６を貫通して軸線方向に延在し、好ましくは１
mm程度の直径を有する毛細管通路である。室要素
１３４及び１３６の軸線方向外端部１４８及び１
５０は一般に平坦であつて、スリーブ１３２に対
し軸線方向に室要素に緩衝を与える為実質的に不
活性な材料で作られた一対の薄い弾性ワツシヤー
と当接される。上方弾性ワツシヤー１５２の上部
に位置する金属ワツシヤー１５４には、スリーブ
１３２の上端部におけるスロツト１５８に係合す
る対向固定耳部１５６を設ける。この金属ワツシ
ヤー１５４は、スリーブ１３２の上端部に螺着さ
れたキヤツプ１６０により所定位置に保たれて、
室要素をスリーブに対して所定の位置に正しく保
持する。耳部１５６とスロツト１５８との嵌合
は、キヤツプ１６０が装着されたときワツシヤー
１５４が回転するのを防止し、かくして室要素の
回転によりキヤツプが組体を破損するのを防止す
る。流体導管４０には末広下端部１６２が設けら
れ、これは導管４０の孔部が入口通路３６に連通
するよう室要素１３４の外端部１４８に当接す
る。導管４０は、支持ワツシヤー１６４と取付け
部材１６６とを備え、後者をキヤツプ１６０中に
軸線方向に螺着することによつて、末広端部１６
２を封止状態で室要素１３４に圧接する。導管４
０は、たとえば市販のフルオロカーボン重合体の
ような任意の弾性かつ実質的に不活性の材料で製
作することができる。導管４０の孔部と入口通路
３６との整列は、共通軸線の周囲に各種の相互取
付け部品を精密に組立てることにより確保され
る。 出口通路３８は、鋼製スリーブ１７４内に収納
された実質的に不活性な材料の部材１７２によ
り、上記の連続マニホールド８４に連通して設置
される。スリーブ１７４は平滑な外面を有し、拡
大円筒部１３８と基部１３０との整列した軸線方
向開口部１７６及び１７８内に収容される。部材
１７２は鋼製スリーブ１７４を越えて上下し、軸
線方向に延在して、第２室要素１３６の外端部１
５０とマニホールド８４を画成する弁ブロツク１
８２のテーパつき凹部１８０とに係合する。部材
１７２内部の軸線通路１８４は、出口通路３８及
びマニホールド８４の一端部に正確に整列して、
室要素１３６から弁ブロツク１８２まで単一の連
続毛細管通路を形成する。上記した導管４０の場
合と同様、共通軸線を中心としての関連部品を精
度よく製作することによつて、各通路間の正確な
整列と完全な密閉とが保証される。かくして室装
置１２は、各通路の整列又は各密閉部の完全性を
害することなく極めて短時間で容易に解体及び再
組立てすることができる。 弁ブロツク１８２は新規な構造であつて、これ
を第９図乃至第１３図と関連して詳細に説明す
る。今の段階では、弁７８，８０及び８２の部分
が、室装置１２からの流体の流れを調節すべく弁
ブロツク１８２内に含まれることを銘記すれば充
分である。 第６Ａ図において明示されるように、室３４は
２つの室要素の対向しあう合致面１４４及び１４
６における整列空洞部１８６及び１８８によつて
形成される。２つの空洞部は入口通路及び出口通
路３６及び３８に対し同軸的に配置されかつ好ま
しくは断面円形であつて、入口通路から出口通路
まで移動する流体に対し軸対称通路を形成する。
多孔質シート部材１９０が反応室３４を横断して
延在しそして空洞部１８６の凹部１９２内に少な
くとも部分的に収容することができる。かくし
て、多孔質シート部材１９０は、入口通路３６と
出口通路３８を一方から他方へ流動する流体が必
らずシート部材を通過するよう分離する。多孔質
シート部材１９０は好ましくはたとえばガラスの
ような圧縮繊維材料で作られたシート又はマツト
からなつている。市販のガラス繊維フイルターが
この目的に適しており、使用中の分解又はその他
の損傷に対し高い耐性を有する。この種の多孔質
シートは蛋白質又はペプチド試料を埋入しうる薄
膜を支持するためのかなり大きい表面積を与える
ことが見出された。薄膜が流体透過性材料、すな
わち液体及び気体をそこに拡散させうる材料で作
成されるならば、この材料は、試料を確実に保持
すると共に、試薬及び溶剤と試料との化学的相互
作用を可能にする固体マトリツクスを形成しう
る。たとえば１，５−ジメチル−１，５−ジアザ
ウンデカメチレンポリメトブロマイド又はポリ
（Ｎ，Ｎ−ジメチル−３，５−ジメチレンピペリ
ジニウムクロライド）のような高分子第４アンモ
ニウム塩がこの目的に理想的である。これらは流
体の拡散を可能にし、使用溶剤に対し不溶性であ
りかつ試薬と溶剤との両者に対し化学的に安定で
ある。さらに、これらは凝集薄膜を形成すると共
に正電荷を有してこれらがガラス支持体表面にイ
オン的に結合するのを可能とする。 従来の順序決定装置において行なわれた試料保
持形態と本発明のそれとの基本的相違は、第１７
Ａ図、第１７Ｂ図及び第１７Ｃ図を参照すること
により明瞭に理解されるであろう。第１７Ａ図及
び第１７Ｂ図は、試料支持体表面３０２又は３０
４に対し蛋白質又はペプチド試料３００を固定す
るためのもつとも一般的な２種の従来方法を図示
している。 第１７Ａ図は、試料を共有結合３０６によりガ
ラス支持体表面３０２に化学的に結合させる場合
を示す。たとえば、表面３０２は、ガラスのシリ
カ部位の幾つかがそこから延出して試料鎖上のカ
ルボキシル基３１０と反応するアミノ官能基３０
８を有するよう特別に処理することができる。適
切な条件下において基３０８及び３１０の幾つか
が反応し、ガラスに共有結合している試料を残存
させると共に多数の水分子を遊離する。この種の
結合は非常に強力であり、試料を所定位置に保持
するには１分子当り１個若しくは２個の結合で充
分である。しかしながら、共有結合は蛋白質及び
ペプチド試料について得るのは困難である。さら
に、共有結合は、連鎖中の極めて少数の分離され
た単位を介して連鎖を保持する。減成過程がこれ
らの単位まで到達してこれらを連鎖から開裂させ
ると、連鎖の残部が未結合として残され、これが
室から洗い出されることがある。 第１７Ｂ図は、試料３００を支持体表面３０４
上に直接吸着させる場合を示す。次いで、試料
は、試料と表面との間の極めて多数の比較的弱い
非共有相互作用３１２によつて所定位置に保たれ
る。分子レベルにおいて、表面は試料上の多くの
異なる部位と相互作用する。これは大型の蛋白質
及びペプチドの場合にはうまくいくが、試料がず
つと小さい寸法まで減成されるにつれて、表面か
ら切り離され又は引き離され易くなる。この結
果、著しい試料損失が生ずる。 第１７Ｃ図は、薄膜として形成された固体マト
リツクス３１６中に試料を埋入することによる支
持体表面３１４に対する試料３００の不動化を図
示している。上記したように、マトリツクス３１
６は正電荷を有する高分子第４アンモニウム塩と
することができる。かくして、マトリツクスは極
めて多数のイオン相互作用により酸性ガラス表面
に堅固に保持され、試料がこの中に埋入されてい
るためこの試料を確実に所定位置に保持する。試
料と表面との間の直接的な結合の相互作用に頼る
ものでないため、不動化の効果は試料寸法の減少
により影響されない。 本発明は、埋入試料との化学的相互作用を行な
うため固体マトリツクス３１６中への試料、溶剤
及びアミノ酸誘導体の拡散乃至浸透に依存してい
る。マトリツクスは薄膜として形成されて、その
上を通過する試薬と溶剤とを吸収する。薄膜中で
溶解されると、試薬及び溶剤は薄膜の厚さを横切
つて容易に拡散して減成過程を行なうことができ
る。 第６Ａ図に戻り、反応室３４は、合着しあう表
面１４４と１４６との間に挾持された屈撓性の封
止材料の少なくとも１枚のシート１９４により空
洞部１８６及び１８８の周辺部において封止され
る。一対の屈撓性シート１９４が多孔質シート部
材１９０の各側に一枚づつ配して好適に使用され
る。これらシート１９４は極めて薄いものであつ
て、室３４を通過させる複数の試薬及び溶剤の流
体に対し透過性である。空洞部１８８の周辺部に
おける環状封止用隆起部又はビード１９６が封止
用シート１９４に当接して、空洞部１８６の周辺
近傍の表面１４４に対しより効果的な封止を与え
る。封止用シート１９４は、シール劣化の可能性
を最小限にするよう、たとえば市販のフルオロカ
ーボン重合体のような任意の実質的に化学不活性
の材料で作ることができる。これらは室３４に対
し密閉効果を与えるだけでなく、多孔質シート部
材１９０を支持し、しかも気体及び液体の流れが
部材１９０全体により均一に分配されるよう室中
を通過する気体及び液体を分散させるのに役立
つ。装置系の使用寿命の延長及び試料との最適な
化学的相互作用がこのようにして助成される。 本発明による反応室の別の具体例３４′を第６
Ｂ図に示し、ここでは２つの室要素の対向係合表
面における整列空洞部１８６′及び１８８′は空洞
部１８６及び１８８よりも幾分狭くかつ長いもの
とされる。その他の点においては、室３４及び３
４′は同一であり、図面における室３４′の各部材
には室３４の対応部分と同じ参照符号にダツシユ
（′）を付てある。反応室３４′は入口３６′から出
口３８′への若干多い流体の直接流れを可能にす
るが、そこにおける多孔質シート部材１９０′の
直径を制限する。 第６Ｃ図は、多孔質シート部材１９０′を除去
した状態の第６Ｂ図の室３４′を示している。さ
らに、封止用シート１９４′は、室の直径に等し
い中央開口部を有する屈撓性材料の単一の環状シ
ート３１６で代替されている。この具体例におい
て、蛋白質又はペプチド試料を埋入した固体の流
体透過性マトリツクス３１８は、室３４′を通過
する試薬と溶剤とに露呈されるよう、この室の壁
部に薄膜として形成される。かくして、室３４′
中を通る流体の流れが相当な薄膜表面積が保持し
たまま向上される。 本発明による室装置の別の具体例を第１８Ａ，
１８Ｂ及び１８Ｃ図に示し、ここでは先の２つの
室要素１３４及び１３６はスリーブ１３２内の単
一の毛細管型室要素３２０により代表される。室
装置１２の残余の部材は第４図及び第５図に関し
て記載したものと同じであり、したがつて同じ参
照符号を付した。室装置に対する外部の構造及び
接続も全て上記のものと同一である。 室要素３２０は、軸線方向の毛細管状の室３２
４を画成する内壁３２２を備えた筒状ガラス構造
からなつている。室３２４はその２つの端部３２
６から中央３２８の方向に直径を一様に増大し、
蛋白質又はペプチド試料は、壁部３２２上に薄膜
として形成された固体マトリツクス３３０の内部
に担持される。 本発明の反応室は、複数の試薬及び溶剤の流体
を通過させうる試料支持体表面を備えた実質的に
任意の形態にしうることが了解されるであろう。
たとえば、室装置１２には内部表面すなわち孔部
に流体透過性の固体マトリツクスを形成させた単
一の長形毛細管（図示せず）で充分である。毛細
管を通過する流体は薄膜中に埋入された蛋白質又
はペプチド試料と相互作用して減成過程を行な
う。 反応室３４，３４′又は３２４への液体試薬の
供給及び貯蔵のための本発明による典型的な貯槽
即ち溜め１９８を第７図に示す。貯槽１９８は第
３図の貯槽４２，５０，５２，５４，１００，１
０１及び１０２に対応する。加圧不活性ガスは導
管２０２により貯槽１９８の内部２００に供給さ
れ、この導管２０２は槽内の液体試薬又は溶剤の
レベル２０４より下方の個所において槽内部に連
通する。かくして、導入された加圧ガスは全ての
溶存酸素を液体から連行して、排気導管２０６を
介し制御された速度で放出されて内部２００内に
動的平衡状態を生成する。試薬又は溶剤を内部ガ
ス圧により貯槽１９８から制御下で押出すため液
体出口２０８が設けられる。各貯槽１９８の不活
性ガス供給路２０２は不活性ガス源２８からの加
圧不活性ガスを圧力調節器５６又は１０６と電磁
弁５８又は１０８とを介して受け入れる。排気導
管２０６を通してのガスの放出も同様に、電磁弁
６２又は１１０の１つと流れ調節器６４又は１１
１の１つとによつて調節される。導管２０８を通
る液体試薬又は溶剤の流れは弁６６又は１１２の
１つによつて調節される。液体試薬又は溶剤の１
種を反応室又は変換フラスコに供給する都度、対
応するアルゴン供給弁と排気弁とを開いて特定貯
槽内に動的平衡状態を確立させる。次いで、液状
の試薬又は溶剤は導管２０８中の弁と排棄トラツ
プ６０への弁との開放により導入することができ
る。液体は一定速度で貯槽から排出され、供給路
２０８中の弁を開放状態に保つ時間の長さを調節
することにより供給液量を正確に調節することが
できる。 気体又は蒸気状で試薬を供給するための本発明
による代表的な貯槽２１０を第８図に示す。ガラ
スフリツト製散気用部材２１３を終端に有する不
活性ガス入口２１２を設けて、不活性ガスを貯槽
２１０の内部２１４にその底部近傍かつ内部の液
体試薬のレベル２１６より相当下方の点から導入
する。排気導管２１８と出口すなわち供給路２２
０とは液体レベル２１６より上方の個所で内部２
１４に連通する。貯槽２１０は第３図の貯槽４
４，４６及び４８の代表的なものであり、ガス圧
源２８から導管２１２を介するガスの流れを調節
する圧力調節器５６の１つと弁５８の１つとを備
えている。同様に、排気導管２１８への加圧ガス
の逸散は流れ調節器６４及び流れ弁６２の１つに
よつて調節され、供給路２２０に沿つて試薬の供
給は流量計７４と流れ調節器７６と並んだダイヤ
フラム弁６６の１つによつて調節される。 かくして、試薬R2、R3及びR3Aは気体又は蒸気
状で反応室に供給されるが、それらは液体として
貯蔵され、必要に応じて気化される。気化は、液
体試薬中に不活性ガスを上方にバブリングさせて
行なわれる。このようにして、貯槽２１０の内部
２１４における不活性ガスは試薬蒸気によつて飽
和されるようになる。試薬が必要とされる都度、
導管２１２及び２１８に接続された弁を開いて試
薬中に不活性ガスをバブリングさせかつ動的平衡
状態を確立させる。次いで供給導管２２０内の弁
６６を所定時間開いて所望量の試薬蒸気を反応槽
に供給する。特定の弁６６と並んだ流れ調節器７
６は、流量計７４で示される一定速度にて蒸気を
貯槽により供給させる。 第９図乃至第１３図は、第３図の弁６６及び７
２と連続マニホールド６８とを具体化する弁アセ
ンブリ２２２の構造及び操作を示している。弁ア
センブリ２２２は、第１１図及び第１２図に最も
明瞭に見られる弁ブロツク２２４を備える。この
弁ブロツク２２４は矩形断面の長形ブロツクであ
つて、この弁ブロツクをその表面から斜めに穿孔
することにより形成された鋸歯模様の連続第１通
路２２６を有する。かくして第１通路２２６は単
一の連続通路となり、その一つおきの交差部にお
いて対応する開口部２３２を介し表面２２８上の
複数のバルブ部位２３０に連通する。テーパ付き
の接続口部２３４が第１通路２２６の一端部に連
通する。複数の第２通路２３６が、弁ブロツク２
２４の反対側におけるテーパつき接続口部２３８
から各バルブ部位２３０における開口部２３２近
傍の対応開口部２４０まで延在する。弁ブロツク
２２４は基部２４４の長手方向スロツト２４２内
に収容され、この基部は連結取付具２４８を受容
する接続口部２３４及び２３８と整列する複数の
ねじ切り開口部２４６を備えている。取付具２４
８は、弾性の、２つのテーパ面を有するフエルー
ル（嵌め輪）２５０をそれぞれ接続口部２３４及
び２３８に対し圧縮当接させて、フエルールを通
して延在する管２５２を弁ブロツク２２４の各通
路と封止接続させるのに適する。このようにし
て、第１通路の接続子口部２３４は第３図の流体
導管４０を介して室装置１２の入口通路３６に連
通し、８本の第２通路のうち最初の７本はそれぞ
れ貯槽４２乃至５４の流体出口２０８及び２２０
に連通する。接続子口部２３４から最も離れた第
２通路は第３図に示した圧力調節器７０を介して
不活性ガス圧源２８に連通する。 弁ブロツク２２４の口部に対する２つのテーパ
面を有するフエルール接続部の構造が口部２３４
を例として第９Ａに詳細に示してある。 第９Ａ図のフエルール２５０はその内側２４３
が接続子口部２３４内に収容されると共に、その
外側２４５が取付具２４８のテーパつき凹部２４
７内に収容され、口部２３４と凹部２４７とはフ
エルールの各側のテーパ角度より大きい角度でテ
ーパづけられている。フエルールは好ましくは両
側が同じ角度でテーパづけられ口部２３４と凹部
２４７とはフエルールよりも3゜大きい角度でテー
パづけられる。異なるテーパづけ表面間における
この固定は圧縮力をフエルール２５０の先端部２
４９に集中させ、弁ブロツク２２４の側部に対す
る圧力を最小にしながら効果的な封止をもたら
す。かくしてバルブ部位２３０を歪めうるような
弁ブロツク２２４に対する過度の圧力が避けられ
る。 一連のダイヤフラム保持ブロツク２５４が、弁
ブロツク２２４の表面２２８に対しダイヤフラム
２５６を両者間に挾持してボルト固定される。各
ダイヤフラム保持ブロツクの上端部を、凹部２６
０と連通しかつバルブ部位２３０の１つと同水準
に延在する空気接続口２５８を受け入れるようね
じ付けする。効果的な空気封止を与えるには、凹
部２６０を包囲する環状溝部内Ｏ−リング２６２
を収容することができる。 ダイヤフラム２５６は、実質的に化学的不活性
な気密材料で製作され、空気接続口２５８を介し
て減圧したり又は空気圧をかけることによりこれ
らダイヤフラムはバルブ部位２３０に対し選択的
にそこから引き離され又はそこに圧接せしめられ
る。ダイヤフラム２５６の２つの状態を第１３Ａ
図と第１３Ｂ図とに示す。第１３Ａ図の状態にお
いて、空気接続口２５８にかけられる空気圧又は
ガス圧は特定のバルブ部位においてダイヤフラム
２５６を第１通路の開口部２３２と第２通路の開
口部２４０とに対し圧接させる。かくして、開口
部２３２及び２４０はダイヤフラム２５６により
閉鎖されて、その間の連通を不能にする。これ
は、特定バルブ部位に存在する弁の閉鎖状態を相
当する。第１３Ｂ図の状態においては空気接続口
２５８における減圧がダイヤフラム２５６を開口
部２３２及び２４０から引き離して、その個所に
おける弁ブロツクの表面にわたる第１通路と第２
通路との間の連通を可能にする。これは特定弁の
開放状態に相当し、貯槽の１つから又は不活性ガ
ス圧源２８からの流体が第１通路を２２６を介し
て入口通路３６まで流動するのを可能にする。 上記した弁アセンブリ２２２の新規な構成は、
試薬と溶剤とを各流体間の実質的な汚染なしに正
確な量で反応室に供給することを可能にする。第
１通路２２６の連続性と室装置１２の入口通路に
対してその一端部において接続されていることが
この有利な操作の主要因である。７種の試薬及び
溶剤のうちいずれか１種の供給は、ダイヤフラム
２５６の１つに減圧をかけかつ他のものに加圧す
ることにより行なうことができ、所望の試薬又は
溶剤を第１通路２２６中に流しそして流体導管４
０を介して反応室に移送することができる。所望
量の流体が特定ダイヤフラムの下を通過した後、
ガス圧を空気接続口２５８を介して再びそのダイ
ヤフラムにかけ、かくしてアセンブリ２２２にお
ける７個の試薬弁及び溶剤弁の各々が閉鎖され
る。次いで弁ブロツク２２４の一番端で不活性ガ
ス口部に連携したダイヤフラムに減圧をかけて第
１通路２２６全体に不活性ガスをフラツシユさせ
ると共に経路内に残留した試薬又は溶剤流体を反
応室３４中に押し込むことにより、流体の供給を
完了することができる。第１通路２２６には不連
続個所も死点分枝部も存在しないので、試薬又は
溶剤のいずれかが供給過程間において捕捉残留さ
れるような余地がない。かくして、後続の順序決
定工程で供給される試薬と溶剤は最大限高純度に
保持され、反応槽内における化学反応を意図する
通りに進行させることができ、しかも汚染された
試薬又は溶剤に起因する不必要な収率ロスが何ら
生じない。 この弁アセンブリ２２２は、単一の口部を他の
複数の口部に選択的に接続せねばならない場合に
生ずる汚染を最小にするよう装置における多くの
他の部分に組込まれうる弁設計の一例でもある。
たとえば、試薬及び溶剤を変換フラスコ１４に供
給するための弁１１２及び１１８は連続マニホー
ルド１１４と組合せた弁アセンブリを形成し、ま
た室装置１２の出口通路３８からの流体を導くた
めの弁７８，８０及び８２は連続マニホールド８
４と組合せた同様な弁装置を形成する。同様に、
変換フラスコ及びフラクシヨンコレクターに排棄
部及び減圧部を接続するための弁並びに変換フラ
スコからフラクシヨンコレクターへの流れを調節
する弁も、弁アセンブリ２２２と同様に製作され
る。これらの弁アセンブリのそれぞれにおける主
たる相違点は、それらと連携するバルブ部位の個
数である。 マニホールド６８，８４及び１１４をそれらに
関連する各ダイヤフラム弁の近傍に一連の小さな
不連続個所又は分枝を有するように図示したが、
各マニホールドは実際上第１１図及び第１２図の
第１通路２２６のように製作された単一の連続通
路である。 開放状態と閉鎖状態との間でダイヤフラム弁を
作動させる減圧及び加圧手段は第３図では省略し
たが、これらは好ましくはここに記載された不活
性ガス源２８及び真空ポンプ９０とは別のものと
される。 変換フラスコ１４を第１４図乃至第１６図に詳
細に示す。このフラスコ１４は、たとえば水のよ
うな加熱用流体を循環させるため二重壁間に空間
２６４を有する二重壁ガラス型式のものである。
加熱用流体は、標準的な可撓性配管の端部を受け
入れるようにした一対のニツプル２６６を介して
空間２６４に対し流入及び流出する。弁９６を介
して真空トラツプ８８と真空ポンプ９０とに接続
できかつ弁９２を介して排棄トラツプ６０に接続
できる大孔管２６８はフラスコの内室２７０に対
しその上端部近傍で連通する。毛細管２７２，２
７４及び２７６がフラスコの上端部を通して内室
２７０内の個所まで延在する。毛細管２７２及び
２７６の孔部はその内方端部が閉鎖され、毛細管
のそれぞれには複数の比較的制限された半径方向
に離間するオリフイス２７８又は２８０がその内
方端部近傍に設けられる。 装置１０を設計した目的である比較的少量の蛋
白質又はペプチド試料のため、並びにそこで使用
される比較的小容量の試薬及び溶剤のため、変換
フラスコ１４は従来のフラスコよりもずつと小さ
い内部容積を有する。フラスコ１４の容積は僅か
１ml程度のものであるのに対し、本出願人の知つ
ている従来の自動変換フラスコは全て100mlの容
積を有している。 反応室３４において試料から開裂されたフラク
シヨンは、弁７８と毛細管２７４とを介して順次
にフラスコ１４に移送される。試薬と溶剤とは毛
細管２７６を介してフラスコの内室に入り、そこ
から制限オリフイス２８０を通し室２７０の壁部
に衝突するスプレーとして強送され、それにより
壁部上の全ての残留物をフラスコの底部へと洗い
落す。変換反応の間、不活性ガスを毛細管２７２
により導入して液体を撹拌すると共に、そこから
の溶剤の蒸発を助成する。ガスは制限オリフイス
２７８を介し極めて小さなバルブとして管体２７
２から流出し、フラスコの寸法及びガスの使用量
と無関係に液体中を通してのガスの最適の分散を
与える。変換反応が完結した後、このフラクシヨ
ンをフラスコ内の正圧により長い毛細管２７２を
介してフラクシヨンコレクター１６における各容
器へと上方に強制移送する。これは、このフラク
シヨンがフラクシヨンコレクター１６へより完全
に移送されるよう２回に分けて即ち２つのアリコ
ートとして行なうことができる。第１回の分量は
約200μであつて、最初にフラクシヨンコレク
ターに移送される。次いで、追加50μの溶剤を
導入して、フラスコの下壁部又は底部に存在する
残留物を溶解させる。次いで、第２回分を移送さ
せる。このようにして、各フラクシヨンの高収率
を達成することができる。 特定のフラクシヨンが移送され終つた後、追加
750〜900μの溶剤が前回のサイクルでフラスコ
１４の上壁部上に残留する全ての残留物を溶解さ
せる為に導入されうる。この追加溶剤は排棄トラ
ツプへ排出され、フラスコ壁部は清浄となる。 毛細管２６８，２７２，２７４及び２７６の外
方端部は、装置１０のその他各部品に到るそれぞ
れの可撓性導管２８２に対しねじ接続具２８４に
より相互に嵌合することにより封着される。各導
管２８２の端部には弾性Ｏ−リング２８８を有す
る半径方向フランジ部２８６を設け、このＯ−リ
ングはガラス管の１つにおける半径方向フランジ
２９０の平担な研磨ガラス面に当接して密封作用
を与える。内面ねじ付きカラー２９２が導管２８
２周囲に摺り嵌められて、ガラスフランジ２９０
を収容すると共に、ガラス管の周囲に位置する２
片外ねじ取付け部２９４に螺合する。取付け部２
９４上にカラー２９２を前進させると、フランジ
部２８６がガラスフランジ２９０に圧接されて極
めて効果的な封止が形成される。接続子２８４の
各部分はたとえば市販フルオロカーボン重合体の
ような実質的に化学的不活性の材料で作り、劣化
及び後の漏れの可能性を実質的に排除することが
できる。 フラスコ１４の別の構造は空間部２６４とニツ
プル２６６とを除去して、加熱環境３２内に設置
して高温度に保ちうるような単一壁容器を与える
ようなものである。この構造はガラス管と接続子
２８４との全長さを高温度に維持するという利点
を有し、その内部での準揮発性流体の凝縮を最小
にするが、室装置１２とフラスコ１４を別々の温
度に保つことはできない。 蛋白質又はペプチド鎖の順次減成を行なうため
装置１０で使用される試薬及び溶剤は次の通りで
ある： R1 フエニルイソチオシアネート（PITC）（ヘ
プタン中17％溶液） R2 トリメチルアミン又はトリエチルアミン
（水中25％溶液） R3 トリフルオロ酢酸又はヘプタフルオロ酪酸 R3A 水蒸気 R4 トリフルオロ酢酸（水中25％溶液） R4A 塩化水素（メタノール中1N溶液） S1 ベンゼン S2 0.1％酢酸を含む酢酸エチル S3 塩化ブチル S4 アセトニトリル又はメタノール 操作において、好ましくは装置１０の各弁及び
その他機構は自動制御装置１８により制御され
て、人間の介入なして蛋白質又はペプチド試料に
つき無限回数の減成サイクルを行なう。制御装置
１８は米国特許第3725010号明細書に開示された
プログラミング装置の一般的形態に装置１０によ
り必要とされる特定の工程順序を与えるよう変更
を行つてもよいし、或いは特殊若しくは汎用デジ
タルコンピユーターによりより複雑な電子制御と
することもできる。更には、各減成サイクルにお
ける各過程を所定スケジユールに従つて操作員に
より手動で行ない、同じ結果を得ることもでき
る。 減成過程を開始する前に、研究すべき蛋白質又
はペプチドの試料を適当な試料支持体表面に設置
せねばならない。マトリツクス材料を最初に支持
体表面に被覆し、その後下記に詳細に記載する如
くその中に試料を埋入する。部材１９０又は１９
０′を試料支持体表面として使用する場合は、こ
れは部材１９０が凹部１９２の位置で反応室３４
内に収容されるよう少なくとも１枚の封止用シー
ト１９４と共に室要素１３４と１３６との間に設
置する。本発明の好適具体例においては、一対の
封止用シート１９４を使用し、それらの間に部材
１９０を介在させる。室要素１３４及び１３６を
次いでスリーブ１３２中に挿入しかつ他の各部品
と組合せて室装置１２を形成する。 試料含有薄膜を室３４′又は室３２４の内表面
によつて支持する場合には、これは下記の例２に
記載するようにして被覆される。 先ず、室要素をスリーブ１３２内に組立てた
後、キヤツプ１６０により所定位置に保持され
る。室３４′の場合には、屈撓性材料の環状シー
ト３１６の組立の際に室要素１３４′と１３６′と
の間に設置する。次いで、固体マトリツクス材料
と試料とが例２に記載するように室３４′又は３
２４の壁部に被覆され、スリーブ１３２を他の部
品と組合せて装置を完成させる。 試薬R1乃至R3Aと溶剤S1乃至S3とガス源２８か
らの不活性ガスとを順次導入する準備として、先
ず最初に弁８２を真空トラツプ８８及び真空ポン
プ９０の側に開くことにより反応室３４と関連流
体導管とが排気される。試薬又は溶剤の１種を導
入する都度、対応する不活性ガス供給弁５８と排
気弁６２とを開いて特定貯槽を加圧すると共に、
その内部に動的平衡状態を確立させる。不活性ガ
スが貯槽内に一定圧力を維持するよう逆排され
る。貯槽４４，４６及び４８の場合、供給の際の
そこからの飽和ガスの流れは流れ調節器７６の１
つによつて調節される。 供給すべき特定試薬又は溶剤を含有する貯槽が
加圧されて上記のように平衡に達した後、補助減
圧源（図示せず）により対応する流れ弁６６のダ
イヤフラムに減圧をかけてこの弁を開き、連続マ
ニホールド６８と導管４０とを介して室入口通路
への試薬又は溶剤の流れを生ぜしめる。弁６６を
所定長さの時間にわたり開放に保つて所望量の試
薬又は溶剤を正確に移送させ、次いでそのダイヤ
フラムにガス圧をかけて閉鎖させる。次いで、補
助減圧源からの減圧を連続マニホールド６８の一
番端における弁７２のダイヤフラムにかけて、マ
ニホールドから残留試薬又は溶剤を除去し、室に
対するその供給を完了する。次いで、弁７２をそ
のダイヤフラムに正圧をかけることにより閉鎖
し、マニホールド６８を次回の供給過程に対する
準備として溶剤及び試薬に対し解放する。 ダイヤフラム弁８０は一般に、室３４中に各試
薬及び溶剤を通す間、室出口通路とマニホールド
８４とを介して排棄トラツプ６０へ排出を行なう
よう開放に保たれる。特定試薬又は溶剤を供給し
た後、ダイヤフラム弁８２を真空ポンプ９０側に
開いて室と関連導管とを排気することができる。
別様には室とその中の試料とは、弁７２により室
中に不活性ガスを通して適当な時期に乾燥させる
ことができる。次いで室から出たガスを排棄トラ
ツプ６０に移送することができ、或いは所望に応
じて真空ポンプ９０で吸引して乾燥工程を加速す
ることもできる。 結合及び開裂過程を完了した後、抽出溶剤S3を
反応室３４に供給して、減成の特定サイクルの際
生成された開裂アミノ酸誘導体を溶解させると共
に、この溶液を導管８６を介して変換フラスコ１
４に供給する。この目的で弁７８を開きかつ弁８
０及び８２を閉鎖状態に保つ。次いで、変換試薬
R4及びR4A（使用するならば）と溶剤S4とを適当
な時期に変換フラスコ１４に供給できるが、これ
は対応する弁１１２を開いて液体をマニホールド
１１４と導管１０４とを介して変換フラスコに移
送することにより行なわれる。各供給の前に他の
試薬及び溶剤の供給に関して上記した加圧と排気
の操作を行ない、次いで弁１１８を開いてマニホ
ールド１１４と導管１０４とをパージする。 変換フラスコ１４に移送されるフラクシヨンは
蛋白質又はペプチド試料のＮ−末端アミノ酸のア
ニリノチアゾリノン誘導体であり、これは反応室
３４における次の結合及び開裂サイクルの際ホイ
ツトマン−リーブオールドによる上記論文の記載
に一部従つてより安定なフエニルチオヒダントイ
ンアミノ酸まで自動的に変換される。つまり、変
換フラスコ内のアミノ酸フラクシヨンは、短い毛
細管２７６を通しての溶液上方への不活性ガスの
通過と毛細管２７２による液体中への不活性ガス
のバブリングとに続いて管２６８を通して減圧す
ることによつて蒸発させることができる。次いで
変換試薬R4を毛細管２７６により導管１０４と
弁１１２の１つ（第３図参照）とを介して所望量
だけ導入することができる。所望の変換時間後に
おける変換フラスコの急速蒸発は、変換フラスコ
へ管２６８を介して減圧をかけさらに毛細管２７
２及び２７６を介して不活性ガスを同時に適用す
ることにより達成できる。Pth−アスパラギン酸
及びPth−グルタミン酸の酸性側鎖をさらに安定
させるには、試薬R4Aを毛細管２７６により導管
１０４と弁１１２の１つとを介して所望量だけ導
入することにより変換フラスコ中の残留物をさら
に溶解させることができる。変換フラスコの蒸発
を再び、管２６８を通しての減圧と毛細管２７２
及び２７６を通しての不活性ガスの使用によつて
行なう。次いで、変換フラスコ内に残存するPth
−アミノ酸を、導管１０４を介して導入された溶
剤S4に再溶解させ、このフラクシヨンをフラクシ
ヨンコレクター１６における適当な容器へ移送す
る。フラクシヨンの移送は、変換フラスコの長い
中央毛細管２７２に接続された弁１３１を開きか
つ加圧不活性ガスを毛細管２７６により導入して
フラクシヨンをフラスコから押し出すことによつ
て行なわれる。 フラクシヨンコレクター１６の円形に配列され
た容器は、それぞれ到来するフラクシヨンが別々
の容器中に収集されるよう、各減成サイクルの間
所定角度だけ回転される。減成サイクルの適当な
時点においてフラクシヨンコレクター内のフラク
シヨンをさらに乾燥させることができ、これは弁
９８を減圧側に開くか又は弁１２８及び９４を開
いて源泉２８からの不活性ガスをフラクシヨン上
方に流しかつ最終的に排棄トラツプ６０へ流すこ
とによつて行なわれる。 装置１０の各種部品は好ましくは、実質的に不
活性かつ劣化に対して高度に耐性の材料で製作さ
れる。この種の材料には硼珪酸ガラス、或る種の
フルオロカーボン重合体並びに或る場合にはステ
ンレス鋼及びアルミニウムが包含される。装置１
０の封止構造及びその他部品も、殆んどこれら材
料から製造されうるように設計された。得られる
装置はこれまでの装置のうちで最大限に清浄であ
りそして最も汚染の無い系として永久的に機能す
る。 典型的な減成及び変換サイクルにおいて装置１
０により行なわれる各種の工程を末尾に添付する
第１表に示す。各工程の持続時間及び各工程の際
の装置の作動状態をも同表に示す。ここでの作動
状態は装置における各弁の状態に対応し、欄中の
印は適当な弁が開放している時を意味する。たと
えば、欄“R1”、“R2”、“R3”、“R3A”、“S1”、
“S2”及び“S3”は、選択的に加圧しかつ貯槽４
２乃至５４内に動的平衡状態を確立するための各
対の弁５８及び６２の状態を示す。これらの欄の
１つに印が存在する場合は常に、特定試薬又は溶
剤を反応室に供給する準備として或いは供給中の
いずれかにおいて、特定貯槽に関連する弁５８及
び６２が開放している。その他全ての時点におい
て弁は閉鎖状態に留まる。同様に、“アルゴン”
の欄はたとえばアルゴンのような不活性ガスをマ
ニホールド６８を介して反応室に供給するための
弁７２の状態を示し、“供給”の欄はその時点で
加圧される任意の貯槽に対応する弁６６の状態を
示し、また“排棄”、“収集”及び“減圧”と記し
た欄はそれだれ弁８２，７８及び８０の状態を示
している。上記したように、溶剤又は試薬供給の
各工程に先立つて適当な溶剤又は試薬貯槽の加圧
が行なわれ、次いで弁７２を介して不活性ガスが
導入されて溶剤又は試薬の供給を完了しかつ供給
路をフラツシユする。欄“R4A”及び“S4”は、
選択的に加圧しかつ貯槽１００乃至１０２内に動
的平衡を確立するための各対の弁１０８及び１１
０の状態を示し、“供給／アルゴン”の欄は経路
１２４を介して不活性ガスを変換フラスコ中に導
入する弁１２２と、その時点で加圧される貯槽に
対応する弁１１２との両者の状態を意味する。欄
“アルゴン”、“排棄１”、“減圧”、“収集”、及び
“排棄２”はそれぞれ弁１１８，９２，９６，１
３１及び１２５の状態を示している。 表示したフラクシヨンコレクター機能のうち、
欄“アルゴン”、“排棄”及び“減圧”はそれぞれ
弁１２８，９４及び９８の状態を示している。 上記を除いて第１表に示した工程の順序は引用
文献に記載したエドマン減成法に実質的に一致す
るので詳細には説明しない。一般的実施法から外
れたものは全て工程の名称と第１表に示した対応
する作動状態とから明瞭であろう。 実際には、特定使用者の要望にプログラムを合
わせるため第１表の順序プログラムにおいて次の
変更を行なうことができる： (1) 工程１８乃至５８を最初の順序サイクルで１
回又は２回循環して蛋白質に対する全アミノ基
の完全結合を確保することができる。 (2) 工程６５に続いて反応室中に水蒸気（R3A）
を20〜60秒間供給してセリン及びスレオニンの
側鎖の脱水を減少させることができる。 (3) 工程６５に続いてメタノール（R4A）中の1N
塩酸0.05mlを変換フラスコに供給してアスパラ
ギン酸及びグルタミン酸の側鎖をメチル化する
ことができる。これを行なう場合、S4は好まし
くはメタノールである。 (4) 工程７６に続いて0.7〜１mlのS4（アセトニト
リル又はメタノール）を供給し、これをその後
に排棄部へ移送して変換フラスコを充分に清浄
することができる。 (5) 工程８の持続時間を増加して（500〜1000秒
間）、アミノ末端プロリン残部の開裂を促進す
ることができる。 本発明の本質は、本発明の実施に関する以下の
特定例によりさらに明瞭となるであろう。開示し
たデータは本発明の装置及び方法を用いて実施し
た処理の例としてのみ役立ち、決して本発明の範
囲を限定する意図でないことを了解すべきであ
る。 以下の例で示すアミノ酸順序は１文字のアミノ
酸記号で示され、これは次のように定義される： Ａ：アラニン Ｌ：ロイシン Ｒ：アルギニン Ｋ：リジン Ｎ：アスパラギン Ｍ：メチオニン Ｄ：アスパラギン酸 Ｆ：フエニルアラニン Ｃ：システイン Ｐ：プロリン Ｅ：グルタミン酸 Ｓ：セリン Ｑ：グルタミン Ｔ：スレオニン Ｇ：グリシン Ｗ：トリプトフアン Ｈ：ヒスチジン Ｙ：チロシン Ｉ：イソロイシン Ｖ：バリン 例 １ 順次決定する蛋白質試料を埋入するのに適した
高分子第４アンモニウム塩の固体マトリツクスは
上記の繊維質シート部材１９０及び１９０′の上
で調製することができ、蛋白質試料は次のように
マトリツクス中に埋入されうる。 直径12mmかつ厚さ0.25〜0.5mmのガラス繊維円
板を、ニユージヤーシー州、クリフトン所在のワ
ツトマン社より市販されているガラスミクロフア
イバーフイルターのシートから切り取る。この円
板を室要素１３４の凹部１９２に設置する。1.5
mgの１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカ
メチレンポリメトブロマイドと0.0033mgのグリシ
ルグリシンとを含有する水溶液25μを注射器又
はピペツトからガラス繊維円板上に滴下する。減
圧下又は温窒素の流れ中で加熱することにより水
を蒸発させる。室装置１２の残部を組立てて、装
置１０中に装着する。蛋白質順序決定プログラム
を工程１８から開始し、蛋白質試料と化学反応す
るか或いはエドマン法を妨げる可能性のある不純
物を１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカ
メチレンポリメトブロマイドから除去するため４
〜６回の減成サイクルを行なう。室装置１２を部
分的に解体して25μの蛋白質溶液をガラス繊維
円板上に滴下する。蛋白質溶液は１，５−ジメチ
ル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブ
ロマイドを溶解させ、液体を蒸発により除去して
蛋白質試料が埋設された１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド
の薄膜を残入させる。最初の蛋白質試料容量が
25μより大であれば、この試料を25μ分だけ
施こし、分割施用の間に蒸発により液体を除去す
ることができる。室装置１２を再組立てし、装置
１０中に再装着する。次いで蛋白質順序決定プロ
グラムを工程１８から開始し、所望に応じて多数
回の減成サイクルを行なう。 例 ２ 順序決定する蛋白質試料を埋入するのに適する
高分子第４アンモニウム塩の固体マトリツクスは
ガラス毛細管容器の内壁上で調製することがで
き、蛋白質試料を次のようにしてマトリツクス中
に埋入することができる。 室要素３２４又は室要素１３４′及び１３６′を
先ず最初に図面に示すようにスリーブ１３２及び
キヤツプ１６０と組立てて小型のカートリツジ式
小組体を形成し、これはマトリツクス及び試料を
導入するための操作を容易化する。この小組立体
を水平に保ち、0.6mgの１，５−ジメチル−１，
５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド
と0.0013mgのグリシルグリシンとを含有する水溶
液10μを注射器から反応室中に注入する。 室３２０は、その２端部の直径が1/16インチと
なりかつ中央の直径が1/8″となるように製作し、
水平状態においてこれら端部からこぼれることな
く25μまでの溶液を収容する室を作るのが好ま
しい。水平状態で溶液を保持する室３２４のこの
形状を第１８Ｂ図に示し、この場合簡単化のため
スリーブ１３２とこれに関連する構造とを省略し
てある。次いで、この小組立体をその軸を中心と
して回転させ、その間室中に空気又は窒素の流れ
を流入させることにより反応室内の液体を蒸発さ
せて、室の壁部上に１，５−ジメチル−１，５−
ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイドの薄
膜を残留させる。次いで、小組立体を装置１０内
に装着し、蛋白質順序決定プログラムを工程１８
から開始し、そして４〜６回の完全減成サイクロ
を行なう。次いで、小組立体を装置１０から取り
出して水平に保ち、10μの蛋白質溶液を注射器
から反応室中に適下する。小組立体を再びその軸
を中心として回転させ、その間室中に向けた窒素
の流れにより反応室内の液体を蒸発させて、第１
８Ｃ図に示したように蛋白質試料が埋入された
１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチ
レンポリメトブロマイドの薄膜を残留させる。次
いでこの小組立体を装置１０内に再装着し、蛋白
質順序決定プログラムを工程１８から開始して所
望の回数だけ減成サイクルを行なう。 例 ３ 20％蟻酸水溶液25μ中に含有させたアンギオ
テンシン0.0005mgを、予め環化させた１，５−ジ
メチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメ
トブロマイドの固体マトリツクス中に例１の方法
に従つて埋め込んだ。アンギオテンシンを８サイ
クルのエドマン減成にかけ、各サイクルで生成さ
れたフエニルチオヒダントインアミノ酸をジヨン
ソン等により記載された方法〔「デユポン・ゾル
バツクスCNカラム上での高圧液体クロマトグラ
フイーによるフエニルチオヒダントインアミノ酸
の分析」、アナリテイカル・バイオケミストリー、
第100巻、第335頁（1979）〕に従つて高圧液体ク
ロマトグラフイーにより分析した。「実験」とし
て下記する順序が得られた。既知順序をも比較の
ため下記する。 実験：１ Ｄ −Ｒ−３ Ｖ −Ｙ−５ Ｉ −Ｈ−７ Ｐ −Ｆ 既知：Ｄ−Ｒ−Ｖ−Ｙ−Ｉ−Ｈ−Ｐ−Ｆ この結果は、少量のペプチドでさえ本発明の方
法で順序決定できることを示しているので意義が
ある。このような少量のペプチドを順序決定しう
る性能は、試料を支持体表面上に直接吸着させる
のでなく薄膜中に埋設して保持し、したがつて寸
法に無関係にしつかり保持されうるという事実に
よつて生ずる。吸着結合は試料と表面との間にお
ける多数の非共有相互作用からなり、分子の寸法
によつて著しく左右されるのに対し、ここに開示
した薄膜の保持力は試料寸法により比較的影響さ
れない。 例 ４ 20％酢酸水溶液25μ中に含有させた鯨精子ア
ポミオグロビン0.01mgを、予め環化させた１，５
−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポ
リメトブロマイドの固体マトリツクス中に例１の
方法に従つて埋め込んだ。このアポミオグロビン
を40サイクルのエドマン減成にかけ、フエニルチ
オヒダントインアミノ酸を例３の方法に従つて分
析し、「実験」として下記に示す順序を得た。鯨
精子アポミオグロビンの既知順序をも比較のため
下記に示す。 実験：１ Ｖ −Ｌ−Ｓ−Ｅ−５ Ｇ −Ｅ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−10 Ｖ 既知：Ｖ−Ｌ−Ｓ−Ｅ−Ｇ−Ｅ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−Ｖ 実験：−Ｌ−Ｈ−Ｖ−Ｗ−15 Ａ −16 Ｋ −Ｖ−Ｅ−Ａ 既知：−Ｌ−Ｈ−Ｖ−Ｗ−Ａ−Ｋ−Ｖ−Ｅ−Ａ 実験：−20 Ｄ −Ｖ−Ａ−25 Ｇ −Ｈ−Ｇ−Ｑ−Ｄ−Ｉ− 既知：−Ｄ−Ｖ−Ａ−Ｇ−Ｈ−Ｇ−Ｑ−Ｄ−Ｉ− 実験：Ｌ−30 Ｉ −Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−35 Ｓ −Ｈ−Ｐ 既知：Ｌ−Ｉ−Ｒ−Ｌ−Ｆ−Ｋ−Ｓ−Ｈ−Ｐ 実験：−Ｅ−Ｔ−40 Ｌ − 既知：−Ｅ−Ｔ−Ｌ 例 ５ 0.1％のドデシル硫酸ナトリウムと0.05M重炭
酸アンモニウムとの水溶液25μ中に含有させた
未知構造のしようじようばえ
（Drosophilamelano−gaster）幼虫のキユーチク
ル蛋白質を、予め環化させた１，５−ジメチル−
１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマ
イドの固定マトリツクス中に例１の方法に従つて
埋め込んだ。このキユーチクル蛋白質を36サイク
ルのエドマン減成にかけ、フエニルチオヒダント
インアミノ酸の例３の方法に従つて分析し、「実
験」として下記に示す順序を得た。 実験：１ Ｎ −Ａ−Ｎ−Ｖ−５ Ｅ −Ｖ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｖ −11 Ｎ −Ｄ−Ｖ−Ｑ−15 Ｐ −Ｄ−Ｇ−Ｆ−Ｖ− Ｓ−21 Ｋ −Ｌ−Ｖ−Ｌ−25 Ｄ −Ｄ−Ｇ−Ｓ− Ａ−Ｓ−31 Ｓ −Ａ−Ｔ−Ｇ−35 Ｄ −Ｉ− 例 ６ 0.1％のドデシル硫酸ナトリウムと0.05M重炭
酸アンモニウムとの水溶液10μ中に含有させた
未知構造のしようじようばえ幼虫のキユーチクル
蛋白質を、予め環化させた１，５−ジメチル−
１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマ
イドの固定マトリツクス中に例２の方法に従つて
埋め込んだ。このキユーチクル蛋白質を24サイク
ルのエドマン減成にかけ、フエニルチオヒダント
インアミノ酸の例３の方法に従つて分析し、「実
験」として下記に示す順序を得た。 実験：１ Ｎ −Ａ−Ｎ−Ｖ−５ Ｅ −Ｖ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｖ −11 Ｎ −Ｄ−Ｖ−Ｑ−15 Ｐ −Ｄ−Ｇ−Ｆ−Ｖ− Ｓ−21 Ｋ −Ｌ−Ｖ−Ｌ− 例５及び例６において達成された結果は、本発
明の装置及び方法がドデシル硫酸酸ナトリウム
（以下、「SDS」と云う）、すなわち有力な陰イオ
ン洗剤の溶液に溶解された蛋白質及びペプチドを
順序決定するのに適することを示している。この
ことは、分析用の大型蛋白質又はペプチドに対し
少量の媒体を分離するポリアクリルイミドゲル電
気泳動として知られた最も一般的な方法がSDS溶
液中にて試料を生ずるので重要である。この一般
的な洗剤は支持体表面に対する試料の吸着結合に
基づいて試料が装置を洗浄するようにさせるにも
拘らず、本発明の固体マトリツクスはSDSの存在
により影響を受けない。 上記から判るように、極めて少量の試料につき
最少量の試薬及び溶剤と比較的短いサイクル時間
との使用により化学過程を順次実施する改良装置
及び方法が提供された。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
第１図は本発明により製作した装置の斜視図、
第２図は第１図の装置の平面図、第３図は第１図
の装置の略図、第４図は本発明により製作された
反応室アセンブリの拡大分解斜視図、第５図は第
４図の５−５線による拡大縦断面図、第６Ａ図は
第５図に示した反応室の拡大断面図、第６Ｂ図は
第５図に示した反応室の第二の具体例の断面図、
第６Ｃ図は多孔質シート部材を除去し、かつ内部
表面に試料含有薄膜を施こして使用するための第
６Ｂ図の反応室の断面図、第７図は液状で使用さ
れる試薬又は溶剤に対する本発明の典型的な貯槽
の縦断面図、第８図は気体又は蒸気として使用さ
れる試薬に対する本発明の典型的な貯槽の縦断面
図、第９図は第１１図の９−９線に対応する方向
で見た反応室及び変換フラスコに対する流体流れ
の出入を制御するための本発明により製作された
ダイヤフラム弁アセンブリの縦断面図、第９Ａ図
は第９図に示した弁アセンブリの一接続部材の部
分拡大断面図、第１０図は第９図の１０−１０線
縦断面図、第１１図は第９図に示した弁装置のマ
ニホールドブロツクの側面図、第１２図は第１１
図の１２−１２線横断面図、第１２Ａ図は第１１
図の１２Ａ−１２Ａ線縦断面図、第１３Ａ図は第
９図の弁アセンブリのバルブ部分の拡大部分断面
図であつてマニホールドブロツクに圧接されるこ
とによりその位置における通路間の流体連通を防
止するダイヤフラムを示し、第１３Ｂ図は第９図
のアセンブリのバルブ部分の拡大部分断面図であ
つてマニホールドブロツクから引き離されること
により通路間の流体流れを可能にするダイヤフラ
ムを示し、第１４図は本発明により製作された変
換フラスコの平面図、第１５図は第１４図の１５
−１５線縦断面図、第１６図は第１４図の１６−
１６線縦断面図、第１７Ａ及び１７Ｂ図は減成の
際蛋白質又はペプチド試料を不動化させる２つの
主要な従来法の略図、第１７Ｃ図は本発明による
蛋白質又はペプチドの不動化を示す略図、第１８
Ａ図は本発明の反応室アセンブリの別の具体例に
関する第５図に対応する部分拡大縦断面図、第１
８Ｂ図は第１８Ａ図の具体例の室要素を示す縦断
面図であつてその内壁部に試料含有マトリツクス
を施こす目的でその側部を回転させた図、そして
第１８Ｃ図は第１８Ｂ図の室要素のさらに拡大し
た部分断面図であつてその内壁部に施こした試料
含有薄膜を示す。 １２……室装置、１４……変換フラスコ、１６
……フラクシヨンコレクター、２２……ダイヤフ
ラム弁、２４……弁、２６……ダイヤフラム弁、
２８……不活性ガス源、３０……圧力調節弁、３
４……室、１８６，１８８……空洞部、１９０…
…多孔質シート部材、３６，３８……入口、出口
通路、３１６……固定マトリツクス、３００……
試料。
第２図は第１図の装置の平面図、第３図は第１図
の装置の略図、第４図は本発明により製作された
反応室アセンブリの拡大分解斜視図、第５図は第
４図の５−５線による拡大縦断面図、第６Ａ図は
第５図に示した反応室の拡大断面図、第６Ｂ図は
第５図に示した反応室の第二の具体例の断面図、
第６Ｃ図は多孔質シート部材を除去し、かつ内部
表面に試料含有薄膜を施こして使用するための第
６Ｂ図の反応室の断面図、第７図は液状で使用さ
れる試薬又は溶剤に対する本発明の典型的な貯槽
の縦断面図、第８図は気体又は蒸気として使用さ
れる試薬に対する本発明の典型的な貯槽の縦断面
図、第９図は第１１図の９−９線に対応する方向
で見た反応室及び変換フラスコに対する流体流れ
の出入を制御するための本発明により製作された
ダイヤフラム弁アセンブリの縦断面図、第９Ａ図
は第９図に示した弁アセンブリの一接続部材の部
分拡大断面図、第１０図は第９図の１０−１０線
縦断面図、第１１図は第９図に示した弁装置のマ
ニホールドブロツクの側面図、第１２図は第１１
図の１２−１２線横断面図、第１２Ａ図は第１１
図の１２Ａ−１２Ａ線縦断面図、第１３Ａ図は第
９図の弁アセンブリのバルブ部分の拡大部分断面
図であつてマニホールドブロツクに圧接されるこ
とによりその位置における通路間の流体連通を防
止するダイヤフラムを示し、第１３Ｂ図は第９図
のアセンブリのバルブ部分の拡大部分断面図であ
つてマニホールドブロツクから引き離されること
により通路間の流体流れを可能にするダイヤフラ
ムを示し、第１４図は本発明により製作された変
換フラスコの平面図、第１５図は第１４図の１５
−１５線縦断面図、第１６図は第１４図の１６−
１６線縦断面図、第１７Ａ及び１７Ｂ図は減成の
際蛋白質又はペプチド試料を不動化させる２つの
主要な従来法の略図、第１７Ｃ図は本発明による
蛋白質又はペプチドの不動化を示す略図、第１８
Ａ図は本発明の反応室アセンブリの別の具体例に
関する第５図に対応する部分拡大縦断面図、第１
８Ｂ図は第１８Ａ図の具体例の室要素を示す縦断
面図であつてその内壁部に試料含有マトリツクス
を施こす目的でその側部を回転させた図、そして
第１８Ｃ図は第１８Ｂ図の室要素のさらに拡大し
た部分断面図であつてその内壁部に施こした試料
含有薄膜を示す。 １２……室装置、１４……変換フラスコ、１６
……フラクシヨンコレクター、２２……ダイヤフ
ラム弁、２４……弁、２６……ダイヤフラム弁、
２８……不活性ガス源、３０……圧力調節弁、３
４……室、１８６，１８８……空洞部、１９０…
…多孔質シート部材、３６，３８……入口、出口
通路、３１６……固定マトリツクス、３００……
試料。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 多数のアミノ酸単位を含有する蛋白質又はペ
プチドにおけるアミノ酸単位の順序を決定する為
の方法において、 入口及び出口を有する閉成反応室内において試
薬を保持しない固体支持体上に試薬に溶解せず且
つ試薬透過性の材料から成る薄膜の形態をしたマ
トリツクスを用意する段階と、 前記マトリツクス中に蛋白質又はペプチドの試
料を埋入する段階と、 前記反応室を通して前記入口から前記出口へと
複数の試薬を加圧流れとして順次導通し、該試薬
の一部を前記マトリツクス中に拡散及び吸収せし
める段階と を包含し、前記試料を前記マトリツクス中に不動
化すると共に、前記反応室を導通されそして該マ
トリツクス中に拡散した複数の試薬の各々に露呈
せしめて化学的相互作用を行なわせることを特徴
とする蛋白質又はペプチドにおけるアミノ酸単位
の順序を決定する為の方法。 ２ 反応室内にマトリツクスを支持する段階がマ
トリツクス材料を含有する溶液を反応室中に導入
し、次いで反応室中にガスを通しながら反応室を
回転させて液体を蒸発させ、マトリツクス材料を
反応室の内壁上に薄膜として残留させることから
成る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ マトリツクス中に試料を埋入する段階が試料
を含有する溶液を反応室内に導入して、該溶液中
にマトリツクス材料を溶解させ、次いで反応室中
にガスを通しながら反応室を回転させて液体を蒸
発させ、試料を埋入したマトリツクス材料を反応
室の内壁上に薄膜として残留させることから成る
特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４ マトリツクスが多孔質シート上に支持され、
反応室内にマトリツクスを支持する段階がマトリ
ツクス材料を該多孔質シート上に薄膜として被覆
し、そして該多孔質シートを入口から出口まで通
過する試薬が該シートを通過するよう反応室内に
入口と出口との間の位置にて反応室を横断して配
置することから成る特許請求の範囲第１項記載の
方法。 ５ マトリツクス中に試料を埋入する段階が試料
を含有する溶液を多孔質シートに被覆してマトリ
ツクス材料を溶解せしめ、該シートから液体を蒸
発させ、試料を埋入したマトリツクス材料を薄膜
として残すことから成る特許請求の範囲第４項記
載の方法。 ６ 反応室中に試薬を順次導通する段階が反応室
を通して気体或いは蒸気の形で少なくとも１種の
試薬を流通させて、マトリツクス中に拡散せしめ
そして試料と反応せしめることから成る特許請求
の範囲第１項記載の方法。 ７ 多数のアミノ酸単位を含有する蛋白質又はペ
プチドにおけるアミノ酸単位の順序を決定する為
の装置であつて、 入口及び出口を有する反応室を形成する内表面
を具備しそして試薬を保持しない薄膜の形態をし
たマトリツクス支持用固体支持体を含む室手段
と、 少なくとも一部が蛋白質又はペプチドと反応性
である試薬を収納しそして前記反応室と流通状態
にある複数の貯槽と、 前記貯槽から前記反応室へ試薬を移動するため
の加圧手段と、 前記貯槽から前記反応室へそして該反応室を通
して前記入口から前記出口へと複数の試薬を加圧
流れとして順次導通せしめる手段と、 蛋白質又はペプチドの試料を埋入するため、前
記反応室内で前記固体支持体上に設けられそして
試薬に溶解せず且つ試薬透過性の材料から成る薄
膜の形態をしたマトリツクスと、 を包含し、試料を前記マトリツクス中に不動化す
ると共に、前記反応室を導通されそして該マトリ
ツクス中に拡散した複数の試薬の各々に露呈せし
めて化学的相互作用を行なわせることを特徴とす
る蛋白質又はペプチドにおけるアミノ酸単位の順
序を決定する為の装置。 ８ マトリツクスが非反応性ポリマーから成る特
許請求の範囲第７項記載の装置。 ９ 複数のサイクルを通して装置の機能を自動的
に制御するための手段を備える特許請求の範囲第
７項記載の装置。 １０ 反応室出口と連通しそして内部に突入する
複数の毛細管を備えた変換フラスコと、 各種試薬を前記毛細管を通して前記フラスコ内
へと導入しそしてフラスコから取出すための手段
と を含み、少なくとも１つの毛細管が毛細管孔を閉
鎖される内方端部においてフラスコの底部近傍に
終端し、そして前記内方端部に複数の制限された
放射状に離間するオリフイスを有し、それにより
前記１つの毛細管を通して内方に通されるガスの
流れがフラスコ内の液体中に多数の小気泡を導入
し、これら気泡が液体を撹拌するか又はその乾燥
を促進する特許請求の範囲第７項記載の装置。 １１ サンプルがアミノ酸単位の順序を決定する
為順次減成される蛋白質又はペプチドである特許
請求の範囲第７項記載の装置。 １２ 反応室出口と連通しそして内部に突入する
複数の毛細管を有する変換フラスコと、 各種試薬を前記毛細管を通して前記フラスコ内
へと導入しそしてフラスコから取出すための手段
と を含み、少なくとも１つの毛細管が毛細管孔を閉
鎖される内方端部においてフラスコの底部近傍に
終端し、そして前記内方端部に複数の制限された
放射状に離間するオリフイスを有し、それにより
前記１つの毛細管を通して内方に通される試薬の
流れがフラスコ内壁に噴霧されて該内壁を洗浄す
る特許請求の範囲第７項記載の装置。 １３ 毛細管がガラス管である特許請求の範囲第
１２項記載の装置。 １４ マトリツクスが高分子第４アンモニウム塩
からなる特許請求の範囲第７項記載の装置。 １５ 高分子第４アンモニウム塩が１，５−ジメ
チル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメト
ブロマイドからなる特許請求の範囲第１４項記載
の装置。 １６ 高分子第４アンモニウム塩がポリ（Ｎ，Ｎ
−ジメチル−３，５−ジメチレンピペリジニウム
クロライド）からなる特許請求の範囲第１４項記
載の装置。 １７ 反応室を通して複数の試薬を順次導通せし
める手段が該反応室と複数の貯槽との間で試薬の
流れを制御するための少なくとも一つの弁手段を
含み、該弁手段が 表面上に複数のバルブ部位を備える弁ブロツク
にして、各バルブ部位に第１開口群を介して開通
する、両端間で連続した第１通路と、前記バルブ
部位の１つに第２開口群を介して各連通する複数
の第２通路とを備えた弁ブロツクと、 各バルブ部位を覆う複数の弾性かつ実質的に不
透過性のダイヤフラムであつて、各ダイヤフラム
が前記バルブ部位の１つに圧接されて該バルブ部
位に開口する第１及び第２開口を閉鎖する第１封
止状態と、該バルブ部位から引き離されて該第１
及び第２開口の間に流体流路を形成する第２状態
との間で動作しうるダイヤフラムと、 前記第１及び第２通路を複数の貯槽及び反応室
にそれぞれ接続する手段と を包含し、それにより前記第１通路と第２通路と
の間の流体流れを選択的に制御しうる特許請求の
範囲第７項記載の装置。 １８ 接続手段が第１通路の端部の１つに取付け
部を有し、それにより第１通路をマニホールドと
して作用され、該マニホールドは前記取付け部と
該取付け部から最も離間した第２通路との間で流
体流れによりフラツシユすることができる特許請
求の範囲第１７項記載の装置。 １９ 第１通路が複数の直線通路からなり、これ
らを端部対端部で接続して鋸歯形状を有しかつそ
の交互の交差部において各バルブ部位に連通する
導管を形成する特許請求の範囲第１８項記載の装
置。 ２０ 接続手段が少なくとも１つのテーパ付きフ
エルールからなり、これを配管部材周囲に滑り係
合にて密接に嵌装すると共に、弁ブロツク手段中
の異なるテーパの凹部に圧接して前記通路の１つ
に連通させ、かくして前記フエルールに適用され
る内向き力をフエルールと凹部との間の比較的小
さい接触面積に集中させてそれらの間の流体シー
ルを形成する特許請求の範囲第１７項記載の装
置。 ２１ 凹部をフエルールよりも大きい角度でテー
パづけした特許請求の範囲第２０項記載の装置。 ２２ フエルールを両側においてテーパづけし、
前記側部の一方を別のテーパづき凹部を有するス
クリユーねじ手段により前記凹部に圧接して前記
フエルールの他方の側部を収容し、前記凹部を前
記フエルールの対応側部のテーパ角度よりも大き
い角度でテーパづけした特許請求の範囲第２０項
記載の装置。 ２３ 反応室が一対の当接する室要素からなりそ
の対向係合表面上にそれぞれ第１及び第２空洞部
を備え、前記第１及び第２空洞が互いに整列して
反応室を形成し、該第１及び第２空洞が係合表面
から離れる方向に入口及び出口とそれぞれ通じる
位置までテーパ付けされている特許請求の範囲第
７項記載の装置。 ２４ 支持手段が第１及び第２空洞を分画する配
向において反応室内に保持のため係合表面の少な
くとも一方における凹部内に配置される多孔質シ
ートであり、反応室が該多孔質シートの少なくと
も一方側に配置される屈撓性材料製のシートを含
み、該シートが係合表面間に挾持されて係合表面
間にシールを形成し、該シートが試薬に対して透
過性である特許請求の範囲第２３項記載の装置。 ２５ 多孔質シートが室を実質的に横断して延在
する特許請求の範囲第２４項記載の装置。 ２６ 多孔質シートが複数の繊維で作られたシー
トからなる特許請求の範囲第２４項記載の装置。 ２７ 繊維がガラス繊維である特許請求の範囲第
２４項記載の装置。 ２８ 室要素の少なくとも一方がその係合表面上
に空洞部周囲に延在する隆起部を備え、屈撓材料
の少なくとも１枚のシートを他方の室要素の係合
表面に圧接させ、以つて封止関係を向上させる特
許請求の範囲第２４項記載の装置。 ２９ 入口及び出口が室要素を貫通延在しそして
内端において多孔質シートを構成する支持手段の
両側にて反応室に連通する一対の毛細管通路を含
む特許請求の範囲第２３項記載の装置。 ３０ 毛細管が反応室と同軸であり、そこから室
要素における外方毛細管開口部まで延在する特許
請求の範囲第２９項記載の反応室装置。 ３１ 室要素がガラス製でありかつ毛細管開口部
に隣接するほぼ平坦な表面を有する特許請求の範
囲第２９項記載の装置。 ３２ 反応室を通して試薬を導通する手段が入口
及び出口手段がほぼ平坦な封止端部とこの端部に
おける開口部に終端する軸線方向の毛細管通路を
有する弾性材料製の少くとも１つの柱状部片を含
み、さらに前記封止端部を前記毛細管開口部の１
つに対し軸線方向に押圧するスクリユーねじ手段
を備え、かくして軸線方向通路が前記毛細管開口
部に連通しかつ封止端部がそれに隣接する室要素
のほぼ平坦な表面に対し封止する特許請求の範囲
第２９項記載の装置。 ３３ 柱状部片が、金属スリーブ中に包入された
フルオロカーボン重合体の塊体からなる特許請求
の範囲第３２項記載の装置。 ３４ スクリユーねじ手段が孔部を備えて金属ス
リーブを軸線方向滑り関係にて密接に収容し、１
つの毛細管開口部と柱状部片中の通路との正確な
整列を保証する特許請求の範囲第３３項記載の装
置。 ３５ 多数のアミノ酸単位を含有する蛋白質又は
ペプチドにおけるアミノ酸単位の順序を決定する
為の方法において、 入口及び出口を有する閉成反応室内において試
薬を保持しない固体支持体上に試薬に溶解せず且
つ試薬透過性の材料から成る薄膜の形態をしたマ
トリツクスを用意する段階と、 前記マトリツクス中に蛋白質又はペプチドの試
料を埋入する段階と、 前記反応室を通して前記入口から前記出口へと
複数の試薬を加圧流れとして順次導通し、該流体
の一部を前記マトリツクス中に拡散及び吸収せし
める段階と を包含し、前記試料を前記マトリツクス中に不動
化すると共に、前記反応室を導通されそして該マ
トリツクス中に拡散した複数の試薬の各々に露呈
せしめて化学的相互作用を行なわせて、試料を順
次減成し、 更に、減成した物質を変換フラスコに移送して
一層安定なアミノ酸フラクシヨンに変換する段階
を含む ことを特徴とする蛋白質又はペプチドにおけるア
ミノ酸単位の順を決定する為の方法。
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