JPH0321038B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、γ−Ｌ−グルタミルＬ−システイニ
ルグリシン（別称：グルタチオン；以下、グルタ
チオンと呼ぶ）の従来公知文献未記載の三量体に
関し、公知グルタチオン単量体に比べて極めて優
れた金属結合能を有し、重金属類の生体内、毒性
発現の防除、生体内金属の移行制御関与物質とし
て医学及び薬学の広い分野における利用などに有
用且つ注目されるグルタチオン三量体に関する。 更に詳しくは、本発明は従来公知文献未記載の
グルタチオン三量体（グルタチオン単位における
システイン残基の−SH基が遊離状態であるグル
タチオン三量体）及び少なくともその−SH基の
保護された誘導体に関する。更に又、本発明はそ
れ自体公知の手法を利用して該グルタチオン三量
体及び該誘導体を製造する方法にも関する。 グルタチオンは公知物質であつて、下記式で示
すようにＬ−グルタミン酸単位部分、Ｌ−システ
イン単位部分及びグリシン単位部分から成り（以
下、グリシン以外のアミノ酸はＬ−体を示す）、
グルタチオン−単位についてペプチド結合により
重合可能な位置が下記式にアンダーラインを施し
た３ケ所存在する。従つて、その三量体の位置異
性体の存在様式は５種類であり、本発明はこれら
５種類の位置異性体の中後記のTri−GSH−Ｉで
表わされるグルタチオン三量体に係るが、以下に
参考として残りの４種類の位置異性体についても
説明する。 グルタチオン：− グルタチオンは、例えば酵母や動物の肝臓、筋
肉などに広く分布する公知物質であつて、生体内
酸化還元に重要な役割を果していることが知られ
ている。又、金属に対して結合能を有する物質で
あることも知られている。従来、グルタチオンの
酸化体である−Ｓ−Ｓ−結合により結合された二
量体は知られている。しかしながら、ペプチド結
合により結合されたグルタチオンオリゴマーにつ
いては従来全く知られていない。 本発明者等はグルタチオン及びその誘導体に関
して研究を行つてきた。その結果、ペプチド結合
により結合されたグルタチオンの三量体及び少な
くともその−SH基の保護された誘導体が存在し
得て且つそれ自体公知の反応手法を組み合わせる
ことにより合成できることを発見した。 更に、得られるグルタチオン三量体は従来公知
文献未記載の化合物であつて、グルタチオン単量
体に比して極めて優れた金属結合能を有し、細胞
に対する重金属類の毒性に対する毒性低減能も強
いことを発見した。 又更に、上記特性に由来して、重金属類による
生体内毒性発現を防除する作用、生体細胞の機能
維持に重要な役割を演ずるホルモン、酵素類など
の生理活性物質に密接に関与する銅、亜鉛、鉄、
コバルト、ニツケル、硅素などの金属の移行制御
作用、などに関係を有する物質として医学及び薬
学の広い応用分野に於て有用であり、更に、本発
明新規化合物は生体内における金属の移行制御に
関与する物質として公知で且つ生物界に広く存在
する金属結合蛋白“メタロチオネイン”の金属結
合部位と構造的な類似性を有する点でも興味ある
注目すべき化合物であることを知つた。 従つて本発明の目的は新規グルタチオン三量体
及びその誘導体を提供するにある。 本発明の他の目的は上記化合物の製法を提供す
るにある。 本発明の上記目的及び更に多くの他の目的なら
びに利点は以下の記載から一層明らかとなるであ
ろう。 グルタチオン三量体は、グルタチオン単位中の
グルタミン酸残基のカルボキシル基及び／又はグ
リシン残基のカルボキシル基と、他のグルタチオ
ン単位のグルタミン酸残基のアミノ基との間のペ
プチド結合を形成する組合わせに応じて５種のグ
ルタチオン三量体〔以下TriGSHと略記すること
がある〕を包含する。そしてこれら５種のグルタ
チオン三量体の分子構造を表示するため、グルタ
チオン単位の結合様式を次のごとく定義する。ア
ミノ基が遊離状態であるグルタチオン単位を母体
として、第２位のグルタチオン単位のアミノ基が
グルタミン酸残基のα−カルボキシル基とペプチ
ド結合により連結している状態をα−、グリシン
残基のカルボキシル基とペプチド結合している状
態をω−、第３位のグルタチオン単位が、第２位
のグルタチオン単位のグルタミン酸残基のα−カ
ルボキシル基、グリシン残基のカルボキシル基と
結合している状態をそれぞれα′−、ω′−と表示
し、下記のとおり５種のTriGSHの構造と名称を
提示する。 (1) TriGSH−（α，ω−グルタチオニルジグ
ルタチオン）〔本発明〕：− 但し式中−Glu−または−Glu−はグルタミン
酸残基のうち−NH₂のＨ及び−COOHのOHを
除いた残基 を示し、−Cys−は、システイン酸基のうち を示し、そして−Gly−は、グリシン残基のう
ち−HN−CH₂−CO− を示し、本化合物に於けるアミノ酸略号間の実
線に各々アミノ酸がペプチド結合で連絡されて
いることを示す。GluまたはGluの上、下に出
た実線はγ−カルボキシル基からOHを除いた
カルボニル基、Glu−の右横実線はα−カルボ
キシル基からOHを除いたカルボニル基を示
す。 またシステイン残基中−SH保護基にて保護
されている場合（ ）内にその保護基の略号を
示し−SHが遊離の場合は、（Ｈ）を付して表示
した。 (2) TriGSH−（ω−グルタチオニル−ω′−グ
ルタチオニルグルタチオン）〔参考〕：− 但し式中、−Glu−または−Glu−、−Cys（Ｈ）−
及び−Gly−は上記したと同義。 (3) TriGSH−（ω−グルタチオニルα′−グル
タチオニルグルタチオン）〔参考〕：− 但し式中、−Glu−または−Glu−、−Cys（Ｈ）−
及び−Gly−は上記したと同義。 (4) TriGSH−（α−グルタチオニル−ω′−グ
ルタチオニルグルタチオン）〔参考〕：− 但し式中、−Glu−または−Glu−、−Cys（Ｈ）−
及び−Gly−は上記したと同義。 (5) TriGSH−（α−グルタチオニル−α′−グ
ルタチオニルグルタチオン）〔参考〕：− 但し式中、−Glu−または−Glu−、−Cys（Ｈ）−
及び−Gly−は上記したと同義。 本発明はまた、上記グルタチオン三量体の少な
くとも−SH基の保護された誘導体を包含し、例
えば、該三量体の金属キレート化合物もしくは−
SH保護基で保護された化合物を挙げることがで
きる。−SH保護基で保護された化合物は、前記式
(1)〜(5)中、−Gly−OHで示されるグリシン単位カ
ルボキシル基（−COOH）、Glu−OHで示される
グルタミン酸単位α−カルボキシル基（−
COOH）、及びＨ−Glu−で示されるグルタミン
酸単位アミノ基（NH₂−）も保護されていてよ
い。更に又、金属キレート化合物の形で少なくと
も−SH基が保護された誘導体は、−SH基と結合
能を有する少なくとも二価の任意の金属との金属
キレート化合物であることができる。このような
金属としては、Cd、Hg、Zn、Cu、Fe、Coなど
の如き重金属類及びCa、Mg、Siなどの如き金属
類を例示できる。二価金属が好ましい。 上記アミノ基（NH₂ ^-）の保護基の例として
は、たとえばベンジルオキシカルボニル基〔以
下、Ｚと略示することがある〕、第三ブトキシカ
ルボニル基〔以下、Bocと略示することがある〕
などの如きウレタン型保護基やトリチル基〔以
下、Trtと略示することがある〕の如きアラルキ
ル型保護基を例示することができる。又、上記α
−カルボキシル基の（−COOH）の保護の例と
しては、たとえばベンジルエステル〔以下、
OBzlと略示することがある〕、第三ブチルエステ
ル〔以下、OBu_tと略示することがある〕などを
例示することができる。更に、上記システイン単
位の側鎖−SH基の保護基としては、たとえばベ
ンジル基〔Bzl〕、低級アルコキシベンジル基例
えばｐ−メトキシベンジル基〔以下、MBzlと略
示することがある〕、トリチル基〔Trt〕などを
例示することができる。 本発明及び参考として示すグルタチオン三量体
及び少なくともその−SH基の保護された誘導体
は、それ自体公知のペプチド合成単位反応手段を
適宜に組み合わせて、たとえば、後記図式１〜４
に例示する如き合成経路により合成することがで
きる。 このような公知の合成単位反応手段としては、
例えば、ラセミ化を抑制するために、Ｎ−ヒドロ
キシサクシンイミド〔以下、HOSuと略記するこ
とがある〕や１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
〔以下、HOBtと略記することがある〕の如き試
薬を添加するジシクロヘキシルカルボイミド法
（DCC法）や水溶性カルボジイミド法（EDC法）
またＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル〔以
下、−OSuと略記することがある〕などの活性エ
ステルの如き公知方法を利用したカツプリング反
応；例えば、ベンジルアルコールやイソブチレン
の如き化合物を用いて前記例示の如きカルボキシ
基の（−COOH）を保護してベンジルエステル
や第三ブチルエステルに転化するカルボキシル保
護基導入反応、上記アミノ基の（NH₂−）の保
護のため、例えば、塩化ベンジルオキシカルボニ
ル〔以下、Ｚ−Clと略記することがある〕や２−
第三ブトキシカルボニルオキシイミノ−２−フエ
ニルアセトニトリル〔以下、Boc−ONと略記す
ることがある〕の如き化合物を用いて前記例示の
如きアミノ基の（NH₂−）を保護してＺあるい
はBoc基を導入するアミノ保護基導入反応、上記
側鎖−SH基の保護のため、例えば臭化ベンジル、
ｐ−メトキシベンジルアルコールやトリフエニル
カルビノールの如き化合物を用いてチオベンジル
基、チオｐ−メトキシベンジル基、チオトリチル
基に転化するメルカプト保護基導入反応などの如
き反応目的の官能基以外の官能基部位を保護する
保護基導入反応；上記保護基導入反応により反応
目的の官能基以外の官能基部位を保護したのち、
前記例示の如きカツプリング反応を行い、次いで
保護基を除去する保護基除去反応、例えば、
1NHCl／酢酸（AcOH）、トリフルオロ酢酸
（TFA）、HCl／有機溶媒、HFなどの各種の酸や
液体アンモニア中金属Naによる還元又はH₂／Pd
の如き接触還元手段による保護基除去反応などの
保基除去反応；及び金属キレート形成反応；など
の反応手段を例示できる。 上記例示の如き合成単位反応手段及び各単位手
段における反応条件は当業者によく知られてお
り、本発明新規化合物の合成について後記図式１
〜４に例示する合成経路の単位反応において利用
できる。 以下、本発明及び参考として示す新規化合物の
合成方法の数例について図式を用いて更に詳しく
説明する。 以下の図式に於て、各略号の意味は以下のとお
りである（既にのべた略号も一緒に示してある。

【表】

【表】 上述のようにして得ることのできる従来公知文
献未記載の前記式(1)〜式(5)で表わされる本発明及
び参考として示すグルタチオン三量体は、極めて
優れた金属結合能を有する。更に又、重金属類の
毒性に対する優れた毒性低減能を示す。そのテス
トの一例を以下に示す。 〔Ａ〕 グルタチオン三量体の抗Cd毒性作用試
験：−重金属カドミウムに対する抗毒性作用試
験を以下の方法で行つた。 培養３日目のVero細胞（アフリカミドリザ
ルの腎臓由来の株化細胞）に種々の濃度のグル
タチオン三量体溶液を加える。続いて、塩化カ
ドミウム溶液を最終濃度5ppmになるように添
加してさらに培養を継続し、１日後に生残細胞
数を測定し、その結果に基づいて用量−反応曲
線を描き、グルタチオン三量体の抗Cd毒性作
用のED₅₀値を求め、グルタチオンのED₅₀値と
比較した。 その結果を下掲表〔Ａ〕に示した。 表〔Ａ〕（抗Cd毒性作用） 化合物 ED₅₀（mμmole／ml） 式(1)TriGSH− 40.7 式(2)TriGSH− 20.3 式(3)TriGSH− 32.7 式(4)TriGSH− 28.2 式(5)TriGSH− 28.2 グルタチオン（比較） 164.6 上掲表〔Ａ〕の結果に明らかなように、本発
明及び参考として示す化合物の式(1)〜(5)グルタ
チオン三量体はいずれも、グルタチオンに比し
て顕著に高い抗Cd毒性作用を示し、最も高い
式(2)化合物に於てはグルタチオンの約８倍、最
も低い式(5)化合物に於てもグルタチオン約４倍
という、全く予想外の且つ驚くべき高活性の抗
Cd毒性作用を示すことがわかる。 〔Ｂ〕 グルタチオン三量体のCd捕捉作用試
験：−重金属カドミウムに対するグルタチオン
三量体のCd捕捉作用試験をA.Yoshidaらの方
法〔Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，76 486〜490
（1979）〕に準じて行つた。解離定数が小さいほ
ど捕捉作用が大であることを意味する。結果を
下掲表〔Ｂ〕に示した。 表〔Ｂ〕 化合物 Cdの解離定数（μM） 式(1)TriGSH− 11.3 式(2)TriGSH− 1.23 式(3)TriGSH− 2.21 式(4)TriGSH− 1.91 式(5)TriGSH− 1.85 グルタチオン（比較） 190.9 上掲表〔Ｂ〕の結果に明らかなとおり、本発
明及び参考として示す化合物の式(1)〜(5)グルタ
チオン三量体はCdの解離定数で示したCdの捕
捉作用がグルタチオンに比して、全く予想外且
つ驚くべき強さであることがわかるる。 これら表〔Ａ〕及び表〔Ｂ〕に示した結果か
ら、本発明及び参考として示す化合物は重金属類
の生体内毒素発現の防除に、極めて高い且つ有用
な性質を示す新規化合物であることが理解され
る。 以下、実施例により本発明及び参考として示す
グルタチオン三量体及び少なくともその−SH基
の保護された誘導体及びその製造について更に具
体的に例示する。尚、以下の例において、グルタ
チオン三量体（グルタチオン単位におけるシステ
イン残基の−SH基が遊離状態である化合物）は、
比較的不安定であつて、融点を測定することは物
理化学恒数の特定として無意味であるため、他の
物性でその確認データーを示した。又、本発明及
び参考として示すグルタチオン三量体の前記式(1)
〜(5)で示した構造は、その合成経路及び下記の手
段を利用して確認された。 実施例１ 式(1)TriGSH−及びその−SH基の
保護された誘導体の合成。〔図式１の合成経路〕 Ｓ−ｐ−メトキシベンジルグルタチオン〔GS
（MBzl）〕，１−(1)の調整。グルタチオン〔興人
（株）販売〕4.54ｇ（14.8ｍmol），1NHCl／
AcOH20ml、及びｐ−メトキシベンジルアルコー
ル〔井上香料（株）販売〕2.2ml（17.8ｍmol）の
混合懸濁液を、65／70℃で30分加熱すると澄明な
溶液に変る。室温に冷却し減圧下に蒸発分を溜去
して黄色残渣を得る。該残渣のエーテル洗滌を３
度繰返したのちKOH上で減圧乾燥して半固形物
を得る。この半固形物を温2NAcOH（200ml）に
とかし、Dowexl（AcO^-型、30ml）を加え加温下
に10分撹拌し、Dowexlを別する。液を減圧
濃縮して結晶を得る。この結晶を200mlのH₂Oに
懸濁溶解、濃縮し、氷室放置して再結晶せしめ
GS（MBzl）4.43ｇ（収率70％）を得る。その物
性値は以下のとおりであつた。 融点 ：192〜193℃（分解） 〔α〕²⁰ _D：−20.4℃（C0.5、1NNaOH） Rf² ：0.17 元素分析 ：C₁₈H₂₅O₇N₃Sとして Ｃ Ｈ Ｎ （計算値）50.58 5.90 9.83％ （実測値）50.63 5.91 9.59％ N〓−Ｚ−Ｓ−ｐ−メトキシベンジルグルタチ
オン〔Ｚ・GS（MBzl）〕、１−(2)の調製。 １−(1)で得たGS（MBzl）427mg（１ｍmol）に
０℃に於て1NNaOH、２ml及び0.2mlのエチルエ
ーテルを加え澄明溶液とし、はげしく撹拌しなが
ら1NNaOH1.2mlと塩化ベンジルオキシカルボニ
ル（Ｚ−Cl）0.17ml（1.2ｍmol）とを０℃に於て
徐々に加え（30分を要す）、更に室温下で２時間
撹拌を続ける。 水層をエチルエーテルで抽出し、抽出残分（水
層）を濃HClにて酸性化すると油状物が析出す
る。この油状物を酢酸エチル40mlで２回抽出し酢
酸エチル層を水洗し、芒硝にて乾燥する。乾燥酢
酸エチル層を減圧下に溜去し油状残留物を得る。
この油状物をエチルエーテルから結晶化して、Ｚ
−GS（MBzl）516mg（収率92％）を得る。その物
性値は以下のとおりであつた。 融点 ：117−118℃ 〔α〕²⁰ _D：−36.4゜（C1、MeOH） R² _f ：0.70、R¹ _f：0.16、R³ _f：
0.45 元素分析 ：C₂₆H₃₁O₉N₃S・1/2
H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ （計算値）54.73 5.65 7.36％ （実測値）54.90 5.56 7.27％ Ｓ−ｐ−メトキシベンジルグルタチオン・ジベ
ンジルエステル〔GS（MBzl）−（OBzl）₂〕１−(3)
の調製。 Dean−Stark装置を用い１−(1)で得たGS
（MBzl）855mg（２ｍmol）、ｐ−トルエンスルホ
ン酸、１水和物457mg（2.4ｍmol）、ベンジルア
ルコール２ml及びベンゼン４mlを加えて澄明粘稠
な溶液となし、油浴上110℃で６時間還流を行う。
冷却後、反応液を40mlのエチルエーテル中に注
ぎ、生じた油状物質をエチルエーテル洗滌する。
この油状物質を40mlの酢酸エチルに溶解し、
0.5M・NaHCO₃及びH₂Oにて洗滌し、酢酸エチ
ル層をNa₂SO₄上で乾燥し、酢酸エチルを減圧下
に溜去して油状のGS（MBzl）−（OBzl）₂1.06ｇ
（収率87％）を得た。この物質の結晶化は出来な
かつた。 物性値R¹ _f：0.70、R² _f：0.66、R³ _f：0.83−SH基
の保護された式(1)TriGSH−、１−(4)の調製。 １−(2)で得たＺ−GS（MBzl）281mg（0.5ｍ
mol）、１−(3)で得たGS（MBzl）−（OBzl）₂730mg
（1.2mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（HOBt）〔（株）ペプチド研究所販売〕230mg
（1.7ｍmol）を０℃で５mlのDMFに加える。次い
で１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）−カルボジイミド塩酸（EDC・HCl）〔和光純
薬工業（株）販売〕326mg（1.7ｍmol）加え、０
℃で１時間、室温下２日間撹拌を続ける。反応物
を減圧乾固し、40mlの0.5MNaHCO₃を加えると
半固形状物質を得る。この半固形状物質を水洗、
0.5Mクエン酸洗滌及び水洗を行つた後、２mlの
DMFに溶解し40mlの酢酸エチルを加えるとゲル
状沈殿を得る。このゲル状沈殿を別、冷酢酸エ
チル洗滌し乾燥し、704mg（収率81％）のSH基の
保護された式(1)TriGSH−（Protected
TriGSH−）、（１−４）を得る。その物性値は
以下のとおりであつた。 融点 ：183〜184℃ 〔α〕²⁰ _D：−26.4゜（C1、DMF） R¹ _f ：0.82 元素分析 ：C₉₀H₁₀₁O₂₁NaS₃
として Ｃ Ｈ Ｎ （計算値）62.09 5.85 7.42％ （実測値）62.00 5.86 7.33％ 得られたProtected TriGSH−は下記式で示す
ことができる。 式(1)TriGSH−、１−(5)の調製。 １−(4)で得たProtected TriGSH−348mg
（0.2mmol）にアニソール0.35ml（3.2ｍmol）を
加える。次いで、HF5mlを加えて０℃で1.5時間
撹拌反応する。反応液を最初アスピレータにて０
℃減圧濃縮し、次いで、真空ポンプを用いて室温
下で18時間減圧乾固する。分液斗中窒素飽和脱
イオン水15ml、エチルエーテル10mlで得られた乾
固物からアニソールを抽出除去し、水層を
Dowex1×８（AcO^-型、1.8×３cm）のカラムを
通過せしめ、次いで、カラムを20mlの2NAcOH
（N₂飽和）、６mlの25％AcOH（N₂飽和）、10mlの
50％AcOH（N₂飽和）溶液で須次溶出、その全溶
出液を合せて直ちに凍結乾燥し136mg（収率77％）
の式(1)TriGSH−を得る。その物性値は以下の
とおりであつた。 R² _f：0.03、R³ _f：0.03、R⁵ _f：0.15 R² _f（ppc）：0.02R⁵ _f（ppc）：0.70 ニンヒドリン反応：（−NH₂） ニトロプルシド反応：（−SH） 参考例１ 式(2)TriGSH−、式(3)TriGSH−
、式(4)TriGSH−、式(5)TriGSH−及び
それらの−SH基の保護された誘導体の合成。
〔図式４のステツプワイズ合成経路〕 グルタミン酸−γ−ベンジル−α−第三ブチル
エステル

【式】４−(1)の調製。 グルタミン酸γ−ベンジルエステル〔（株）ペ
プチド研究所販売〕25ｇをジオキサン100mlに懸
濁せしめ、濃硫酸10mlを加え−10℃〜−15℃の氷
塩浴上で冷却下にイソブチレンガスを吹き込み、
液量が100ml増量を確認した後、密閉容器中、室
温で18時間撹拌反応せしめる。未反応のイソブチ
レンを気化除去後、NaHCO₃ 60ｇを加えて中和
し溶媒等を減圧溜去して得られた残留状物を酢酸
エチルにて抽出、水洗乾燥後、酢酸エチルを留去
して20ｇの油状物として

【式】を得 る。Rf¹：0.83であつた。 グルタミン酸−α−第三ブチルエステル

【式】４−(2)の調製。 ５−(1)で得た油状の

【式】15ｇ （50ｍmol）を50％エタノール50mlに溶解し水素
気流中でPd黒を用いて24時間接触水素還元した。
Pdを去し、溶媒を留去後、酢酸エチルを加え
て結晶化し、融点143〜144℃の結晶

【式】7.22ｇ（収率70％）を得た。 文献値融点143〜144℃ R.Roeske、J.Org.
Chem.，28 1251（1963）。 N〓−第三ブトキシカルボニルグルタミン酸−
α−第三ブチルエステル

【式】４−(3)の調製。M.Itoh et al，Tetrahedron Lett.1975，4393（1975）
の方法に準じて合成する。 前記−(2)で得た

【式】7.11ｇ（35 ｍmol）をジオキサン−水（１：１、ｖ／ｖ）70
mlに懸濁しEt₃N4.9ml及びBoc−ON8.75ｇを加え
て室温で１夜撹拌した。ジオキサンを留去しエチ
ルエーテルと振とう後、水層をクエン酸にて中
和。中和物を酢酸エチルにて抽出し、MgSO₄で
乾燥後、溶媒を留去して7.51ｇ（71％）の油状物
として

【式】を得た。R¹ _f：0.65で あつた。この油状物の一部をDCHA塩とし結晶
化した。その融点151〜152℃で、〔α〕²⁴ _D：−13.8゜
（C1、MeOH）であつた。 元素分析 C₂₆H₄₈O₆N₂として Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 64.43 9.98 5.78％ 実測値 64.03 9.84 5.74％ N〓−第三ブトキシカルボニル−Ｓ−ベンジル
システイン〔Boc−Cys（Bzl）−OH〕、４−(4)の
調製。 Ｓ−ベンジルシステイン12.7ｇ（60ｍmol）か
ら４−(3)の製法に準じて18ｇのBoc−Cys（Bzl）
−OHを得る。 R¹ _f：0.37であつた。 N〓−第三ブトキシカルボニル−Ｓ−ベンジル
システイニルグリシンベンジルエステル〔Boc−
Cys（Bzl）−Gly−OBzl〕、４−(5)の調製。 前記４−(4)で得たBoc−Cys（Bzl）−OH6.23ｇ
（20ｍmol）とＨ−Gly−OBzlのTosOH塩6.80ｇ
（20ｍmol）及びHOBt0.3ｇの40mlDMF溶液に、
冷却下2.8mlのEt₃N、次いでDCC4.40ｇ（21ｍ
mol）を加え氷浴上５時間、室温で１夜反応せし
める。副生したDCUを去、DMFを留去後残留
物を酢酸エチルにとかし、10％クエン酸、４％
NaHCO₃水で各３回振とう洗滌し、酢酸エチル
層を乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣に石油エー
テルを加えて結晶化し、8.30ｇ（収率90％）の
Boc−Cys（Bzl）−Gly−OBzlを得る。 融点 ：75〜76℃ R¹ _f ：0.85 〔α〕²⁰ _D：−23.2゜（C1、MeOH） N〓−第三ブトキシカルボニル−Ｓ−ベンジル
システニイルグリシン〔Boc−Cys（Bzl）−Gly−
OH〕、４−(6)の調製。 前記４−(4)で得たBoc−Cys（Bzl）−OH6.23ｇ
（20mmol）とHOSu2.6ｇをジオキサン40mlに溶
かし、冷却下DCC4.50ｇを加え４℃で１夜反応す
る。DCUを去、ジオキサンを留去後残渣をエ
チルエーテル−石油エーテルで洗滌、減圧乾燥し
てBoc−Cys（Bzl）−OSu，４−（41）とする。こ
のBoc−Cys（Bzl）−OSuをDMFに溶解し、グリ
シン2.25ｇ（30ｍmol）、Et₃N4.2mlを水20mlに溶
解した溶液を低温下（０〜４℃）で徐々に滴加し
一夜反応せしめる。反応物から溶媒を留去し酢酸
エチルで抽出し10％クエン酸、水で洗滌、乾燥後
溶媒を留去して油状のBoc−Cys（Bzl）−Gly−
OH 6.5ｇ（収率88％）を得る。 R¹ _f：0.66であつた。 N〓−第三ブトキシカルボニル−α−第三ブチ
ルエステル−γ−グルタミル−Ｓ−ベンジルシス
テイニルグリシンベンジルエステル

【式】４−(7)の 調製。 １ ４−(5)で得たBoc−Cys（Bzl）−Gly−
OBzl6.88ｇ（15ｍmol）をTFA10mlに冷却溶
解30分後TFAを減圧留去し残留油状物に
HCl／ジオキサンを1.1当量加えHCl塩をエー
テルにて結晶化せしめる，４−（52）・HCl。 ２ ４−(3)で得たBoc−Glu−OBu^t3.64ｇ（12ｍ
mol）及び１）の操作で得た結晶４−（52）
5.20ｇ（12ｍmol）をDMF20mlに溶解し、氷浴
上で冷却後Et₃N1.7mlで中和し、HOB_t0.5ｇ及
びDCC3.1ｇを加えて冷却下３時間室温で一夜
反応せしめる。生成したDCUを去、PMFを
減圧留去後残留分を酢酸エチルに溶解し、10％
クエン酸、４％NaHCO₃、水で各３回振とう
洗滌し、酢酸エチル層を乾燥後、溶媒を留去し
残留油状物をエチルエーテル−石油エーテルで
結晶せしめ6.11ｇ（収率77％）の

【式】を得る。 融点 ：81〜82℃ R¹ _f ：0.48 〔α〕²⁴ _D：−39.2゜（C1、MeOH） 元素分析 C₃₄H₄₇O₈N₃S・1/2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 61.24 7.26 6.30％ 実測値 61.40 7.02 6.45％ N〓−第三ブトキシカルボニル−γ−グルタミ
ル−Ｓ−ベンジルシステイニルグリシンベンジル
エステル

【式】 ４−(8)の調製。 ５−(7)で得た結晶

【式】5.92ｇ （９ｍmol）を1NHCl／AcOH50mlに溶解し室温
に放置する。５時間後溶媒を留去し、エチルエー
テルを加え生じた沈殿を取乾燥する。乾燥物
4.4ｇ（８ｍmol）をジオキサン−水（１：１，
ｖ／ｖ）50mlに溶解しEt₃N1.34ml及びBoc−ON
2.20ｇを加え室温で一夜撹拌反応する。副生物を
エーテル抽出により除去後、目的物を酢酸エチル
にて抽出し、水洗乾燥後酢酸エチルを留去して油
状の

【式】3.6ｇ （収率77％）を得た。 R¹ _f：0.72 上記油状物の一部をDCHA塩とし結晶化せし
める。 融点 ：72〜75℃ 〔α〕²⁰ _D：−19.6゜（C1、MeOH） 元素分析 C₂₉H₃₇O₈N₃S・C₁₂H₂₃N・H₂Oと
して Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 62.57 7.94 7.12％ 実測値 62.32 8.05 7.18％ N〓−第三ブトキシカルボニル−α−第三ブチ
ルエステル−γ−グルタミル−Ｓ−ベンジルシス
テイニルグリシン

【式】４−(9)の調 製。 １ ４−(6)で得たBoc−Cys（Bzl）−Gly・
OH6.00ｇ（15ｍmol）を氷冷下、TFA10mlに
とかし30分放置、TFAを留去しエチルエーテ
ルを加えて固定せしむ，４−（61）・TFA。 ２ ４−(3)で得た

【式】3.64ｇ （12ｍmol）とHOSu1.45ｇ（12.6ｍmol）を
DMF20mlに溶解し、氷冷後DCC2.6ｇ（12）６
ｍmol）を加えて氷冷下６時間反応せしめる。
この反応物１）で得た固化物，４−（61）・
TFA 4.06ｇ（12ｍmol）とEt₃N 3.5ml、
DMF20mlからなる溶液を徐々に添加し0゜〜４
℃で４時間、室温で１夜反応する。副生した
DCUを去し、DMFを留去し残渣を酢酸エチ
ルに溶解し、10％クエン酸、H₂Oで各３回洗
滌し、酢酸エチル層を乾燥後濃縮した。生成油
状物をエチルエーテル−石油エーテルにて洗滌
乾燥し無定形の目的物

【式】4.71ｇ （収率71％）を得る。 R¹ _f：0.61 上記無定形物120mgを酢酸エチルに溶解し
DCHA0.04mlを加え、減圧乾固し、エチルエー
テルにて結晶化する。 融点 ：148−149℃ 〔α〕²⁴ _D：−37.6゜（C1、MeOH） 元素分析 C₂₆H₃₉O₈N₃S・C₁₂H₂₃N・1/2
H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 61.35 8.54 7.53％ 実測値 61.46 8.41 7.54％ Ｓ−ベンジルグルタチオン

【式】２−(1)の調 製。 グルタチオン〔興人（株）販売〕1.84ｇ（６
ｍmol〕を氷冷下EtOH12mlと1NNaOH12ml
（12ｍmol）混合溶液に加え澄明溶液とする。
N₂ガス飽和後、冷却撹拌しながら臭化ベンジ
ル0.79ml（6.6ｍmol）を加え１時間反応する。
濃・HClを用いて反応液のPHを３〜４に調整す
ると目的物の結晶が析出する。この結晶を
別、冷水、EtOH、エチルエーテル洗滌後、乾
燥し、1.87ｇ（収率78％）のＳ−ベンジルグル
タチオンを得る。 融点 ：200〜202℃（分
解） 〔α〕²⁰ _D：−6.4゜（C0.7，3NHCl） R¹ _f ：0.02 R² _f ：0.21 R³ _f ：0.21 Ｓ−保護−ω−グルタチオニルグルタチオン
誘導体 ４−(10)の調整。 N〓−第三ブトキシカルボニル−α−第三ブ
チルエステル−γ−グルタミル−Ｓ−ベンジル
システイニルグリシン４−(9)2.21ｇ（４ｍ
mol）とHOSu506mg（4.4ｍmol）の10mlDMF
溶液に冷却下DCC865mg（4.2ｍmol）を加えて
０℃３時間、室温で２時間反応せしめ、活性エ
ステル，４−（91）とする。 先に用意したＳ−ベンジルグルタチオン1.75
ｇ（4.4ｍmol）とEt₃N1.22ml（8.8ｍmol）の
６mlDMF溶液を冷却下添加、0゜〜４℃で一夜
反応せしめる。副生するDCUを去し、DMF
を留去後、残渣を酢酸エチルに溶解、10％クエ
ン酸及び冷水で各３回振とう洗滌する。酢酸エ
チル層を乾燥後減圧乾固すると目的のＳ−保護
−ω−グルタチオニルグルタチオン誘導体４−
(10)の結晶が析出する。 メタノールエチルエーテル再結後3.14ｇ（収
率83％）の目的物４−(10)を得る。 融点 ：128〜130℃ 〔α〕²⁴ _D：−27.1゜（C0.7，MeOH） R¹ _f ：0.62 元素分析 C₄₃H₆₀O₁₃N₆S₂・3/2・H₂Oとし
て Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 53.79 6.61 8.75％ 実測値 53.95 6.51 9.05％ Ｓ−保護−α−グルタチオニルグルタチオン
誘導体 ４−(11)の調整。 ４−(8)のグルタチオン誘導体2.06ｇ（3.5ｍ
mol）と、HOSu460mg（４ｍmol）の10ml
DMF溶液にDCC824mg（４ｍmol）を加えて０
℃３時間、室温下２時間反応せしめる。副生す
るDCUを去し、DMFを減圧留去後残渣にエ
チルエーテルを加えて、生ずる沈殿を取し、
減圧乾燥して2.75ｇの活性エステル，４−（81）
を得る。 この活性エステル，４−（81）2.75ｇをＳ−
ベンジルグルタチオン1.59ｇ（４ｍmol）と
Et₃N1.12ml（８ｍmol）の10mlDMF溶液に冷
却下加え、0゜〜４℃で一夜反応せしめる。
DMFを減圧留去後、残渣を酢酸エチルに抽瞬
し、10％クエン酸、H₂Oで各３回洗滌、乾燥
後、溶媒を留去し、エチルエーテルを加えると
結晶が析出する。これら結晶を酢酸エチル−エ
チルエーテル系溶媒から再結し、3.05ｇ（収率
89％）の目的物、Ｓ−保護−α−グルタチオニ
ルグルタチオン誘導体、４−(11)を得る。 融点 ：137〜139℃ 〔α〕²⁴ _D：−33.6゜（C1，MeOH） R¹ _f ：0.66 元素分析 C₄₆H₅₈O₁₃N₆S₂・1/2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 56.60 6.09 8.61％ 実測値 56.53 6.13 8.69％ 保護トリグルタチオン−（Protected
TriGSH−） ４−(12)の調整。 １ 先に得た４−(10)3.00ｇ（3.16ｍmol）を
1NHCl／CH₃COOH20mlに溶解し室温で３時
間放置してBoc−および−OBu^t基を除去し、
反応溶液を濃縮し、エチルエーテルを加えて固
化せしめた。固化物を取し、エチルエーテル
洗滌後減圧乾燥して2.56ｇ（収率100％）のペ
プチド塩酸塩４−（101）、HClを得た。 ２ 先に得た４−(9)の保護グルタチオン誘導体
886ｇ（1.6ｍmol）を、４−(10)調製に準じて活
性エステル、４−（91）とする。 ３ １）で得た４−（101）・HCl2.56ｇ（3.16ｍ
mol）とEt₃N0.90ml（6.4ｍmol）の10mlDMF
溶液に２）の活性エステル４−（91）を加え、
0゜〜４℃で２日間反応せしめる。反応液から
DMFを留去し、残留分にEtOHを添加し、酢
酸エチルにて抽出し、すばやく10％クエン酸、
H₂Oで振とう洗滌、酢酸エチル層を乾燥後、
溶媒を留去し、エチルエーテルにて目的物を粉
末化せしめる。2.1ｇの粉末を酢酸エチル−エ
チルエーテル系溶媒から再結（沈殿）せしめ、
不定形粉末の目的保護トリグルタチオン−、
４−(12)1.76ｇ（収率84％）を得る。 融点：117〜119℃（分解） 〔α〕²⁴ _D：−29.8（C1、DMF） 元素分析 C₆₀H₈₁O₁₈N₉S₃・2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 53.44 6.35 9.35％ 実測値 53.26 6.17 10.01％ 保護トリグルタチオン− ４−（13）の調整。 １ ４−(11)で得たＳ−保護−α−グルタチオニル
グルタチオン誘導体2.90ｇ（３ｍmol）を
1NHCl／AcOH 20mlに溶解し室温で２時間静
置する。減圧濃縮後、エチルエーテルを加え、
白沈を析出せしめ、この沈殿を取し、減圧下
乾燥して2.6ｇ（収率97％）の部分脱保護基ペ
プチド４−（111）の塩酸塩を得る。 ２ ４−(9)のグルタチオン誘導体831mg（1.5ｍ
mol）を４−(10)調製に準じて活性エステル、４
−（91）とする。 この活性エステルを１）で準備した部分脱保
護基ペプチド４−（111）の塩酸塩1.35ｇ（1.5
ｍmol）を加え、10mlのDMFとEt₃N（4.5ｍ
mol）溶液に加え0゜〜４℃で２日間反応を行
う。反応液を酢酸にて中和し、溶媒を留去し生
成する固形物をH₂O 20mlに分散し、再過に
より取する。エタノール−エチルエーテル系
溶媒から再結晶化し1.64ｇ（収率78％）の保護
トリグルタチオン−、４−（13）を得る。 融点 ：174〜176℃（分解） 〔α〕²⁴：−34.2°（C1、DMF） R¹ _f：0.57、Rf⁶：0.59、R² _f：0.92、R³ _f：0.77 R² _f：0.59 R³ _f：0.92 R⁴ _f：0.77 元素分析 C₆₇H₈₇O₁₈N₉S₃・1/2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 56.29 6.35 8.82％ 実測値 56.12 6.24 9.08％ 保護トリグルタチオン−、４−（14）の調製 １ ４−(10)で得たＳ−保護−ω−グルタチオニル
グルタチオン誘導体1.42ｇ（1.5ｍmol）を
1NHCl／AcOH10mlに溶解し、室温で３時間
放置した後、減圧濃縮し、エーテルを加え残留
分を固化せしめた。固形物を取し、エーテル
洗滌後、減圧乾燥して1.23ｇ（1.5ｍmol）の部
分脱保護基ペプチド４−（101）の塩酸塩を得
た。 ２ ４−(8)のグルタチオン誘導体882mg（1.5ｍ
mol）から４−(11)の記載に準じて得られた活性
エステル、４−（81）1.18ｇ、４−（101）の部
分脱保護基ペプチド塩酸塩1.23ｇおよび0.84ml
（６ｍmol）のEt₃Nを５mlのDMFに溶解して、
0゜〜４℃で２日間反応せしめる。DMFを減圧
留去後、少量のEtOHの存在下残留物を酢酸エ
チルで抽出しすばやく10％クエン酸、水で洗滌
し、後乾燥した。溶媒を減圧濃縮し、エチルエ
ーテルを加え結晶化させる。EtOH−酢酸エチ
ル−エチルエーテル系溶媒から再結晶して1.43
ｇ（収率71％）の目的物保護トリグルタチオン
−を得た。 融点：131〜133℃（分解） 〔α〕²⁴ _D：−30.4゜（C1、DMF） R¹ _f：0.54、R⁶ _f：0.44、R² _f：0.86 R³ _f：0.72 元素分析 C₆₃H₇₉O₁₈N₉S₃・2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 54.73 6.05 9.12％ 実測値 54.68 6.02 9.45％ 保護トリグルタチオン−、４−（15）の調製。 １ ４−(11)で得たＳ−保護−α−グルタチオニル
グルタチオン誘導体1.35ｇ（1.4ｍmol）を
1NHCl／AcOH10mlに溶解し、室温で３時間
放置後減圧濃縮し、エチルエーテルを加え、残
留物を固化せしめた。固化物を取し、エチル
エーテル洗滌後減圧乾燥し、1.26ｇ（1.4ｍ
mol）の部分脱保護基ペプチド、４−（111）の
塩酸塩を得る。 ２ ４−(8)のグルタチオン誘導体823mg（1.4ｍ
mol）より４−(11)の記載に準じて得られた活性
エステル、４−（81）1.1ｇと１）のペプチド塩
酸塩、４−（111）・HCl 1.26ｇおよび0.59ml
（4.2ｍmol）のEt₃Nを５mlのDMFに溶解し、
0゜〜４℃で２目間反応させた。反応液に酢酸を
加え中和後、減圧濃縮し、固化物に水を加えて
取した。エタノール−エチルエーテル系溶媒
より再結晶して1.67ｇ（収率83％）の保護トリ
グルタチオン−、４−（15）を得た。 融点：173〜175℃ 〔α〕²⁴ _D：−36.6゜（C1、DMF） R¹ _f：0.71、R⁶ _f：0.59、R² _f：0.97、R⁴ _f：：
0.75 元素分析 C₇₀H₈₅O₁₈N₉S₃・1/2H₂Oとして Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 57.44 6.06 8.61％ 実測値 57.46 6.00 8.78％ 式(2)トリグルタチオン−（TriGSH−）４
−（16）の調製。 ４−(12)で調製した保護トリグルタチオン−
800mg（0.61ｍmol）を1.2NHCl／AcOH5mlに溶
解し、１時間室温に放置する。溶媒を減圧留去
し、残渣にエチルエーテルを加えて、脱Boc−、
OBu^t、４−(12)塩酸塩700mg（収率96％）を無定形
粉末として得る。この脱Boc−、OBu^t、４−(12)
塩酸塩700mgを−50℃で液体アンモニア10mlに溶
解し、約120mgの金属Naを少量づつ加える。１分
間以上溶液が青色を持続することを確認した後、
−50℃でNH₄Cl250mgを加え、15分間撹拌した
後、室温に戻しつつ窒素ガスを通じてNH₃を留
去する。残渣を窒素ガス置換した2M酢酸５mlに
溶解し、SephadexG−25カラム（2.0×80cm）に
てゲル過法による脱塩を行いペプチド画分約50
ml（４mlフラクシヨン、フラクシヨン番号、45番
〜56番）を集めβ−メルカプトエタノール５滴加
えて減圧濃縮する。濃縮シロツプにエタノールを
加えて、析出する結晶を取し、五酸化リン上真
空乾燥して、目的のトリグルタチオン−
（TriGSH−）、４−（16）325mg（収率72％）を
得る。 TLCによるR² _f：0.02 紙電気泳動のR_Lys：0.27 式(3)トリグルタチオン−（TriGSH−）、 ４−（17）の調製。 ４−（13）で調製した保護ト
リグルタチオン−800mg（0.57ｍmol）を４−
（16）に準じて処理し、脱Boc−、OBu^t４−（13）
誘導体塩酸塩720mg（収率99％）を得る。この化
合物を４−（16）に準じて金属Na／液体アンモニ
ア処理し、NH₃留去後の残渣を窒素ガス置換し
た水10mlに溶解し、Dowex1×８（Aco^-型）カラ
ム（200〜400メツシユ、2.0×10cm）にて吸着、
50％酢酸にて脱着し、溶出画分約40mlを集め、β
−メルカプトエタノール数滴加え減圧濃縮する。
濃縮シロツプにエタノールを加え析出する結晶を
取し、五酸化リン上真空乾燥して、目的のトリ
グルタチオン−、４−（17）410mg（収率82％）
を得る。 TLCによるR² _f：0.02 紙電気泳動のR_Lys：0.30 式(4)トリグルタチオン−（TriGSH−）、
４−（18）の調製。 ４−（14）で得た保護トリグルタチオン−800
mg（0.59ｍmol）を４−（16）に準じて処理し脱
Boc4−（14）誘導体塩酸塩735mg（収率97％）を
得る。本化合物を４−（16）に準じて金属ナトリ
ウム／液体アンモニア処理し、アンモニア留去後
の残渣を窒素置換した水10mlに溶解しDowex1×
８カラム（Aco^-型）（200〜400メツシユ、2.0×
10cm）に吸着し、50％酢酸溶液にて脱着し、溶出
画分約40mlをβ−メルカプトエタノール存在下に
濃縮し、生じたシロツプにエタノールを加えて析
出する結晶を取し、五酸化リン上真空乾燥し
て、目的のトリグルタチオン−、４−（18）450
mg（収率85％）を得る。 TLCによるR² _f：0.02 紙電気泳動のR_Lys：0.34であつた。 式(5)トリグルタチオン−（TriGSH−）、
４−（19）の調製。 ４−（15）で調製した保護トリグルタチオン−
800mg（0.56ｍmol）を５−（16）に準じて処理
し脱Boc−４−（15）誘導体塩酸塩730mg（収率95
％）を得る。本化合物を４−（16）に準じて金属
ナトリウム／液体アンモニア処理し、NH₃留去
後の残渣を窒素置換した2M酢酸溶液５mlに溶解
し、SephadexG−25カラム（2.0×80cm）にてゲ
ル過クロマトグラフイーを行い、ペプチド画分
約40ml（４mlフラクシヨン、フラクシヨンNo.41〜
50番）を集めβ−メルカプトエタノール５滴添加
して濃縮し、生じたシロツプにエタノールを加え
析出する結晶を取し、五酸化リン真空乾燥して
目的のトリグルタチオン−、４−（19）380mg
（収率77％）を得る。 TLCによるR² _f：0.02 紙電気泳動のR_Lys：0.37であつた。 薄層クロマトグラフイー（TLC）の移動度Rf
は下記の各溶媒系に於ける値を示す。紙での移
動度はRf（ppc）で示す。

【表】 検出法：遊離アミノ基を有する化合物については
ニンヒドリン試薬の噴霧、加熱により生じた紫
色スポツトを確認し、アミノ基を保護した化合
物についてはI₂蒸気又は10％H₂SO₄噴霧後乾熱
機中加熱し生じた灰暗色スポツトを確認した。 紙電気泳動は東洋紙No.52を用い溶媒（蟻
酸：酢酸：メタノール：水＝１：３：６：10v／
ｖPH1.8）を用い600volt、３時間に於ける各化合
物の移動距離をリシン（Lys）との比で測定し移
動度R_Lysとして表わした。 上記本発明及び参考として示す化合物の赤外線
吸収スペクトルの特異吸収を表１−(1)及び表１−
(2)に示す。

【表】

【表】

【表】 グルタチオン三量体GSH−、GSH−、
GSH−、GSH−、GSH−の−SH基が遊
離状態であることの確認は、Elleman法〔G.L.
Elleman：Arch.Biochem.Bisphys.，74，443
（1958）〕に従つて、１−(5)の操作により得た式(1)
TriGSH−、４−（16）の操作にて得た式(2)
TriGSH−、４−（17）の操作にて得た式(3)
TriGSH−、４−（18）の操作にて得た式(4)
TriGSH−及び４−（19）の操作にて得た式(5)
TriGSH−各2.77mgを6Mグアニジン塩酸／
0.01Mトリス塩酸PH8.0／0.05MEDTA水溶液3.1
mlに溶解して調製した１ｍＭ溶液２mlに５，5′−
ジチオービス（２−ニトロベンゾイツクアシド）
39.6mg／0.05Mリン酸緩衝液、PH7.0 10mlに溶解
して得た試薬溶液0.1mlを加え25℃で反応せしめ
生じたチオニトロフエノレイトアニオンの吸光を
412mmで経時的に測定して反応−SH基の量を測定
した。 測定の結果は表−に示す。

【表】 チオン
TriGSH各化合物のカルボキシメチル誘導体の
紙電気泳動。 TriGSH−、TriGSH−、TriGSH−、
TriGSH−、TriGSH−それぞれ各20mgをト
リス緩衝液（PH8.0）0.5mlに溶解し0.02Mモノヨ
ード酢酸水溶液0.7mlを加えてSH基のカルボキ
シ・メチル化を行う。余剰のモノヨート酢酸をヂ
チオエリスリトールで中和し、反応を止め、反応
液をセフアデツクスＧ−10のゲル過により脱塩
し、得られたカルボキシメチル化TriGSH各種
を、ビリジン／酢酸／水PH3.6で2000ボルト1.5時
間紙電気泳動を行つた。システイン酸を標準物
質として移動度〔Rf＝1.00とした時のカルボキシ
メチル化トリグルタチオンの移動度〕を表−に
示す。 表− 化合物 Rf システイン酸 1.00 CM化TriGSH− 0.60 CM化TriGSH− 0.64 CM化TriGSH− 0.61 CM化TriGSH− 0.61 CM化TriGSH− 0.60 対象CM化システイン 0.51 更に、TriGSH−、同−、同−、同−
及びTriGSH−の各種金属キレート化合物を形
成し、その安定度定数を下掲表−に示した。

【表】 上記安定度定数の測定は、Bjerrumの方法（金
属キレート〔〕239頁〜255頁；坂口武一、上野
景平編 南江堂）に従い４×10^-3mole／ｌの試
料、１×10^-3mole／ｌの各種金属イオンの混合
液30mlをイオン強度0.15、測定温度25℃にして
0.01NKOH標準液を用いて滴定したときのPH変
化を東洋科学産業販売ガラス電極PHメーター（型
式TD−15）にて測定し滴定曲線から生成関数
＝〔Ａ〕_t−〔Ａ〕／〔Ｍ〕_t、但し：〔Ａ〕_t：配位子
の総濃度、 〔Ｍ〕_t＝金属の総濃度とpA＝−40ｇ〔Ａ〕グラフ
による中点傾斜から総安定度定数β＝²
〔MZ₂〕／〔Ｍ〕〔Ｚ〕²＝K_MZ・K_MZ2を算出し、平均安
定度 定数の対数値をもつて表した。計算に用いた
TriGSHの酸解離恒数pK₁、pK₂、pK₃、pK₄はそ
れぞれ次の通り 2.12、 2.35、 8.66、 （α−COOH） （ω−COOH） （N〓−NH₂） 9.65（−SH）であつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式（１） ［但し式中、−Glu−または−Glu−はグルタミ
   ン酸残基のうち−NH₂のＨ及び−COOHのOHを
   除いた残基 を示し、−Cys−は、システイン残基のうち を示し、そして−Gly−は、グリシン残基のうち −HN−CH₂−CO− を示し、本化合物に於けるアミノ酸略号間の実線
   は各々アミノ酸がペプチド結合で連絡されている
   ことを示す。GluまたはGluの上、下に出た実線
   はγ−カルボキシル基からOHを除いたカルボニ
   ル基、Glu−の右横実線はα−カルボキシル基か
   らOHを除いたカルボニル基を示す。］ のγ−Ｌ−グルタミルＬ−システイニルグリシン
   （別称：グルタチオン）三量体並びに少なくとも
   その−SH基が(イ)随意置換されていてもよいアラ
   ルキル基または(ロ)Hg、Cu、Pd、Cd、Ni、Zn、
   Co、Fe及びMnからなる群から選ばれた金属によ
   るキレート化によつて保護された該三量体の誘導
   体。 ２ 該金属が二価金属である特許請求の範囲第１
   項記載の誘導体。 ３ 随意置換されていてもよいアラルキル基が、
   ベンジル基、低級アルコキシベンジル基またはト
   リチル基である特許請求の範囲第１項記載の誘導
   体。