JPH0336513B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0336513B2 JPH0336513B2 JP63193573A JP19357388A JPH0336513B2 JP H0336513 B2 JPH0336513 B2 JP H0336513B2 JP 63193573 A JP63193573 A JP 63193573A JP 19357388 A JP19357388 A JP 19357388A JP H0336513 B2 JPH0336513 B2 JP H0336513B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amount
- formula
- carbohydrate
- dye
- carbohydrates
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6459—Plasminogen activators t-plasminogen activator (3.4.21.68), i.e. tPA
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
- B01D15/3804—Affinity chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
- B01D15/424—Elution mode
- B01D15/426—Specific type of solvent
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Mechanical Treatment Of Semiconductor (AREA)
- Pressure Welding/Diffusion-Bonding (AREA)
- Carbon And Carbon Compounds (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は、色素含有不溶性炭水化物での親和性
クロマトグラフイーによつて、ｔ−PA含有タン
パク質水溶液からｔ−PAを分離し、かつ精製す
る方法に関する。 〔従来の技術〕 ｔ−PA（プラスミノーゲン活性化因子；tissue
−Plasminogen Activator）の製造は、ｔ−PA
の凝血溶解作用およびその心臓冠動脈疾病の治療
の可能性に基づき、最近重要になつている。種々
の細胞系、例えばヒトメラノーム細胞
（Melanomzellen）、またはCHO（中国ハムスター
卵巣：Chinese Hamster Ovary）細胞から、ｔ
−PA含有タンパク質水溶液を取得することに成
功している。他の細胞タンパク質のタンパク質の
精製、分離および精製の可能性は、従来は、特
に、ｔ−PAがこのような細胞中に痕跡量でしか
存在しないので、満足しうるものではない。 ブルートリアジン色素を用いる親和性クロマト
グラフイーによるｔ−PAの精製法は、欧州公開
特許（EP−A2）第178105号明細書および、ビオ
ケミカ・エ・ビオフイジカ・アクタ
（Biochemica et Biophysica Acta）第704巻
（1982）450−460頁に記載されている。ここでは、
精製係数（Aufreinigungsafactor）約20〜30が得
られた。トリアジン色素を用いるタンパク質の親
和性クロマトグラフイーは、コンタクテ
（Kontakte（Darmstadt））1980(2)、32〜40頁に、
一般的に述べられている。トリアジン色素に対す
る十分な親和性を得るために、タンパク質は特定
の補酵素を有すべきであり、各々好適なトリアジ
ン色素は、各々の補酵素に一致する構造特徴を有
すべきである。このような補酵素は、NAD、
NADP、COA FADおよび葉酸である。ｔ−PA
は、補酵素を有しないので、このような色素での
精製は、成功の見込みはない。 ｔ−PAの十分な濃度増加は、ｔ−PAに対する
モノクローナル抗体がカラム物質に固定されて存
在する際に、親和性クロマトグラフイーの利用下
に成功をおさめている（EMBO Journal第２巻
（1983）115〜119頁およびBBA第830巻（1985）
１−10頁）。もう１つの方法は、ｔ−PAが、フイ
ブリンに対して高い親和性を有するのでセフアロ
ーズに結合したフイブリン親和性クロマトグラフ
イーに使用することより成る（BBA第621巻
（1980）241−254）。しかしながら、この最後の２
種のクロマトグラフイー物質は高価で、その製造
に手間がかかる。 更に、これらは、例えば処理すべき物質として
のCHO−細胞上澄の使用の際に不安定である。
特に、上澄中に含まれるプロテアーゼは、フイブ
リンと抗体を部分的に分離する。これにより、カ
ラムは破壊され、これが使用可期間を制限し、溶
離液中に、第２の障害性タンパク質を発生させ
る。 更に、このクロマトグラフイ物質を用いては、
CHO−上澄中に同様に含有する阻害剤−ｔ−PA
−複合体（ｔ−PA−活性の約60％が複合されて
いる）からｔ−PAを遊離させることは成功しな
い。 〔発明が解決しようとする課題〕 従つて、本発明の課題は、可能な限り低価格
で、簡単に製造でき、かつ、安定なクロマトグラ
フイー物質の使用下に、活性度を高めることを可
能にするｔ−PAの精製法を提供することにある。
更に、ｔ−PA−阻害剤−複合体からのｔ−PAの
遊離を達成すべきである。 本発明によれば、この課題は、色素含有不溶性
炭水化物での親和性クロマトグラフイーにより、
ｔ−PA含有タンパク質水溶液からｔ−PAを分離
し、かつ精製する方法で解決され、これは、クロ
マトグラフイに、一般式： 〔式中Ｘ＝−Clまたは
クロマトグラフイーによつて、ｔ−PA含有タン
パク質水溶液からｔ−PAを分離し、かつ精製す
る方法に関する。 〔従来の技術〕 ｔ−PA（プラスミノーゲン活性化因子；tissue
−Plasminogen Activator）の製造は、ｔ−PA
の凝血溶解作用およびその心臓冠動脈疾病の治療
の可能性に基づき、最近重要になつている。種々
の細胞系、例えばヒトメラノーム細胞
（Melanomzellen）、またはCHO（中国ハムスター
卵巣：Chinese Hamster Ovary）細胞から、ｔ
−PA含有タンパク質水溶液を取得することに成
功している。他の細胞タンパク質のタンパク質の
精製、分離および精製の可能性は、従来は、特
に、ｔ−PAがこのような細胞中に痕跡量でしか
存在しないので、満足しうるものではない。 ブルートリアジン色素を用いる親和性クロマト
グラフイーによるｔ−PAの精製法は、欧州公開
特許（EP−A2）第178105号明細書および、ビオ
ケミカ・エ・ビオフイジカ・アクタ
（Biochemica et Biophysica Acta）第704巻
（1982）450−460頁に記載されている。ここでは、
精製係数（Aufreinigungsafactor）約20〜30が得
られた。トリアジン色素を用いるタンパク質の親
和性クロマトグラフイーは、コンタクテ
（Kontakte（Darmstadt））1980(2)、32〜40頁に、
一般的に述べられている。トリアジン色素に対す
る十分な親和性を得るために、タンパク質は特定
の補酵素を有すべきであり、各々好適なトリアジ
ン色素は、各々の補酵素に一致する構造特徴を有
すべきである。このような補酵素は、NAD、
NADP、COA FADおよび葉酸である。ｔ−PA
は、補酵素を有しないので、このような色素での
精製は、成功の見込みはない。 ｔ−PAの十分な濃度増加は、ｔ−PAに対する
モノクローナル抗体がカラム物質に固定されて存
在する際に、親和性クロマトグラフイーの利用下
に成功をおさめている（EMBO Journal第２巻
（1983）115〜119頁およびBBA第830巻（1985）
１−10頁）。もう１つの方法は、ｔ−PAが、フイ
ブリンに対して高い親和性を有するのでセフアロ
ーズに結合したフイブリン親和性クロマトグラフ
イーに使用することより成る（BBA第621巻
（1980）241−254）。しかしながら、この最後の２
種のクロマトグラフイー物質は高価で、その製造
に手間がかかる。 更に、これらは、例えば処理すべき物質として
のCHO−細胞上澄の使用の際に不安定である。
特に、上澄中に含まれるプロテアーゼは、フイブ
リンと抗体を部分的に分離する。これにより、カ
ラムは破壊され、これが使用可期間を制限し、溶
離液中に、第２の障害性タンパク質を発生させ
る。 更に、このクロマトグラフイ物質を用いては、
CHO−上澄中に同様に含有する阻害剤−ｔ−PA
−複合体（ｔ−PA−活性の約60％が複合されて
いる）からｔ−PAを遊離させることは成功しな
い。 〔発明が解決しようとする課題〕 従つて、本発明の課題は、可能な限り低価格
で、簡単に製造でき、かつ、安定なクロマトグラ
フイー物質の使用下に、活性度を高めることを可
能にするｔ−PAの精製法を提供することにある。
更に、ｔ−PA−阻害剤−複合体からのｔ−PAの
遊離を達成すべきである。 本発明によれば、この課題は、色素含有不溶性
炭水化物での親和性クロマトグラフイーにより、
ｔ−PA含有タンパク質水溶液からｔ−PAを分離
し、かつ精製する方法で解決され、これは、クロ
マトグラフイに、一般式： 〔式中Ｘ＝−Clまたは
【式】R1＝
−Ｈまたは−SO3
およびR2＝−Ｈ、−OHまた
は−OCH3〕の色素で置換されている炭水化物を
用い、PH−値5.5〜8.5で緩衝された溶液からｔ−
PAを抽出することよりなる。 この方法により、任意の供給源、例えばリフキ
ン・メラノーム細胞（Rifkin
Melanomazellen）、CHO−細胞、大腸菌（E.
coll）由来の再酸化ｔ−PA（reoxidiertes ｔ−
PA）から、ｔ−PAを精製して優れた残分を得る
ことができる。CHO−上澄からのｔ−PAの精製
に関する濃度増加係数は、出発物質の特異的活性
に依存して70から200倍ある。 天然物質中には、ｔ−PAと複合体を形成する
ｔ−PA−阻害物質が存在する。この形で、ｔ−
PAの生物学的活性は抑制されるか、いずれにせ
よ著るしく低下される。本発明方法の意想外の効
果は、このクロマトグラフイーの間に阻害剤複合
体が消失し、従つて、このような阻害剤複合体を
含有する出発物質において、溶離液中で阻止の消
失に帰因する出発物質に対して30％までの測定ｔ
−PA−活性の上昇が確認できることである。本
発明によれば、補酵素を含有しないｔ−PAにお
いて、ｔ−PAに対するモノクロナール抗体を担
持しているカラムでのクロマトグラフイーを用い
ると同様に、色素クロマトグラフイにより良好な
精製結果を得ることができる。このことは、非特
異的マトリツクス（この場合、アガロースに結合
した色素）での酵素の濃度増加に関して、特異的
マトリツクス例えば、ｔ−PAに対するモノクロ
ーナル抗体を用いる場合と匹敵しうる濃度増加を
期待することはできないので、一層意想外のこと
である。 色素としては、Ｘ＝−Cl、R1＝SO3 、および
R2＝−Ｈまたは−OHを有する前記一般式の化合
物が有利である。同様に、Ｘ＝−Cl、R1＝−Ｈ
およびR2＝−Ｈまたは−OH、並びに
は−OCH3〕の色素で置換されている炭水化物を
用い、PH−値5.5〜8.5で緩衝された溶液からｔ−
PAを抽出することよりなる。 この方法により、任意の供給源、例えばリフキ
ン・メラノーム細胞（Rifkin
Melanomazellen）、CHO−細胞、大腸菌（E.
coll）由来の再酸化ｔ−PA（reoxidiertes ｔ−
PA）から、ｔ−PAを精製して優れた残分を得る
ことができる。CHO−上澄からのｔ−PAの精製
に関する濃度増加係数は、出発物質の特異的活性
に依存して70から200倍ある。 天然物質中には、ｔ−PAと複合体を形成する
ｔ−PA−阻害物質が存在する。この形で、ｔ−
PAの生物学的活性は抑制されるか、いずれにせ
よ著るしく低下される。本発明方法の意想外の効
果は、このクロマトグラフイーの間に阻害剤複合
体が消失し、従つて、このような阻害剤複合体を
含有する出発物質において、溶離液中で阻止の消
失に帰因する出発物質に対して30％までの測定ｔ
−PA−活性の上昇が確認できることである。本
発明によれば、補酵素を含有しないｔ−PAにお
いて、ｔ−PAに対するモノクロナール抗体を担
持しているカラムでのクロマトグラフイーを用い
ると同様に、色素クロマトグラフイにより良好な
精製結果を得ることができる。このことは、非特
異的マトリツクス（この場合、アガロースに結合
した色素）での酵素の濃度増加に関して、特異的
マトリツクス例えば、ｔ−PAに対するモノクロ
ーナル抗体を用いる場合と匹敵しうる濃度増加を
期待することはできないので、一層意想外のこと
である。 色素としては、Ｘ＝−Cl、R1＝SO3 、および
R2＝−Ｈまたは−OHを有する前記一般式の化合
物が有利である。同様に、Ｘ＝−Cl、R1＝−Ｈ
およびR2＝−Ｈまたは−OH、並びに
次の例で、さらに本発明を詳細に述べる。
例 １
クロマトグラフイー物質の製造
吸引濾過され洗浄されたアガロース（セフアロ
ーズCL−6B）100ｇを、H2O400ml中にけんだく
させ、撹拌下に40℃まで加熱する。引続きＸ＝−
Cl、R1＝−SO3 およびR2＝−Ｈを有する一般
式の色素（プロシオン・レツドMX−2B）2.2ｇ
を水30ml中にけんだくされて添加する。10分後に
4M Nacl 40mlを添加し、さらに30分後に1N
NaOHで、0.1N NaOH濃度まで調節する。40℃
（±５℃）で72時間注意深く撹拌する。吸引濾過
後に、次の緩衝液で所定の順序で洗浄する；
H2O、5M尿素、H2O、2MNaCl、H2O、HCl。
その後、この生成物はすぐ使用可能であり、以後
これを“レツド（Red）−Ｓ”と称する。 例 ２ CHO−ｔ−PA−培養液上澄の精製：
ーズCL−6B）100ｇを、H2O400ml中にけんだく
させ、撹拌下に40℃まで加熱する。引続きＸ＝−
Cl、R1＝−SO3 およびR2＝−Ｈを有する一般
式の色素（プロシオン・レツドMX−2B）2.2ｇ
を水30ml中にけんだくされて添加する。10分後に
4M Nacl 40mlを添加し、さらに30分後に1N
NaOHで、0.1N NaOH濃度まで調節する。40℃
（±５℃）で72時間注意深く撹拌する。吸引濾過
後に、次の緩衝液で所定の順序で洗浄する；
H2O、5M尿素、H2O、2MNaCl、H2O、HCl。
その後、この生成物はすぐ使用可能であり、以後
これを“レツド（Red）−Ｓ”と称する。 例 ２ CHO−ｔ−PA−培養液上澄の精製：
【表】
【表】
例２(a)〜(c)の容量（Kapazitaet）および流過
速度は類似している。３つの例すべてにおいて、
濃度増加係数（Anreicherungsfactor）も同じく
類似している。流過速度は、レツドＳ上の培養液
上澄の抽出のためには90ml／ｈ、洗浄および溶離
のためには500ml／ｈであつた。平衡緩衝液とし
て、リン酸カリウム（PH7.5）200ｍモル、トウイ
ーン（Tween）80 0.01％を使用し、洗浄もしく
は溶離緩衝液として、KSCN（０〜2M）の増加性
濃度勾配およびNaCl（２〜0M）の減少性濃度勾
配を有する平衡緩衝液を使用した。
速度は類似している。３つの例すべてにおいて、
濃度増加係数（Anreicherungsfactor）も同じく
類似している。流過速度は、レツドＳ上の培養液
上澄の抽出のためには90ml／ｈ、洗浄および溶離
のためには500ml／ｈであつた。平衡緩衝液とし
て、リン酸カリウム（PH7.5）200ｍモル、トウイ
ーン（Tween）80 0.01％を使用し、洗浄もしく
は溶離緩衝液として、KSCN（０〜2M）の増加性
濃度勾配およびNaCl（２〜0M）の減少性濃度勾
配を有する平衡緩衝液を使用した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 色素を有する不溶性炭水化物での親和性クロ
マトグラフイーによつて、ｔ−PA含有タンパク
質水溶液よりｔ−PAを分離し、かつ精製する方
法において、このクロマトグラフイのために、一
般式： ［式中Ｘ＝−Clまたは【式】R1＝ −Ｈまたは−SO3 、R2＝−Ｈ、OHまたは−
OCH3］の色素で置換されている炭水化物を使用
し、PH−値5.5〜8.5で緩衝溶液からｔ−PAを抽
出することを特徴とする、ｔ−PAの分離および
精製法。 ２ 式中のＸ＝−Cl、R1＝SO3 およびR2＝−
Ｈまたは−OHである、請求項１記載の方法。 ３ 炭水化物としてアガロースを使用する、請求
項１記載の方法。 ４ 色素が、炭水化物の量に対して0.5〜10重量
％の量で存在する、請求項１から３までのいずれ
か１項記載の方法。 ５ 色素が、炭水化物の量に対して１〜５重量％
の量で存在する、請求項４記載の方法。 ６ PH−値が７〜８である、請求項１記載の方
法。 ７ 緩衝溶液中のハロゲン化アルカリまたは匹敵
しうるイオン濃度を有する酸の他のアルカリ金属
塩を有する抽出液0.1〜２モル／を使用する、
請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。 ８ 抽出液として、緩衝されたカリウム塩溶液を
使用する、請求項１から７までのいずれか１項記
載の方法。 ９ リン酸カリウム緩衝液を使用する、請求項７
または８記載の方法。 １０ 溶離のために、減少性濃度勾配のアルカリ
金属塩の抽出液を使用する、請求項１から９まで
のいずれか１項記載の方法。 １１ 溶離液は、KSCN0〜２モル／を含有す
る、請求項１０記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873726019 DE3726019A1 (de) | 1987-08-05 | 1987-08-05 | Verfahren zur abtrennung und reinigung von t-pa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6467187A JPS6467187A (en) | 1989-03-13 |
| JPH0336513B2 true JPH0336513B2 (ja) | 1991-05-31 |
Family
ID=6333126
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63193573A Granted JPS6467187A (en) | 1987-08-05 | 1988-08-04 | Method of separating and refining t-pa |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0302503B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6467187A (ja) |
| AT (1) | ATE76300T1 (ja) |
| DE (2) | DE3726019A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6117996A (en) * | 1995-09-20 | 2000-09-12 | Novo Nordisk A/S | Triazine based ligands and use thereof |
| GB9519197D0 (en) * | 1995-09-20 | 1995-11-22 | Affinity Chromatography Ltd | Novel affinity ligands and their use |
| JP2000286602A (ja) | 1999-03-30 | 2000-10-13 | Alps Electric Co Ltd | 超広帯域直線・円偏波変換器 |
| CN100335623C (zh) * | 2005-10-20 | 2007-09-05 | 上海交通大学 | 纤溶酶原激活剂的仿生亲和纯化方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL191755C (nl) * | 1982-10-29 | 1996-07-02 | Mitsui Toatsu Chemicals | Plasminogeenactivator en trombolytisch middel. |
| EP0163751B1 (en) * | 1984-06-05 | 1989-09-20 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for the preparation of a plasminogen activator |
| EP0178105B1 (en) * | 1984-10-01 | 1997-04-02 | Genzyme Corporation | Recombinant DNA techniques and the products thereof |
| EP0236289A3 (en) * | 1986-02-26 | 1988-12-07 | Monsanto Company | Tissue plasminogen activator from normal human colon cells |
-
1987
- 1987-08-05 DE DE19873726019 patent/DE3726019A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-08-04 EP EP88112737A patent/EP0302503B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-04 JP JP63193573A patent/JPS6467187A/ja active Granted
- 1988-08-04 AT AT88112737T patent/ATE76300T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-08-04 DE DE8888112737T patent/DE3871277D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0302503A3 (en) | 1990-03-28 |
| DE3871277D1 (de) | 1992-06-25 |
| EP0302503A2 (de) | 1989-02-08 |
| ATE76300T1 (de) | 1992-06-15 |
| DE3726019A1 (de) | 1989-02-16 |
| EP0302503B1 (de) | 1992-05-20 |
| JPS6467187A (en) | 1989-03-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2553095B1 (en) | A process for purifying vitamin K dependent proteins such as coagulation factor IX | |
| US5614500A (en) | Compositions containing highly purified factor IX proteins prepared by immunoaffinity chromatography | |
| US4259447A (en) | Process for the production of urokinase in pure condition | |
| US4066506A (en) | Method of separating and purifying two active forms of urokinase using affinity chromatography | |
| JPS63105694A (ja) | 組換え腫瘍壊死因子の精製 | |
| JPH0336513B2 (ja) | ||
| NO173287B (no) | Fremgangsmaate for rensing av enkeltkjedet og dobbeltkjedet vevplasminogenaktivator | |
| JPS62262992A (ja) | 安定化されたｎａｄ（ｐ）ｈ−依存性で可溶性の同化型硝酸還元酵素、その製法及びこれを含有する硝酸塩測定試薬 | |
| JP2573467B2 (ja) | 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 | |
| Szewczyk et al. | Purification by affinity chromatography of the dicarboxylate carrier from bovine heart mitochondria | |
| JPS5935B2 (ja) | ウロキナ−ゼの精製法 | |
| CN101693748B (zh) | 一种特异性纯化高分子尿激酶层析介质及制备方法和应用 | |
| JPS59110625A (ja) | プラスミノ−ゲン活性化因子、その製造法およびその製造用生産物 | |
| JPS5838151B2 (ja) | カリクレインの精製法 | |
| Mazitsos et al. | Galactosyl-biomimetic dye-ligands for the purification of Dactylium dendroides galactose oxidase | |
| CN114426962B (zh) | t-PA纯化方法 | |
| JP2861655B2 (ja) | ヒト尿性トリプシンインヒビター含有液状製剤及びその製造方法 | |
| Archinard et al. | [43] Use of monoclonal antibodies to purify oligomycin sensitivity-conferring protein and to study its interactions with F0 and F1 | |
| JPS63145297A (ja) | タンパク質の精製方法 | |
| KR830001822B1 (ko) | 유로 키나제의 제조방법 | |
| JP5067917B2 (ja) | Ａｄａｍｔｓ１３の分離精製方法 | |
| JPS6092220A (ja) | カリクレインの精製法 | |
| JPH0558709B2 (ja) | ||
| JPH0260316B2 (ja) | ||
| JPS6023646B2 (ja) | 高純度カリクレインの精製方法 |