JPH0349556B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は醗酵法によるＬ−グルタミン酸ナトリ
ウムの製造方法に関するものであつてその目的と
するところは、培養液中へＬ−グルタミン酸ナト
リウムを直接培養中に蓄積せしめることによつて
従来の醗酵法によるＬ−グルタミン酸ナトリウム
の製造法に於るアンモニア及び塩酸の使用量を節
減し、かつ、Ｌ−グルタミン酸アンモニウムから
Ｌ−グルタミン酸ナトリウムへ転換する複雑な工
程は省略し、工業的利用にＬ−グルタミン酸ナト
リウムを製造することにある。 従来、醗酵法によつてＬ−グルタミン酸ナトリ
ウムを直接培養液中に蓄積せしめる方法として酢
酸を主炭素源とする培地にＬ−グルタミン酸生産
菌を培養し、培養期間中に供給するフイード液の
酢酸と酢酸アンモニウムのモル比及び酢酸と酢酸
ナトリウムのモル比をたくみに調節しつつ培養し
て培養液中にＬ−グルタミン酸ナトリウム塩を蓄
積せしめる方法が知られていた（特公昭45−
26710号公報）。この方法によれば、Ｌ−グルタミ
ン酸塩中のグルタミン酸ナトリウムの割合は90％
以上に達するが、Ｌ−グルタミン酸の収率が低い
のが欠点であり、工業的に実施されるには至つて
いない。そこで本発明者等は収率を低下させるこ
となくＬ−グルタミン酸をナトリウム塩として生
成せしめる方法を開発することを目的として鋭意
研究を重ねた結果、ブレビバクテリウム属に属す
る酢酸要求性のＬ−グルタミン酸生産菌を酢酸及
び糖類を主炭素源とする培地で好気的に培養し、
グルタミン酸の生成が開始された後、酢酸ナトリ
ウム及び酢酸アンモニウムを添加して培養液中の
NH₄／Na比を1.4以下に制御しつつ培養すること
によつてかかる目的が達成できることを発見し本
発明を完成するに至つた。 以下、本発明の方法について説明する。 本発明の方法で使用されるＬ−グルタミン酸生
産菌はブレビバクテリウム属に属する酢酸要求性
変異株であり、例えばブレビバクテリウム・ラク
トフエルメンタムAJ11515（FERM−P5335）、ブ
レビバクテリウム・フラバムAJ11517（FERM−
P5337）等が使用される（上記変異株の誘導方法
は特開昭56−92794号公報に記載されている）。 酢酸要求性を有しないＬ−グルタミン酸生産菌
を使用した場合にはグルタミン酸の収率が低く、
特に培地中のNH₄／Naモル比1.4以下になると収
率が著しく低下するため、本発明の目的を達成す
ることはできない。 本発明で使用する培地は、酢酸と糖類を主炭素
源とし、窒素源、無機イオン、更に必要に応じて
有機微量栄養素を含有する栄養培地が使用され
る。 酢酸は本発明で使用されるグルタミン酸生産菌
の酢酸要求性を満足させる物質として使用される
ものであるが、酢酸要求性を満足せしめる物質と
しては酢酸の他にプロピオン酸等の低級脂肪酸、
パルミチン酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、エ
タノール、プロパノール等の脂肪族低級アルコー
ル等も使用することができる。酢酸等と併用され
る糖類としてはグルコース、フラクトース、マル
トース、シユークロース、これらを含有する澱粉
糖化液、セルロース糖化液、果汁、甘蔗廃糖蜜、
甜菜糖廃蜜等が使用される。両者の配合割合は前
者３〜２に対し後者を２〜１の割合で使用する。
又この混合液は培養期間中、特にＬ−グルタミン
酸の生成期に連続的又は段階的に供給される。 窒素源としては例えば通常のＬ−グルタミン酸
発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモニア水
アンモニアガス、尿素等が用いられ、その他必要
に応じて、りん酸塩、マグネシウム塩等の無機イ
オンが適宜培地に添加される。また必要に応じて
サイアミン、ビオチン等の微量栄養素が適宜使用
される。さらに、ビオチオンが過剰に存在する培
地には、ポリオキシエチレンソルビタンモノパル
ミテート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質
が常法により培地に添加される。 培養は通常のＬ−グルタミン酸発酵と同様に行
えば良く、培養温度を24〜37℃、PHを６〜９に調
節しつつ好気的に培養を行う。このようにして培
養すると菌体が増殖し、８〜10時間後にＬ−グル
タミン酸の生成が開始される。培養はＬ−グルタ
ミン酸が開始されるまでは通常のＬ−グルタミン
酸発酵と何ら変るところはないが、Ｌ−グルタミ
ン酸の生成が開始された後は、Ｌ−グルタミン酸
の蓄積量を増大させるため、前記炭素源を連続的
又は段階的に供給すると共に酢酸ナトリウム溶液
と酢酸アンモニウム溶液を添加して培養液中の
NH₄／Na比を1.4以下に制御し、かつ、培養液の
PHを6.0〜9.0の範囲に調節しつつ培養を継続しグ
ルタミン酸ナトリウムを著量培養液中に蓄積させ
る。本発明の方法に於ては、アンモニアの供給は
菌体の生育及びＬ−グルタミン酸の生合成に必要
な最少量に抑えて培養することが特徴であつて、
このような条件下で培養してもＬ−グルタミン酸
の収率が全く低下せず、培養液中に著量のＬ−グ
ルタミン酸が蓄積され、約48時間後にはＬ−グル
タミン酸の収率は57％以上、全Ｌ−グルタミン酸
に対するＬ−グルタミン酸ナトリウム塩の割合は
60％以上に達する。 Ｌ−グルタミン酸ナトリウム塩の採取法は、常
法に従つて行えば良く、培養液を遠心分離して除
菌し、必要に応じて脱色後、濃縮晶析法によりＬ
−グルタミン酸ナトリウム塩を結晶化して析出せ
しめこれを分離することによつて行われる。 実施例 １ 第１表に示す組成の２種類の培地（Ａ培地、Ｂ
培地）を調製し、500ml容の肩付フラスコにＡ培
地を20ml、Ｂ培地を25ml宛夫々分注し115℃で10
分間加熱滅菌した。

【表】 一方、グルコース溶液（45ｇ／dl）、酢酸ナト
リウム溶液（20ｇ／dl）を調製し夫々加熱殺菌し
た。上記Ａ培地にブレビバクテリウム・ラクトフ
エルメンタムAJ11515を接種し315℃で振盪培養
した。培養開始後10、15、20、25、35及び44時間
に、上記グルコース溶液、酢酸、酢酸ナトリウム
溶液及び酢酸アンモニウム溶液を供給し、酢酸ア
ンモニウムに対する酢酸ナトリウムの比を変化さ
せることにより培養液中のNH₄／Na比を0.5〜
9.0と変化させ、かつ培養液のPHを6.5〜9.0に調節
しつつ培養を継続し、48時間で培養を終了した。 対照としてブレビバクテリウム・ラクトフエル
メンタムATCC13869をＢ培地を用いて同様の方
法で培養した。培養液中に蓄積されたＬ−グルタ
ミン酸の収率及び全Ｌ−グルタミン酸塩中のＬ−
グルタミン酸ナトリウムの割合を第２表に示す。

【表】 第２表に示すように酢酸要求変異株AJ11515の
場合にはＬ−グルタミン酸の収率が高いのみなら
ず、NH₄／Na比を1.4以下にしても収率は殆んど
低下することなく全グルタミン酸塩の60〜90％が
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム塩として蓄積されて
いる。 実施例 ２ グルコース2.3ｇ／dl、酢酸1.4ｇ／dl、
KH₂PO₄0.2ｇ／dl、MgSO₄・7H₂O0.1ｇ／dl、
硫酸アンモニウム0.05ｇ／dl、MnSO₄・7H₂O1.0
mg／dl、FeSO₄・7H₂O1.0mg／dl、ビオチン3μ
ｇ／、大豆蛋白分解液（全窒素量換算）36mg／
dl、及びサイアミン塩酸塩／200μｇ／を含有
してなるＬ−グルタミン生産用培地を調製し、PH
を7.0に調節後その300mlを1.5容ジヤーフアー
メンターに張込み120℃で15分間加熱滅菌した。
この培地に、実施例１のＡ培地で前培養したブレ
ビバクテリウム・ラクトフエルメンタムAJ11515
の種培養液を接種し31.5℃で通気撹拌培養した
（1000rpm、1/4VVM）。10時間培養後、17ｇ／
dlのグルコース溶液及び20ｇ／dlの酢酸を供給す
ると共に20ｇ／dlの酢酸アンモニウム溶液及び30
ｇ／dlの酢酸ナトリウム溶液を１：６の割合で供
給し、培養液中のNH₄／Na比を0.6±0.2の範囲
に、又培養液のPHを6.5〜8.5の範囲に調節しつつ
培養して48時間で培養を終了した。 培養液中のＬ−グルタミン酸ナトリウムの蓄積
量は7.78ｇ／dl、Ｌ−グルタミン酸塩中のＬ−グ
ルタミン酸ナトリウムの割合は94％であり、Ｌ−
グルタミン酸の収率は57.4％であつた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ブレビバクテリウム属に属し酢酸要求性のＬ
   −グルタミン酸生産菌を酢酸及び糖類を炭素源と
   する培地で好気的に培養し、Ｌ−グルタミン酸の
   蓄積が開始された後、培養液へ該炭素源を供給す
   ると共に酢酸ナトリウムと酢酸アンモニウムを添
   加して培養液中のNH₄／Na比を1.4以下に制御し
   つつ培養を行い、培養液中にＬ−グルタミン酸ナ
   トリウムを著量蓄積せしめることを特徴とする醗
   酵法によるＬ−グルタミン酸の製造法。