JPH0363350B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は糸状菌の培養方法に関する。 従来、植物由来粉体を食用茸の人工栽培に使用
する研究は多くなされている（例えば特開昭58−
56614）。しかし、糸状菌による有用物質生産を目
的とした液体培養に植物由来粉体を生育に必要な
栄養源以外の目的で使用した例は未だ報告がな
い。 一般に糸状菌を液体培地中で好気的に培養する
と菌糸はペレツト状（球状）又はパルプ状の塊に
なつて生育し、時にはこの塊が大きく成長するた
めに目的としている有用物質の生産が著しく低下
することが糸状菌を用いた有用物質生産に於ける
欠点の一つであつた。 本発明者等は制ガン剤、有機酸、抗生物質、プ
ロテアーゼ、グルコアミラーゼ、グルコースオキ
シダーゼなどの酵素類Ｌ−アミノ酸、色素及び酵
素阻害剤の生産を目的として、ペニシリウム属、
アスペルギルス属、セフアロスポリウム属又はリ
ゾープス属に属するそれぞれの生産菌を植物由来
粉体含有培養液中で培養した結果、菌糸の塊が微
細化されると同時に目的とする有用物質の生産が
著しく促進されることを見出し、本発明を完成す
るに至つた。 すなわち、本発明は植物由来粉体を含有する液
体培地中でペニシリウム属、アスペルギルス属、
セフアロスポリウム属又はリゾープス属に属する
糸状菌を好気的に培養することを特徴とする糸状
菌の培養法に関する。 本発明に使用される植物由来粉体のうち木材粉
体としては種々の木材由来のものがある。例え
ば、杉、松、栂、桧、桐、ひば、ラワン等のオガ
クズをあげることができる。また草茎粉体として
は稲、大麦、小麦のわら、ほし草、バガス等をあ
げることができる。また種皮としては大豆、トウ
モロコシ、モミガラ、ソバガラ等をあげることが
できる。使用するオガクズは一般に入手出来るそ
のままの形でよく、場合によつては適当なメツシ
ユの篩で分別する。また種皮は一般に入手出来る
そのままの形又は適当の大きさに粉砕して使用す
る。 培地中への植物由来粉体の添加により、胞子及
び菌糸が植物由来粉体に付着し、これを核にして
発芽し、菌糸が成長している様子が観察され、更
に植物由来粉体に付着せず、しかも塊にもならず
に成長している様子も観察される。かくして植物
由来粉体添加により菌糸は大きな塊にならずに生
育し、培地の撹拌効率も改善され、増殖速度及び
目的とする有用物質の生産が促進されるという結
果が得られる。 本発明において生産する有用物質とは糸状菌が
生産する有用物質であり、ペニシリウム属、アス
ペルギルス属、セフアロスポリウム属又はリゾー
プス属に属する糸状菌の生産するミコフエノール
酸、サイクロスポリン等の制ガン剤、グルコン
酸、クエン酸、リンゴ酸、ピルビン酸、イタコン
酸、アラボアスコルビン酸、コウジ酸、アロイソ
クエン酸等の有機酸、ペニシリン、セフアロスポ
リンＣ等の抗生物質プロテアーゼ、グルコアミラ
ーゼ、グルコースオキシダーゼ等の酵素類、Ｌ−
アミノ酸、色素類及びコンパクチン、メビノリン
等の酵素阻害剤をあげることができる。 本発明において用いる糸状菌は上記の有用物質
を生産する糸状菌であり、例えばミコフエノール
酸及びコンパクチンを生産するペニシリウムブレ
ビコンパクタム、ペニシリンＧ生産菌であるペニ
シリウム・クリソゲナム、グルコースオキシダー
ゼ生産菌であるペニシリウム・パープロゲナム、
セフアロスポリンＣ生産菌であるセフアロスポリ
ウム・ポリアレウラム、アミラーゼ生産菌である
アスペルギルス・オリゼ、リゾープス・デレマ、
プロテアーゼ生産菌であるアスペルギルス・サイ
トイ、アスペルギルスフエニシス、クエン酸、グ
ルコン酸生産菌であるアスペルギルス・ニガー、
イタコン酸生産菌であるアスペルギルス・テレウ
ス等をあげることができる。具体的にはミコフエ
ノール酸生産菌、ペニシリウム・ブレビ・コンパ
クタム（Penicillium brevi−compactum）、
AJ117096、（FERM Ｐ−5693、FERM BP−
55）、ペニシリン生産菌であるペニシリウム・ク
リソゲナム（P.chrysogenum）
ATCC10002AJ7343、グルコースオキシダーゼ生
産菌であるペニシリウム・パープロゲナムNo.778
（P.purprogenum）AJ17045 FERM−P1846、セ
フアロスポリンＣ生産菌としてセフアロスポリウ
ム・ポリアレラム（Cephalosporium
polyaleurum）ATCC20359 AJ6993、プロテア
ーゼ生産菌としてはアスペルギルス・フエニシス
（Aspergillus phenicis）ATCC14332 AJ17063、
グルコアミラーゼ及びクエン酸生産菌としてアス
ペルギルス・ニガー（A.niger）ATCC9642
AJ7172等が使用される。 本発明において使用する液体培地は植物由来粉
体を添加する以外は糸状菌が生育する液体培地で
あればどのような培地でも使用できる。例えばミ
コフエノール酸生産用培地としては公知の培地、
W.L.Muth et al，Autimicrob，Agents
Chemtherap.，８，321−327（1975）記載の培地
等が使用される。ペニシリン発酵用培地としては
Johnson等の合成培地（住木諭介“抗生物質”
上、p.177，1961）が使用される。セフアロスポ
リンＣ発酵用培地としては、例えばAL.
DEMAIN，JF NEWKIRK，and D.
HENDLIN，Ｊ．Bacteriol.85，339（1963）記載
の培地の改変培地（第４表）が使用される。グル
コースオキシダーゼ生産用培地としては、例えば
特公昭52−109公報記載の培地が使用される（第
６表）。プロテアーゼ、グルコアミラーゼ及びク
エン酸生産用培地としては第５表、第６表に記載
の培地が使用される。 植物由来粉体の添加量は0.05〜５％でよく、好
ましくは0.1〜１％である。培養温度は有用物質
を生産する糸状菌が生育できる温度であればどの
ような温度でも良いが、有用物質を生産する至適
培養温度を使用することが好ましい。それぞれの
有用物質の生産に好適の条件で回転又は通気撹拌
培養する。回転速度は200〜250rpmである植物由
来粉体の添加方法としては、単独又は二種以上の
組合せがある。 本発明の方法によつて生産される各種有用物質
は各々の公知の方法で定量及び採取することがで
きる。培養液中のミコフエノール酸及びクエン酸
は高速液体クロマトグラムにより分析定量を行
い、アスパラギン酸はバイオアツセイ法でペニシ
リンＧの定量はStaphyloccus aureusを用いる国
家検査法、セフアロスポリンＣはComamonas
ferrigenaの生育阻止円法を用いて行つた。グル
コアミラーゼ活性の測定は糖化力測定法（“実験
化学講座”24巻，p272 1961）、プロテアーゼ活
性の測定はCasein−Folin呈色Ａ法（萩原“酵素
研究法第２巻，p.237 1956年）、グルコースオキ
シターゼの活性の測定はワールブルグマノメータ
ーを用いる検圧法で行なつた。 以上説明したように本発明は植物由来粉体を培
地中に添加して糸状菌の生産する有用物質を蓄積
採取する方法に関するものであり、本発明の方法
は植物由来粉体の添加により有用物質の生産量を
著しく高めるものであり、かつ生産物採取後の培
養液からの植物由来粉体を含む残渣は容易に焼却
できる点で工業的実用価値はきわめて大きい。 実施例 １ ペニシリウム・ブレビコンパクタムAJ117096
（FERM Ｐ−5693，FERM BP−55）を第１表
の示す天然斜面培地に接種し、27℃にて14日間培
養後、胞子を採取し、0.1Mリン酸緩衝液（PH
6.8）に懸濁し、その一定容量を第２表に示すミ
コフエノール酸生産培地（300ml用三角フラスコ
に50ml培地張込み）に接種し（約10⁶個胞子／
ml）、27℃にて12日間226rpmで回転培養を行なつ
た。オガクズを添加する場合は予めオガクズ（ラ
ワン材を主成分としている）を30メツシユの篩で
ふるい分け、それぞれを蒸気減菌した後に0.5％
になるように培地に添加した。培養後、培養液
中のミコフエノール酸を高速液体クロマトグラム
によりＬ−アスパラギン酸はバイオアツセイ法に
より定量した。菌の生育は培地全体（50ml）を東
洋紙No.２を用いて自然過した後、約10mlの蒸
留水で洗

【表】

【表】 浄し、菌体を紙と共に105℃で18時間乾燥、全
乾燥重量より紙及び添加オガクズ重量を差引い
た値で示した。その結果を第３表に示した。

【表】 ツシユ以上の
粒)

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 木材粉体、草茎粉体または種皮の少なくとも
   一種から選ばれる植物由来粉体を含有する液体培
   地中でペニシリウム属、アスペルギルス属、セフ
   アロスポリウム属、又はリゾープス属に属する糸
   状菌を好気的に培養することを特徴とする糸状菌
   の培養法。