JPH0431673B2

JPH0431673B2 -

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Publication number: JPH0431673B2
Application number: JP58210027A
Authority: JP
Priority date: 1982-11-11
Filing date: 1983-11-10
Publication date: 1992-05-27
Also published as: ATE27183T1; DE3241788A1; JPS59140894A; EP0109009A1; EP0109009B1; US4788145A; DE3371541D1

Description

【発明の詳細な説明】本発明は１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−
Ｄ−フルクトースを製造する方法、特に微生物又
はそれから抽出された酵素を使用して１−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースへの
スクロース又はイソマルチユロースの酵素による
転化（enzymatic conversion）方法に関する。
本発明は甘味料としての１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用にも関す
る。

G.Avidad（Biochem.J.73、587〔1959〕）はスク
ロース及びフルクトースの混合物に対するイース
トの作用により１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ド−Ｄ−フルクトースを得ることを報告した。し
かしながら、収率が非常に低かつた（出発スクロ
ースを基準として0.77％）。B.M.Lund及びG.M.
Wyatt（J.Gen.Microbiol.78〔pt.2〕、331−６
〔1973〕）はスクロース２−４％を含有する栄養溶液に対す
るエルビニアカロトボラアトロセプチカ
（Ervinia carotovora atroseptica）の作用によ
り６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース（イソマルチユロース）の他に１−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースを
製造することができた。

これらの製造方法は非常に低い収率であるとい
う欠点を有し、従つてこの方法の工業的使用は可
能ではなかつた。

ドイツ公開3038219は１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースは固定バクテリア
細胞（immobilized bacterial cells）を使用して
スクロースからの酵素による転化によりイソマル
チユロース（６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド
−Ｄ−フルクトース）の製造における副生物とし
て生成されることを開示している。

反応の正しい条件を観測することによつて、生
成物溶液はサツカロースからイソマルチユロース
を形成する微生物を使用してイソマルチユロース
又はイソマルチユロースとスクロースの混合物の
溶液から製造することができ、驚くべきことに該
生成物溶液は主成分として１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースを含有する。微
生物が生きている形態又は死んだ形態の完全細胞
（whole cells）として使用されるか又は細胞が固
定化されていないか（free）もしくは固定化され
ている（im−mobilized）かどうか或いは酵素が
最初細胞から導かれ次いで固定されていない酵素
としてもしくは固定化された形態で使用されるか
どうかはこの点に関しては重要ではない。

イソマルチユロース又はイソマルチユロースと
スクロースの混合物からの酵素による転化により
１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルク
トースを製造するための本発明の方法は、イソマ
ルチユロース又はイソマルチユロースとスクロー
スの混合物の溶液をスクロースからイソマルチユ
ロースを形成する微生物の固定化されていない又
は固定化された酵素抽出物又は固定化されていな
いもしくは固定化された、生きているもしくは死
んだ完全細胞と接触させ、１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースをイオン交換体
又は他の適当な分離物質によるクロマトグラフイ
ー分離により水溶液として先ず得、次いでそれを
それ自体公知の方法で乾燥形態に転化することを
特徴とする。

本発明の方法においては、好ましくは約20−55
重量％の濃度におけるイソマルチユロース又はイ
ソマルチユロースとスクロースの混合物の溶液を
固定化されていないもしくは固定化された細胞又
は微生物の酵素抽出物で、25−55℃、好ましくは
30−50℃の温度で、且つイソマルチユロース又は
イソマルチユロースとスクロースの混合物を所望
の糖に十分に転化する時間処理する。接触時間は
少なくとも10−20時間であり、好ましくはスクロ
ース溶液に対して少なくとも15−18時間である。
より長い接触時間がイソマルチユロースの溶液に
対して必要である。

イソマルチユロース又はイソマルチユロースと
スクロースの混合物溶液の転化は、適当な反応器
において、たとえば発酵器（fermenter）中で又
は特に固定化された細胞もしくは酵素抽出物を使
用する場合には固定化された細胞もしくは酵素抽
出物を充填されたカラムにおいて連続的に又はバ
ツチ方式で行なうことができる。

生きているもしくは死んだ細胞として又は酵素
抽出物の形態の本発明の方法に有用な微生物とし
ては、固定化されていても固定化されていなくて
も、スクロースをイソマルチユロースに酵素によ
り転化することができる微生物の何れも使用する
ことができる。これらは、プロトアミノバクター
ルブルム（Protaminobacter rwbrum）
（CBS574，77）、セラチアプリムチカ（Serratia
plymuthica）（ATCC15928）、セラチアマルセ
ツセンス（Serratia marcescens）（NCIB8285）、
ロイコノストツクメセンテロイデス
（leuconostoc mesenteroides）（NRRL Ｂ−
512F〔ATCC10830a〕）及びエルウイニア・ラポ
ンテイシ（Erwinia rhapontici）（NCPPB1578）
を包含する。プロトアミノバクタールブルム
（CBS574，77）の細胞又は酵素抽出物が好まし
くは使用される。

その後に固定化され又は本発明の方法に対する
酵素抽出に付され得る細胞を製造するために、５
重量％の乾燥物質含有率のみ含有する栄養培地に
おいて最適の細胞増殖が行なわれる。栄養培地は
シロツプ（砂糖工業の中間生成物）、コーンステ
イープリツカー（corn steep liguor）及び
（NH₄）₂HPO₄を含有する。しかしながら、テン
サイ糖蜜（sugar beet molasses）及び（NH₄）₂
HPO₄のみから成る実質的により経済的な栄養剤
基質（nutrient substrate）を使用するのが有利
である。この栄養剤基質を製造するために、上記
糖蜜は乾燥物質５重量％の含有率まで蒸留水で希
釈される。追加の窒素及びホスフエイト源として
（NH₄）₂HPO₄ 0.1Kgをこの溶液100Kgに加える。
pH値はカセイソーダ又はカセイカリによつて又
は塩酸によつて7.2に調節される。

イソマルチユロース形成性微生物、たとえば、
プロトアミノバクタールブルム（CBS574，77）
の接種物（inoculum）は上記組成の無菌の栄養
剤基質10mlと共に振とうフラスコに移されそして
29℃における同じ栄養剤培地200ml中でインキユ
ベーシヨンする。攪拌された培養物中の細胞計数
が５×10⁹細胞／mlに達するとただちに培養物を
上記組成の栄養剤培地と共に小さな発酵器に移
し、そして29℃で最大可能な通気及び攪拌速度で
増殖させる。増殖は細胞計数の決定により攪拌培
養物（agitation culture）に対すると同じ方法で
制御される。細胞計数が５×10⁹細胞／mlに達す
るや否や発酵器から収獲することができる。

細胞の固定化は完全細胞を固定化するためのI.
CHIBATA（Immobilized enzymes，John
Wiley and Sons，New York，london，1978）
により記載された方法に従つて行なうことができ
る。特に適用可能であることが見出された方法は
カチオン性凝集剤による凝集、キトサン
（chitosan）による凝集、アルギン酸カルシウム
マトリツクスへの封入（inclusion）、セルロース
ジアセテート又はセルローストリアセテートへの
封入；Ｋ−カラジーナンゲル（Ｋ−carrageenan
gel）への封入及びカチオン性凝集剤又はアニオ
ン性凝集剤又はこれらの両方の組合せによる凝集
を含む。

細胞の漏洩を防止するために、上の方法により
製造された調製物は架橋を必要とする。２官能性
試薬、たとえばグルタルアルデヒドが架橋のため
に使用される。イソマルチユロース形成性微生物
に関して30−45分の接触時間に対して2.5〜５％
の普通に使用されるグルタルアルデヒドを使用す
ることは可能ではない。これらの条件下では、固
定化された調製物はすべて完全に不活性化された
ことが見出された。本方法に対する最適架橋条件
はグルタルアルデヒド0.1％の濃度、及び10分の
処理時間であることが見出された。

本発明の方法に有用な酵素はイソマルチユロー
ス形成性酵素からたとえば分解、硫酸アンモニウ
ム沈殿及びゲルクロマトグラフイーを含む当業界
で良く知られている方法によつて抽出することが
できる。それ自体公知である酸素の固定化方法は
適当な固定化された酵素を製造するために使用す
ることができる。

固定化された細胞又は酵素は適当なカラム反応
器に入れることができる。この反応器は加熱可能
でなければならずそして約１：１〜１：20、好ま
しくは１：１〜１：10、特に１：1.5〜１：５の
直径対床高さ割合であるべきである。イソマルチ
ユロース又はイソマルチユロースとスクロースの
混合物溶液はカラムの頂部から底部へ又は底部か
ら頂部へ25〜55℃の温度でポンプ送りされる。流
速は適切な接触時間、たとえば10〜20時間を得る
ように調製される。

本発明の方法に従う方法の他の特徴は本願にお
いて後に記載された実施例に関連して記載された
好ましい方法を参照することによつてより良く理
解される。

本発明の方法により得られた１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは食料品、
ごちそう（delicacies）及び飼料に対する甘味料
として (a) 固体又は液体形態で及び／又は (b) スクロースの甘味力に等しいか又はそれより
高い特定の甘さ又は甘味力の甘味料との混合物
として (c) フルクトース、ソルビツト、キシリツト、パ
ラチニツト^R（palatinit^R）又はスクロースの甘
さに匹敵し得る特定の甘さの他の二糖アルコー
ルとの混合物として、又は (d) スクロースの溶解性に匹敵し得る溶解性を有
するイソマルチユロースとの混合物として使用
することができる。

比較味試験において決定された通り、１−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの
特定の甘さはスクロースのそれの45％でありそし
てイソマルチユロースのそれに等しい。

スクロース又はイソマルチユロースに比較して
水中の１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−
フルクトースの溶解性は特に高い。たとえば、ス
クロース２ｇ、イソマルチユロース0.6ｇが、し
かし４ｇより多くの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシド−Ｄ−フルクトースが20℃で水１ｇに溶解
するであろう。故に、たとえばイソマルチユロー
ス及び１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−
フルクトースの混合物を使用することによつてイ
ソマルチユロースのより低い溶解性に関する欠点
を回避することが可能である。最初の研究はスト
レプトコツカスムタンス（Streptococcns
mutans）によるインキユベーシヨンに続く僅か
な酸形成によりこの糖は非う食原性（non−
cariogenetic）として分類されるべきことを確か
にするように思われる。更に、それはプラークポ
リサツカライド（plague polysaccharides）の形
成に影響を与えないように思われる。１−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは又
人間の小腸による分離（split）は困難であり、
従つてそれは部分的にのみ且つ遅延を伴なつて吸
収される。

本発明の方法を下記実施例に関して以下に説明
する。

実施例１ (a) プロトアミノバクタールブルム菌株
（Protaminobactor rubrum strain）
（CBS574.77；本菌株は特許手続上の微生物の
寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規
則6.4(d)により、同条約に基づく国際寄託に変
更、受託番号CBS574.77；同菌株はまた、上記
ブダペスト条約に基づき西ドイツの国際寄託当
局DSMにも受託番号DSM2414のもとに国際寄
託されている）の接触物（inoculum）からの
細胞を糖植物（乾燥物質含有率＝65％）、コー
ンステイープリツカー２Kg、（NH₄）₂HPO₄
0.1Kg及び蒸留水89.9Kg（必要に応じて7.2のpH
に調節された）からの濃厚ジユース８Kgから成
る無菌の栄養剤基質10ml中に懸濁させる。この
懸濁液を上の組成の栄養剤溶液の各々200mlを
有する１フラスコ中での攪拌機プレカルチヤ
ー（preculture）に対する接触物質
（inoculating material）として使用する。20
のかかるフラスコ（全容量＝４）を29℃で30
時間インキユベーシヨンする。しかる後、上記
組成の栄養剤溶液16に上記20のフラスコの内
容物を30の小さな発酵器中において接種しそ
して20／分の通気速度及び350rpmの攪拌速
度で29℃で発酵させる。増殖する細胞計数を顕
微鏡で決定する。５×10₉細胞／mlを越える細
胞計数に達した後、攪拌及び通気を止めそして
温度を20℃に下げることによつて醗酵を停止す
る。発酵器内容物は無菌条件下に発酵器中に残
りそして下記実施例の酵素源として使用され
る。

(b) 実施例１(a)における発酵の終り近くで、乾燥
物質内容物の下記組成が確かめられる：フルクトース２−４重量％グルコース 0.5−１重量％スクロース５−10重量％イソマルチユロース 75−85重量％１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース５−10重量％オリゴマー 0.5−２重量％この発酵器液をゆつくり攪拌しながら通気な
しで30℃で更に４時間インキユベーシヨンする
と下記組成物が得られる。

フルクトース５−８重量％乾燥物質含有率グルコース２−５重量％〃スクロース０−0.5重量％〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース 10−20重量％乾燥物質含有率イソマルチユロース 65−72重量％〃オリゴマー３−６重量％〃 (c) 実施例１(b)の栄養剤溶液を遠心分離により細
胞から分離しそして80％の乾燥物質含有率に蒸
発させ、そして冷却結晶器中でイソマルチユロ
ース種結晶を同時に添加しながら20℃の温度に
１−５℃／時間の速度で冷却する。発生したイ
ソマルチユロース結晶をストレーナーバスケツ
ト遠心分離機で除去する。母液を再び80％の乾
燥物質含有率に蒸発させ、そして冷却している
結晶化器中でイソマルチユロース種結晶を添加
しながら冷却しそして0.5−２℃／時間の速度
で20℃に冷却する。母液を再び乾燥物質含有率
80％まで蒸発させそして冷却している結晶化器
中でイソマルチユロース種結晶を添加して0.5
〜２℃／時間の速度で20℃に冷却する。発生し
たイソマルチユロース結晶をストレーナーバス
ケツト遠心分離器において分離する。この第２
の母液を乾燥物質含有率85％となるまで蒸発さ
せそしてイソマルチユロース結晶を接種する
（seed）。このシロツプをメタノール、エタノー
ル又は他のアルコールで約１：１容量比に希釈
しそしてアルコール性溶液を４℃に冷却する。
結晶化したイソマルチユロースを遠心分離によ
り除去する。この第３の母液は、ほぼ次の乾燥
物質含有率を有する：フルクトース８−12重量％ダルコース４−６重量％スクロース０−２重量％イソマルチユロース 45−50重量％１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース 30−35重量％オリゴマー３−６重量％ (d) 実施例１(c)で得られた母液から蒸発によりメ
タノールを除去しそして乾燥物質含有率15−20
％に調節しそしてスクロース、グルコース及び
フルクトースが溶液中に見出すことができなく
なるまで37℃でパン酵母により発酵させる。酵
母を分離する。透明な溶液を乾燥物質含有率50
％に蒸発させ次いでクロマトグラフイー分離カ
ラムにより分離に付す。１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースを含有するフ
ラクシヨンを採集しそして完全脱塩に続いて、
１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトースが結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥又は他
の同様な方法によち乾燥形態で得られる。

(e) 実施例１(d)に記載された酵母による母液の発
酵は必須ではない。かかる発酵を省きそして母
液を直接クロマトグラフイー分離に付すること
すら有利であり得る。かかる態様においては、
メタノールは実施例１(d)により得られた母液か
ら蒸発により除去され、乾燥物質含有率50％に
調節され次いでクロマトグラフイー分離カラム
により分離に付される。糖、１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースがそれを
含有するフラクシヨンから結晶化、凍結乾燥、
噴霧乾燥又は他の同様な方法による完全脱塩後
に乾燥形態で得られる。

収率：仕込みスクロース100Kg当り14.3Kgク
ロマトグラフイー分離において蓄積するフルク
トース、グルコース及びイソマルチユロースの
如き他の糖は、他の観点において有用である
（たとえばイソマルチユロースはパラチニツト
（paiatinit）を製造するのに使用される）ので
損失にはならない。

実施例２本実施例に使用される微生物は実施例１(a)の発
酵器液を遠心分離することにより得られ、そして
それ自体公知の方法によつて固定化される。固定
化された細胞は温度制御されたカラム中に置か
れ、スクロース溶液（50％乾燥物質含有率）は50
℃におけるこれらの固定化された細胞を連続的に
流過する。流速は10〜20時間、好ましくは15−18
時間の平均滞留時間が得られるように調節され
る。下記例示組成が生成物流において決定され
る：フルクトース 5.8％乾燥物質含有率グルコース 2.5％〃スクロース０〃イソマルチユロース 65.8 〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース 23.2 〃オリゴマー 2.7 〃 (b) 生成物溶液を80％の乾燥物質含有率に蒸発さ
せそしてイソマルチユロース種結晶を添加して
１−５℃／時間の冷却速度で冷却している結晶
器中で20℃に冷却する。発生したイソマルチユ
ロース結晶をストレーナー−バスケツト遠心分
離器において除去する。母液を再び80％の乾燥
物質含有率に蒸発させそして冷却している結晶
化器においてイソマルチユロース種晶を添加し
て0.5−２℃の冷却速度で20℃に冷却する。発
生したイソマルチユロース結晶をストレーナー
−バスケツト遠心分離器において除去する。こ
の第２の母液を85％の乾燥物質含有率になるま
で蒸発させそしてイソマルチユロース結晶を接
種する。このシロツプをメタノール、エタノー
ル、又は他のアルコールで約１：１容量比とな
るように希釈しそしてアルコール溶液を４℃に
冷却する。結晶化したイソマルチユロースを遠
心分離により除去する。そのように得られた第
３の母液は次の例示組成を有する：フルクトース 12.7％乾燥物質中グルコース 5.5〃スクロース０〃イソマルチユロース 25.0〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトース 50.9〃オリゴマー 5.9〃 (c) (1) 実施例２(b)により得られる母液を蒸発に
付してメタノールを除去し、15−20％の乾燥
物質含有率に調節しそしてスクロース、グル
コース又はフルクトースが溶液中に確かめら
れなくなるまで37℃でパン酵母で発酵させ
る。酵母を除去する。透明な溶液を50％の乾
燥物質含有率となるように蒸発させ、次いで
クロマトグラフイー分離カラムにより分離に
付す。１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−
Ｄ−フルクトースがそれを含有するフラクシ
ヨンから、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥又は
他の同様な方法により乾燥形態で得られる。

(c) (2) 実施例２(b)により得られた母液を蒸発に
付してメタノールを除去し、50％の乾燥物質
含有率に調節し、次いでクロマトグラフイー
分離カラムによつて分離に付す。１−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルクトース
がそれを含有するフラクシヨンから、結晶
化、凍結乾燥又は他の同様な方法により乾燥
形態で得られる。

収率：仕込みスクロース100Kg当り18.6Kg 実施例３微生物は実施例１(a)により得られた発酵器液か
ら遠心分離により得られ、そしてスクロースから
イソマルチユロースを形成する酵素が分解、硫酸
アンモニウム沈殿及びゲルクロマトグラフイーの
如きそれ自体公知の方法により純粋な形態で単離
される。次いでこの酵素をそれ自体公知の方法に
より固定化する。

固定化された酵素を温度制御されたカラム反応
器中に入れそしてスクロース溶液（50％乾燥物質
含有率）を50℃で連続的に該酵素を通過させる。
流速を10−20時間、好ましくは15−18時間の平均
滞留時間が得られるような方法で調節する。

生成物流れにおける糖の組成は実施例２(a)に記
載された組成に殆ど等しい。この生成物溶液は実
施例２(b)及び２(c)に記載の如くして更に処理され
る。従つて、かくして得られた１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースは実施例２
のそれと実質的に同一である。即ちそれはスクロ
ースの仕込み量に対して約18％である。

実施例４実施例１(a)により製造されそして自体公知の細
胞固定化方法の１つにより固定化されたプロトア
ミノバクタールブルム（CBS574.77）の固定化
された細胞を温度制御されたカラム反応器に加
え、そして50℃のそして30％の乾燥物質含有率を
有するイソマルチユロース溶液を連続的に該細胞
を通過させる。イソマルチユロース溶液を循環せ
しめる。反応はイソマルチユロースが生成物流れ
中にもはや存在しなくなるまで続ける。全接触時
間は約150時間になる。生成物溶液は下記組成を
有することが決定される：フルクトース 31％（乾燥物質の）グルコース 31％〃１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フルク
トース 38％〃この生成物溶液を50％の乾燥物質含有率に蒸発
させ、次いでクロマトグラフイー分離カラムによ
り分離に付す。上記糖、即ち１−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド−Ｄ−フルクトースがそれを含む
有するフラクシヨンから、結晶化、凍結乾燥、噴
霧乾燥又は他の同様な方法により乾燥形態で得ら
れる。

クロマトグラフイー分離を回避しそして随伴糖
（companion sugar）、フルクトース及びグルコ
ースを酵母を使用して除去することも可能であ
る。しかしながら、この方法は非経済的である。
何故ならばそれによつて２つの価値ある糖、即ち
フルクトース及びダルコースが破壊されるからで
ある。

収率：仕込みイソマルチユロースの約38％。

実施例５硬質キヤンデイにおける糖、１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用：処
法 25Kgの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−
フルクトース８の水 1.2％酸（クエン酸／酒石酸＝１：１）３％香味料たとえばレツドオレンジシレジア
（red−orange Silesia）111／658101又はレモン
シレジア（Lem0n Silesia）111／710134 １−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フル
クトースを水に溶解しそして138℃で沸騰させる。
しかる後その物質を冷却テーブル上に置きそして
酸、香味料及び着色料の混合物を入れる。次いで
その物質をフツク（hook）から数回抜き出し、
最後にキヤンデイに成型する。

実施例６アイスクリームにおける糖、１−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの使用処
法： 3.6Kgのバター（83％脂肪） 12.5Kgの脱脂ミルク粉末（skimmed
milkpowder） 15Kgの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−
フルクトース 0.6Kgの乳化剤（クラノダン（Cranodan） TEF₄、グラインドステツド（Grindsted）68.3Kg
の水。

上記物質を先ず78℃で低温殺菌し
（pasteurized）次いで二段階方法で均一化する
（homogenized）。

実施例７ジヤムにおける糖、１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシド−Ｄ−フルクトースの使用処法： 250ｇの１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−ｄ
−フルクトース 450ｇのフルーツ５ｇのアミド化ペクチン 2.5ｇのジエニユーゴム（genugum）４ｇのクエン酸 0.8ｇのソルビン酸カリウム 287.7ｇの水乾燥物質：32％先ず、１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ
−フルクトース、アミド化ペクチン、ジエニユー
ゴム（genugum）、クエン酸及びソルビン酸カリ
ウムから先ず予備混合物を調製し、次いでこれを
微粉砕したフルーツに加える。混合物を24時間放
置する。その後、水を加えそして混合物を沸騰さ
せる。４分間の沸騰に続いてジヤムをジヤーに充
填する。

Claims

【特許請求の範囲】１プロトアミノバクター属に属しスクロース又
はイソマルチユロースから１−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド−Ｄ−フルクトースを生成し得る能
力を有する微生物又は該微生物の酵素とイソマル
チユロース水溶液又はイソマルチユロースとスク
ロースの混合物の水溶液を接触させて第１溶液を
形成し、その生成物溶液から１−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド−Ｄ−フルクトースの水溶液を分
離し、その該水溶液から１−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシド−Ｄ−フルクトースを回収することを
特徴とするイソマルチユロースの酵素での転化に
よる１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フ
ルクトースの製造方法。２１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド−Ｄ−フ
ルクトースの該水溶液をクロマトグラフイー分離
により生成物溶液から得る特許請求の範囲第１項
記載の方法。３生成物溶液を、固定化されていないか又は固
定化された酵素により発酵に付して、該生成物溶
液中に含まれる酵母発酵性糖（yeast−
fermenting sugars）を発酵させる特許請求の範
囲第１項記載の方法。４生成物溶液を結晶化に付して、その中に含ま
れるイソマルチユロースの少なくとも一部を除去
し、そしてその母液をクロマトグラフイー分離に
付す特許請求の範囲第１項記載の方法。５イソマルチユロース水溶液又はイソマルチユ
ロースとスクロースの混合物の水溶液が20〜55重
量％の濃度を有する特許請求の範囲第１項記載の
方法。６イソマルチユロース水溶液又はイソマルチユ
ロースとスクロースの混合物の水溶液の接触を25
〜55℃の温度で行なう特許請求の範囲第１項記載
の方法。７温度が30〜50℃である特許請求の範囲第６項
記載の方法。