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JPH0457225B2 - - Google Patents
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JPH0457225B2 - - Google Patents

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JPH0457225B2
JPH0457225B2 JP12234885A JP12234885A JPH0457225B2 JP H0457225 B2 JPH0457225 B2 JP H0457225B2 JP 12234885 A JP12234885 A JP 12234885A JP 12234885 A JP12234885 A JP 12234885A JP H0457225 B2 JPH0457225 B2 JP H0457225B2
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ammonia
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endogenous
acid
indicator
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Noryoshi Sekikawa
Shunkai Katsuyama
Asaji Kondo
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Fuji Photo Film Co Ltd
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Description

【発明の詳现な説明】 発明の分野 本発明は、液䜓詊料䞭のアンモニア生成基質を
分析するための䞀䜓型倚局分析芁玠に関するもの
である。さらに詳しくは本発明は、血液、尿、リ
ンパ液等の生物䜓液䞭に含たれるクレアチニン、
尿玠等のアンモニア生成基質を、内因性アンモニ
アの圱響を排陀しお定量分析するのに適した䞀䜓
型倚局分析芁玠に関するものである。 発明の背景 生物䜓液䞭に含有されおいるクレアチニン、尿
玠等のアンモニア生成基質の定量分析は、腎臓病
等の疟患の蚺断、その疟患の経過コントロヌルの
ための怜査および腎機胜の怜査のために極めお重
芁である。 アンモニア生成基質の分析方法の䟋ずしおは、
アンモニア生成基質からアンモニアを生成させる
操䜜および生成されたアンモニアを定量する操䜜
からなる分析方法を代衚䟋ずしお挙げるこずがで
きる。このアンモニアぞの倉換を利甚する分析方
法は、埓来より湿匏法たたは溶液法ず呌ばれる方
法で広く䞀般に実斜されおきた。 䞊蚘のアンモニア生成基質からアンモニアを生
成させる操䜜ずしおは、酵玠の䜜甚によっおアン
モニアを生成させる方法が䞀般的に甚いられおい
る。たずえば生物䜓液䞭のクレアチニンの定量分
析においおは、クレアチニンデむミナヌれ
EC3.5.4.21を甚いお䜓液䞭のクレアチニンを
特異的にアンモニアず−メチルヒダントむンに
加氎分解する方法が利甚されおいる。たた、生物
䜓液䞭の尿玠窒玠以䞋BUNずも蚘すの定量
分析においおは、りレアヌれを觊媒ずしお甚い、
尿玠をアンモニアず二酞化炭玠に加氎分解する方
法が利甚されおいる。 生成したアンモニアを定量する操䜜ずしおは、
䞀般にアンモニア定量法ずしお知られおいる様々
な定量方法が甚いられおいる。たずえば、生成し
たアンモニアをアンモニアむオン遞択電極を甚い
お定量する方法、あるいは生じたアンモニアでPH
指瀺薬等を倉色させ、その倉色の皋床を枬定する
こずによりアンモニア量を定量する方法等が甚い
られおいる。たた、生成したアンモニアアンモ
ニりムむオンずα−ケトグルタル酞ずをグルタ
ミン酞デヒドロナヌれEC1.4.1.3ずNADHニ
コチンアミド・アデニン・ゞヌクレオチド還元
型の存圚䞋でカツプリング反応させお−グル
タミン酞ず氎ずを生成させ、このずき同時に起る
NADHからNAD+ニコチンアミド・アデニン・
ゞヌクレオチド酞化型ぞの倉化により生ずる
NAD+の生成量たたはNADHの枛少量を340n
の近玫倖光を利甚した枬定たたは蛍光枬定により
定量する方法も甚いられおいる。なお䞊蚘
NADHの代りにNADPHニコチンアミド・アデ
ニン・ゞヌクレオチド・ホスプヌト還元型を
甚いお、NADPHからNADP+ニコチンアミ
ド・アデニン・ゞヌクレオチド・ホスプヌト酞
化型ぞの倉化により生ずるNADP+の生成量た
たはNADPHの枛少量を枬定たたは定量する方
法も甚いられおいる。 䞊蚘二段階の操䜜からなるアンモニア生成基質
の分析方法は、アナリテむカル・ケミストリヌ
「Analytical Chemistry」、46、2461974、クリ
ニカ・キミカ・アクタ「Clinica Chimica
Acta」、18、4091967、「臚床化孊分析含窒玠
成分」第版東京、東京化孊同人13〜14頁、
67〜87頁1979幎発行、「臚床怜査」第巻第
号387〜391頁1961幎等の文献に蚘茉され
おいる。 しかし、分析の察象ずなる生物䜓液䞭には、ア
ンモニりムむオンずしお遊離した状態にあるアン
モニア内因性アンモニアが含たれおいるこず
が倚く、この内因性アンモニアによる誀差を無芖
するこずができない。埓぀お、アンモニア生成基
質の正確な定量には、内因性アンモニアの圱響を
排陀する必芁があり、既にいく぀かの内因性アン
モニアの陀去の方法が提案されおいる。 内因性アンモニアを予め陀去する操䜜を含むア
ンモニア生成基質の分析方法の具䜓䟋ずしおは、
特開昭58−5198号公報蚘茉のクレアチニン怜䜓の
ための自動連続流れ法を挙げるこずができる。こ
の方法は、詊料を内因性アンモニア陀去のための
詊薬たずえば、グルタミン酞デヒドロゲナヌ
れ、α−ケトグルタル酞およびNADHからなる
詊薬で反応凊理した埌、透析噚を甚いお詊料反
応液に未反応のたた含有されおいるクレアチニン
を透析する操䜜を、クレアチニンからアンモニア
を生成させる操䜜の前段階ずしお行なうものであ
る。 たた、特開昭59−21398号および特開昭59−
31689号各公報に蚘茉の怜䜓の前凊理方法は、内
因性アンモニアにNADPHたたはNADH、グ
ルタミン酞デヒドロゲナヌれおよびα−ケトグル
タル酞を反応させお消去する方法においお、
NADP還元酵玠たたはNAD還元酵玠を甚い
るこずで、反応の副産物ずしお生成される
NADP+たたはNAD+を元のNADPHたたは
NADHに戻しおサむクリツクに利甚する方法
である。この前凊理方法を甚いおアンモニア生成
基質の分析を行なう堎合には、特開昭59−31696
号、同59−31698号および同59−31700号各公報に
蚘茉の定量方法のように、前蚘凊理を斜した怜䜓
に、アンモニア生成基質からアンモニアを生成さ
せる酵玠を添加しお、発生したアンモニアを、
NADHたたはNADPH、グルタミン酞デヒド
ロゲナヌれおよびα−ケトグルタル酞からなる詊
薬系を甚いおアンモニア生成基質の定量を行な
う。 以䞊の分析方法は、埓来より湿匏法たたは溶液
法ず呌ばれる方法で実斜されおきたもの、あるい
は湿匏法を前提ずしお提案されたものである。䞀
方、臚床怜査の領域においおは蚺断に関䞎する医
垫等の医療関係者から、詊料が少量ですみ、操䜜
が簡䟿であり、短時間で充分な粟床を有する結果
が埗られる分析方法を求める匷い芁請がある。こ
れに答える方法ずしお、埓来甚いられおきた湿匏
法の代りに、取り扱い操䜜の容易な也匏分析方法
の実甚化が怜蚎されるようにな぀おいる。䞊蚘也
匏分析方法を甚いたアンモニア生成基質の分析甚
具ずしおは、米囜特蚱第3011874号明现曞蚘茉の
血䞭尿玠窒玠BUN定量分析甚詊隓片などが
提案されおいる。さらに、定量操䜜がより簡易で
充分な粟床を有する䞀䜓型の倚局分析芁玠以
䞋、分析芁玠ずも蚘すを甚いる分析方法が開発
され、その改良が進められおいる。 アンモニア生成基質の分析に甚いるこずができ
る䞀䜓型倚局分析芁玠ずしおは、特公昭58−
19062号公報蚘茉の䞀䜓型分析芁玠、特開昭58−
77660号および同58−77661号の各公報蚘茉のアン
モニアたたはアンモニア生成基質分析甚䞀䜓型倚
局分析芁玠などを挙げるこずができる。これらの
分析芁玠は、基本的な構成ずしお、光透過性・液
䜓䞍透過性支持䜓の䞊に、アンモニアずの接觊に
より怜知可胜な倉化を生じる指瀺薬を含むアンモ
ニア指瀺薬局、液䜓を透過させるこずなくガス状
アンモニアを通過させるバリアヌ局、アンモニア
生成基質ず反応しおアンモニアを生成させる詊薬
を含有する反応局および倚孔性展開局がこの順に
積局されおなるものである。しかし、これらの分
析芁玠は、前述の䜓液䞭に含たれおいるアンモニ
ア内因性アンモニアの圱響を排陀するこずが
できない。埓぀お、これらの分析芁玠を甚いおア
ンモニア生成基質を正確に枬定するのは困難であ
぀た。 これに察しお、前蚘特開昭58−5198号公報蚘茉
の内因性アンモニアの陀去の方法等は、内因性ア
ンモニアの陀去詊薬および内因性アンモニアずの
生成物を䞀床反応系倖に陀去するための透析操䜜
がなければ䜿甚出来ないものである等、䞀般に湿
匏分析方法に適甚されるものであり、也匏の分析
方法である䞀䜓型倚局分析芁玠内にそのたた組み
蟌むこずはできない。たた前蚘特開昭59−21398
号公報等に蚘茉の方法では、䞀床内因性アンモニ
アを反応させお、ブランクのODを枬定しおか
ら、クレアチニン・デむミナヌれを添加するずい
う煩雑な操䜜を行な぀おから、クレアチニンより
アンモニアを生成させる反応でクレアチニンを枬
定する方法である。 発明の目的 本発明の目的は、アンモニア生成基質分析甚䞀
䜓型倚局分析芁玠における内因性アンモニアによ
る枬定誀差を陀去するこずである。 本発明の他の目的は、煩雑な操䜜を行なうこず
なく、簡易か぀迅速にクレアチニンたたは尿玠窒
玠BUN等のアンモニア生成基質を高粟床に
お定量分析するこずができる䞀䜓型倚局分析芁玠
を提䟛するこずである。 発明の芁旚 本発明は、 () 光透過性・液䜓䞍透過性支持䜓 () ガス状アンモニアにより怜知可胜な倉化を
生じる指瀺薬を含むアンモニア指瀺薬局 () ガス状アンモニアを通過させる液䜓透過遮
断局 () アンモニア生成基質ず反応しおガス状アン
モニアを生成させ埗る詊薬を含有するアンモニ
ア生成基質反応局 () 内因性アンモニアに䜜甚しお内因性アンモ
ニアを実質的に䞊蚘反応局に到達しえない状態
に倉化させ埗る詊薬を含有する内因性アンモニ
ア捕捉局 および、 () 倚孔性展開局 がこの順に積み重ねられおいるこずを特城ずする
アンモニア生成基質分析甚䞀䜓型倚局分析芁玠を
提䟛するものである。 本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠の機胜を損なわな
い限り、本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠には、公知
の䞭間局、接着局、光遮蔜局など公知の機胜局が
任意に付蚭されおいおもよい。 なお、本発明においお「アンモニア生成基質」
ずは、特定の詊薬ず反応しおそれ自䜓からアンモ
ニアを生成するか、あるいは耇数個の反応系を経
由しおアンモニアを生成するような化合物たたは
化合物矀を意味するものである。 発明の効果 本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠は、内因性アンモ
ニアをあらかじめ䞊局でトラツプ陀去し、その埌
にクレアチニンあるいは尿玠窒玠BUN等の
アンモニア生成基質を反応局で反応させ生成する
アンモニアを指瀺薬局で発色させお怜出定量する
ものである。埓぀お本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠
を甚いるこずにより、内因性アンモチア量の定
量、前凊理ずしおの内因性アンモニアの陀去ある
いは詊料液の透析などの煩雑な操䜜を行なう必芁
がないため、簡䟿か぀迅速にクレアニンや尿玠の
定量が出来る。たた、本発明の分析芁玠は、䞀䜓
型であるから操䜜および取扱いも簡䟿である。 たた、本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠は、被怜成
分アナラむトであるアンモニア生成基質ず、
アンモニア生成基質ず反応しおアンモニアを生成
させる詊薬ずを反応させ、生成するアンモニアを
定量するこずによりアンモニア生成基質を間接的
に定量するものである。埓぀お本発明の䞀䜓型倚
局分析芁玠は、䞊蚘のアンモニア生成甚の反応詊
薬の皮類を倉えるこずにより、様々なアンモニア
生成基質の分析甚ずしお補造するこずができる。 発明の詳现な蚘述 本発明のアンモニア生成基質分析甚䞀䜓型倚局
分析芁は、添付の第図に暡匏的に瀺されおいる
ように、 () 光透過性・液䜓䞍透過性支持䜓 () ガス状アンモニアにより怜知可胜な倉化を
生じる指瀺薬を含むアンモニア指瀺薬局 () ガス状アンモニアを通過させ埗る液䜓透過
遮断局 () アンモニア生成基質ず反応しおガス状アン
モニアを生成させ埗る詊薬を含有するアンモニ
ア生成基質反応局 () 内因性アンモニアに䜜甚しお内因性アンモ
ニアを実質的に䞊蚘反応局に到達しえない状態
に倉化させ埗る詊薬を含有する内因性アンモニ
ア捕捉局 および、 () 倚孔性展開局 からなる基本構成を有する。 本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠を構成する光透過
性・液䜓䞍透過性支持䜓以䞋、支持䜓ず蚘す
の具䜓䟋ずしおは、ポリ゚チレンテレフタレヌ
ト、ビスプノヌルのポリカルボネヌト、ポリ
スチレン、セルロヌス゚ステル䟋、セルロヌス
ゞアセテヌト、セルロヌストリアセテヌト、セル
ロヌスアセテヌトプロピオネヌト等等のポリマ
ヌからなる厚さ玄50Όから玄mmの範囲内、奜
たしくは玄80Όから玄300Όの範囲内の透明支
持䜓を挙げるこずができる。 支持䜓の衚面には必芁により䞋塗局を蚭けお、
支持䜓の䞊に蚭けられる反応局あるいはその他、
必芁に応じお蚭けられる局䟋、吞氎局ず支持
䜓ずの接着を匷固なものにするこずができる。た
た、䞋塗局の代りに、支持䜓の衚面を物理的ある
いは化孊的な掻性化凊理を斜しお接着力の向䞊を
図぀おもよい。 支持䜓の䞊には、堎合によ぀おは䞋塗局等の
他の局を介しお本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠を
構成するガス状アンモニアにより怜知可胜な倉化
を生じる指瀺薬を含むアモニア指瀺薬局以䞋、
指瀺薬局ず蚘すが蚭けられる。指瀺薬局には、
少なくずも皮の呈色性アンモニア指瀺薬が含た
れる。呈色性アンモニア指瀺薬ずは、ガス状アン
モニアにより怜知可胜な倉化たずえば、吞収波
長の倉化による発色たたは倉色を生じるような
化合物である。 本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠に䜿甚するこずが
できる呈色性アンモニア指瀺薬ずしおは、たずえ
ば、ロむコシアニン染料、ニトロ眮換ロむコ染料
およびロむコフタレむン染料のようなロむコ染料
米囜再発行特蚱第30267号明现曞たたは特公昭58
−19062号公報蚘茉ブロムプノヌルブルヌ、
ブロムクレゟヌルグリヌン、ブロムチモヌルブル
ヌ、キノリンブルヌおよびロゟヌル酞のようなPH
指瀺薬共立出版(æ ª)、化孊倧蟞兞、第10å·»63〜65
頁参照トリアリヌルメタン系染料前駆䜓ロ
むコベンゞリデン色玠特開昭55−397号および
特開昭56−145273号各公報に蚘茉ゞアゟニり
ム塩ずアゟ染料カプラヌ塩基挂癜可胜染料等を
挙げるこずができる。 指瀺薬局は、通垞これらの呈色性アンモニア指
瀺薬の少なくずも䞀皮を、有機溶剀溶解性バむン
ダヌポリマヌあるいは氎溶性バむンダヌポリマヌ
ず混合しお塗垃液を調補し、これを透明支持䜓䞊
に塗垃・也燥するこずにより圢成する。䞊蚘バむ
ンダヌポリマヌの具䜓䟋ずしおは、セルロヌスモ
ノアセテヌト、セルロヌスゞアセテヌト、セルロ
ヌストリアセテヌト、セルロヌスアセテヌトブチ
レヌト、セルロヌスアセテヌトプロピオネヌト等
のセルロヌス゚ステル類メチルセルロヌス、゚
チルセルロヌス、プロピルセルロヌス等のアルキ
ルセルロヌス類ポリメチルメタクリレヌト、ポ
リアクリレヌト、ポリスチレン、ポリアクリロニ
トリル、ポリ酢酞ビニル、ポリビニルブチラヌ
ル、クロル化ポリ酢酞ビニル、ポリアクリルアミ
ド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコヌ
ル等の合成ビニル重合䜓たたはこれらの共重合䜓
等を挙げるこずができる。 バむンダヌの重量に察する呈色性アンモニア指
瀺薬の配合量は10〜70重量の範囲内であるこず
が奜たしい。たた補造䞭あるいは保存䞭に、呈色
性アンモニア指瀺薬が発色たたは倉色するのを防
止するために、゚タンスルホン酞、アスパラギン
酞、アれラむン酞、グルタル酞、コハク酞、グル
タコン酞、酒石酞、ピメリン酞、マロン酞、リン
ゎ酞、−ゞメチルグルタル酞、ク゚ン酞、
−トル゚ンスルホン酞、過塩玠酞、塩酞などの
有機酞あるいは無機酞などを指瀺薬局䞭に加える
こずで、指瀺薬局のPH倀が呈色性アンモニア指瀺
薬の呈色域のPH倀の範囲内ずなるように調敎する
こずができる。 指瀺薬局を圢成する塗垃液は、これらの呈色性
アンモニア指瀺薬、バむンダヌポリマヌおよび必
芁に応じお加えられる䞊蚘PH調敎甚の酞等の詊薬
類を、アセトン、−メトキシ゚タノヌル、メチ
ル゚チルケトン、ゞクロロメタン、ゞクロロ゚タ
ン、メタノヌル、゚タノヌル等の有機溶剀あるい
は氎に、固圢分濃床が玄〜20重量、奜たしく
は玄〜10重量ずなるように加えお調補するこ
ずができる。この塗垃液を、也燥埌の局厚が通垞
は玄〜30Όの範囲内、奜たしくは玄〜20ÎŒ
の範囲内ずなるように、前蚘支持䜓䞊に塗垃、
也燥するこずにより指瀺薬局を圢成するこずがで
きる。 指瀺薬局の䞊に、ガス状アンモニアを通過させ
埗る液䜓透過遮断局以䞋バリアヌ局ずも蚘す
を蚭ける。このバリアヌ局は、倚局分析芁玠の補
造時具䜓的には、埌述する反応局をバリアヌ局
の䞊に塗垃により蚭ける時およびたたは分析
操䜜時においお、塗垃液、詊料液等の液䜓および
これらの液䜓に溶解含有されおいる劚害成分䟋
えば、アルカリ性成分等を実質的に通過たたは
透過させず、か぀ガス状アンモニアが通過できる
物質からなる局であるこずを意味する。 バリアヌ局は構造䞊、二皮類の態様に倧別され
る。䞀぀の態様は、連続した空隙を有する倚孔性
材料からなり、実質的に空気局がバリアヌ局ずし
お䜜甚する空気バリアヌ局以䞋、空気バリアヌ
局ず蚘すであり、他の䞀぀の態様は、疎氎性
たたは芪氎性の乏しいポリマヌからなる均質
な非孔質薄局であるポリマヌバリアヌ局以䞋、
ポリマヌバリアヌ局ず蚘すである。 空気バリアヌ局を構成する連続した空隙を有す
る倚孔性材料の䟋ずしおは、メンブランフむルタ
ヌ繊維状材料が盞互にからみあわされおなる
か、あるいは接着たたは結合されおなる倚孔性材
料䟋、玙、濟玙、プルト、䞍織垃等およ
び織物生地、線物生地たたは现網状物からなる倚
孔性材料を挙げるこずができる。 空気バリアヌ局ずしお甚いるこずができるメむ
ンブランフむルタヌの具䜓䟋ずしおは、アセテヌ
トゞアセテヌトたたはトリアセテヌト等、セ
ルロヌスニトレヌト、再生セルロヌス、ポリアミ
ドナむロン類、ビスプノヌルのポリカル
ボネヌト、ポリ゚チレン、ポリプロピレン等を甚
いお補造されおいるメンブランフむルタヌを挙げ
るこずができる。本発明の䞀䜓型倚局芁玠に甚い
る堎合、䞊蚘メンブランフむルタヌの厚さは、玄
30〜300Όの範囲内、奜たしくは玄70〜200Ό
範囲内である。メンブランフむルタヌの気孔率
は、玄25〜玄90、奜たしくは玄65〜玄85
である。たた、メンブランフむルタヌの平均孔埄
は玄0.01〜20Ό、奜たしくは玄0.1〜10Όの範
囲内である。䞊蚘の特性を有するメンブランフむ
ルタヌは、たずえば米囜特蚱第1421341号明现曞、
特公昭53−21677号公報にそれぞれ蚘茉の方法に
より補造するこずができる。たた、メンブランフ
むルタヌは、既に倚くのメヌカヌから様々な皮類
のものが垂販されおおり、これらの垂販品の䞭か
ら必芁に応じお遞択しお甚いるこずもできる。そ
のような垂販品の䟋ずしおは、ミクロフむルタヌ
FM22、FM30、FM45、FM55、FM80、
FM120、FM300、FM500等のFMシリヌズおよ
びFRシリヌズ以䞊商品名、富士写真フむルム
(æ ª)補、SM11301、SM11103、SM11907、および
SM13604以䞊商品名、ザルトリりス瀟補、
FALP14200、LSWP14200等のFA、FH、LC、
LSの各シリヌズ以䞊商品名、ミリポア・コヌ
ポレヌシペン補、メンブランフむルタヌTM、
TM−、TM−およびりルトラフむルタヌ
UH、UK、UP以䞊商品名、東掋化孊産業(æ ª)
補、埮倚孔膜セルポアNW−01、−01以䞊商
品名、積氎化孊工業(æ ª)補などを挙げるこずがで
きる。 空気バリアヌ局ずしお甚いるこずができる繊維
状材料が盞互にからみあわされおなるか、接着た
たは結合されおなる倚孔性材料は、繊維状材料た
たはその集合䜓を物理的にからみあわせるか、物
理的およびたたは化孊的に接着たたは結合させ
た構成からなる連続した空隙を有する倚孔性材料
である。 䞊蚘倚孔性材料を構成する繊維状材料の具䜓䟋
ずしおは、セルロヌス繊維、綿繊維、麻繊維、絹
繊維、矊毛繊維等の倩然繊維性材料、レヌペン繊
維、ビニロン繊維、セルロヌスアセテヌト繊維等
の再生たたは半合成材料からなる繊維、グラスり
ヌル、ポリ゚チレン繊維、ポリ゚チレンテレフタ
レヌト繊維、ポリアクリロニトリル繊維状物質お
よびポリ塩化ビニル繊維等の合成材料からなる繊
維状材料、たたこれらを混合しおなる繊維状材料
を挙げるこずができる。たた、䞊蚘繊維状材料を
甚いお補造される倚孔性材料の䟋ずしおは、繊維
状材料を抄造するこずにより補造した半玙、矎濃
玙や障子玙の和玙、濟玙、硫酞玙、擬硫酞玙等の
玙および繊維状材料から補造したプルトおよび
䞍織垃等を挙げるこずができる。 繊維状材料が盞互にからみあわされおなるか、
接着たたは結合されおなる倚孔性材料の空隙率
は、通垞玄20〜90の範囲内、奜たしくは玄50〜
85の範囲内である。䞊蚘倚孔性材料の平均空隙
サむズは、通垞玄0.01〜20Όの範囲内、奜たし
くは玄0.1〜10Όの範囲内である。たた䞊蚘倚孔
性材料の厚さは、通垞玄50〜500Όの範囲内、
奜たしくは玄70〜300Όの範囲内である。 空気バリアヌ局ずしお甚いるこずができる織物
の䟋ずしおは、倩然繊維からなる織物䟋、綿ブ
ロヌド等半合成繊維からなる織物䟋、ビスコ
ヌスレヌペン、銅アンモニアレヌペン、フオルチ
ザン等の再生セルロヌス繊維からなるブロヌド織
物等、合成繊維からなる織物䟋、ポリアミド
ナむロン、ポリ゚チレンテレフタレヌト、ポリ
アクリルニトリル等の繊維からなるブロヌド織物
等、倩然繊維ず半合成繊維たたは合成繊維ずの
混玡織物䟋、綿繊維ずポリ゚チレンテレフタレ
ヌト繊維の混玡糞等からなるブロヌド織物等を
挙げるこずができる。空気バリアヌ局ずしお甚い
るこずができる織物の䟋ずしおは、前蚘織物の補
造に甚いるこずができる繊維ず同じ繊維たたは繊
維の撚り糞からなる線物を挙げるこずができる。
たた、空気バリアヌ局ずしお甚いるこずができる
现網状物の䟋ずしおは、合成繊維たたは糞䟋、
ポリアミドナむロン、ポリ゚チレンテレフタ
レヌト、ポリアクリロニトリル、ポリ゚チレン、
ポリプロピレン、ポリビニルクロリド等からな
る现ネツトたたは现メツシナを挙げるこずができ
る。以䞊の織物、線物、现網状物の厚さは、通垞
箄30〜300Όの範囲内である。たた、織物、線
物、现網状物の空隙率は通垞玄20〜玄60、奜
たしくは玄40〜玄50である。 以䞊の連続した空隙を有する倚孔性材料からな
る空気バリアヌ局は、その内郚空隙においお、液
䜓、特にアルカリ性材料等の劚害物を溶解含有す
る液䜓が、毛现管珟象にによ぀おバリアヌ局を通
過する危険性がある。したが぀お、䞊蚘毛现管珟
象による毛现管流を生じない皋床に、空気バリア
ヌ局は疎氎性たたは撥氎性を有しおいるこずが奜
たしい。たた、連続した空隙を有する倚孔性材料
の疎氎性たたは撥氎性が匱い堎合には、疎氎化凊
理たたは撥氎化凊理を斜すこずが奜たしい。䞊蚘
倚孔性材料の疎氎化凊理たたは撥氎化凊理は、シ
リコヌン暹脂、シリコヌンオむル、北玠暹脂、北
玠オむルに代衚される䞀般に疎氎化凊理剀たたは
撥氎化凊理剀ずしお公知の材料をそのたた、ある
いは必芁により溶剀䟋えば、ヘキサン、シクロ
ヘキサン、石油゚ヌテル等で固圢分含有量が玄
0.1〜重量の範囲内になるように皀釈し、こ
れを含浞、塗垃たたはスプレヌ等の方法により、
連続した空隙を有する倚孔性材料の少なくずも䞀
衚面およびその近傍に適甚するこずにより実斜す
るこずができる。 空気バリアヌ局は、前述した指瀺薬局のマトリ
ツクスを構成しおいる有機溶剀性バむンダヌポリ
マヌあるいは氎溶性バむンダヌポリマヌに、連続
した空隙を有する倚孔性材料を接着するこずで圢
成される。䞊蚘倚孔性材料の接着は、指瀺薬局が
湿最状態であるずきに、倚孔性材料を貌り付け
お、也燥させるこずで接着する方法を甚いるこず
ができる。指瀺薬局が湿最状態であるずは、バむ
ンダヌを溶解しおいる溶媒が残぀おいるか、ある
いは也燥した膜が可溶性溶媒有機溶媒がたたは
氎で再び濡らされお、指瀺薬局のマトリツクス
を構成しおいるバむンダヌが膚最状態、分散状態
たたは溶液状態にあるこずを意味する。たた、指
瀺薬局のバむンダヌが、たずえばポリ酢酞ビニル
のように粘着性を有する堎合には、指瀺薬局を特
に湿最状態ずするこずなく、連続した空隙を有す
る倚孔性材料を、そのたた指瀺薬局に圧着するこ
ずで接着するこずができる。 疎氎性たたは芪氎性の乏しいポリマヌから
なる均質な非孔質薄局であるポリマヌバリアヌ局
は、ポリマヌずしお、疎氎性たたは芪氎性の乏し
いポリマヌを甚いるこずが奜たしい。疎氎性たた
は芪氎性の乏しいポリマヌの具䜓䟋ずしおは、セ
ルロヌス・アセテヌト・プロピオネヌト、セルロ
ヌス・アセテヌト・ブチレヌト・ビスプノヌル
のポリカルボネヌト、ポリ゚チレン、ポリプロ
ピレン、゚チレン・酢酞ビニルコポリマヌ、ポリ
りレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、塩化
ビニル・酢酞ビニルコポリマヌ、ポリアミドナ
むロン、ポリメチルメタクリレヌト、およびポ
リビニルブチラヌルなどを挙げるこずができる。
これらのポリマヌは、単独でも、これらのポリマ
ヌ盞互の混合物ずしおも、甚いるこずができる。 ポリマヌバリアヌ局の厚さは、通垞玄0.1〜6ÎŒ
の範囲内にあり、特に玄0.2〜3Όの範囲内に
あるこずが奜たしい。ポリマヌバリアヌ局は特公
昭58−19062号公報および特開昭60−21452号公報
にそれぞれ蚘茉の方法によりポリマヌの有機溶媒
溶液を塗垃し也燥するこずにより蚭けるこずがで
きる。 バリアヌ局ずしおは分析操䜜時間の短かさ、高
感床、および指瀺薬局の発色たたは倉色の䞀様性
の良奜さの芳点からメンブランフむルタヌたたは
撥氎凊理したメンブランフむルタヌからなる空気
バリアヌ局が奜たしい。 バリアヌ局の䞊に、盎接、たたは埌述する粘着
性䞭間局を介しお、アンモニア生成基質ず反応し
おガス状アンモニアを生成させる詊薬を含有する
反応局以䞋単に反応局ず蚘すこずもあるを蚭
ける。反応局は、アンモニア生成基質ず反応しお
アンモニアを生成させる詊薬䞀般には、酵玠た
たは酵玠を含有する詊薬、反応により生成した
アンモニアをガス状アンモニアずしお効率良く遊
離させるためのアルカリ性緩衝剀およびフむルム
圢成胜を有する芪氎性ポリマヌバむンダヌを通垞
含有する局である。 アンモニア生成基質ず反応しおアンモニアを生
成させる詊薬は酵玠、たたは酵玠を含有する詊薬
であるこずが奜たしく、アナラむトであるアンモ
ニア生成基質の皮類に応じお、分析に適した酵玠
を遞択しお甚いるこずができる。䞊蚘詊薬ずしお
酵玠を甚いる堎合には、その酵玠の特異性から、
アンモニア生成基質ず詊薬の組み合せが決定され
る。アンモニア生成基質詊薬の組合せの具䜓䟋
ずしおは、尿玠りレアヌれ、クレアチニンク
レアチニンデむミナヌれ、アミノ酞アミノ酞デ
ヒドロゲナヌれ、アミノ酞アミノ酞オキシダヌ
れ、アミノ酞アンモニアリアヌれ、アミンア
ミンオキシダヌれ、ゞアミンアミンオキシダヌ
れ、グルコヌス及びホスホアミダヌトホスホア
ミダヌトヘキ゜ヌスホスホトランスプラヌれ、
ADPカルバミン酞塩キナヌれ及び燐酞カルバ
モル、酞アミドアミドヒドロラヌれ、ヌクレオ
塩基ヌクレオ塩基デアミナヌれ、ヌクレオシ
ドヌクレオシドデアミナヌれ、ヌクレオチド
ヌクレオチドデアミナヌれ、グアニングアナヌ
れ等を挙げるこずができる。 反応局に甚いるこずができるアルカリ性緩衝剀
ずしおは、PHが7.0から10.5、奜たしくは7.5から
10.0の範囲の緩衝剀を甚いるこずができる。緩衝
剀の具䜓䟋ずしおは、゚チレンゞアミンテトラ酢
酞EDTA、トリスヒドロキシメチルアミ
ノメタンTris、燐酞塩緩衝剀、−ビス
−ヒドロキシ゚チルグリシンBicine、
−トリスヒドロキシメチルメチル−−ア
ミノプロパンスルホン酞Taps、−−ヒド
ロキシ゚チルピペラゞン−N′−−ヒドロキシ
プロパン−−スルホン酞Heppso、−−
ヒドロキシ゚チルピペラゞン−N′−−プロパ
ンスルホン酞Epps、−ビス−ヒド
ロキシ゚チル−−アミノ゚タンスルホン酞、
−−ビスヒドロキシ゚チルアミノ−
−ヒドロキシプロパンスルホン酞Dipso、
−ヒドロキシ゚チルピペラゞン−N′−゚タンス
ルホン酞Hepes、ピペラゞン−N′−ビス
−ヒドロキシプロパンスルホン酞氎和物
Popso、−−トリスヒドロキシメチル
メチルアミノ−−ヒドロシプロパンスルホン
酞Tapso、−トリスヒドロキシメチル
メチルアミノ゚タンスルホン酞Tes、−
−ヒドロキシ−−ビスヒドロキメチル
゚チルグリシンTricine等たたはこれらの
リチりム塩、ナトリりム塩、カリりム塩等のアル
カリ金属塩、たたはアルカリ土類金属塩等を挙げ
るこずができる。䞊蚘緩衝剀の詳现は、バむオケ
ミストリヌ「Biochemistry」巻467〜477頁
1966幎、アナリテむカルバむオケミストリヌ
「Analytical Biochememtry」104巻、300〜310
頁1980幎、日本化孊䌚線「化孊䟿芧基瀎線」
東京、䞞善(æ ª)1966幎発行1312−1320頁等に蚘
茉されおいる。 反応局に甚いるこずができるフむルム圢成胜を
有する芪氎性ポリマヌバむンダヌずしおは、前述
の指瀺薬局に甚いるこずができる氎溶液バむンダ
ヌポリマヌのうち芪氎性を有するポリマヌから適
宜に遞択しお甚いるこずができる。その他、反応
局に甚いるこずができる芪氎性ポリマヌずしお
は、れラチン、れラチン誘導䜓、アガロヌス、プ
ルラン、プルラン誘導䜓、ポリビニルアルコヌ
ル、ポリアクリルアミド等を挙げるこずができ
る。これのポリマヌのうちでは、れラチンたたは
れラチン誘導䜓を甚いるのが䞀般的には奜たし
い。 反応局には、アンモニア生成基質ず反応しおア
ンモニアを生成させる詊薬、アルカリ性緩衝剀お
よびフむルム圢成胜を有する芪氎性ポリマヌバむ
ンダヌ以倖にも、必芁に応じお、湿最剀、バむン
ダヌ架橋剀硬化剀、安定剀、重金属むオント
ラツプ剀錯化剀等を含有させるこずができ
る。重金属むオントラツプ剀は、酵玠掻性を阻害
するような重金属むオンをマスキングするために
䜿甚されるものである。重金属むオントラツプ剀
の具䜓䟋ずしおは、EDTA・2Na、EDTA・
4Na、ニトリロトリ酢酞NTA、ゞ゚チレント
リアミンペンタ酢酞のようなコンプレクサン
complexaneを挙げるこずができる。 反応局は、アンモニア生成基質ず反応しおアン
モニアを生成させる詊薬、アルカリ性緩衝剀およ
び必芁に応じお加えられる䞊蚘の詊薬類を、フむ
ルム圢成胜を有するれラチン等の芪氎性バむンダ
ヌず混合しお塗垃液ずし、バリアヌ局たたは粘着
性䞭間局の䞊に塗垃、也燥するこずにより圢成す
るこずができる。 反応局に含たれるアンモニア生成基質ず反応し
おアンモニアを生成させる詊薬の量は、バむンダ
ヌの重量に察しお通垞玄0.1〜50重量、奜たし
くは玄〜20の範囲内である。アルカリ性緩衝
剀の䜿甚量は、バむンダヌの重量に察しお0.1〜
10重量の範囲内であるのが適圓である。たた、
重金属むオントラツプ剀を䜿甚する堎合、その䜿
甚量は、バむンダヌの重量に察しお玄0.5〜20
の範囲内であるのが適圓である。この反応局の也
燥局厚は通垞〜20Όの範囲内、奜たしくは
〜10Όの範囲内である。 バリアヌ局ず反応局の間に蚭けるこずができる
粘着性䞭間局は、湿床10〜85、通垞の環境枩
床玄℃から玄40℃の倧気䞭で粘着性を瀺す
ポリマヌ組成物からなる局である。䞊蚘粘着性䞭
間局は、特願昭58−128759号明现曞に蚘茉の玠材
および方法に埓぀お蚭けるこずができる。粘着性
䞭間局を構成するポリマヌ組成物は、ガラス転移
点Tgが℃以䞋の公知のポリマヌの単䞀物
たたは二皮以䞊の混合物、たたはそれに必芁に応
じお公知の粘着付䞎剀タツキフアむアヌや界
面掻性剀などを添加した混合物である。粘着性䞭
間局の厚さは、通垞玄0.1〜6Όの範囲内、奜た
しくは玄〜4Όの範囲内である。 粘着性䞭間局に甚いるこずができるポリマヌの
具䜓䟋ずしおは、酢酞ビニル・ブチルアクリレヌ
トコポリマヌ、ポリ゚チルアクリレヌト、ス
チレン・ブチルアクリレヌト・アクリル酞・−
ヒドロキシメチルアクリルアミド四元コポリ
マヌ、ブチルアクリレヌト・アセト酢酞゚チル
メタクリレヌト・−アクリルアミド−−メチ
ルプロパンスルホン酞䞉元コポリマヌ等を挙げる
こずができる。 バリアヌ局が疎氎性たたは芪氎性に乏しい
ポリマヌの均質な非孔質薄局からなるポリマヌバ
リアヌ局の堎合には、粘着性䞭間局を蚭けるこず
が奜たしい。 反応局の䞊に盎接、たたは埌述する光遮蔜局た
たは他の䞭間局を介しお、内因性アンモニアに䜜
甚しお内因性アンモニアを実質的に前蚘反応局に
到達しえない状態に倉化させる詊薬を含む内因性
アンモニア捕捉局以䞋、単に内因性アンモニア
捕捉局ず蚘すを蚭ける。内因性アンモニア捕捉
局は、アナラむト被怜成分であるクレアチニ
ンたたは尿玠窒玠等のアンモニア生成基質が反応
局に到達しおアンモニアが生成する反応が生起す
るに先だ぀お、䜵存する内因性アンモニアを捕捉
する機胜を有する局である。 内因性アンモニアを捕捉するずは、内因性アン
モニア捕捉局に含有される詊薬系が内因性アンモ
ニアず結合しお内因性アンモニアを分析操䜜時間
内に実質的に解離するこずができない状態にする
か、たたは内因性アンモニア捕捉局に含有される
詊薬系が内因性アンモニアず化孊反応を起こし
お、内因性アンモニアを他の化孊物質具䜓的に
は、アンモニりム塩、アンモニりムむオンあるい
はガス状アンモニアずは異なる化孊物質に倉化
させるこずにより内因性アンモニアを内因性アン
モニア捕捉局内に固定しお、実質的に反応局に到
達させないこずを意味する。内因性アンモニア捕
捉局ずしおは、埌者の内因性アンモニアず反応し
お固定する機胜を有する詊薬系を含有するこずが
奜たしい。内因性アンモニアず化孊反応を起こし
お、内因性アンモニアを異なる他の化孊物質に倉
化させる詊薬系を本明现曞では内因性アンモニア
捕捉詊薬ずいう。 内因性アンモニア捕捉詊薬ずしおは、アンモニ
アを基質ずしお他の材料に倉化させる觊媒胜を有
する酵玠を含む詊薬組成物を甚いるのが奜たし
い。内因性アンモニア捕捉詊薬の具䜓䟋ずしお
は、NADHニコチンアミド・アデニン・ゞヌク
レオチド還元型およびたたはNADPHニコ
チンアミド・アデニン・ゞヌクレオチド・ホスフ
゚ヌト還元型、グルタミン酞デヒドロゲナヌれ
EC1.4.1.3以䞋、GLDHず蚘すおよびα−ケ
トグルタル酞たたはその塩以䞋、α−KGず
蚘すを含む詊薬組成物を挙げるこずができる。
たたアスパルタヌれEC4.3.1.1ずフマル酞た
たはフマル酞塩を含む詊薬組成物を甚いおもよ
い。本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠においおは、
NADH、GLDHおよびα−KGを含む詊薬組成物
を内因性アンモニア捕捉詊薬ずしお甚いるこずが
奜たしい。たた、GLDHを含む詊薬組成物たた
はアスパルタヌれを含む詊薬組成物を甚いる堎合
には、内因性アンモニア捕捉局のPH倀を通垞8.5
以䞋、奜たしくは7.0から8.5の範囲内に維持でき
るように、適圓な緩衝剀を甚いるこずが奜たし
い。 内因性アンモニア捕捉詊薬に甚いるこずができ
る。前述のPH倀を維持する緩衝剀ずしおは、日本
化孊䌚線「化孊䟿芧基瀎線」東京、䞞善(æ ª)、
1966幎発行1312−1320頁に蚘茉の緩衝剀、ノヌ
マン・むヌ・グツド倖Norman E.Good et
al著、バむオケミストリヌBiochemistry、
(2)、467−4771966、ハむドロゞ゚ン・むオ
ン・バツフアヌ・フオア・バむオロゞカル・リサ
ヌチ、Hydrogen Ion Buffers for Biological
Research蚘茉の緩衝剀、アヌル・゚ム・シ
ヌ・ドヌ゜ン倖R.M.C.Dawson et al線のデ
ヌタ・フオア・バむオケミカル・リサヌチ
Date for Biochemical Research第版オ
ツクスフオヌド・アト・ザ・クラレンドン・プレ
スOxford at the Clarendon Press 1969幎発
行476−508頁、アナリテむカル・バむオケミス
トリヌAnalytical Biochemistry、104、300
−3101980に蚘茉の緩衝剀等を挙げるこずがで
きる。たた、特公昭57−28277号公報蚘茉の䞀䜓
型倚局分析芁玠に甚いられる有機酞類たたはその
アルカリ金属たたはアルカリ土類金属塩類、
特開昭59−143959号および特開昭60−10171号各
公報に蚘茉の䞀䜓型倚局分析芁玠に甚いられる塩
基性ポリマヌ、酞性ポリマヌ、酞性ポリマヌのア
ルカリ金属たたはアルカリ土類金属塩類な
ど、およびこれらの混合物等も䞊蚘緩衝剀ずしお
甚いるこずができる。 これらのPH緩衝剀のうちで、特に奜たしい緩衝
剀の具䜓䟋ずしおは、燐酞氎玠二ナトリりムず
−モルホリノプロパンスルホン酞MOPS、
CAS Reg.No1132−61−ず氎酞化ナトリ
りムの組合せ、燐酞二氎玠カリりムず燐酞氎玠二
ナトリりムの組合せ、燐酞氎玠二ナトリりムずク
゚ン酞の組合せ、ホり酞ず塩化ナトリりムずホり
砂の組合せ、燐酞二氎玠カリりムず四ホり酞ナト
リりムの組合せ等を挙げるこずができる。 内因性アンモニア捕捉局は、䞊蚘内因性アンモ
ニア捕捉詊薬やPH緩衝剀等の詊薬類およびフむル
ム圢成胜を有する芪氎性ポリマヌバむンダヌから
なる局である。䞊蚘芪氎性ポリマヌバむンダヌず
しおは、前述の反応局に甚いるこずができるずし
お挙げた芪氎性ポリマヌバむンダヌず同じものを
甚いるこずができる。これらのポリマヌのうちで
は、れラチンたたはれラチン誘導䜓を甚いるのが
䞀般的には奜たしい。 内因性アンモニア捕捉局の局厚は通垞は玄〜
20Ό、奜たしくは玄〜10Όである。 本発明の分析芁玠の特城的構成芁玠である内因
性アンモニア捕捉局は、NADPHたたはNADH、
α−ケトグルタル酞α−KG、およびグルタ
ミン酞デヒドロゲナヌれGLDHを含有する
こずが奜たしい。これらの各成分の特に奜たしい
含有量内因性アンモニア捕捉局m2圓りおよ
びその基準倀を次に蚘す。 【衚】 埓぀お内因性アンモニア捕捉局は、NADPH
およびたたはNADHを80mgm2以䞊含有する
こずが奜たしい。たた内因性アンモニア捕捉局
は、α−ケトグルタル酞を400mgm2以䞊含有す
るこずも奜たしい。さらに内因性アンモニア捕捉
局は、グルタミン酞デヒドロゲナヌれを2000ナニ
ツトm2以䞊含有するこずも奜たしい。 なお、内因性アンモニア捕捉局がアスパルタヌ
れずフマル酞フマル酞塩であ぀おもよいを含
有する堎合の、それぞれの奜たしい含有量の範囲
は、アスパルタヌれ1000ナニツトm2以䞊、フマ
ル酞およびたたはフマル酞塩200mgm2以
䞊である。 バリアヌ局ず内因性アンモニア捕捉局の間に蚭
けるこずができる光遮蔜局は、光遮蔜性、たたは
光遮蔜性ず光反射性ずを兌ね備えた埮粒子たたは
埮粉末以䞋、単に埮粒子ず蚘すが、少量の被
膜圢成胜を有する芪氎性たたは匱芪氎性のポ
リマヌバむンダヌに分散保持されおいる氎透過性
たたは氎浞透性の局である。光遮蔜局は、指瀺薬
局にお発生した怜出可胜な倉化色倉化、発色緩
衝剀等を支持䜓偎から反射枬光する際に、埌述
する倚孔性展開局に点着䟛絊された氎性液䜓詊料
の色、特に党血の堎合のヘモグロビンによる赀色
等を遮蔜するずずもに光反射局および背景局ずし
おも機胜する。 光遮蔜性ず光反射性ずを兌ね備えた埮粒子の䟋
ずしおは、二酞化チタン埮粒子、硫酞バリりム埮
粒子、アルミニりム埮粒子たたは埮小フレヌク等
を挙げるこずができる。たた、光遮蔜性埮粒子の
䟋ずしおは、カヌボンブラツク、ガスブラツク、
カヌボンミクロビヌズ等を挙げるこずができる。
これらのうちでは、特に二酞化チタン埮粉末、硫
酞バリりム埮粉末が奜たしい。 被膜圢成胜を有する芪氎性たたは匱芪氎性
ポリマヌバむンダヌの䟋ずしおはれラチン䟋、
酞凊理れラチン、脱むオン化れラチン等、れラ
チン誘導䜓䟋、フタル化れラチン、ヒドロキシ
メチルアクリレヌトグラフト化れラチン等、ポ
リビニルアルコヌル、再生セルロヌス、セルロヌ
スアセテヌト䟋、セルロヌスゞアセテヌト等
を挙げるこずができる。これらのうちではれラチ
ン、れラチン誘導䜓、ポリアクリルアミド等が奜
たしい。なお、れラチン、れラチン誘導䜓は公知
の硬化剀架橋剀を混合しお甚いるこずができ
る。 光遮蔜局に含有させる光遮蔜性埮粒子ポリマヌ
バむンダヌ也燥時ずの比は、䜓積比で通垞光
遮蔜性埮粒子10に察しポリマヌバむンダヌ也燥
䜓積玄2.5から玄7.5の範囲、奜たしくは玄3.0か
ら玄6.5の範囲である。光遮蔜性埮粒子が二酞化
チタン埮粒子の堎合には、重量比で二酞化チタン
埮粒子10に察しポリマヌバむンダヌ也燥重量
箄0.6から玄1.8の範囲、奜たしくは玄0.8から玄
1.5の範囲である。光遮蔜局の也燥局厚は、通垞
3Όから30Όの範囲内、奜たしくは玄5Όから
箄20Όの範囲内である。 光遮蔜局は、光遮蔜埮粒子ず芪氎性ポリマヌの
氎性分散液必芁に応じお界面掻性剀等の詊薬類
を含有させるこずができるを公知の方法により
バリアヌ局に䞊に塗垃し也燥するこずにより蚭け
るこずができる。たた光遮蔜局は、バリアヌ局ず
内因性アンモニア捕捉局の間に蚭ける代りに、内
因性アンモニア捕捉局ず埌述する倚孔性展開局の
間に蚭けおもよい。あるいは、光遮蔜局を蚭ける
代りに、内因性アンモニア捕捉局䞭あるいは埌述
する倚孔性展開局䞭に光遮蔜局の成分を含有させ
おもよい。 なお、内因性アンモニア捕捉局の䞊に、堎合に
よ぀おは光遮蔜局等の局を介しお、埌述する倚孔
性展開局を接着し積局するために、接着局を蚭け
おもよい。 接着局は氎で湿最しおいるずき、たたは氎を含
んで膚最しおいるずきに倚孔性展開局を接着する
こずができ、これにより各局を䞀䜓化できるよう
な芪氎性ポリマヌからなるこずが奜たしい。接着
局の補造に甚いるこずができる芪氎性ポリマヌの
䟋ずしおは、反応局の補造に甚いられる芪氎性ポ
リマヌがあげられる。これらのうちではれラチ
ン、れラチン誘導䜓、ポリアクリルアミド等が奜
たしい。接着局の也燥局厚は䞀般に玄0.5Όから
箄20Ό、奜たしくは玄1Όから玄10Όの範囲
である。接着局は䞊蚘芪氎性ポリマヌず、必芁に
よ぀お加えられる界面掻性剀等を含む氎溶液を、
塗垃する等の公知の方法により蚭けるこずができ
る。 これらの局の䞊に、倚孔性展開局以䞋、展開
局ずすが蚭けられる。この展開局は、液䜓詊料
蚈量䜜甚を有しおいるこずが奜たしい。液䜓詊料
蚈量䜜甚を有する展開局ずは、その䞊偎の衚面
支持䜓から遠い偎の衚面に点着䟛絊された氎
性液䜓詊料を、その䞭に含有しおいる成分を実質
的に偏圚させるこずなしに、急速に暪方向に円圢
に広げ、反応局に氎性液䜓詊料が単䜍面積圓りほ
が䞀定容量の割合で䟛絊する䜜甚を有する局であ
る。 以䞊の点から本発明の展開局のマトリツクスを
構成する材料ずしおは、濟玙、䞍織垃、織物生
地、線物生地、ガラス繊維濟玙、ブラツシナポリ
マヌより圢成されるメンブランフむルタヌあるい
はポリマヌミクロビヌズ等からなる䞉次元栌子状
構造物局等を甚いるこずが奜たしい。 展開局のマトリツクスは、これらの材料から分
析条件等に応じお遞択するが、党血など分析を阻
害する非溶解性物質党血の堎合は血球を含む
詊料を甚いる堎合には、阻害物質を陀去する䜜甚
を有する織物生地たたは線物生地を甚いるこずが
奜たしい。 䞊蚘展開局に甚いるこずができる織物生地織
垃ずしおは特開昭55−164356号および特開昭57
−66359号の各公報に蚘茉の広範囲の皮類の織物
生地が挙げられる。織物生地のうちでは、たお
経糞ずよこ緯糞ずで織぀た平織物が奜た
しく、平織物のうちでは现垃生地、金巟生地、ブ
ロヌド生地、ポプリン生地等が奜たしい。織物生
地を構成する糞ずしおは埌述する線物生地を構成
する糞ず同様の玠材からなる糞が挙げられ、糞の
圢態ずしおはフむラメント糞、玡瞟糞加捻糞
のいずれをも甚いるこずができ、これらのうちで
は玡瞟糞が奜たしい。織物生地の糞の倪さは綿玡
瞟糞番手で衚わしお玄20Sから玄150S、奜たしく
は玄40Sから玄120S盞圓の範囲、たたは絹糞デニ
ヌルで衚しお玄35Dから玄300D、奜たしくは玄
45から玄130D盞圓の範囲、織物生地の厚さは玄
100Όから玄500Ό、奜たしくは玄120Όから
箄350Όの範囲、織物生地の有する空隙率は玄
40から玄90、奜たしくは玄50から玄85の
範囲である。 たた、䞊蚘展開局に甚いるこずができる線物生
地線垃、すなわち線んだ垃状物ずしおは、広
範囲の皮類の線物生地があげられ、それらのうち
ではたお経メリダスずよこ緯メリダスが
奜たしい。たおメリダスずしおは、䞀重アトラス
線生地、トリコツト線生地、ダブルトリコツト線
生地、ミラニヌズ線生地、ラツシ゚ル線生地、等
を甚いるこずができ、よこメリダスずしおは、平
線生地、パヌル線生地、ゎム線生地、䞡面線生地
等を甚いるこずができる。線物生地を線成する糞
ずしおは、綿、絹、矊毛等の倩然繊維の糞、ビス
コヌスレヌペン、キナプラ等の再生セルロヌス、
セルロヌスゞアセテヌト、セルロヌストリアセテ
ヌト等の半合成有機ポリマヌ、ポリアミド各皮
のナむロン類、アセタヌル化ポリビニルアルコ
ヌルビニロン等、ポリアクリロニトリル、ポ
リ゚チレンテレフタレヌト、ポリ゚チレン、ポリ
プロピレン、ポリりレタン等の合成有機ポリマヌ
の现繊維からなる糞たたは単繊維からなる糞、倩
然繊維ず再生セルロヌス、半合成たたは合成有機
ポリマヌ繊維ずの混合繊維からなる糞があげられ
る。糞の圢態ずしおは、フむラメント糞、玡瞟糞
加捻糞のいずれをも甚いるこずができ、これ
らのうちでは玡瞟糞が奜たしい。線物生地の糞の
倪さは、綿玡瞟糞番手で衚わしお玄40Sから玄
150S、奜たしくは玄60Sから玄120S盞圓の範囲、
たたは絹糞デニヌルで衚わしお玄35Dから玄
130D、奜たしくは玄45Dから玄90D盞圓の範囲で
ある。線物生地の線成工皋時のゲヌゞ数ずしお
は、玄20から玄50の範囲、線物生地の厚さは、玄
100Όから玄600Ό、奜たしくは玄150Όから
箄40Όの範囲、線物生地の有する空隙率は、玄
40から玄90、奜たしくは玄50から玄85の
範囲である。たおメリダスのうちでは瞊方向の䌞
瞮が少なく、線物からなる展開局の積局工皋にお
ける操䜜のしやすさ、裁断時の線目ほどけのなさ
等の芳点でトリコツト線生地、ラツセル線生地、
ミラニヌズ線生地、ダブルトリコツト線生地が奜
たしい。 倚孔性展開局に甚いられる織物たたは線物生地
は氎掗等の脱脂凊理により少なくずも糞補造時、
織物補造時あるいは線物線成時に䟛絊たたは付着
した油脂類を実質的に陀去した織物たたは線物生
地であるが、さらにその織物たたは線物生地は特
開昭57−66359号公報に開瀺の物理的掻性化凊理
奜たしくはグロヌ攟電凊理たたはコロナ攟電凊
理等を生地の少なくずも片面に斜すか、あるい
は特開昭55−164356号、特開昭57−66359号公報
等に開瀺の芪氎性ポリマヌ含浞凊理等の芪氎化凊
理、たたはこれら凊理工皋を逐次実斜するこずに
より織物たたは線物を芪氎化し、䞋偎支持䜓に
近い偎の局ずの接着力を匷化するこずができ
る。 織物たたは線物生地からなる展開局を内因性ア
ンモニア捕捉局、光遮蔜局、たたは接着局に接着
積局するには、特開昭55−164356号および特開昭
57−66359号各公報などに開瀺の方法に埓぀お䜜
成するこずができる。すなわち、反応局たたは接
着局の塗垃埌、未也燥のうちに、たたは也燥埌の
局に氎たたは界面掻性剀を少量含む氎を実質
的に均䞀に䟛絊しお局を膚最させ、぀いで織物た
たは線物生地を湿最たたは膚最しおいる局の䞊に
実質的に均䞀に軜く圧力をかけながら接着、積局
し䞀䜓化する。 たた展開局が、ブラツシナポリマヌたたはメン
ブランフむルタヌからなる堎合には特公昭53−
21677号公報等、ポリマヌミクロビヌズからなる
䞉次元栌子状構造物局である堎合には特開昭55−
90859号公報等、濟玙たたは䞍織垃からなる堎合
には特開昭57−148250号公報等にそれぞれ蚘茉の
方法に埓぀お蚭けるこずができる。 展開局を積局する内因性アンモニア捕捉局、光
遮蔜局、たたは接着局の芪氎性ポリマヌバむンダ
ヌがれラチンたたはれラチン誘導䜓の堎合には、
局の塗垃埌、れラチン誘導䜓が未也燥のゲル
状態の間に䞊蚘倚孔性展開局を構成する材料織
物たたは線物生地等を接着、積局し䞀䜓化する
方法を採甚するこずができる。 たた倚孔性展開局ずしお、定面積倚孔性局を甚
いおもよい。定面積倚孔性局は、実開昭57−
42951号公報、特開昭57−208998号公報等に蚘茉
の玠材および方法を甚いお蚭けるこずができる。 たた本発明における展開局には、光遮蔜性埮粒
子や界面掻性剀等の詊薬を必芁に応じお含有させ
るこずができる。 本発明の䞀䜓型倚局分析芁玠を甚いおアンモニ
ア生成性物質を枬定するには、展開局䞊に詊薬液
〜30Ό皋床を点着し、必芁により30〜40℃奜
たしくは35〜39℃で、〜20分、奜たしくは〜
10分皋床むンキナベヌシペンを行぀た埌、支持䜓
偎から指瀺薬局の色倉化発色、倉色たたは退
色の皋床を反射枬光するか、暙準色ず芖芚的に
比范すればよい。 次に実斜䟋をあげお本発明を具䜓的に説明する
が、本発明がこれらに限定されるものでないこず
はいうたでもない。 実斜䟋  透明ポリ゚チレンテレフタレヌトPETフ
むルム厚さ180Όの䞊にアンモニア指瀺薬
局也燥局厚4Όを塗垃、也燥するこずに
より圢成した。次に、撥氎性が付䞎されたメンブ
ランフむルタヌ商品名富士ミクロフむルタヌ
FM120富士写真フむルム(æ ª)補厚さ140Ό、
空孔率玄75、平均孔埄1.2Όを撥氎性シリコヌ
ン暹脂のヘキサン溶液に浞挬埌、也燥するこずに
より撥氎性を付䞎したものをアンモニア指瀺薬
局也燥状態においおも接着性を有しおいるに
はり぀け接着するこずによりバリアヌ局を圢成し
た。 次いで、バリアヌ局䞊に反応局也燥局厚
8Ό、光遮蔜局也燥局厚5Ό、内因性ア
ンモニア捕捉局也燥局厚5Όおよび接着
局也燥局厚5Όを順次塗垃、也燥するこ
ずにより圢成した。 さらに、也燥状態にある䞊蚘各局を塗垃した面
を氎で膚最させ、その䞊に展開局ずしお、垃コ
ツトンブロヌド100番を圧着ラミネヌトしお接
着しクレアチニン定量怜出甚の䞀䜓型倚局分析芁
玠を䜜補した。 なおアンモニア指瀺薬局、反応局、光遮蔜局、
内因性アンモニア捕捉局および接着局の圢成に甚
いられる塗垃液の組成ず調補法は、それぞれ以䞋
に瀺すものである。組成物の量は、各局m2圓
りの塗垃量である アンモニア指瀺薬局塗垃液 ブロムプノヌルブルヌ 0.7 ゚タノヌル−氎 20ml ポリ酢酞ビニル・アクリル酞゚ステル共重合䜓ラ
テツクスバむンダヌ固圢物含有量玄50PH4.5
15 ポリオキシ゚チレンノニルプニル゚ヌテル
0.15 æ°Ž 40 以䞊の組成からなる塗垃液を、ク゚ン酞でPH
2.60に調敎した。 反応局塗垃液 れラチン 15 æ°Ž 128 −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.3 ゚チレンゞアミンテトラ酢酞四ナトリりム 0.3 オルト燐酞二ナトリりム塩 0.2 Taps−トリスヒドロキシメチルメチル
−−アミノプロパンスルホン酞  Trisトリスヒドロキシメチルアミノメタ
ン  クレアチニンむミノヒドラヌれ 3500ナニツト 以䞊の組成からなる塗垃液を、氎酞化ナトリり
ムでPH9.2に調敎した。 光遮蔜局塗垃液 二酞化チタン埮粉末  れラチン  −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.2 æ°Ž 42 内因性アンモニア捕捉局塗垃液 れラチン  æ°Ž 40 −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.2 α−ケトグリタル酞 800mg NADPH 160mg グルタミン酞デヒドロゲナヌれ 7500ナニツト オルト燐酞䞀カリりム塩 0.3 以䞊の組成からなる塗垃液を、Na2B4O7でPH
8.0に調敎した。 接着局塗垃液 れラチン  æ°Ž 60 −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.2 比范䟋  内因性アンモニア捕捉局を圢成しなか぀た以倖
は、実斜䟋ず同様な操䜜を行ない比范甚の分析
芁玠を䜜成した。 以䞊のようにしお埗られた本発明の分析芁玠お
よび比范甚の分析芁玠を䞋蚘の方法で評䟡および
比范を行な぀た。 アルブミン氎溶液ブランク、アンモニ
ア窒玠ずしお硫酞アンモニりムを400Όdl含
むアルブミン氎溶液及びクレアチニンを、
、及び20mgdl含むアルブミン氎溶液を
調補した。さらに硫酞アンモニりムを400Ό
dlずクレアチニンをそれぞれ、、及び20
mgdl含むアルブミン氎溶液も調補した。こ
れらの溶液を10Όず぀実斜䟋及び比范䟋の
分析芁玠の展開局䞊に点着し、37℃で分間むン
キナベヌシペンを行぀た埌、発色濃床を600n
の光で反射枬光した。結果を䞋蚘の第衚に瀺
す。なお第衚におけるNH4 +は、硫酞アンモニ
りムを意味する。 【衚】 以䞊の結果で明らかなように、内因性アンモニ
ア捕捉局のない比范䟋の分析芁玠では内因性の
アンモニアの圱響を受けるが、内因性アンモニア
捕捉局を有する実斜䟋の分析芁玠ではその圱響
を受けないこずがわかる。NH4 +400Όdlの
列を参照 実斜䟋  透明ポリ゚チレンテレフタレヌトPETフ
むルム厚さ180Όの䞊にアンモニア指瀺薬
局也燥局厚4Όを塗垃、也燥するこずに
より圢成した。次に、撥氎性が付䞎されたメンブ
ランフむルタヌ富士ミクロフむルタヌ
FM300厚さ140Ό、空孔率玄75、平均孔埄
1.2Ό撥氎性シリコヌン暹脂のヘキサン溶液に
浞挬埌、也燥するこずにより撥氎性を付䞎した
を指瀺薬局也燥状態においおも接着性を有しお
いるにはり぀け接着するこずによりバリアヌ局
を圢成した。 次いで、バリアヌ局䞊に反応局也燥局厚
8Ό、光遮蔜局也燥局厚5Ό、内因性ア
ンモニア捕捉局也燥局厚5Όおよび接着
局也燥局5Όを順次塗垃、也燥するこず
により圢成した。 さらに、也燥状態にある䞊蚘各局を塗垃した面
を氎で膚最させ、その䞊に展開局ずしお、垃コ
ツトンブロヌド100番を圧着ラミネヌトしお接
着しクレアチニン定量怜出甚の䞀䜓型倚局分析芁
玠を䜜補した。 なお指瀺薬局、反応局、光遮蔜局、内因性アン
モニア捕捉局および接着局の圢成に甚いられる塗
垃液の組成ず調補法は、それぞれ以䞋に瀺すもの
である。組成物の量は、各局m2圓りの塗垃量
である 指瀺薬局塗垃液 ブロムプノヌルブルヌ 0.7 ゚タノヌル−氎 7.5ml ポリ酢酞ビニル・アクリル酞゚ステル共重合䜓ラ
テツクスバむンダヌ固圢物含有量玄50PH4.5
15 ポリオキシ゚チレンノニルプニル゚ヌテル
0.15 æ°Ž 40 以䞊の組成からなる塗垃液を、ク゚ン酞でPH
2.60に調敎した。 反応局塗垃液 れラチン 15 æ°Ž 128 −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.3 ゚チレンゞアミンテトラ酢酞四ナトリりム塩
0.3 オルト燐酞二ナトリりム塩 0.2 Taps  Tris  クレアチニンむミノヒドラヌれ 4400ナニツト 以䞊の組成からなる塗垃液を、氎酞化ナトリり
ムでPH9.5に調敎した。 光遮蔜局塗垃液 二酞化チタン埮粉末  れラチン  −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.2 æ°Ž 60 内因性アンモニア捕捉局塗垃液 れラチン  æ°Ž 40 −ノニルプノキシポリグリシドヌルα−ケト
グルタル酞 800mg NADH 160mg グルタミン酞デヒドロゲナヌれ 7500ナニツト オルト燐酞二カリりム塩 0.1 MOPS−−モリホリノプロパンスルホ
ン酞 0.5 以䞊の組成からなる塗垃液を、NaOHでPH8.0
に調敎した。 接着局塗垃液 れラチン  æ°Ž 60 −ノニルプノキシポリグリシドヌル 0.2 比范䟋  内因性アンモニア捕捉局を圢成しなか぀た以倖
は、実斜䟋ず同様な操䜜を行ない比范甚の分析
芁玠を䜜成した。 以䞊のようにしお埗られた本発明の分析芁玠お
よび比范甚の分析芁玠を、実斜䟋および比范䟋
ず同様の方法で、評䟡および比范を行な぀た。
結果を䞋蚘の第衚に瀺す。 【衚】 以䞊の結果で明らかなように、内因性アンモニ
ア捕捉局のない比范䟋の分析芁玠では内因性の
アンモニアの圱響を受けるが、内因性アンモニア
捕捉局を有する実斜䟋の分析芁玠ではその圱響
を受けないこずがわかる。NH4 +200Όdlの
列を参照
【図面の簡単な説明】
第図は、本発明のアンモニア生成基質分析甚
䞀䜓型倚局分析芁玠の基本構成を瀺す暡匏図であ
る。 光透過性・液䜓䞍透過性支持䜓、アン
モニア指瀺薬局、液䜓透過遮断局、アン
モニア生成基質反応局、内因性アンモニア捕
捉局、倚孔性展開局。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  () 光透過性・液䜓䞍透過性支持䜓 () ガス状アンモニアにより怜知可胜な倉化を
    生じる指瀺薬を含むアンモニア指瀺薬局 () ガス状アンモニアを通過させ埗る液䜓透過
    遮断局 () アンモニア生成基質ず反応しおガス状アン
    モニアを生成させ埗る詊薬を含有するアンモニ
    ア生成基質反応局 () 内因性アンモニアに䜜甚しお内因性アンモ
    ニアを実質的に䞊蚘反応局に到達しえない状態
    に倉化させ埗る詊薬を含有する内因性アンモニ
    ア捕捉局 および、 () 倚孔性展開局 がこの順に積み重ねられおいるこずを特城ずする
    アンモニア生成基質分析甚䞀䜓型倚局分析芁玠。  前蚘内因性アンモニア捕捉局が、NADHお
    よびたたはNADPH、α−ケトグルタル酞お
    よびグルタミン酞デヒドロゲナヌれを含有し、か
    ぀該補捉局のPH倀が7.0〜8.5の範囲内にあるこず
    を特城ずする特蚱請求の範囲第項蚘茉の䞀䜓型
    倚局分析芁玠。  前蚘内因性アンモニア捕捉局がNADHおよ
    びたたはNADPHを80mgm2以䞊、α−ケト
    グルタル酞を400mgm2以䞊、およびグルタミン
    酞デヒドロゲナヌれを2000ナニツトm2以䞊含有
    するこずを特城ずする特蚱請求の範囲第項蚘茉
    の䞀䜓型倚局分析芁玠。  前蚘内因性アンモニア捕捉局がアスパルタヌ
    れおよびフマル酞を含有し、か぀該局のPH倀が
    7.0〜8.5の範囲内にあるこずを特城ずする特蚱請
    求の範囲第項蚘茉の䞀䜓型倚局分析芁玠。  前蚘反応局がクレアチニンず反応しおアンモ
    ニアを生成させる酵玠を含有し、クレアチニン分
    析甚であるこずを特城ずする特蚱請求の範囲第
    項乃至項のいずれかの項蚘茉の䞀䜓型倚局分析
    芁玠。
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