JPH0457680B2 - - Google Patents
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- JPH0457680B2 JPH0457680B2 JP57041527A JP4152782A JPH0457680B2 JP H0457680 B2 JPH0457680 B2 JP H0457680B2 JP 57041527 A JP57041527 A JP 57041527A JP 4152782 A JP4152782 A JP 4152782A JP H0457680 B2 JPH0457680 B2 JP H0457680B2
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモン（以
下HCGと略称することもある）の製造法に関す
る。
下HCGと略称することもある）の製造法に関す
る。
妊婦尿中に含まれるHCGを安息香酸やカオリ
ンを用いる吸着法により抽出して数百国際単位
（IU）／mg（蛋白質）の粗製HCGを得ることは
知られている。また、かくして得た粗製HCGに
抽出、沈澱操作を反復し、さらに透析して数千
IU／mg（蛋白質）の比較的高い比活性を有する
HCGを得ることも知られている。
ンを用いる吸着法により抽出して数百国際単位
（IU）／mg（蛋白質）の粗製HCGを得ることは
知られている。また、かくして得た粗製HCGに
抽出、沈澱操作を反復し、さらに透析して数千
IU／mg（蛋白質）の比較的高い比活性を有する
HCGを得ることも知られている。
本発明者らは、従来の方法よりも簡単な操作
で、効率よくHCGを精製する方法について研究
を重ねた結果、本発明を完成するに到つた。
で、効率よくHCGを精製する方法について研究
を重ねた結果、本発明を完成するに到つた。
本発明は、低純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンを
低級アルコールとそれに可溶性の塩を含有するPH
７−8.5の水溶液で抽出し、抽出液に低級アルコ
ールを加えて生成する沈澱を採取することを特徴
とする高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法
である。
低級アルコールとそれに可溶性の塩を含有するPH
７−8.5の水溶液で抽出し、抽出液に低級アルコ
ールを加えて生成する沈澱を採取することを特徴
とする高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法
である。
本発明の方法において原料として用いる低純度
のHCGとしては、数百乃至数千IU／mg（蛋白
質）程度の比活性を有するものが好ましい。それ
は前記のような粗製または比較的高い比活性を有
するHCGでもよい。また、本発明者らが先に出
願した特開昭58−99421号の方法によつて製造し
たHCGでもよい。その方法によれば、妊婦尿を、
望ましくはPH８−９として沈澱する不純物を除去
したのち、弱酸性で式Al2O3・9SiO2・xH2Oを有
するケイ酸アルミニウムよりなる吸着剤と接触さ
せて尿中の成分を吸着させ、吸着剤から被吸着物
をアルカリ性水溶液で溶出したのち溶出液を弱酸
性にして生成する沈澱を除去した残留液、または
上記吸着物を低級アルコールとそれに可溶性の塩
を含有する水溶液で溶出した溶出液から有効成分
を採取することにより粗製HCGが製造され、そ
の比活性は通常約2000−3000IU／mg（蛋白質）
である。
のHCGとしては、数百乃至数千IU／mg（蛋白
質）程度の比活性を有するものが好ましい。それ
は前記のような粗製または比較的高い比活性を有
するHCGでもよい。また、本発明者らが先に出
願した特開昭58−99421号の方法によつて製造し
たHCGでもよい。その方法によれば、妊婦尿を、
望ましくはPH８−９として沈澱する不純物を除去
したのち、弱酸性で式Al2O3・9SiO2・xH2Oを有
するケイ酸アルミニウムよりなる吸着剤と接触さ
せて尿中の成分を吸着させ、吸着剤から被吸着物
をアルカリ性水溶液で溶出したのち溶出液を弱酸
性にして生成する沈澱を除去した残留液、または
上記吸着物を低級アルコールとそれに可溶性の塩
を含有する水溶液で溶出した溶出液から有効成分
を採取することにより粗製HCGが製造され、そ
の比活性は通常約2000−3000IU／mg（蛋白質）
である。
上記のような低純度HCGを低級アルコールと
それに可溶性の塩を含有するPH７−8.5の水溶液
で抽出する。
それに可溶性の塩を含有するPH７−8.5の水溶液
で抽出する。
低級アルコールとしては、たとえばメタノー
ル、エタノールが用いられるが、特にエタノール
が好ましい。
ル、エタノールが用いられるが、特にエタノール
が好ましい。
水溶液中のアルコール濃度は、エタノールの場
合55−75％が好ましく、メタノールの場合は60−
80％が好ましい。
合55−75％が好ましく、メタノールの場合は60−
80％が好ましい。
低級アルコールに可溶性の塩としては、たとえ
ば酢酸アンモニウムが好ましく、水溶液中におけ
るその濃度は10％前後が好ましい。
ば酢酸アンモニウムが好ましく、水溶液中におけ
るその濃度は10％前後が好ましい。
抽出液の使用量は一般に原料のHCGに対して
約10−20倍量が好ましい。抽出はなるべく低温で
行うのがよい。
約10−20倍量が好ましい。抽出はなるべく低温で
行うのがよい。
抽出操作後、遠心分離した抽出液に低級アルコ
ールを加えればHCGは沈澱し、採取される。
ールを加えればHCGは沈澱し、採取される。
かくして、原料よりも遥かに純度の高いHCG
を90％以上の高収率で得ることができる。たとえ
ば、原料として2000−2500IU／mg（蛋白質）の
HCGを用いた場合6000−7000IU／mg（蛋白質）
の製品を得ることができる。これは従来の精製
HCGと同等もしくはそれ以上の比活性である。
を90％以上の高収率で得ることができる。たとえ
ば、原料として2000−2500IU／mg（蛋白質）の
HCGを用いた場合6000−7000IU／mg（蛋白質）
の製品を得ることができる。これは従来の精製
HCGと同等もしくはそれ以上の比活性である。
上記のようにして得られたHCGは弱塩基性イ
オン交換体を用いてさらに精製することができ
る。
オン交換体を用いてさらに精製することができ
る。
そのためには、上記で採取したHCGの沈澱を
弱酸性ないし弱塩基性、好ましくはPH5.5−９、
さらに好ましくはPH６−7.5の緩衝液に溶解し、
その溶液を弱塩基性イオン交換体と接触させる。
弱酸性ないし弱塩基性、好ましくはPH5.5−９、
さらに好ましくはPH６−7.5の緩衝液に溶解し、
その溶液を弱塩基性イオン交換体と接触させる。
緩衝液としては、リン酸緩衝液などが用いられ
る。
る。
弱塩基性陰イオン交換体としては、たとえば、
フアルマシア社（スウエーデン）製のDEAE（ジ
エチルアミノエチル）セルローズ（商標）、
DEAEセフアデツクス（Se−phadex）（登録商
標）、DEAEセフアローズ（Sepharose）（登録商
標）などが用いうる。
フアルマシア社（スウエーデン）製のDEAE（ジ
エチルアミノエチル）セルローズ（商標）、
DEAEセフアデツクス（Se−phadex）（登録商
標）、DEAEセフアローズ（Sepharose）（登録商
標）などが用いうる。
溶液中のHCGはイオン交換体との接触により
交換体に吸着されるから続いてそれを溶出する。
溶出は上記の緩衝液に塩を加えた溶液を用いて行
われる。
交換体に吸着されるから続いてそれを溶出する。
溶出は上記の緩衝液に塩を加えた溶液を用いて行
われる。
塩としては、たとえば食塩などが用いられ、そ
の緩衝液中の濃度は0.05−0.3M程度が望ましい。
の緩衝液中の濃度は0.05−0.3M程度が望ましい。
上記の操作法により、約80−85％の高収率の下
にHCGの純度はさらに著しく上昇する。たとえ
ば6000−7000IU／mg（蛋白質）のHCGの純度を
13000−16000IU／mg（蛋白質）に上げることが
できる。
にHCGの純度はさらに著しく上昇する。たとえ
ば6000−7000IU／mg（蛋白質）のHCGの純度を
13000−16000IU／mg（蛋白質）に上げることが
できる。
以下実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。
る。
実施例 １
粗製HCG〔2500IU／mg（蛋白質）〕1500000IU
を60％エタノール・９％酢酸アンモニウム（PH
8.0）110mlで一昼夜４℃で抽出後、遠心して上清
100mlにエタノール200mlを加えてHCGを沈澱さ
せ、遠心分離して沈澱を採取した。
を60％エタノール・９％酢酸アンモニウム（PH
8.0）110mlで一昼夜４℃で抽出後、遠心して上清
100mlにエタノール200mlを加えてHCGを沈澱さ
せ、遠心分離して沈澱を採取した。
HCGの比活性は7000IU／mg（蛋白質）で、収
量は90％であつた。
量は90％であつた。
実施例 ２
粗製HCG〔2000IU／mg（蛋白質）〕2000000IU
を70％エタノール・10％酢酸アンモニウム（PH
8.0）150mlで一昼夜４℃で抽出後、遠心して上清
135mlにエタノール270mlを加えてHCGを沈澱さ
せ、これを遠心分離して採取した。
を70％エタノール・10％酢酸アンモニウム（PH
8.0）150mlで一昼夜４℃で抽出後、遠心して上清
135mlにエタノール270mlを加えてHCGを沈澱さ
せ、これを遠心分離して採取した。
HCGの比活性は6000IU／mg（蛋白質）で収量
は93％であつた。
は93％であつた。
参考例 １
実施例１で得られたHCGを0.01Mリン酸緩衝
液（PH7.0）に溶解し、同緩衝液で緩衝した
DEAEセルローズ（商標）のカラム（1.2×15cm）
にかけ、非吸着区分が出終わつた後、Step−
wise法にて同緩衝液に0.1M塩化ナトリウムを加
えた緩衝液でHCGを溶出させた。
液（PH7.0）に溶解し、同緩衝液で緩衝した
DEAEセルローズ（商標）のカラム（1.2×15cm）
にかけ、非吸着区分が出終わつた後、Step−
wise法にて同緩衝液に0.1M塩化ナトリウムを加
えた緩衝液でHCGを溶出させた。
こうして得られたHCGは比活性16000IU／mg
（蛋白質）で収量は85％であつた。
（蛋白質）で収量は85％であつた。
参考例 ２
実施例２で得られたHCGを0.005Mリン酸緩衝
液（PH7.5）に溶解し、同緩衝液で緩衝した３ｇ
のDEAE−セフアデツクス（登録商標）のカラム
（２×15cm）にかけ、非吸着区分が出終わつて後、
Step−wise法にて同緩衝液に0.015M塩化ナトリ
ウムを加えた緩衝液で溶出させた。
液（PH7.5）に溶解し、同緩衝液で緩衝した３ｇ
のDEAE−セフアデツクス（登録商標）のカラム
（２×15cm）にかけ、非吸着区分が出終わつて後、
Step−wise法にて同緩衝液に0.015M塩化ナトリ
ウムを加えた緩衝液で溶出させた。
こうして得られたHCGは比活性14000IU／mg
（蛋白質）で収量は80％であつた。
（蛋白質）で収量は80％であつた。
なお実施例および参考例におけるHCGの測定
は標準品として日本薬局方標準品の胎盤性性腺刺
戟ホルモン標準品を用いて、日本薬局方のラツト
卵巣重量法により行つた。
は標準品として日本薬局方標準品の胎盤性性腺刺
戟ホルモン標準品を用いて、日本薬局方のラツト
卵巣重量法により行つた。
蛋白質量はLowry−Folin法を用いてBSAを標
準にして測定した。
準にして測定した。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57041527A JPS58157720A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法 |
| EP83301397A EP0089218B1 (en) | 1982-03-15 | 1983-03-14 | A process for purifying human chorionic gonadotropin |
| DE8383301397T DE3378828D1 (en) | 1982-03-15 | 1983-03-14 | A process for purifying human chorionic gonadotropin |
| US06/857,511 US4665161A (en) | 1982-03-15 | 1986-04-21 | Process for producing highly purified HCG |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57041527A JPS58157720A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58157720A JPS58157720A (ja) | 1983-09-19 |
| JPH0457680B2 true JPH0457680B2 (ja) | 1992-09-14 |
Family
ID=12610867
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57041527A Granted JPS58157720A (ja) | 1982-03-15 | 1982-03-15 | 高純度の胎盤性性腺刺戟ホルモンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4665161A (ja) |
| EP (1) | EP0089218B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58157720A (ja) |
| DE (1) | DE3378828D1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US6162905A (en) * | 1996-11-07 | 2000-12-19 | Ibsa Institut Biochimique S.A. | FSH and LH separation and purification process |
| IT1287138B1 (it) * | 1996-11-07 | 1998-08-04 | Ibsa Inst Biochimique Sa | Procedimento per la separazione e purificazione di fsh e lh |
| WO2002072615A1 (en) * | 2001-03-09 | 2002-09-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of purifying protein |
| WO2014063071A1 (en) | 2012-10-18 | 2014-04-24 | Neuralight Hd, Llc | Treatment of depression and ptsd |
| CN105085660A (zh) * | 2015-08-21 | 2015-11-25 | 江西浩然生物医药有限公司 | 一种基于超滤浓缩从大体积孕妇尿液中提取绒促性素粗品的方法 |
| CN117186205A (zh) * | 2022-05-18 | 2023-12-08 | 江苏尤里卡生物科技有限公司 | 一种人绒毛膜促性腺激素的制备方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4196123A (en) * | 1978-11-20 | 1980-04-01 | Eugenia Rosemberg | Hybrid chorionic gonadotropin preparations and methods for stimulating ovulation using same |
| JPS58197380A (ja) * | 1982-05-08 | 1983-11-17 | 「ま」木 久喜 | 皮革類シ−トの連続揉み加工方法及びその装置 |
-
1982
- 1982-03-15 JP JP57041527A patent/JPS58157720A/ja active Granted
-
1983
- 1983-03-14 DE DE8383301397T patent/DE3378828D1/de not_active Expired
- 1983-03-14 EP EP83301397A patent/EP0089218B1/en not_active Expired
-
1986
- 1986-04-21 US US06/857,511 patent/US4665161A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58157720A (ja) | 1983-09-19 |
| EP0089218A3 (en) | 1984-08-08 |
| US4665161A (en) | 1987-05-12 |
| EP0089218A2 (en) | 1983-09-21 |
| EP0089218B1 (en) | 1989-01-04 |
| DE3378828D1 (en) | 1989-02-09 |
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