JPH0458312B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0458312B2 JPH0458312B2 JP2511885A JP2511885A JPH0458312B2 JP H0458312 B2 JPH0458312 B2 JP H0458312B2 JP 2511885 A JP2511885 A JP 2511885A JP 2511885 A JP2511885 A JP 2511885A JP H0458312 B2 JPH0458312 B2 JP H0458312B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amount
- cgtase
- solution
- anion exchange
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 claims description 27
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 19
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 14
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 14
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 241000178960 Paenibacillus macerans Species 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 19
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 19
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 10
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 10
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 10
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 5
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 5
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 and as a result Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 108010063993 lens intrinsic protein MP 64 Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
＜産業上の利用分野＞
本発明はサイクロデキストリンを生産する際に
用いる固定化酵素に関するものである。
用いる固定化酵素に関するものである。
＜従来の技術＞
バチルスマセランス菌が生産するサイクロデキ
ストリングルカノトランスフエラーゼ（以下
CGTaseと略称する）は馬鈴薯澱粉、トウモロコ
シ澱粉などに作用してサイクロデキストリン（以
下CDと略称する）を生成することは古くから知
られている。また、このCDには６個のグリコー
スからなるα−CD、７個のグリコースからなる
β−CD、８個のグリコースからなるγ−CDなど
が含まれる。
ストリングルカノトランスフエラーゼ（以下
CGTaseと略称する）は馬鈴薯澱粉、トウモロコ
シ澱粉などに作用してサイクロデキストリン（以
下CDと略称する）を生成することは古くから知
られている。また、このCDには６個のグリコー
スからなるα−CD、７個のグリコースからなる
β−CD、８個のグリコースからなるγ−CDなど
が含まれる。
ところで、従来からCDの製造は澱粉懸濁液に
α−アミラーゼまたはCGTaseを加えて液化した
後、これら酵素を加熱失活させ、さらに当該液化
澱粉液にCGTaseを加えて約24時間反応させると
いうバツチ法で行われている。
α−アミラーゼまたはCGTaseを加えて液化した
後、これら酵素を加熱失活させ、さらに当該液化
澱粉液にCGTaseを加えて約24時間反応させると
いうバツチ法で行われている。
＜発明が解決しようとする問題点＞
しかしながら、このような方法でCDを製造す
る場合、反応時間が非常に長時間かかること、ま
たCD生成に使用するCGTaseはバツチ式である
ため再使用ができず使い捨てになるため、酵素費
用が高くつくなどの欠点がある。
る場合、反応時間が非常に長時間かかること、ま
たCD生成に使用するCGTaseはバツチ式である
ため再使用ができず使い捨てになるため、酵素費
用が高くつくなどの欠点がある。
そこで、本発明者等はCDの連続的製造と酵素
の有効利用の目的のためにCGTaseの固定化につ
いて鋭意研究を行つた結果、CGTaseが弱塩基性
アニオン交換樹脂に極めて効果的に吸着固定化さ
れること、またCGTaseの単位樹脂あたりの固定
化量がCDの生成量に大きく影響し、一定の範囲
内で吸着させないと所期の目的を達し得ないこと
を見出した。
の有効利用の目的のためにCGTaseの固定化につ
いて鋭意研究を行つた結果、CGTaseが弱塩基性
アニオン交換樹脂に極めて効果的に吸着固定化さ
れること、またCGTaseの単位樹脂あたりの固定
化量がCDの生成量に大きく影響し、一定の範囲
内で吸着させないと所期の目的を達し得ないこと
を見出した。
＜問題点を解決する手段＞
本発明はこれらの知見に基づくもので、弱塩基
性アニオン交換樹脂の湿潤樹脂１ｇあたりに、バ
チルスマセランス菌から生産されるCGTaseを蛋
白質として0.5〜30mgの範囲で吸着させたことを
特徴とする固定化酵素に関するものである。
性アニオン交換樹脂の湿潤樹脂１ｇあたりに、バ
チルスマセランス菌から生産されるCGTaseを蛋
白質として0.5〜30mgの範囲で吸着させたことを
特徴とする固定化酵素に関するものである。
＜作用＞
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に用いる弱塩基性アニオン交換樹脂とし
ては、ポリアミン、１・２級アミン、３級アミン
などを交換基の主体とし、樹脂の母体はスチレン
とジビニルベンゼンの共重合体、アクリルとジビ
ニルベンゼンの共重合体、あるいはフエノール系
のものであり、アンバーライト（登録商標）IRA
−93、IRA−94、IRA−68、IRA−47、IRA−
35、IR−45、ダイヤイオン（登録商標）WA10、
WA20、WA30、レバチツト（登録商標）MP64、
MP62など、あるいはこれらと同等のものを使用
することができる。
ては、ポリアミン、１・２級アミン、３級アミン
などを交換基の主体とし、樹脂の母体はスチレン
とジビニルベンゼンの共重合体、アクリルとジビ
ニルベンゼンの共重合体、あるいはフエノール系
のものであり、アンバーライト（登録商標）IRA
−93、IRA−94、IRA−68、IRA−47、IRA−
35、IR−45、ダイヤイオン（登録商標）WA10、
WA20、WA30、レバチツト（登録商標）MP64、
MP62など、あるいはこれらと同等のものを使用
することができる。
なお弱塩基性アニオン交換樹脂には塩基性度の
強いものから弱いものまで各種のものがあり、比
較的塩基性度の強い弱塩基性アニオン交換樹脂
は、場合によつては中塩基性アニオン交換樹脂と
呼称されることがあるが、本発明はこの様な比較
的塩基性度の強い弱塩基性アニオン交換樹脂も使
用できる。また母体構造がいわゆるゲルタイプと
巨大網目状構造（MRタイプ）とがあるが、後者
の方が粒子の細孔径が大きいので酵素が吸着され
易く有利である。また当該イオン交換樹意の粒子
径としては、0.05〜0.6mmのものを用いるが、好
ましくは粒子0.1〜0.2mmのものがよい。すなわ
ち、粒子径があまり小さいと固定化酵素をカラム
に充填し、これに液化澱粉を通液した場合、圧力
損失の増大をきたす。一方粒子径があまり大きい
と表面積が小となり、吸着させようとする酵素の
量が小となり、固定化酵素の容積が大きくなつて
経済的に不利となる。
強いものから弱いものまで各種のものがあり、比
較的塩基性度の強い弱塩基性アニオン交換樹脂
は、場合によつては中塩基性アニオン交換樹脂と
呼称されることがあるが、本発明はこの様な比較
的塩基性度の強い弱塩基性アニオン交換樹脂も使
用できる。また母体構造がいわゆるゲルタイプと
巨大網目状構造（MRタイプ）とがあるが、後者
の方が粒子の細孔径が大きいので酵素が吸着され
易く有利である。また当該イオン交換樹意の粒子
径としては、0.05〜0.6mmのものを用いるが、好
ましくは粒子0.1〜0.2mmのものがよい。すなわ
ち、粒子径があまり小さいと固定化酵素をカラム
に充填し、これに液化澱粉を通液した場合、圧力
損失の増大をきたす。一方粒子径があまり大きい
と表面積が小となり、吸着させようとする酵素の
量が小となり、固定化酵素の容積が大きくなつて
経済的に不利となる。
次ぎに弱塩基性アニオン交換樹脂にCGTaseを
吸着させる方法を説明すると、まず当該イオン交
換樹脂をアルカリ溶液で再生し、交換基を遊離塩
基型にしたのち、PH６前後のバツフアー溶液、た
とえば酢酸・酢酸ナトリウム溶液、リン酸・リン
酸ナトリウム溶液で洗浄し前処理を行う。このよ
うに調整した当該イオン交換樹脂の一定量に
CGTaseを接触させ吸着させる。CGTaseの添加
量は蛋白質として0.05〜1.5mg／ml［活性５〜
250THU（TildenHudson単位／ml］の濃度の酵
素溶液を樹脂量の容量あたり10倍量程度用いる。
好ましくは蛋白質として0.15〜0.4mg／ml（活性
20〜60THU）の濃度の酵素溶液を樹脂量の10倍
量用いるとよい。また接触法としては容器に樹脂
と酵素溶液を入れ、バツチ法で撹拌しながら吸着
させるか、あるいは樹脂をカラムに充填し、酵素
溶液を下降流または上昇流で通液する。この場
合、流出液を再循環して吸着させてもよい、接触
時間としては0.5〜４時間で吸着させるが、好ま
くは１時間程度がよい。
吸着させる方法を説明すると、まず当該イオン交
換樹脂をアルカリ溶液で再生し、交換基を遊離塩
基型にしたのち、PH６前後のバツフアー溶液、た
とえば酢酸・酢酸ナトリウム溶液、リン酸・リン
酸ナトリウム溶液で洗浄し前処理を行う。このよ
うに調整した当該イオン交換樹脂の一定量に
CGTaseを接触させ吸着させる。CGTaseの添加
量は蛋白質として0.05〜1.5mg／ml［活性５〜
250THU（TildenHudson単位／ml］の濃度の酵
素溶液を樹脂量の容量あたり10倍量程度用いる。
好ましくは蛋白質として0.15〜0.4mg／ml（活性
20〜60THU）の濃度の酵素溶液を樹脂量の10倍
量用いるとよい。また接触法としては容器に樹脂
と酵素溶液を入れ、バツチ法で撹拌しながら吸着
させるか、あるいは樹脂をカラムに充填し、酵素
溶液を下降流または上昇流で通液する。この場
合、流出液を再循環して吸着させてもよい、接触
時間としては0.5〜４時間で吸着させるが、好ま
くは１時間程度がよい。
次ぎに弱塩基性アニオン交換樹脂に吸着させる
CGTaseの量について説明する。
CGTaseの量について説明する。
従来から酵素をイオン交換樹脂などの担体に吸
着させて固定化する場合、加水分解酵素、異性化
酵素のような通常の酸素ではイオン交換樹脂への
吸着量が大である程、得られる固定化酵素の力価
は大で、またその固定価酵素の性能も優れている
のが普通である。
着させて固定化する場合、加水分解酵素、異性化
酵素のような通常の酸素ではイオン交換樹脂への
吸着量が大である程、得られる固定化酵素の力価
は大で、またその固定価酵素の性能も優れている
のが普通である。
しかるに、当該CGTaseは転移酵素であるた
め、一般の酵素とは挙動が異なり、必ずしも吸着
量の増大が性能上昇に結びつかず、過度に吸着量
を増大させると逆にその性能を低下させることが
判明した。
め、一般の酵素とは挙動が異なり、必ずしも吸着
量の増大が性能上昇に結びつかず、過度に吸着量
を増大させると逆にその性能を低下させることが
判明した。
第１図は弱塩基性アニオン交換樹脂アンバーラ
イトIRA−93にCGTaseを種々な量で吸着させた
固定化酵素を各々カラムに充填し、４％液化澱粉
液を流速SV1〜３で通液した際の、処理液中の
CD生産量を示したものである。
イトIRA−93にCGTaseを種々な量で吸着させた
固定化酵素を各々カラムに充填し、４％液化澱粉
液を流速SV1〜３で通液した際の、処理液中の
CD生産量を示したものである。
第１図から明らかなように単位樹脂あたりの
CGTaseの吸着量が少なくても、多くても処理液
に生成されるCD量が少なくなる。すなわち、
CGTaseの吸着量が少ないと酵素活性が弱くCD
が十分に生成せず、また吸着量がある値以上にな
ると酵素活性が強すぎて一度生成されたCDが分
解する。
CGTaseの吸着量が少なくても、多くても処理液
に生成されるCD量が少なくなる。すなわち、
CGTaseの吸着量が少ないと酵素活性が弱くCD
が十分に生成せず、また吸着量がある値以上にな
ると酵素活性が強すぎて一度生成されたCDが分
解する。
したがつて、当該弱塩基性アニオン交換樹脂に
吸着されるCGTaseの吸着量としては湿潤樹脂１
ｇあたり蛋白質として0.5〜30mg（活性70〜
5000THU）の範囲で吸着させるのがよく、好ま
しくは１〜20mgの範囲で吸着させるのが好まし
い。なお本発明における湿潤樹脂とは、水分含有
率50〜60％程度の水を吸着した一般に市販されて
いる状態のものを指す。またCGTaseは強塩基性
アニオン交換樹脂あるいは合成吸着剤などにも吸
着され、当該弱塩基性アニオン交換樹脂と同様な
挙動を示すが、CD生産量は後者よりも劣り、担
体として好ましくない。
吸着されるCGTaseの吸着量としては湿潤樹脂１
ｇあたり蛋白質として0.5〜30mg（活性70〜
5000THU）の範囲で吸着させるのがよく、好ま
しくは１〜20mgの範囲で吸着させるのが好まし
い。なお本発明における湿潤樹脂とは、水分含有
率50〜60％程度の水を吸着した一般に市販されて
いる状態のものを指す。またCGTaseは強塩基性
アニオン交換樹脂あるいは合成吸着剤などにも吸
着され、当該弱塩基性アニオン交換樹脂と同様な
挙動を示すが、CD生産量は後者よりも劣り、担
体として好ましくない。
＜効果＞
以上説明したごとく、本発明の固定化酵素を充
填したアラムに液化澱粉液を通すことにより、
CDを連続的に製造することができるのでCDを生
産する操作が簡単となり、かつ本発明の固定化酵
素はカラムに充填して用いる場合においてCD生
成量が可及的に増大するようにCGTase吸着量を
調整しているので、酵素が無駄に消費されること
なく最も経済的にCDを生産することが可能とな
る。
填したアラムに液化澱粉液を通すことにより、
CDを連続的に製造することができるのでCDを生
産する操作が簡単となり、かつ本発明の固定化酵
素はカラムに充填して用いる場合においてCD生
成量が可及的に増大するようにCGTase吸着量を
調整しているので、酵素が無駄に消費されること
なく最も経済的にCDを生産することが可能とな
る。
以下に本発明の効果をより明確とするために実
施例を説明する。
施例を説明する。
実施例 １
弱塩基性アニオン交換樹脂アンバーライトIRA
−93の粒径約100メツシユのものを直径10mm、高
さ200mmのカラムに５ml充填する。次ぎにIN−水
酸化ナトリウム溶液100mlを通薬後、水洗して遊
離塩基形とする。次いで１／10M酢酸・酢酸ナト
リウムバツフアー（PH6.0）溶液を１通薬する。
水洗後、この樹脂をカラムから取り出し100mlの
ビーカーに入れ、これにCGTase酵素液（蛋白質
3.05mg／ml、活性475THU／ml）５mlと純水44ml
を加え、スターラーで撹拌（約200r・ｐ・ｍ）し
ながら１時間反応させ、酵素を吸着させる。この
固定化酵素を再びカラムに充填し、20mlの前述の
バツフアー溶液を通薬する。水洗後このカラムに
４％液化澱粉液を温度50℃、流速SV1で通液し、
処理液のCD生成量を測定したところ、4.32％で
あつた。なおCD生成量とは澱粉がCDに変化した
際の重量％を示す。
−93の粒径約100メツシユのものを直径10mm、高
さ200mmのカラムに５ml充填する。次ぎにIN−水
酸化ナトリウム溶液100mlを通薬後、水洗して遊
離塩基形とする。次いで１／10M酢酸・酢酸ナト
リウムバツフアー（PH6.0）溶液を１通薬する。
水洗後、この樹脂をカラムから取り出し100mlの
ビーカーに入れ、これにCGTase酵素液（蛋白質
3.05mg／ml、活性475THU／ml）５mlと純水44ml
を加え、スターラーで撹拌（約200r・ｐ・ｍ）し
ながら１時間反応させ、酵素を吸着させる。この
固定化酵素を再びカラムに充填し、20mlの前述の
バツフアー溶液を通薬する。水洗後このカラムに
４％液化澱粉液を温度50℃、流速SV1で通液し、
処理液のCD生成量を測定したところ、4.32％で
あつた。なおCD生成量とは澱粉がCDに変化した
際の重量％を示す。
比較のために、弱塩基性アニオン交換樹脂にか
えて、強塩基性アニオン交換樹脂アンバーライト
IRA−900を用いる他は全く同様な方法で
CGTaseを吸着させ、次いで同じ条件で液化澱粉
液を通液したところ、処理液のCD濃度は2.3％で
強塩基性アニオン交換樹脂は弱塩基性アニオン交
換樹脂よりCDの生産量が非常に少なかつた。
えて、強塩基性アニオン交換樹脂アンバーライト
IRA−900を用いる他は全く同様な方法で
CGTaseを吸着させ、次いで同じ条件で液化澱粉
液を通液したところ、処理液のCD濃度は2.3％で
強塩基性アニオン交換樹脂は弱塩基性アニオン交
換樹脂よりCDの生産量が非常に少なかつた。
実施例 ２
実施例 １で用いたと同じ弱塩基性アニオン交
換樹脂アンバーライトIRA−93に実施例 １と同
じ方法で、弱塩基性アニオン交換樹脂の湿潤樹脂
１ｇあたり、蛋白質として0.15mg、0.7mg、2.9mg、
5.8mg、15mg、25mgのCGTaseを吸着させた６種
類の固定化酵素を調整し、これらの固定化酵素を
カラムに充填し、４％液化澱粉を温度50℃で流速
SV1〜３で通液し、各CGTaseの吸着量と各SV
における処理液のCD生成量を測定した。その結
果を第１図に示す。なおCD生成量とは澱粉がCD
に変化した際の重量％を示す。
換樹脂アンバーライトIRA−93に実施例 １と同
じ方法で、弱塩基性アニオン交換樹脂の湿潤樹脂
１ｇあたり、蛋白質として0.15mg、0.7mg、2.9mg、
5.8mg、15mg、25mgのCGTaseを吸着させた６種
類の固定化酵素を調整し、これらの固定化酵素を
カラムに充填し、４％液化澱粉を温度50℃で流速
SV1〜３で通液し、各CGTaseの吸着量と各SV
における処理液のCD生成量を測定した。その結
果を第１図に示す。なおCD生成量とは澱粉がCD
に変化した際の重量％を示す。
第１図に見られるごとく、各流速ともに
CGTaseの吸着量が少なすぎてもまた多すぎても
CD生成量が小さくなることが示されている。
CGTaseの吸着量が少なすぎてもまた多すぎても
CD生成量が小さくなることが示されている。
第１図は各流速における酵素吸着量とCD生成
量の関係を示すグラフで縦軸にCD生成量、横軸
に酵素吸着量を示す。
量の関係を示すグラフで縦軸にCD生成量、横軸
に酵素吸着量を示す。
Claims (1)
- １ 弱塩基性アニオン交換樹脂の湿潤樹脂１ｇあ
たりに、バチルスマセランス菌から生産されるサ
イクロデキストリングルカノトランスフエラーゼ
を蛋白質として0.5〜30mgの範囲で吸着させたこ
とを特徴とする固定化酵素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2511885A JPS61185188A (ja) | 1985-02-14 | 1985-02-14 | 固定化酵素 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2511885A JPS61185188A (ja) | 1985-02-14 | 1985-02-14 | 固定化酵素 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61185188A JPS61185188A (ja) | 1986-08-18 |
| JPH0458312B2 true JPH0458312B2 (ja) | 1992-09-17 |
Family
ID=12157012
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2511885A Granted JPS61185188A (ja) | 1985-02-14 | 1985-02-14 | 固定化酵素 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61185188A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63196290A (ja) * | 1987-02-09 | 1988-08-15 | Nippon Shokuhin Kako Ltd | 固定化酵素 |
| JPH0771489B2 (ja) * | 1989-06-29 | 1995-08-02 | 農林水産省食品総合研究所長 | 転移糖の製造法 |
-
1985
- 1985-02-14 JP JP2511885A patent/JPS61185188A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61185188A (ja) | 1986-08-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4808232A (en) | Separation and purification of cyclodextrins | |
| EP0220719B1 (en) | Cyclodextrin absorbing material and its use | |
| Carević et al. | Galacto-oligosaccharide synthesis using chemically modified β-galactosidase from Aspergillus oryzae immobilised onto macroporous amino resin | |
| Matsumoto et al. | Derivatization of epoxy-activated agarose with various carbohydrates for the preparation of stable and high-capacity affinity adsorbents: their use for affinity chromatography of carbohydrate-binding proteins | |
| Charles et al. | Enzymes immobilized on alumina and stainless steel supports | |
| Caldwell et al. | Immobilization of enzymes based on hydrophobic interaction. II. Preparation and properties of an amyloglucosidase adsorbate | |
| JPH0458312B2 (ja) | ||
| JPS6219835B2 (ja) | ||
| CA1116113A (en) | Process for producing an immobilized glucose isomerase | |
| JPH0523753B2 (ja) | ||
| JPH0716411B2 (ja) | 固定化酵素 | |
| JP2595004B2 (ja) | 酵素固定化用担体とその酵素固定化方法および酵素脱着方法 | |
| JP2524984B2 (ja) | 固定化酵素 | |
| US20040175788A1 (en) | Method for the separation of bioproducts | |
| CA1281675C (en) | Product and process for increasing enzyme adsorption | |
| JPH066064B2 (ja) | ジフルクトース・ジアンヒドリドの製造方法 | |
| NZ198572A (en) | Preparing agglomerated fibrous ion-exchange cellulose composites | |
| KR900003710B1 (ko) | 고정화 프럭토실트랜스퍼라제의 제조법 | |
| US5001063A (en) | Treatment of cellulosic ion exchange composites in hot aqueous medium to increase adsorption of macromolecules | |
| CA1159785A (en) | Method for the production of immobilized glucose isomerase | |
| KR900003746B1 (ko) | 사이클로덱스트린 글리코실트란스퍼라제의 정제방법 | |
| JPH02115193A (ja) | ジフルクトース・ジアンヒドリドの精製方法 | |
| JP2778975B2 (ja) | マルトシル―サイクロデキストリンの製造方法 | |
| JP2661710B2 (ja) | 固定化酵素 | |
| KR100526957B1 (ko) | 말토오스결합단백질 융합단백질을 정제하기 위한 친화성크로마토그래피 담체 제조방법 |