JPH0518062B2 - - Google Patents
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- JPH0518062B2 JPH0518062B2 JP60149410A JP14941085A JPH0518062B2 JP H0518062 B2 JPH0518062 B2 JP H0518062B2 JP 60149410 A JP60149410 A JP 60149410A JP 14941085 A JP14941085 A JP 14941085A JP H0518062 B2 JPH0518062 B2 JP H0518062B2
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- JP
- Japan
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- tetrahydroquinoline
- reaction
- aniline
- coupling
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10T436/144444—Glucose
-
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
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- Catalysts (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明は、カツプリング成分（Kupplungs−
komponente）としてアニリン誘導体を使用する
酸化的発色反応の実施方法に関する。 従来の技術 フエノール又はアニリンと、適当なカツプリン
グ成分、例えば４−アミノアンチピリン（４−
AAP）又はメチルベンゾチアゾロン−ヒドラゾ
ン（MBTH）との酸化的発色反応〔エマーソン
−トリンダー反応（Emerson−Trinder−
Reaction〕は、発色反応のために使用される酸
化剤の検出及び測定のために使用することができ
る。この反応は、酸素分析又は他の分野、例えば
免疫学における化学的診断法の基礎として利用す
ることができる。例えば同反応は、体液中のグル
コース、尿酸又はコレステリンの、酵素例えばグ
ルコースオキシダーゼ、ウリカーゼ及びコリンエ
ステラーゼによる酸化の際に形成される過酸化水
素の測定による体液中の前記物質の測定のため、
酸化剤としての過酸化水素を用いる基質及び／又
はペルオキシダーゼの測定のため又は例えば体液
中のリピドペルオキシダーゼのようなペルオキシ
ドの測定のために利用することができる（例えば
西独国特許出願公開第3037342号明細書参照）。こ
の種の測定法の重要な前提は、高い感光性、つま
り高い吸光係数を有しかつ高い収量で得られる色
素の形成である。これは例えば特に臨床化学的診
断で、体液中に少量しか存在しない物質の測定の
場合に重要である、それというのもこの場合には
例えば血清成分による障害が十分に除去されうる
からである。しかしまた前記診断法の場合と同様
に他の分野でも、例えば標識酵素としてペルオキ
シダーゼが頻繁に使用される免疫学においても鋭
敏な発色系を必要としている。 フエノールと、発色のために適当なカツプリン
グ成分、例えば４−アミノアンチピリン（４−
AAP）又はメチルベンゾチアゾロンヒドラゾン
（MBTH）との酸化的発色反応の場合、４位で塩
素化又は臭素化されたフエノールを発色反応に投
入すると、酸化剤の量に対して色素の収量が増大
されうることは公知である。この効果は、ハロゲ
ン化フエノールを用いる発色反応は２電子酸化法
であるが、４位で置換されていないフエノールは
４電子酸化法で有色化合物に変化されるという事
実に起因している〔例えば特開昭54−9821号参
照〕。つまり、酸化剤、例えばFe3+又は酵素的に
形成されたH2O2の測定時の感光性は、発色反応
の際に４−ハロゲンフエノールを使用すると倍加
される。 ４−AAP又はMBTHを用いる酸化的発色反応
の際、ハロゲンフエノールに対して、４位で塩素
又は臭素で置換されたアニリン誘導体は、発色反
応を示さないか又は僅かしか示さない〔J.Org.
Chem.３（1938）、153頁；アナリテイカル・ケミ
ストリー（Analytical Chemistry）23（1961）、
722頁参照〕が、水素で置換されているがその点
では類似している化合物は一般に、特に中性乃至
弱酸性PH範囲で、フエノールよりも高い吸光係数
及びより長い波長の最大吸収幅を有する色素を供
給する。またｏ位又はｐ位で低級アルキル基によ
つて置換されたＮ−置換アニリンを用いても、感
光性及び呈色安定性の点で満足すべき成果が得ら
れなかつた（西独国特許出願公告第2833612号）。 従つて、例えば過酸化水素及びペルオキシダー
ゼ（POD）のような酸化剤の測定のために新規
の鋭敏な発色系を開発するという実験はなかつ
た。酸化的発色反応の場合、諸開発により、改善
されたアニリン系カツプリング成分を生じ、この
際感受性の増大は、大低、アニリン窒素又はＣ−
３−原子における置換分の変化によつて得られた
〔例えば西独国特許出願公開第3037342号及び同第
2833612号；ヨーロツパ特許出願公開第0007787号
参照〕。 発明の解決しようとする問題点 本発明の課題は、酸化的発色反応の際に高い収
量及び選択性をもつて、高い吸光度及び呈色安定
性を有する色素を生じ、かつそれ故に酸化的発色
反応の際に鋭敏な発色系を形成する新規なアニリ
ン誘導体を用いた過酸化性作用物質の測定方法を
提供することである。 問題点を解決するための手段 前記課題は本発明により解決される。本発明の
対象は、酸化的発色反応におけるカツプリング成
分として、一般式： ［式中R1＝（CH2）ｎ−Ｘ（ｎ＝２又は３、Ｘ＝
OH、CH3CONH、SO3H）、R3＝Ｈ又はCH3、
R4＝Ｈ又はBr］で示されるアニリン誘導体を使
用する過酸化性作用物質の測定方法である。 特にR3＝Ｈであり、かつR4＝Ｈ又はBr、特に
R4＝Ｈである場合のアニリン誘導体が有利に使
用される。 式で示されるアニリン誘導体と発色剤との酸
化的発色反応の際に生じる色素のスペクトルは、
意外にも比較的高いε値及び極めて広い最大吸光
幅を示し；後者は極めて特定された波長の依存性
を減少することが判明した（例えば第１図乃至第
３図参照）。さらに本発明による式のアニリン
誘導体は、相応の非環状Ｎ−アルキル−又はＮ，
Ｎ−ジアルキル化合物と比べると、発色剤、例え
ばメチルベンゾチアゾロンヒドラゾン（MBTH）
又はスルホン化メチレンベンゾチアゾロンヒドラ
ゾン（SMBTH）との酸化的発色反応の際に意
外にもまた著しく良好な呈色安定性及びより小さ
い空値遅延（Leerwert−schleich）を示し、これ
によつてより高い選択性が得られる。 また極性基によつて置換された一般式の化合
物は、部分的には、特にアルキルスルホン酸基又
はスルホン酸基によつて十分でさえある改善され
た水溶性も示す；しかしまたあまり溶解しない式
の化合物も、適当な常用の洗浄剤を使用して安
定な溶液に変えることもできる。 次の表１では、常用のアニリンカツプリング成
分及び発色剤を含有する、H2O2／PODで酸化さ
れた発色系のλmaxで測定された吸光係数ε
（cm2／μmol H2O2）と、常用のアニリン系カツプ
リング成分の代りに相応に置換された本発明のア
ニリン誘導体を含有する、その他の点では同じ発
色系の吸光係数とが比較されている。発色剤とし
てはスルホン化メチルベンゾチアゾロンヒドラゾ
ン（SMBTH）を使用した。 発色反応は自体公知のようにして行われる（例
えば西独国特許出願公告第2833612号明細書）。好
ましくは室温で作業されるが、カツプリング成
分／発色剤の濃度割合＞５が極めて有利であるこ
とが判明した。PH値は好ましくは中性範囲にあ
る。次の値（反応混合物中の各濃度）が表１の基
礎になつている： 燐酸カリカム緩衝液 PH7.0：0.1mol／ アニリンカツプリング成分：３・10-1mol／ 発色剤（SMBTH）：３・10-2mol／ 過酸化水素：1.5・10-2m mol／ ペルオキシダーゼ：1.2U／ml
komponente）としてアニリン誘導体を使用する
酸化的発色反応の実施方法に関する。 従来の技術 フエノール又はアニリンと、適当なカツプリン
グ成分、例えば４−アミノアンチピリン（４−
AAP）又はメチルベンゾチアゾロン−ヒドラゾ
ン（MBTH）との酸化的発色反応〔エマーソン
−トリンダー反応（Emerson−Trinder−
Reaction〕は、発色反応のために使用される酸
化剤の検出及び測定のために使用することができ
る。この反応は、酸素分析又は他の分野、例えば
免疫学における化学的診断法の基礎として利用す
ることができる。例えば同反応は、体液中のグル
コース、尿酸又はコレステリンの、酵素例えばグ
ルコースオキシダーゼ、ウリカーゼ及びコリンエ
ステラーゼによる酸化の際に形成される過酸化水
素の測定による体液中の前記物質の測定のため、
酸化剤としての過酸化水素を用いる基質及び／又
はペルオキシダーゼの測定のため又は例えば体液
中のリピドペルオキシダーゼのようなペルオキシ
ドの測定のために利用することができる（例えば
西独国特許出願公開第3037342号明細書参照）。こ
の種の測定法の重要な前提は、高い感光性、つま
り高い吸光係数を有しかつ高い収量で得られる色
素の形成である。これは例えば特に臨床化学的診
断で、体液中に少量しか存在しない物質の測定の
場合に重要である、それというのもこの場合には
例えば血清成分による障害が十分に除去されうる
からである。しかしまた前記診断法の場合と同様
に他の分野でも、例えば標識酵素としてペルオキ
シダーゼが頻繁に使用される免疫学においても鋭
敏な発色系を必要としている。 フエノールと、発色のために適当なカツプリン
グ成分、例えば４−アミノアンチピリン（４−
AAP）又はメチルベンゾチアゾロンヒドラゾン
（MBTH）との酸化的発色反応の場合、４位で塩
素化又は臭素化されたフエノールを発色反応に投
入すると、酸化剤の量に対して色素の収量が増大
されうることは公知である。この効果は、ハロゲ
ン化フエノールを用いる発色反応は２電子酸化法
であるが、４位で置換されていないフエノールは
４電子酸化法で有色化合物に変化されるという事
実に起因している〔例えば特開昭54−9821号参
照〕。つまり、酸化剤、例えばFe3+又は酵素的に
形成されたH2O2の測定時の感光性は、発色反応
の際に４−ハロゲンフエノールを使用すると倍加
される。 ４−AAP又はMBTHを用いる酸化的発色反応
の際、ハロゲンフエノールに対して、４位で塩素
又は臭素で置換されたアニリン誘導体は、発色反
応を示さないか又は僅かしか示さない〔J.Org.
Chem.３（1938）、153頁；アナリテイカル・ケミ
ストリー（Analytical Chemistry）23（1961）、
722頁参照〕が、水素で置換されているがその点
では類似している化合物は一般に、特に中性乃至
弱酸性PH範囲で、フエノールよりも高い吸光係数
及びより長い波長の最大吸収幅を有する色素を供
給する。またｏ位又はｐ位で低級アルキル基によ
つて置換されたＮ−置換アニリンを用いても、感
光性及び呈色安定性の点で満足すべき成果が得ら
れなかつた（西独国特許出願公告第2833612号）。 従つて、例えば過酸化水素及びペルオキシダー
ゼ（POD）のような酸化剤の測定のために新規
の鋭敏な発色系を開発するという実験はなかつ
た。酸化的発色反応の場合、諸開発により、改善
されたアニリン系カツプリング成分を生じ、この
際感受性の増大は、大低、アニリン窒素又はＣ−
３−原子における置換分の変化によつて得られた
〔例えば西独国特許出願公開第3037342号及び同第
2833612号；ヨーロツパ特許出願公開第0007787号
参照〕。 発明の解決しようとする問題点 本発明の課題は、酸化的発色反応の際に高い収
量及び選択性をもつて、高い吸光度及び呈色安定
性を有する色素を生じ、かつそれ故に酸化的発色
反応の際に鋭敏な発色系を形成する新規なアニリ
ン誘導体を用いた過酸化性作用物質の測定方法を
提供することである。 問題点を解決するための手段 前記課題は本発明により解決される。本発明の
対象は、酸化的発色反応におけるカツプリング成
分として、一般式： ［式中R1＝（CH2）ｎ−Ｘ（ｎ＝２又は３、Ｘ＝
OH、CH3CONH、SO3H）、R3＝Ｈ又はCH3、
R4＝Ｈ又はBr］で示されるアニリン誘導体を使
用する過酸化性作用物質の測定方法である。 特にR3＝Ｈであり、かつR4＝Ｈ又はBr、特に
R4＝Ｈである場合のアニリン誘導体が有利に使
用される。 式で示されるアニリン誘導体と発色剤との酸
化的発色反応の際に生じる色素のスペクトルは、
意外にも比較的高いε値及び極めて広い最大吸光
幅を示し；後者は極めて特定された波長の依存性
を減少することが判明した（例えば第１図乃至第
３図参照）。さらに本発明による式のアニリン
誘導体は、相応の非環状Ｎ−アルキル−又はＮ，
Ｎ−ジアルキル化合物と比べると、発色剤、例え
ばメチルベンゾチアゾロンヒドラゾン（MBTH）
又はスルホン化メチレンベンゾチアゾロンヒドラ
ゾン（SMBTH）との酸化的発色反応の際に意
外にもまた著しく良好な呈色安定性及びより小さ
い空値遅延（Leerwert−schleich）を示し、これ
によつてより高い選択性が得られる。 また極性基によつて置換された一般式の化合
物は、部分的には、特にアルキルスルホン酸基又
はスルホン酸基によつて十分でさえある改善され
た水溶性も示す；しかしまたあまり溶解しない式
の化合物も、適当な常用の洗浄剤を使用して安
定な溶液に変えることもできる。 次の表１では、常用のアニリンカツプリング成
分及び発色剤を含有する、H2O2／PODで酸化さ
れた発色系のλmaxで測定された吸光係数ε
（cm2／μmol H2O2）と、常用のアニリン系カツプ
リング成分の代りに相応に置換された本発明のア
ニリン誘導体を含有する、その他の点では同じ発
色系の吸光係数とが比較されている。発色剤とし
てはスルホン化メチルベンゾチアゾロンヒドラゾ
ン（SMBTH）を使用した。 発色反応は自体公知のようにして行われる（例
えば西独国特許出願公告第2833612号明細書）。好
ましくは室温で作業されるが、カツプリング成
分／発色剤の濃度割合＞５が極めて有利であるこ
とが判明した。PH値は好ましくは中性範囲にあ
る。次の値（反応混合物中の各濃度）が表１の基
礎になつている： 燐酸カリカム緩衝液 PH7.0：0.1mol／ アニリンカツプリング成分：３・10-1mol／ 発色剤（SMBTH）：３・10-2mol／ 過酸化水素：1.5・10-2m mol／ ペルオキシダーゼ：1.2U／ml
【表】
表１から判るように、本発明により使用される
アニリン誘導体を用いるとその他の点では同じ条
件下で著しく高い吸光係数（1.3〜1.8倍）が得ら
れる；従つて本発明による化合物を用いると、常
用の発色剤と一緒に使用することにより酸化的発
色反応用の極めて鋭敏な発色系を与えるカツプリ
ング成分が提供される。一般式で示される化合
物は特にH2O2及びPODの測定のために使用され
る。 本発明による化合物を使用することによつて酸
化的発色反応による酸化性物質、特にH2O2の分
析的測定剤が得られる。 発色剤としては、このような発色反応に関して
慣用の発色剤、例えばスルホン化メチルベンゾチ
アゾロンヒドラゾン（SMBTH）が使用されう
る。 酸化的発色反応の際に本発明により使用される
カツプリング成分及び発色剤から得られる色素
は、相応の白色色素に容易に還元され、このもの
はさらに再酸化されうるので、酸化性物質、例え
ば体液中のH2O2の検出のためにも同様に使用す
ることができる。 式で示される化合物は、公知であるか又は自
体公知の合成法により、例えば式のアニリン誘
導体（式中R1＝Ｈ）を、式：Cl−（CH2）o−Ｘ（式
中Ｘ及びｎは前記のものを表わす）で示される化
合物でアルキル化することによつて製造すること
ができる〔例えばフーベン−バイル（Houben−
Weyl）、メトーデン・デル・オルガニツシエン・
ヒエミー（Methoden der Organischen
Chemie）、巻11／１、第２及び３章；巻２／２、
251頁参照〕。 出発物質として使用されるR1＝Ｈである式
のアニリン誘導体は、例えば相応のキノリン誘導
体の接触水素化によつて製造することができる
〔フーベン−バイル、巻４／1c、271頁〕。 第１図乃至第３図は、H2O2／PODによる酸化
によつて発色する際の、表１に挙げたカツプリン
グ成分と発色剤としてのスルホン化メチルベンゾ
チアゾロンヒドラゾン（SMBTH）とから成る
発色系のスペクトルを示す。反応混合物中の濃度
は表１に関して記載した値と同等である。 図中曲線Ａ乃至Ｆは、下記のカツプリング成分
を用いて得られるスペクトルを表わし、図中吸光
度Ｅは波長〓（nm）に対してプロツトしてある： Ａ：式、R1＝CH2CH2OH、R4＝Ｈ Ｂ：EHT Ｃ：式、R1＝CH2CH2CH2SO3H、R4＝Ｈ Ｄ：EST Ｅ：式、R1＝CH2CH2NHCOCH3、R4＝Ｈ Ｆ：EMAE スペクトルの比較により、本発明により使用さ
れた化合物を用いて得られたスペクトルは、同様
に置換された常用のアニリン系カツプリング成分
によるスペクトルと比較して特に著しく高いε値
及びより広い最大吸光幅を有することが判る。 実施例 例 １ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン １，２，３，４−テトラヒドロキノリン13.3ｇ
（0.1mol）及び２−クロルエタノール16.1ｇ
（0.2mol）を、120℃に４時間加熱する。冷却後
に反応混合物に水200mlを加えかつ2N苛性ソーダ
溶液でアルカリ性にする。次にクロロホルムを用
いて抽出を施し、有機相を硫酸ナトリウムを介し
て乾燥しかつ回転蒸発器で蒸発する。残留物を珪
酸ゲルによるカラムクロマトグラフイーにより
（キシロール／メチルエチルケトン＝１／１を用
いて溶離）精製する。 収量＃：10.5ｇ＝理論値の59％ 質量スペクトル：M+＝177。 同様にして１，２，３，４−テトラヒドロキノ
リンと２−アセトアミド−プロピルクロリドとの
反応によつてＮ−（２−アセトアミドプロピル）−
１，２，３，４−テトラヒドロキノリンが得られ
る。 例 ２ １，２，３，４−テトラヒドロキノリン−Ｎ−
プロパンスルホン酸 500mlフラスコ中で１，２，３，４−テトラヒ
ドロキノリン58.4ｇに溶融した１，３−プロパン
スルホン48.4ｇを、60〜80℃で50分以内に滴加し
た。反応混合物を約70℃で3.45時間放置し、次に
還流下にメタノール470mlを少しずつ加え、固体
のガラス状液底体が完全溶解するまで還流下に引
続き撹拌した。次いで撹拌下に室温に冷却する
と、急速な結晶化が起こる。冷却器での約12時間
の放置後に結晶を濾取した。 収量：約50ｇ、融点：233〜237℃ 例 ３ ６−ブロム−１，２，３，４−テトラヒドロキ
ノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸 (a) １，２，３，４−テトラヒドロキノリン臭素
化： 氷酢酸60ml中の１，２，３，４−テトラヒドロ
キノリン13.3ｇの溶液に、氷酢酸70ml中に溶した
臭素16ｇを、10〜15℃で（氷水を用いて冷却）激
しい撹拌下に50分以内に滴加した。形成された結
晶スラツジを氷酢酸３×30mlで希釈し、さらに10
〜15分撹拌し、飽和酢酸ナトリウム溶液200ml及
び次いでエーテル300mlを加えた。水で２に希
釈した後エーテル相を分離し、水で２回洗浄し、
Na2SO4を用いて乾燥しかつ30℃で真空蒸発し
た。褐色油状の残留物19.3ｇが得られた。残留物
にカラムクロマトグラフイーを施した（珪酸ゲ
ル；ジイソプロピルエーテル／クロロホルム／氷
酢酸）。最初の物質含有画分（画分１〜８、改15
ml）から５，６−ジブロム−１，２，３，４−テ
トラヒドロキノリン6.23ｇが得られ、最後の画分
（16〜28、各15ml）からは６−ブロム−１，２，
３，４−テトラヒドロキノリン（融点：30〜34
℃）3.75ｇが得られた。 (b) ６−ブロム−１，２，３，４−テトラヒドロ
キノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸 (a)により得られた６−ブロム−１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン4.2ｇを、アセトン20ml
中に溶かしかつ撹拌下にアセトン20ml中に溶かし
た溶融１，３−プロパンスルホン2.44ｇを50℃で
30分以内に滴加した。24時間の還流煮沸後にもう
一度、アセトン20ml中に溶かした溶融プロパンス
ルホン2.44ｇを前記と同じ条件下で滴加した。48
時間の還流煮沸後に反応混合物にカラムクロマト
グラフイーを施した（SiO2；溶離剤CHCl3／メ
タノール＝１／１、画分25ml）。画分６〜10を35
℃で真空蒸発し、得られた赤褐色残留物（1.8ｇ）
をメタノール約20mlと一緒に撹拌し、砂色の結晶
1.05ｇが得られた。融点：217℃（分解）。 同様にして(a)により得られた５，６−ジブロム
−１，２，３，４−テトラヒドロキノリンから
は、５，６−ジブロム−１，２，３，４−テトラ
ヒドロキノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸が得ら
れる。 例 ４ Ｎ−（２−アセトアミドエチル）−１，２，３，
４−テトラヒドロキノリン メタノール（無水）200ml中の１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン13.3ｇ（0.1mol）及びア
セチルアジリジン9.4ｇ（0.11mol）を、夜通し還
流煮沸する。回転蒸発器での蒸発後に得られる、
未反応出発物質と反応生成物とから成る混合物
（13ｇ）を珪酸ゲルによるカラムクロマトグラフ
イー（展開剤：クロロホルム／アセトン＝４：
１）によつて精製する。融点：102℃。 例 ５ Ｎ−（２−アセトアミドエチル）−７−メチル−
１，２，３，４−テトラヒドロキノリン 無水エタノール100ml中の７−メチル−１，２，
３，４−テトラヒドロキノリン４ｇ（27m mol）
及びＮ−アセチルアジリジン2.5ｇ（30m mol）
を、１時間還流下に煮沸し、次いで真空蒸発す
る。反応生成物を、珪酸ゲルによるカラムクロマ
トグラフイー（展開剤クロロホルム／アセトン＝
４：１）及びジイソプロピルエーテルからの再結
晶化によつて精製する。収量：1.3ｇ；融点：99
℃。
アニリン誘導体を用いるとその他の点では同じ条
件下で著しく高い吸光係数（1.3〜1.8倍）が得ら
れる；従つて本発明による化合物を用いると、常
用の発色剤と一緒に使用することにより酸化的発
色反応用の極めて鋭敏な発色系を与えるカツプリ
ング成分が提供される。一般式で示される化合
物は特にH2O2及びPODの測定のために使用され
る。 本発明による化合物を使用することによつて酸
化的発色反応による酸化性物質、特にH2O2の分
析的測定剤が得られる。 発色剤としては、このような発色反応に関して
慣用の発色剤、例えばスルホン化メチルベンゾチ
アゾロンヒドラゾン（SMBTH）が使用されう
る。 酸化的発色反応の際に本発明により使用される
カツプリング成分及び発色剤から得られる色素
は、相応の白色色素に容易に還元され、このもの
はさらに再酸化されうるので、酸化性物質、例え
ば体液中のH2O2の検出のためにも同様に使用す
ることができる。 式で示される化合物は、公知であるか又は自
体公知の合成法により、例えば式のアニリン誘
導体（式中R1＝Ｈ）を、式：Cl−（CH2）o−Ｘ（式
中Ｘ及びｎは前記のものを表わす）で示される化
合物でアルキル化することによつて製造すること
ができる〔例えばフーベン−バイル（Houben−
Weyl）、メトーデン・デル・オルガニツシエン・
ヒエミー（Methoden der Organischen
Chemie）、巻11／１、第２及び３章；巻２／２、
251頁参照〕。 出発物質として使用されるR1＝Ｈである式
のアニリン誘導体は、例えば相応のキノリン誘導
体の接触水素化によつて製造することができる
〔フーベン−バイル、巻４／1c、271頁〕。 第１図乃至第３図は、H2O2／PODによる酸化
によつて発色する際の、表１に挙げたカツプリン
グ成分と発色剤としてのスルホン化メチルベンゾ
チアゾロンヒドラゾン（SMBTH）とから成る
発色系のスペクトルを示す。反応混合物中の濃度
は表１に関して記載した値と同等である。 図中曲線Ａ乃至Ｆは、下記のカツプリング成分
を用いて得られるスペクトルを表わし、図中吸光
度Ｅは波長〓（nm）に対してプロツトしてある： Ａ：式、R1＝CH2CH2OH、R4＝Ｈ Ｂ：EHT Ｃ：式、R1＝CH2CH2CH2SO3H、R4＝Ｈ Ｄ：EST Ｅ：式、R1＝CH2CH2NHCOCH3、R4＝Ｈ Ｆ：EMAE スペクトルの比較により、本発明により使用さ
れた化合物を用いて得られたスペクトルは、同様
に置換された常用のアニリン系カツプリング成分
によるスペクトルと比較して特に著しく高いε値
及びより広い最大吸光幅を有することが判る。 実施例 例 １ Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン １，２，３，４−テトラヒドロキノリン13.3ｇ
（0.1mol）及び２−クロルエタノール16.1ｇ
（0.2mol）を、120℃に４時間加熱する。冷却後
に反応混合物に水200mlを加えかつ2N苛性ソーダ
溶液でアルカリ性にする。次にクロロホルムを用
いて抽出を施し、有機相を硫酸ナトリウムを介し
て乾燥しかつ回転蒸発器で蒸発する。残留物を珪
酸ゲルによるカラムクロマトグラフイーにより
（キシロール／メチルエチルケトン＝１／１を用
いて溶離）精製する。 収量＃：10.5ｇ＝理論値の59％ 質量スペクトル：M+＝177。 同様にして１，２，３，４−テトラヒドロキノ
リンと２−アセトアミド−プロピルクロリドとの
反応によつてＮ−（２−アセトアミドプロピル）−
１，２，３，４−テトラヒドロキノリンが得られ
る。 例 ２ １，２，３，４−テトラヒドロキノリン−Ｎ−
プロパンスルホン酸 500mlフラスコ中で１，２，３，４−テトラヒ
ドロキノリン58.4ｇに溶融した１，３−プロパン
スルホン48.4ｇを、60〜80℃で50分以内に滴加し
た。反応混合物を約70℃で3.45時間放置し、次に
還流下にメタノール470mlを少しずつ加え、固体
のガラス状液底体が完全溶解するまで還流下に引
続き撹拌した。次いで撹拌下に室温に冷却する
と、急速な結晶化が起こる。冷却器での約12時間
の放置後に結晶を濾取した。 収量：約50ｇ、融点：233〜237℃ 例 ３ ６−ブロム−１，２，３，４−テトラヒドロキ
ノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸 (a) １，２，３，４−テトラヒドロキノリン臭素
化： 氷酢酸60ml中の１，２，３，４−テトラヒドロ
キノリン13.3ｇの溶液に、氷酢酸70ml中に溶した
臭素16ｇを、10〜15℃で（氷水を用いて冷却）激
しい撹拌下に50分以内に滴加した。形成された結
晶スラツジを氷酢酸３×30mlで希釈し、さらに10
〜15分撹拌し、飽和酢酸ナトリウム溶液200ml及
び次いでエーテル300mlを加えた。水で２に希
釈した後エーテル相を分離し、水で２回洗浄し、
Na2SO4を用いて乾燥しかつ30℃で真空蒸発し
た。褐色油状の残留物19.3ｇが得られた。残留物
にカラムクロマトグラフイーを施した（珪酸ゲ
ル；ジイソプロピルエーテル／クロロホルム／氷
酢酸）。最初の物質含有画分（画分１〜８、改15
ml）から５，６−ジブロム−１，２，３，４−テ
トラヒドロキノリン6.23ｇが得られ、最後の画分
（16〜28、各15ml）からは６−ブロム−１，２，
３，４−テトラヒドロキノリン（融点：30〜34
℃）3.75ｇが得られた。 (b) ６−ブロム−１，２，３，４−テトラヒドロ
キノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸 (a)により得られた６−ブロム−１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン4.2ｇを、アセトン20ml
中に溶かしかつ撹拌下にアセトン20ml中に溶かし
た溶融１，３−プロパンスルホン2.44ｇを50℃で
30分以内に滴加した。24時間の還流煮沸後にもう
一度、アセトン20ml中に溶かした溶融プロパンス
ルホン2.44ｇを前記と同じ条件下で滴加した。48
時間の還流煮沸後に反応混合物にカラムクロマト
グラフイーを施した（SiO2；溶離剤CHCl3／メ
タノール＝１／１、画分25ml）。画分６〜10を35
℃で真空蒸発し、得られた赤褐色残留物（1.8ｇ）
をメタノール約20mlと一緒に撹拌し、砂色の結晶
1.05ｇが得られた。融点：217℃（分解）。 同様にして(a)により得られた５，６−ジブロム
−１，２，３，４−テトラヒドロキノリンから
は、５，６−ジブロム−１，２，３，４−テトラ
ヒドロキノリン−Ｎ−プロパンスルホン酸が得ら
れる。 例 ４ Ｎ−（２−アセトアミドエチル）−１，２，３，
４−テトラヒドロキノリン メタノール（無水）200ml中の１，２，３，４
−テトラヒドロキノリン13.3ｇ（0.1mol）及びア
セチルアジリジン9.4ｇ（0.11mol）を、夜通し還
流煮沸する。回転蒸発器での蒸発後に得られる、
未反応出発物質と反応生成物とから成る混合物
（13ｇ）を珪酸ゲルによるカラムクロマトグラフ
イー（展開剤：クロロホルム／アセトン＝４：
１）によつて精製する。融点：102℃。 例 ５ Ｎ−（２−アセトアミドエチル）−７−メチル−
１，２，３，４−テトラヒドロキノリン 無水エタノール100ml中の７−メチル−１，２，
３，４−テトラヒドロキノリン４ｇ（27m mol）
及びＮ−アセチルアジリジン2.5ｇ（30m mol）
を、１時間還流下に煮沸し、次いで真空蒸発す
る。反応生成物を、珪酸ゲルによるカラムクロマ
トグラフイー（展開剤クロロホルム／アセトン＝
４：１）及びジイソプロピルエーテルからの再結
晶化によつて精製する。収量：1.3ｇ；融点：99
℃。
第１図、第２図及び第３図は、本発明により使
用される化合物を用いて得られるスペクトル（点
線）及び類似の常用アニリン系カツプリング成分
を用いて得られるスペクトル（実線）の吸収曲線
を示すグラフである。
用される化合物を用いて得られるスペクトル（点
線）及び類似の常用アニリン系カツプリング成分
を用いて得られるスペクトル（実線）の吸収曲線
を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 酸化的発色反応におけるカツプリング成分と
して、 一般式： 〔式中R1＝（CH2）o−Ｘ（ｎ＝２又は３、Ｘ＝
OH、CH3CONH又はSO3H）、R3＝Ｈ又はCH3、
R4＝Ｈ又はBr〕で示されるアニリン誘導体を使
用することを特徴とする過酸化性作用物質の測定
方法。 ２ R3＝Ｈであり、かつR4＝Ｈ又はBrである、
特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ R4＝Ｈである、特許請求の範囲第２項記載
の方法。 ４ 過酸化水素及びPODを測定するための特許
請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項
記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843425219 DE3425219A1 (de) | 1984-07-09 | 1984-07-09 | Verwendung von anilinderivaten als kupplungskomponente in oxidativen farbbildungsreaktionen |
| DE3425219.3 | 1984-07-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6135358A JPS6135358A (ja) | 1986-02-19 |
| JPH0518062B2 true JPH0518062B2 (ja) | 1993-03-10 |
Family
ID=6240179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14941085A Granted JPS6135358A (ja) | 1984-07-09 | 1985-07-09 | 過酸化性作用物質の測定方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4845030A (ja) |
| EP (1) | EP0168035B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6135358A (ja) |
| AT (1) | ATE68212T1 (ja) |
| DE (2) | DE3425219A1 (ja) |
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| WO1987006619A1 (fr) * | 1986-04-28 | 1987-11-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Procede et reactif de detection de lesions ou maladies du coeur |
| US5532138A (en) * | 1990-04-26 | 1996-07-02 | Behringwerke Ag | Method and kits for determining peroxidatively active catalysts |
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| MX2011011029A (es) * | 2009-05-01 | 2011-11-04 | Loctite R & D Ltd | Aceladores de curacion para composiciones curables anaerobias. |
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|---|---|---|---|---|
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| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US3986833A (en) * | 1975-09-08 | 1976-10-19 | Miles Laboratories, Inc. | Test composition, device, and method for the detection of peroxidatively active substances |
| DE3037342A1 (de) * | 1980-01-09 | 1981-07-16 | Dojindo Laboratories, Kumamotoshi | N-sulfoalkylanilinderivate und ihre verwendung |
| DE3125667C2 (de) * | 1981-06-30 | 1986-01-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zum Nachweis von Wasserstoffperoxid |
| DE3413693A1 (de) * | 1984-04-11 | 1985-10-17 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Fluorierte anilinderivate und ihre verwendung |
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- 1984-07-09 DE DE19843425219 patent/DE3425219A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-07-09 AT AT85108525T patent/ATE68212T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-07-09 DE DE8585108525T patent/DE3584323D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-09 JP JP14941085A patent/JPS6135358A/ja active Granted
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-
1987
- 1987-11-20 US US07/122,600 patent/US4845030A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| US4845030A (en) | 1989-07-04 |
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| EP0168035B1 (de) | 1991-10-09 |
| JPS6135358A (ja) | 1986-02-19 |
| ATE68212T1 (de) | 1991-10-15 |
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