JPH0520065B2 - - Google Patents
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- JPH0520065B2 JPH0520065B2 JP58024548A JP2454883A JPH0520065B2 JP H0520065 B2 JPH0520065 B2 JP H0520065B2 JP 58024548 A JP58024548 A JP 58024548A JP 2454883 A JP2454883 A JP 2454883A JP H0520065 B2 JPH0520065 B2 JP H0520065B2
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- cells
- cell leukemia
- cell
- leukemia
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5152—Tumor cells
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な成人Ｔ細胞白血病関連細胞株お
よびその製造方法に関する。
よびその製造方法に関する。
成人Ｔ細胞白血病は1977年高月らによつて提唱
された新しい疾患概念であり、臨床的には成人が
罹患し、核の不整、分葉を示すＴ細胞が出現し、
リンパ節腫大や肝・脾腫を伴い、多くは亜急性に
経過してしばしば皮膚病変をきたす。一般にリン
パ性白血病は小児に多く、non Ｔ non Ｂ型の
ものが多いが、本症はもつぱら成人が罹患し、白
血病細胞が末梢型Ｔ細胞の表面形質をもつ点に特
徴がある。
された新しい疾患概念であり、臨床的には成人が
罹患し、核の不整、分葉を示すＴ細胞が出現し、
リンパ節腫大や肝・脾腫を伴い、多くは亜急性に
経過してしばしば皮膚病変をきたす。一般にリン
パ性白血病は小児に多く、non Ｔ non Ｂ型の
ものが多いが、本症はもつぱら成人が罹患し、白
血病細胞が末梢型Ｔ細胞の表面形質をもつ点に特
徴がある。
また発生分布については顕著なる地域偏在性が
あり、主として九州、南四国に多発する傾向があ
る。東京、大阪などで発病した患者でもその出身
地は九州、四国地方であることが多いと言われ
る。
あり、主として九州、南四国に多発する傾向があ
る。東京、大阪などで発病した患者でもその出身
地は九州、四国地方であることが多いと言われ
る。
後記するように本症は本症に係るウイルス、す
なわち成人Ｔ細胞白血病ウイルス（ATLVと略
記する）の感染によつて発生することが明らかに
なつており、従つて、当該感染に基づく成人Ｔ細
胞白血病関連抗体を検出することをによつて抗体
陽性者の存在分布を調査することができる。
なわち成人Ｔ細胞白血病ウイルス（ATLVと略
記する）の感染によつて発生することが明らかに
なつており、従つて、当該感染に基づく成人Ｔ細
胞白血病関連抗体を検出することをによつて抗体
陽性者の存在分布を調査することができる。
その調査によると、九州、四国に患者が集中し
ているほかさらに沖縄、紀伊半島にも分布してお
り、また特定の家系に分布するところから家族内
伝播の可能性も推定されるのである。
ているほかさらに沖縄、紀伊半島にも分布してお
り、また特定の家系に分布するところから家族内
伝播の可能性も推定されるのである。
かかる成人Ｔ細胞白血病の発生はATLVがそ
の病原体となる。この事実の発見は本発明者とそ
の協力者が成人Ｔ細胞白血病患者末梢血よりMT
−１細胞と指称する成人Ｔ細胞白血病細胞株の培
養樹立に成功したことに始まる。すなわち他の研
究者との共同研究により当該細胞中に成人Ｔ細胞
白血病患者血清と特異的に反応する抗原とＣ型ウ
イルス粒子が存在し、両者が密接に関連している
ことが見出され、この抗原を成人Ｔ細胞白血病関
連抗原（ATLA）と仮唱されるに至つたのであ
る。
の病原体となる。この事実の発見は本発明者とそ
の協力者が成人Ｔ細胞白血病患者末梢血よりMT
−１細胞と指称する成人Ｔ細胞白血病細胞株の培
養樹立に成功したことに始まる。すなわち他の研
究者との共同研究により当該細胞中に成人Ｔ細胞
白血病患者血清と特異的に反応する抗原とＣ型ウ
イルス粒子が存在し、両者が密接に関連している
ことが見出され、この抗原を成人Ｔ細胞白血病関
連抗原（ATLA）と仮唱されるに至つたのであ
る。
上記発見について参考のために下記文献１）〜
３）を列挙する。
３）を列挙する。
(1) Miyoshi，I.et al：Gann，71：155，1980
(2) Miyoshi，I.et al：Jap.J.Clin.Oncol.，９
（Suppl.）：485，1979 (3) Hinuma，Y.et al：Proc.Nat.Acad.Sci.，
78：6476，1981 他方、ほぼ同時期に米国のGalloグループは、
mycosis fungoidesおよびSe′zary症侯群患者よ
りＴ細胞増殖促進因子を用いて胞Ｔ細株を樹立
し、その培養細胞にＣ型レトロウイルス
（HTLV）を見出している。
（Suppl.）：485，1979 (3) Hinuma，Y.et al：Proc.Nat.Acad.Sci.，
78：6476，1981 他方、ほぼ同時期に米国のGalloグループは、
mycosis fungoidesおよびSe′zary症侯群患者よ
りＴ細胞増殖促進因子を用いて胞Ｔ細株を樹立
し、その培養細胞にＣ型レトロウイルス
（HTLV）を見出している。
mycosis fungoides，Se'zary症侯群および成
人Ｔ細胞白血病は相互に臨床的に類似した疾患で
あり、しかもそれぞれからの培養細胞にＣ型ウイ
ルスが発見されるということは、これらウイルス
がヒトのある種のＴ細胞性腫瘍の病因である可能
性を示唆していることになる。
人Ｔ細胞白血病は相互に臨床的に類似した疾患で
あり、しかもそれぞれからの培養細胞にＣ型ウイ
ルスが発見されるということは、これらウイルス
がヒトのある種のＴ細胞性腫瘍の病因である可能
性を示唆していることになる。
さて、成人Ｔ細胞白血病の発生はATLVがそ
の病原体となることは上記のごとく明らかとなつ
た。
の病原体となることは上記のごとく明らかとなつ
た。
しかしこのATLVの伝播様式については、い
まだ明らかでない部分があり、例えば家族内で抗
体陽性者が多いことあるいは夫婦間で抗体陽性率
が高いことから、妊娠、出産、授乳による母から
子への感染あるいは接触による夫婦間の水平感染
が考えられるのである。しかしながら、伝播に関
して防疫対策上とりわけ指摘されなければならな
い重要な点は、本発明者とその協力者がかつて証
明し、指摘したことであるが、輪血供血者に成人
Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者がみられ、しかもそ
の供血者がATLVを保持しているということ、
つまり輪血がATLVの伝播に極めて重要な役割
を果している可能性があるという事実である。さ
らに成人Ｔ細胞白血病以外の疾患で頻回に輪血を
受けた者に成人Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者が存
在する事実も輪血による伝播を示唆するものであ
る。上記証明並びに指摘について参考のために下
記文献４）〜６）を例挙する。
まだ明らかでない部分があり、例えば家族内で抗
体陽性者が多いことあるいは夫婦間で抗体陽性率
が高いことから、妊娠、出産、授乳による母から
子への感染あるいは接触による夫婦間の水平感染
が考えられるのである。しかしながら、伝播に関
して防疫対策上とりわけ指摘されなければならな
い重要な点は、本発明者とその協力者がかつて証
明し、指摘したことであるが、輪血供血者に成人
Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者がみられ、しかもそ
の供血者がATLVを保持しているということ、
つまり輪血がATLVの伝播に極めて重要な役割
を果している可能性があるという事実である。さ
らに成人Ｔ細胞白血病以外の疾患で頻回に輪血を
受けた者に成人Ｔ細胞白血病関連抗体陽性者が存
在する事実も輪血による伝播を示唆するものであ
る。上記証明並びに指摘について参考のために下
記文献４）〜６）を例挙する。
(4) Miyoshi，I.et al：Gann，73：339，1982
(5) Miyoshi，I.et al：Lancet：683，1982
(6) Shimoyama，M.et al：Jap.J.Clin.
Oncol.12：109，1982 かかる実情から、現在においては輪血供血者に
ついて成人Ｔ細胞白血病関連抗体の有無を検索
し、それによつて抗体陽性者からのATLVの感
染を予防することが緊要な対策となつているので
ある。この対策を十分に遂行するためには、その
前提として、成人Ｔ細胞白血病関連抗体を高感度
において測定することのできる測定方法が確立さ
れること並びに当該測定方法の実施のために必要
な成人Ｔ細胞白血病関連抗原が高活性なものとし
て、また高収率において製造されることが要求さ
れるのである。さらにまた当該測定方法を簡便に
実施するためにあらかじめ調製された測定試薬が
提供されることが望まれるのである。
Oncol.12：109，1982 かかる実情から、現在においては輪血供血者に
ついて成人Ｔ細胞白血病関連抗体の有無を検索
し、それによつて抗体陽性者からのATLVの感
染を予防することが緊要な対策となつているので
ある。この対策を十分に遂行するためには、その
前提として、成人Ｔ細胞白血病関連抗体を高感度
において測定することのできる測定方法が確立さ
れること並びに当該測定方法の実施のために必要
な成人Ｔ細胞白血病関連抗原が高活性なものとし
て、また高収率において製造されることが要求さ
れるのである。さらにまた当該測定方法を簡便に
実施するためにあらかじめ調製された測定試薬が
提供されることが望まれるのである。
かかる目的のための先行技術としては、成人Ｔ
細胞白血病関連抗原産生細胞であるMT−１細胞
あるいはMT−２細胞をスライドグラス上に塗沫
風乾し、アセトン固定したものに患者血清を反応
させ、蛍光抗体間接法により成人Ｔ細胞白血病関
連抗体を測定する方法が開発されている。しかし
ながら、この方法は特殊な装置を必要とし、操作
に熱練を要し、多数の検体を同時に処理すること
が不可能であり、しかも検出感度において劣る。
細胞白血病関連抗原産生細胞であるMT−１細胞
あるいはMT−２細胞をスライドグラス上に塗沫
風乾し、アセトン固定したものに患者血清を反応
させ、蛍光抗体間接法により成人Ｔ細胞白血病関
連抗体を測定する方法が開発されている。しかし
ながら、この方法は特殊な装置を必要とし、操作
に熱練を要し、多数の検体を同時に処理すること
が不可能であり、しかも検出感度において劣る。
かかる実情にかんがみ、本発明者は種々の検討
をおこない、その結果、成人Ｔ細胞白血病関連抗
原産生細胞を界面活性剤を用いて処理することに
より成人Ｔ細胞白血病関連抗原を製造し、当該抗
原を使用して酵素免疫測定法、放射免疫測定法、
受身血球凝集法を実施することにより所期の目的
が達成されることを知り、当該知見を特願昭57−
169670号によつて特定される特許出願に係る発明
として完成した。
をおこない、その結果、成人Ｔ細胞白血病関連抗
原産生細胞を界面活性剤を用いて処理することに
より成人Ｔ細胞白血病関連抗原を製造し、当該抗
原を使用して酵素免疫測定法、放射免疫測定法、
受身血球凝集法を実施することにより所期の目的
が達成されることを知り、当該知見を特願昭57−
169670号によつて特定される特許出願に係る発明
として完成した。
しかしながら、成人Ｔ細胞白血病に関しさらに
詳細な診断が展開されるためには成人Ｔ細胞白血
病関連抗体が量産規模において収得されることが
望まれる。例えば適当なる動物に成人Ｔ細胞白血
病関連抗体を産生せしめることができれば、当該
動物からの抗血清を使用して成人Ｔ細胞白血病関
連抗原の検出と定量が可能となる。
詳細な診断が展開されるためには成人Ｔ細胞白血
病関連抗体が量産規模において収得されることが
望まれる。例えば適当なる動物に成人Ｔ細胞白血
病関連抗体を産生せしめることができれば、当該
動物からの抗血清を使用して成人Ｔ細胞白血病関
連抗原の検出と定量が可能となる。
しかしながら、例えばMT−２細胞のごとく成
人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞として現在入手
し得るものは、そもそも成人Ｔ細胞白血病関患者
の末梢血より採取した白血病細胞とヒ臍帯白血球
とを混合培養して得られた細胞株であるから、こ
れをヒト、サル以外の動物に直接に接種してもヒ
トの成人Ｔ細胞白血病関連抗原に対して免疫学的
に特異性の高い抗体のみを得ることはできない。
従つてヒト、サル以外の動物に成人Ｔ細胞関連抗
体を産生せしめるためには、そのための特別の解
決手段が必であり、本発明者はその検討をおこな
つた。その結果、ウサギの動物の白血球と成人Ｔ
細胞白血病関連抗原産生細胞とを混合培養して得
られる細胞株がこれをウサギに接種されたときに
当該動物に免疫学的に特異性の高い成人Ｔ細胞白
血病関連抗原体を産生せしめることができるもの
であることを知り、本発を完成するに至つた。
人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞として現在入手
し得るものは、そもそも成人Ｔ細胞白血病関患者
の末梢血より採取した白血病細胞とヒ臍帯白血球
とを混合培養して得られた細胞株であるから、こ
れをヒト、サル以外の動物に直接に接種してもヒ
トの成人Ｔ細胞白血病関連抗原に対して免疫学的
に特異性の高い抗体のみを得ることはできない。
従つてヒト、サル以外の動物に成人Ｔ細胞関連抗
体を産生せしめるためには、そのための特別の解
決手段が必であり、本発明者はその検討をおこな
つた。その結果、ウサギの動物の白血球と成人Ｔ
細胞白血病関連抗原産生細胞とを混合培養して得
られる細胞株がこれをウサギに接種されたときに
当該動物に免疫学的に特異性の高い成人Ｔ細胞白
血病関連抗原体を産生せしめることができるもの
であることを知り、本発を完成するに至つた。
すなわち、本発明の目的はウサギに接種して成
人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せしめる成人Ｔ細
胞白血病関連細胞株を提供することであり、この
目的の達成のための技術手段として本発明はウサ
ギの白血球と成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞
とを混合培養することを特徴とする製造方法およ
び該方法によつて得られる新規細胞株を提示する
ものである。
人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せしめる成人Ｔ細
胞白血病関連細胞株を提供することであり、この
目的の達成のための技術手段として本発明はウサ
ギの白血球と成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞
とを混合培養することを特徴とする製造方法およ
び該方法によつて得られる新規細胞株を提示する
ものである。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に係る成人Ｔ細胞白血病関連抗原とは成
人Ｔ細胞白血病患者末梢血より採取した白血病細
胞の培養細胞中に存在する抗原蛋白およびＣ型ウ
イルス粒子であつて、成人Ｔ細胞白血病患者血清
との間に特異的な抗原抗体反応を呈するものを言
う。抗原蛋白は分子量の異なる蛋白質より構成さ
れており、分子量24000の蛋白質が主要な成分で
ある。またＣ型ウイルス粒子は逆転写酵素をもつ
たRNAウイルス粒子であり、形状は電子顕微鏡
下において球形を呈してており、比重は蔗糖濃度
勾配法によつて測定するとき1152〜1155g／cm3で
ある。なお、成人Ｔ細胞白血病関連抗原のさらに
詳細なる性状を含めた特定については下記文献
７）における記載内容が引用される。
人Ｔ細胞白血病患者末梢血より採取した白血病細
胞の培養細胞中に存在する抗原蛋白およびＣ型ウ
イルス粒子であつて、成人Ｔ細胞白血病患者血清
との間に特異的な抗原抗体反応を呈するものを言
う。抗原蛋白は分子量の異なる蛋白質より構成さ
れており、分子量24000の蛋白質が主要な成分で
ある。またＣ型ウイルス粒子は逆転写酵素をもつ
たRNAウイルス粒子であり、形状は電子顕微鏡
下において球形を呈してており、比重は蔗糖濃度
勾配法によつて測定するとき1152〜1155g／cm3で
ある。なお、成人Ｔ細胞白血病関連抗原のさらに
詳細なる性状を含めた特定については下記文献
７）における記載内容が引用される。
(7) Yoshida M.，et al：Proc.Nat.Acad.Sci.，
79：2031，1982 次に成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞とは前
記定義の成人Ｔ細胞白血病関連抗原を産生する細
胞株のすべてを包含する概念である。当該概念に
含まれ、現在入手可能な細胞としては、例えば
MT−１細胞、MT−２細胞、MT−３細胞、
MT−４細胞と呼称される一連の培養細胞株を挙
げることができる。これらはいずれも本発者とそ
の協力者がすでに樹立した培養細胞株であり、こ
れらのうち量産上とりわけ有利な細胞はMT−２
細胞であることが判明している。すなわち、MT
−２細胞はその100％の細胞が成人Ｔ細胞白血病
関連抗原を保有しており、極めて大量のＣ型ウイ
ルスを産生し続けるという特異な細胞であり、こ
の点において他の細胞より優れた特徴を有してい
ることがわかつている。そこで成人Ｔ細胞白血病
関連抗原産生細胞の代表例としてMT−２細胞を
特に取りあげ、これについて詳細に説明すれば以
下のごとくである。
79：2031，1982 次に成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞とは前
記定義の成人Ｔ細胞白血病関連抗原を産生する細
胞株のすべてを包含する概念である。当該概念に
含まれ、現在入手可能な細胞としては、例えば
MT−１細胞、MT−２細胞、MT−３細胞、
MT−４細胞と呼称される一連の培養細胞株を挙
げることができる。これらはいずれも本発者とそ
の協力者がすでに樹立した培養細胞株であり、こ
れらのうち量産上とりわけ有利な細胞はMT−２
細胞であることが判明している。すなわち、MT
−２細胞はその100％の細胞が成人Ｔ細胞白血病
関連抗原を保有しており、極めて大量のＣ型ウイ
ルスを産生し続けるという特異な細胞であり、こ
の点において他の細胞より優れた特徴を有してい
ることがわかつている。そこで成人Ｔ細胞白血病
関連抗原産生細胞の代表例としてMT−２細胞を
特に取りあげ、これについて詳細に説明すれば以
下のごとくである。
MT−２細胞は成人Ｔ細胞白血病患者（女性）
の白血病細胞と正常新生男児の臍帯白血球との混
合培養の結果として樹立された臍帯白血球由来の
細胞株であつて、染色体構成は46，XYである。
患者白血球細胞からの成人Ｔ細胞白血球ウイルス
ゲノムが臍帯白血球Ｔ細胞に伝達導入された結果
の産物であると推定される。性状は細胞集塊を形
成しつつ増殖し、羊赤白球とロゼツトを形成し、
Ｔ細胞に対するモノクロナール抗体と反応するこ
とである。また、EBウイルス核抗原陰性である。
なお、MT−２細胞のさらに詳細なる性状を含め
た特定については下記文献８）および９）におけ
る記載内容が引用される。
の白血病細胞と正常新生男児の臍帯白血球との混
合培養の結果として樹立された臍帯白血球由来の
細胞株であつて、染色体構成は46，XYである。
患者白血球細胞からの成人Ｔ細胞白血球ウイルス
ゲノムが臍帯白血球Ｔ細胞に伝達導入された結果
の産物であると推定される。性状は細胞集塊を形
成しつつ増殖し、羊赤白球とロゼツトを形成し、
Ｔ細胞に対するモノクロナール抗体と反応するこ
とである。また、EBウイルス核抗原陰性である。
なお、MT−２細胞のさらに詳細なる性状を含め
た特定については下記文献８）および９）におけ
る記載内容が引用される。
(8) Miyoshi，I.et al：Gann，72：978，1981
(9) Miyoshi，I.et al：Nature，294：770，1981
次に免疫のための本発明に係る動物としてはヒ
ト、サル以外の動物を任意に選択すればよいが、
通常はウサギあるいはハムスターを使用すればよ
い。
ト、サル以外の動物を任意に選択すればよいが、
通常はウサギあるいはハムスターを使用すればよ
い。
免疫動物を選択したならば、当該動物の白血球
は例えば次のように用意する。まず、当該動物の
末梢血10mlを採取し、フイコールハイパツク を
用いた比重遠心法により白血球を分離し、次に述
べる混合培養に先立ち、あらかじめ１×106細
胞／mlの濃度でペトリシヤーレ内に２日間培養す
る。なお、培養液はRPMI 1640に10％ヒト臍帯
血清、10％牛胎児血清およびストレプトマイシン
100μg／dlとペニシリン100u／mlを加えたものを
使用すればよい。混合培養は例えば以下のように
おこなえばよい。
は例えば次のように用意する。まず、当該動物の
末梢血10mlを採取し、フイコールハイパツク を
用いた比重遠心法により白血球を分離し、次に述
べる混合培養に先立ち、あらかじめ１×106細
胞／mlの濃度でペトリシヤーレ内に２日間培養す
る。なお、培養液はRPMI 1640に10％ヒト臍帯
血清、10％牛胎児血清およびストレプトマイシン
100μg／dlとペニシリン100u／mlを加えたものを
使用すればよい。混合培養は例えば以下のように
おこなえばよい。
まず、上記のごとく用意された白血球にあらか
じめＸ線照射された成人Ｔ細胞白血病関連抗原産
生細胞、例えば10000レントゲン照射をしたMT
−２細胞１×106個を加え、37℃、7.5％CO2濃度
下で培養する。なお、週二回の割合で新しい培養
液を加える。混合培養開始後二週間経過すると細
胞集塊が形成され、その数と大きさが増大する。
混合してから四週間経過後に別のシヤーレに植え
継ぎ、さらに培養を続ければよい。
じめＸ線照射された成人Ｔ細胞白血病関連抗原産
生細胞、例えば10000レントゲン照射をしたMT
−２細胞１×106個を加え、37℃、7.5％CO2濃度
下で培養する。なお、週二回の割合で新しい培養
液を加える。混合培養開始後二週間経過すると細
胞集塊が形成され、その数と大きさが増大する。
混合してから四週間経過後に別のシヤーレに植え
継ぎ、さらに培養を続ければよい。
また、その際の培養液としては例えばRPMI
1640に20％牛胎児血清を加えたものを使用すれば
よい。しかしここ記述したものは本発明における
好ましい態様例を示すものであつて、本発明を特
に限定するものではなく、本発明の目的を損うこ
とがない限り、Ｘ線照射量、培養条件、培地組成
は適宜選択することができる。
1640に20％牛胎児血清を加えたものを使用すれば
よい。しかしここ記述したものは本発明における
好ましい態様例を示すものであつて、本発明を特
に限定するものではなく、本発明の目的を損うこ
とがない限り、Ｘ線照射量、培養条件、培地組成
は適宜選択することができる。
かくのごとく混合培養して得られる細胞株は生
命力が強く、例えば、前記動物白血球は２カ月以
内に死滅し、またＸ線照射したMT−２細胞も２
カ月以内に死滅するのに対し、混合培養して得ら
れた細胞株は混合培養開始後６カ月経過するも培
養維持されているのである。
命力が強く、例えば、前記動物白血球は２カ月以
内に死滅し、またＸ線照射したMT−２細胞も２
カ月以内に死滅するのに対し、混合培養して得ら
れた細胞株は混合培養開始後６カ月経過するも培
養維持されているのである。
本発明者はヒト、サル以外の動物としてウサギ
（日本白色種の雄）を選択し、成人Ｔ細胞白血病
関連抗原産生細胞としてMT−２細胞を使用して
混合培養し、その結果得られた細胞株を特にRa
−１細胞と呼ぶことにする。そこで本発明細胞株
の代表例としてRa−１細胞を特にとりあげ、こ
れの性状について詳細に説明すれば以下のごとく
である。
（日本白色種の雄）を選択し、成人Ｔ細胞白血病
関連抗原産生細胞としてMT−２細胞を使用して
混合培養し、その結果得られた細胞株を特にRa
−１細胞と呼ぶことにする。そこで本発明細胞株
の代表例としてRa−１細胞を特にとりあげ、こ
れの性状について詳細に説明すれば以下のごとく
である。
ほとんど全てのRa−１細胞はペルオキシダー
ゼ反応陰性の未熟リンパ球であり、浮遊状態で増
殖し、細胞培加時間は約30時間である。またRa
−１細胞は表面イムノグロブリン並びに羊赤血
球、IgGのFc部分、補体に対するレセプターを欠
いている。またヒトＴ細胞抗原（Leu−１，Leu
−2a，Leu−3a）およびIa抗原（OKI １）に対
するモノクロナール抗体とは反応しない。44個の
染色体を有し、雄のウサギの核型を示す。
ゼ反応陰性の未熟リンパ球であり、浮遊状態で増
殖し、細胞培加時間は約30時間である。またRa
−１細胞は表面イムノグロブリン並びに羊赤血
球、IgGのFc部分、補体に対するレセプターを欠
いている。またヒトＴ細胞抗原（Leu−１，Leu
−2a，Leu−3a）およびIa抗原（OKI １）に対
するモノクロナール抗体とは反応しない。44個の
染色体を有し、雄のウサギの核型を示す。
電子顕微鏡観察によれば、Ra−１細胞の細胞
外にＣ型ウイルス粒子が認められる。このウイル
ス粒子は成人Ｔ細胞白血病ウイルスと同じ形態を
しており、直径が100〜150nmであり、核様体と
外膜からなる構造をしている。
外にＣ型ウイルス粒子が認められる。このウイル
ス粒子は成人Ｔ細胞白血病ウイルスと同じ形態を
しており、直径が100〜150nmであり、核様体と
外膜からなる構造をしている。
次に本発明細胞株を使用して成人Ｔ細胞白血病
関連抗血清を製造するためには、動物感作のため
に通常おこなわれている免疫方法を実施すればよ
い。例えば前記Ra−１細胞をウサギ等の静脈内
に一定間隔をおいて頻回接種し、一定時間経過後
に採血して血清を得ればよい。
関連抗血清を製造するためには、動物感作のため
に通常おこなわれている免疫方法を実施すればよ
い。例えば前記Ra−１細胞をウサギ等の静脈内
に一定間隔をおいて頻回接種し、一定時間経過後
に採血して血清を得ればよい。
後記参考例において示されるごとく、本発明細
胞株を抗原として製造した抗血清は成人Ｔ細胞白
血病関連抗原陽性細胞との間において特異的に反
応を示し、それ以外の一般のヒト白血病細胞とは
反応を示さない。また上記反応における反応挙動
は成人Ｔ細胞白血病患者血清が示す挙動と類似し
ている。従つて、本発明方法、本発明細胞株はウ
サギに成人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せしめる
ことのできるものである。さらに具体的には本発
明はウサギに成人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せ
しめるに適した接種を可能にするものであること
が判明する。
胞株を抗原として製造した抗血清は成人Ｔ細胞白
血病関連抗原陽性細胞との間において特異的に反
応を示し、それ以外の一般のヒト白血病細胞とは
反応を示さない。また上記反応における反応挙動
は成人Ｔ細胞白血病患者血清が示す挙動と類似し
ている。従つて、本発明方法、本発明細胞株はウ
サギに成人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せしめる
ことのできるものである。さらに具体的には本発
明はウサギに成人Ｔ細胞白血病関連抗体を産生せ
しめるに適した接種を可能にするものであること
が判明する。
以下に記載する実施例をもつて本発明を具体的
に説明する。
に説明する。
実施例 １
日本白色種の雄ウサギの末梢血10mlから、フイ
ルコールハイパツクを用いた比重遠心法により白
血球を分離し、１×106細胞／mlの濃度でペトリ
シヤーレ内で２日間培養した。なお、培養液には
RPMI 1640に10％ヒト臍帯血清、10％牛胎児血
清およびストレプトマイシン100μg／dlとペニシ
リン100u／mlを加えたものを使用した。
ルコールハイパツクを用いた比重遠心法により白
血球を分離し、１×106細胞／mlの濃度でペトリ
シヤーレ内で２日間培養した。なお、培養液には
RPMI 1640に10％ヒト臍帯血清、10％牛胎児血
清およびストレプトマイシン100μg／dlとペニシ
リン100u／mlを加えたものを使用した。
次にあらかじめ10000レントゲン照射したMT
−２細胞１×106個を加え、37℃、7.5％CO2濃度
で４週間培養した。この間週二回の割合で新しい
培地を加えた。
−２細胞１×106個を加え、37℃、7.5％CO2濃度
で４週間培養した。この間週二回の割合で新しい
培地を加えた。
次にRPMI 1640に20％牛胎児血清を加えた培
地に植え継ぎ、４カ月間培養維持し、成人Ｔ細胞
白血病関連細胞株Ra−１を得た。
地に植え継ぎ、４カ月間培養維持し、成人Ｔ細胞
白血病関連細胞株Ra−１を得た。
参考例
実施例１の実施によつて得られたRa−１細胞
５×107個を日本白色種の雌ウサギに静脈内接種
した。２週後再びRa−１細胞５×107個を静脈内
接種した。第一回接種してから１週間経過後、第
二回接種してから１週間経過後および２週間経過
後に採血し、それぞれ成人Ｔ細胞白血病関連抗血
清ａ，ｂおよびｃを得た。
５×107個を日本白色種の雌ウサギに静脈内接種
した。２週後再びRa−１細胞５×107個を静脈内
接種した。第一回接種してから１週間経過後、第
二回接種してから１週間経過後および２週間経過
後に採血し、それぞれ成人Ｔ細胞白血病関連抗血
清ａ，ｂおよびｃを得た。
間接蛍光抗体法によれば、ａ，ｂ，ｃの抗体価
はそれぞれX80，X160，X320であり、いづれも
成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞株MT−２
（ヒト）、Si−１（サル）、Ra−１（ウサギ）との間
で反応を示すが、三種類のATLV陰性のヒト白
血病細胞株、すなわちTALL−１，BALL−１，
NALL−１とは反応を示さなかつた。なお、Si−
１，TALL−１，BALL−１，NALL−１につい
ては下記文献10）、11）が参照される。
はそれぞれX80，X160，X320であり、いづれも
成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞株MT−２
（ヒト）、Si−１（サル）、Ra−１（ウサギ）との間
で反応を示すが、三種類のATLV陰性のヒト白
血病細胞株、すなわちTALL−１，BALL−１，
NALL−１とは反応を示さなかつた。なお、Si−
１，TALL−１，BALL−１，NALL−１につい
ては下記文献10）、11）が参照される。
(10) Miyoshi，I.et al.Lancet １，1061（1982）
(11) Miyoshi，I.et al：Nature267，843−844
（1977） またａ，ｂ，ｃは固定したRa−１細胞の細胞
質周縁と反応するばかりでなく、生きたRa−１
細胞の表面膜とも反応をした。この反応挙動は成
人Ｔ細胞白血病患者血清が成人Ｔ細胞白血病関連
抗原陽性の固定細胞および生細胞の両方に対して
反応する挙動と一致している。
（1977） またａ，ｂ，ｃは固定したRa−１細胞の細胞
質周縁と反応するばかりでなく、生きたRa−１
細胞の表面膜とも反応をした。この反応挙動は成
人Ｔ細胞白血病患者血清が成人Ｔ細胞白血病関連
抗原陽性の固定細胞および生細胞の両方に対して
反応する挙動と一致している。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ウサギの白血球と成人Ｔ細胞白血病関連抗原
産生細胞との混合培養によつて得られる成人Ｔ細
胞白血病関連細胞株。 ２ 成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞がMT−
２細胞である特許請求の範囲第１項記載の成人Ｔ
細胞白血病関連細胞株。 ３ ウサギを免疫するために使用する成人Ｔ細胞
白血病関連細胞株を製造するに当たり、ウサギの
白血球を成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞とを
混合培養することを特徴とする成人Ｔ細胞白血病
関連細胞株の製造方法。 ４ 成人Ｔ細胞白血病関連抗原産生細胞がMT−
２細胞である特許請求の範囲第３項記載の成人Ｔ
細胞白血病関連細胞株の製造方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58024548A JPS59151885A (ja) | 1983-02-18 | 1983-02-18 | 成人ｔ細胞白血病関連細胞株 |
| KR1019840000581A KR890002411B1 (ko) | 1983-02-18 | 1984-02-08 | 성인 t세포 백혈병 관련 세포주의 제조방법 |
| PH30240A PH19340A (en) | 1983-02-18 | 1984-02-14 | Adult t cell leukemia associated cell strain |
| DE8484101562T DE3480655D1 (de) | 1983-02-18 | 1984-02-16 | Erwachsene-t-zellen-leukaemie verbundene zellinien, verfahren zur herstellung dieser linie und gegenserum. |
| AT84101562T ATE48442T1 (de) | 1983-02-18 | 1984-02-16 | Erwachsene-t-zellen-leukaemie verbundene zellinien, verfahren zur herstellung dieser linie und gegenserum. |
| EP84101562A EP0116949B1 (en) | 1983-02-18 | 1984-02-16 | Adult t cell leukemia associated cell strains and a method for the preparation of said strain and respective antiserum |
| US07/070,135 US4792524A (en) | 1983-02-18 | 1987-07-02 | Adult T cell leukemia associated cell strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58024548A JPS59151885A (ja) | 1983-02-18 | 1983-02-18 | 成人ｔ細胞白血病関連細胞株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59151885A JPS59151885A (ja) | 1984-08-30 |
| JPH0520065B2 true JPH0520065B2 (ja) | 1993-03-18 |
Family
ID=12141202
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58024548A Granted JPS59151885A (ja) | 1983-02-18 | 1983-02-18 | 成人ｔ細胞白血病関連細胞株 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4792524A (ja) |
| EP (1) | EP0116949B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59151885A (ja) |
| KR (1) | KR890002411B1 (ja) |
| AT (1) | ATE48442T1 (ja) |
| DE (1) | DE3480655D1 (ja) |
| PH (1) | PH19340A (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6395495B1 (en) | 1983-09-15 | 2002-05-28 | Institut Pasteur | Methods and kits for detecting antibodies against an HIV variant |
| US6600023B1 (en) | 1983-09-15 | 2003-07-29 | Institut Pasteur | Antibody directed against HIV-1 P25 antigen |
| US6428952B1 (en) | 1983-09-15 | 2002-08-06 | Institut Pasteur | Methods and kits employing LAV antigens for the detection of HIV-1-specific antibodies |
| US5374519A (en) * | 1983-12-05 | 1994-12-20 | Institut Pasteur | Oligopeptides comprising p18 protein of human immunodeficiency virus (HIV), compositions comprising peptides of p18 protein of HIV, and diagnostic kits and methods for detecting acquired immune deficiency syndrome (AIDS) |
| IE58321B1 (en) * | 1984-04-23 | 1993-09-08 | Us Health | Isolation of proteins of HTLV-III, serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with aids and pre-aids conditions, and detection of HTLV-III infection bi/immuno-assays using HTLV-III infection by immuno-assays using HTLV-III and its proteins |
| US5164293A (en) * | 1990-09-25 | 1992-11-17 | Coulter Corporation | Monoclonal antibody for detecting HTLV-I, HTLV-II and STLV-I viruses |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2487201B2 (fr) * | 1980-03-24 | 1985-07-05 | Pasteur Institut | Preparation lymphocytaires applicables en therapeutique humaine, procede d'obtention et applications |
| US4442205A (en) * | 1981-09-22 | 1984-04-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Simian virus recombinant that directs the synthesis of hepatitis B surface antigen |
| US4464465A (en) * | 1982-04-05 | 1984-08-07 | Genetic Systems Corporation | Cell-driven viral transfer in eukaryotes |
| JPS58187861A (ja) * | 1982-04-26 | 1983-11-02 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 成人型ｔ細胞性白血病関連抗体の測定法 |
| JPS5962527A (ja) * | 1982-09-30 | 1984-04-10 | Eisai Co Ltd | 成人ｔ細胞白血病関連抗原の製造方法 |
-
1983
- 1983-02-18 JP JP58024548A patent/JPS59151885A/ja active Granted
-
1984
- 1984-02-08 KR KR1019840000581A patent/KR890002411B1/ko not_active Expired
- 1984-02-14 PH PH30240A patent/PH19340A/en unknown
- 1984-02-16 DE DE8484101562T patent/DE3480655D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-02-16 AT AT84101562T patent/ATE48442T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-16 EP EP84101562A patent/EP0116949B1/en not_active Expired
-
1987
- 1987-07-02 US US07/070,135 patent/US4792524A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3480655D1 (de) | 1990-01-11 |
| EP0116949A2 (en) | 1984-08-29 |
| KR840007602A (ko) | 1984-12-08 |
| KR890002411B1 (ko) | 1989-07-03 |
| EP0116949A3 (en) | 1986-12-03 |
| PH19340A (en) | 1986-03-21 |
| EP0116949B1 (en) | 1989-12-06 |
| JPS59151885A (ja) | 1984-08-30 |
| ATE48442T1 (de) | 1989-12-15 |
| US4792524A (en) | 1988-12-20 |
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