【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
（発明の技術分野）
本発明は、抗腫瘍作用の強い血液製剤の製造法
に関する。
（従来技術とその問題点）
先進国における死亡原因の第一は癌によるもの
であるが、現在のところ、細菌感染症に対する抗
生物質のような強力な制癌剤は見い出されていな
い。
哺乳動物（人を含む、以下同じ）をBCG（弱毒
性結核菌）、コリネバクテリウム グラヌロサム
（orynebacterium granulosum）あるいはザイモ
サン（Zymosan）のごとき物質で代表される免
疫刺激剤を投与したのち、エンドトキシンあるい
はポリＩ：Ｃ（poli Ｉ：Ｃ）などを投与すると、
該哺乳動物の血液中にTNF（腫瘍壊死因子）の生
ずることが知られている［E.A.Carswell et al，
プロシーデイングズ オブ ザ ナシヨナル ア
カデミー オブ サイアンシーズ オブ USA
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA）vol.72，(9)pp3666−
3670（1975）］。
該TNFを誘導するための物質としては、エン
ドトキシンが最も強力であるが、毒性も強いた
め、該哺乳動物はTNFを産生しながら、死亡す
る。
この方法で作られたTNFを含む血液にはエン
ドトキシンが含まれるため、このままでは他の動
物に投与できない。したがつて、この血液中の
TNFを利用するためには、この血液からエンド
トキシンを除かねばならないが、そのためには多
大の労力を要する。
（問題点を解決するための手段）
TNF様物質を作る際、エンドトキシンを不溶
性担体に固定化してエンドトキシンが血液中に流
れでないようにしたものを、エンドトキシンの代
わりに用いる。
（発明の構成）
本発明は、
哺乳動物に弱毒性結核菌で代表される免疫刺激
剤を投与したのち、該哺乳動物の血液を、不溶性
担体に固定化したグラム陰性菌細胞壁リポ多糖体
で処理することによる抗腫瘍性血液製剤の製造方
法
を提供するものである。
（発明の構成）
本発明でいう、グラム陰性菌細胞壁リポ多糖体
（以下リポ多糖体と略称する）とは、リン菌
（Neisseria gonorrhoeae）で代表されるグラム
陰性球菌、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、
ウシ流産菌（Brucella abortus）、百日咳菌
（Bordetella pertussis）などで代表されるグラム
陰性好気性桿菌、大腸菌（Escherichia coli）、
腸チフス菌（Salmonella typhi）、シゲラ ダイ
セントリー（Shigella dysenteriae）、肺炎桿菌
（Klebsiella pneumoniae）、霊菌（Serratia
marcescens）、変形菌（Proteus vulgaris）、腸
炎エルシニア（Yersinia enterocolitica）、コレ
ラ菌（Vibrio cholerae）などで代表されるグラ
ム陰性通性嫌気性桿菌等のグラム陰性菌の細胞壁
の外層に局在する脂質・多糖類の複合体、脂質・
多糖類とタンパク質の複合体、および、リピツド
Ａを意味する。該リポ多糖体は、グラム陰性菌か
ら既知の方法により抽出することができる。その
方法の代表例として、フエノール水で抽出する方
法［Van Otto Westphal et al.，ツアイトシユ
リフト フユール ナトールフオルシユング コ
ーテス ラーデス ドウ ラ ソシエテ ドウ
ビオロジー（Z.Naturforsch.，Comp.Rend.Soc.
Biol.，）128 ５（1938）］、ブタノールで抽出する
方法［D.Morrison and Leive，ジヤーナル オ
ブ バイオロジカル ケミストリー（J.Biol.
Chem.）250 2911（1975）］、および、エチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ，N′，N′−テトラ酢酸水で抽出
する方法［L.Lieve et al，J.Biol.Chem.243
6384（1968）］などをあげることができる。また、
これらのリポ多糖体をおだやかに酸処理すること
により、リピツドＡを作ることができる［本間
他、内毒素−その構造と活性、p.47−61（1983）
医歯薬出版］。
本発明でいう不溶性担体とは、実質上不溶性
で、かつ、リポ多糖体を固定することのできる担
体を意味する。該不溶性担体の形状は球状、繊維
状、膜状のいずれでもよいが、リポ多糖体を高密
度で固定化できるためには表面積の大きい形状が
好ましい。とりわけ、繊維の形状は血液との接触
効率が良く、また、血液からの分離の際の被捕捉
性が良いので好ましい。
また該不溶性担体は結晶性ポリプロピレン、ポ
リエチレンなどで代表されるポリα−オレフイン
で補強されていれば、機械的性質が向上するの
で、さらに好ましい。
また、該不溶性担体の表面積はあまり小さすぎ
ると、固定化密度が低くなるが、あまり大きすぎ
ても、固定化リポ多糖体を充填したカラムの通液
性は悪くなるので、該不溶性担体の表面積は0.01
以上50m2／ｇ以下、より好ましくは、0.05以上10
m2／ｇ以下がよい。
本発明でいう不溶性担体の一例をあげると、(1)
ポリスチレンまたはスチレン・ジビニルベンゼン
共重合体に、アミノ基、カルボキシル基、活性ハ
ロゲン基、オキシラン基、活性エステル基または
イソシアン酸基等のリポ多糖体と結合しうる官能
基を芳香核置換基として導入したもの、(2)(1)のポ
リスチレンの代りにメチレン架橋またはスルホン
架橋したポリスチレンを用いたもの、(3)アクリル
酸・メチレンビスアクリルアミド共重合体、(4)ブ
ロムシアノ化アガロースなどがあるが、これらの
なかでも、ビニルポリマを幹ポリマとする担体
が、耐酸性や対アルカリ性などに富むので、特に
好ましく用いられる
本発明で用いるリポ多糖体を結合せる不溶性担
体（以下固定化リポ多糖体と略称する）は、リポ
多糖体を不溶性担体結合表面上に化学的に結合せ
しめたものであるが、その固定化密度が低すぎる
と、血液の活性化が小さすぎて抗腫瘍活性の低い
血液しか得られない。従つて、該固定化リポ多糖
体中のリポ多糖体密度は0.01mg／ｇ以上、より好
ましくは1.0mg／ｇ以上であることが望ましい。
本発明で用いる免疫刺激剤としては、コリネバ
クテリウム パーバム（Corynebacterium
parvum）、マイコバクテリア（Mycobacteria）、
ノカルデイア（Nocardia）、BCG（Bacillus
Calmette Guerin）、結核菌メタノール不溶画分
（MER）、ワツクス Ｄ（Wax Ｄ）、結核菌全細
胞壁成分（WCW）、結核菌細胞壁基本成分
（CWS）、水溶性アジユバンド（WSA）などのマ
イコバクテリア（Mycobacteria）およびその菌
体成分、リン菌（Neisseria gonorrhoeae）、緑
膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、ウシ流産菌
（Brucella abortus）、百日咳菌（Bordetella
pertussis）、大腸菌（Escherichia coli）、腸チフ
ス菌（Salmonella typhi）、シゲラ ダイセント
リー（Shigella dysenteriae）、肺炎桿菌
（Klebsiella pneumoniae）、霊菌（Serratia
marcescens）、変形菌（Proteus vulgaris）、腸
炎エルシニア（Yersinia enterocolitica）、コレ
ラ菌（Vibrio cholerae）等のグラム陰性の細菌、
ブドウ球菌（Staphylococcus）、連鎖球菌
（Streptococcus）等のグラム陽性の細菌、ピシバ
ニール（Picibanil）、ワクシニア ビールス
（vaccina viruses）等のウイルス，インターフエ
ロン、ポリＩ：Ｃ（poliI：Ｃ）、ポリＡ：Ｕ
（poliA：Ｕ）などがあるが、とりわけ、BCGが
よい。
固定化リポ多糖体の調製は、不溶性担体をリポ
多糖体の溶液と混合するか、あるいは、さらにこ
の混合物にジシクロヘキシルカルボジイミド等の
ペプチド合成用縮合剤を添加することによつて達
成される。
本発明における血液と固定化リポ多糖体との接
触は、補体の失活や血球の損傷の起らない生理的
条件下で行なわれるのが好ましい。その接触時間
には特に制限はないが、通常10〜180分間行なわ
れる。
抗腫瘍血液製剤の具体的製法は、まず、哺乳動
物に免疫刺激剤を投与し、その１〜３週間後に(1)
固定化リポ多糖体をつめたカラムで全血体外循環
（以下DHPと略称する）したのち、該動物から採
血する方法、(2)該哺乳動物から血液を採取し、そ
の血液を固定化リポ多糖体と接触させる方法、お
よび、(3)血清または血液を血漿をえるため上記
(1)、(2)でえられた血液を遠心分離する方法があ
る。勿論さらに抗腫瘍性成分を精製濃縮すること
も可能である。
抗腫瘍血液製剤の具体的使用例をあげると、同
種または異種の担癌哺乳動物に静脈または直接腫
瘍内に投与することにより、該哺乳動物の癌の治
療を行なう方法がある。
（発明の効果）
エンドトキシンを用いたときは血液提供動物は
死亡したが、固定化リポ多糖体を用いることによ
り、死亡しなくなつた。
以下に実施例を示す。
実施例 １
ポリプロピレン（三井“ノーブレン”J3HG）
50部を島成分とし、ポリスチレン（“スタイロン”
666）46部、ポリプロピレン（住友“ノーブレン”
WF−727−Ｆ）４部の混合物を海成分とする海
島型複合繊維（島数16、単系繊度2.6デニール、
引張強度2.9ｇ／ｄ、伸度50％、フイラメント数
42）50ｇを、Ｎ−メチロール−α−クロルアセト
アミド50ｇ、ニトロベンゼン400ｇ、およびパラ
ホルムアルデヒド0.85ｇからなる混合溶液中に浸
し、20℃で１時間反応させた。繊維を反応液から
取り出し、０℃の氷水5l中に投じて、反応停止さ
せたのち、水で洗浄し、次に、繊維に付着してい
るニトロベンゼンをメタノールで抽出除去した。
この繊維（繊維Ａ）を50℃で真空乾燥して、クロ
ルアセトアミドメチル化繊維71ｇ（繊維Ａ）を得
た。
繊維A40ｇを15℃のエチレンジアミン中に浸
し、15〜20℃の温度で24時間反応させて、エチレ
ンジアミノアセトアミドメチル化繊維（繊維Ｂ）
を得た。この繊維は1.8ミリモル／ｇのエチレン
ジアミノ基を持ち、また、PH7.4における含水率
は乾燥繊維1.0ｇ当り1.0ｇであり、この状態にお
ける単糸の直径は40〜44μmであつた。
（固定化リポ多糖体の調製）
上記繊維B32ｇを300mlの水中に一昼夜膨潤さ
せたのち、Escherichia coli 055：B5のリポ多糖
体（トリクロル酢酸抽出法、デイフコ・ラボラト
リーズ社製造）の0.4mg／ml水溶液500mlと混合
し、次に1N−塩酸および1N−水酸化ナトリウム
でPHを4.5〜6.0に保ちながら、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
5.0ｇを少しずつ加え、溶解した。この混合物を
室温で２日間振とうしたのち、繊維を取り出し、
1lの沸騰水を中に30分間浸漬する操作を３回行な
つたのち、0.07モルのリン酸緩衝液（PH7.4）で
洗浄液のPHが7.4になるまで洗浄して、リポ多糖
体固定化繊維（固定化リポ多糖体）を得た。上記
固定化母液および洗浄液中のリポ多糖体の濃度を
フエノール・硫酸法（試料溶液１ml＋５％フエノ
ール水１ml＋濃硫酸５ml；485mμ）で求めた。固
定化リポ多糖体中のリポ多糖体固定化量は5.0
mg／ｇであつた。
この固定化リポ多糖体0.6ｇを200mlの局方生理
的食塩水で洗浄後、50mlの局方生理的食塩水に浸
し、38℃で３時間暖めたのち、その生理的食塩水
のエンドトキシンの存在量をリムラス・プレゲル
法で求めたところ、１ナノグラム／ml以下であつ
た。
（抗腫瘍性血液製剤の調製）
家兎（日本白色種；体重2.4〜3.0Kg）９匹に２
mgのBCG（日本BCG協会製；生菌数約4.7×107
個）を生理食塩水１mlに溶し、耳静脈から投与し
た。その３日後にVX−２腫瘍細胞１×105個
（１mlPBS緩衝液）に左大腿四頭菌内に接種し
た。それから14日後に上記固定化リポ多糖体0.6
ｇをつめた内容積10mlのポリプロピレン製カラム
を用いて、DHP（ソムノペンチル麻酔下、右大腿
動脈−耳静脈シヤント、血流量10ml／min.，ヘ
パリン500単位／Kg）を60分間行なつた。
比較群として４匹の家兎に繊維B0.6ｇをつめ
たカラムを用いてDHPを施した。
比較群では30日以内に全数死亡したのに対し、
固定化リポ多糖体のカラムでDHPを施した群で
は90日後も全数生存し、その腫瘍径（大腿筋幅）
を無処置群（BCG接種なし）に比し大幅な縮小
傾向を認た。
上記固定化リポ多糖体のカラムでDHPを施し
た群の中の２匹についてDHPの前後（ ）で採
血を行ない、その血清についてインターフエロン
様様ウイルス作用の力価（RK−13／水泡口内炎
ウイルス（VSV）…ザ ナシヨナル インステ
イチユーツ オブ ヘルス（NIH）のスタンダ
ードと比較）を測定したところ、DHPの前では
共に０であつたのに対し、DHPの後では495単位
と161単位の活性を認めた。
実施例 ２
実施例１と同様にして作つたBCG感作担癌家
兎２匹に、上記固定化リポ多糖体のカラムで実施
例１と同様にDHPを施した。DHP前後に採血
し、それから得た血清の腫瘍細胞に対する細胞障
害性および血清に含まれるエンドトキシン濃度
［トキシカラーキツト；生化学工業(株)製］を調べ、
下記の結果を得た。
(Technical Field of the Invention) The present invention relates to a method for producing a blood product with strong antitumor activity. (Prior art and its problems) Cancer is the leading cause of death in developed countries, but at present no anticancer drugs as strong as antibiotics for bacterial infections have been found. After administering immunostimulants such as BCG (attenuated Mycobacterium tuberculosis), Corynebacterium granulosum, or Zymosan to mammals (including humans), endotoxin or polypeptides are administered. When I:C (poli I:C) etc. are administered,
It is known that TNF (tumor necrosis factor) is produced in the blood of these mammals [EA Carswell et al.
Proceedings of the National Academy of Scientists of USA
(Proc.Natl.Acad.Sci.USA) vol. 72 , (9)pp3666−
3670 (1975)]. Endotoxin is the most powerful substance for inducing TNF, but it is also highly toxic, so the mammal dies while still producing TNF. Blood containing TNF produced using this method contains endotoxin, so it cannot be administered to other animals as is. Therefore, this blood
In order to utilize TNF, endotoxin must be removed from the blood, but this requires a great deal of effort. (Means for solving the problem) When producing a TNF-like substance, endotoxin is immobilized on an insoluble carrier so that it does not flow into the blood, and is used instead of endotoxin. (Structure of the Invention) The present invention involves administering an immunostimulant represented by attenuated Mycobacterium tuberculosis to a mammal, and then treating the blood of the mammal with a Gram-negative cell wall lipopolysaccharide immobilized on an insoluble carrier. The present invention provides a method for producing an antitumor blood product by. (Structure of the Invention) Gram-negative bacteria cell wall lipopolysaccharide (hereinafter abbreviated as lipopolysaccharide) as used in the present invention refers to Gram-negative cocci represented by Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa, and Pseudomonas aeruginosa. ,
Gram-negative aerobic bacilli such as Brucella abortus and Bordetella pertussis, Escherichia coli,
Salmonella typhi, Shigella dysenteriae, Klebsiella pneumoniae, Serratia
Lipids localized in the outer layer of the cell wall of Gram-negative bacteria such as Gram-negative facultative anaerobic bacilli such as Yersinia marcescens, Proteus vulgaris, Yersinia enterocolitica, and Vibrio cholerae. Complexes of polysaccharides, lipids,
It refers to a polysaccharide-protein complex and lipid A. The lipopolysaccharide can be extracted from Gram-negative bacteria by known methods. A typical example of this method is extraction with phenolic water [Van Otto Westphal et al.
Biology (Z.Naturforsch., Comp.Rend.Soc.
Biol., ) 128 5 (1938)], butanol extraction method [D.Morrison and Leive, Journal of Biological Chemistry (J.Biol.
Chem.) 250 2911 (1975)] and a method of extraction with ethylenediamine-N,N,N',N'-tetraacetic acid water [L.Lieve et al, J.Biol.Chem. 243
6384 (1968)]. Also,
Lipid A can be produced by gentle acid treatment of these lipopolysaccharides [Honma et al., Endotoxin - its structure and activity, p. 47-61 (1983)
Ishiyaku Publishing]. The insoluble carrier as used in the present invention means a carrier that is substantially insoluble and capable of immobilizing lipopolysaccharide. The shape of the insoluble carrier may be spherical, fibrous, or membrane-like, but a shape with a large surface area is preferred in order to immobilize the lipopolysaccharide at high density. In particular, the fiber shape is preferable because it has good contact efficiency with blood and good capture property when separated from blood. Further, it is more preferable that the insoluble carrier is reinforced with polyα-olefin such as crystalline polypropylene or polyethylene, since mechanical properties will be improved. In addition, if the surface area of the insoluble carrier is too small, the immobilization density will be low, but if it is too large, the liquid permeability of the column packed with immobilized lipopolysaccharide will be poor, so the surface area of the insoluble carrier is 0.01
50 m 2 /g or less, more preferably 0.05 or more 10
m 2 /g or less is preferable. An example of the insoluble carrier referred to in the present invention is (1)
A functional group capable of bonding to a lipopolysaccharide, such as an amino group, a carboxyl group, an active halogen group, an oxirane group, an active ester group, or an isocyanate group, is introduced into polystyrene or a styrene/divinylbenzene copolymer as an aromatic nucleus substituent. (2) those using methylene crosslinked or sulfone crosslinked polystyrene instead of the polystyrene in (1), (3) acrylic acid/methylenebisacrylamide copolymer, and (4) bromicyanated agarose. Among these, carriers with vinyl polymer as the backbone polymer are particularly preferred because they have high acid resistance and anti-alkali properties.Insoluble carriers to which the lipopolysaccharide used in the present invention is bound (hereinafter abbreviated as immobilized lipopolysaccharide) is a chemically bonded lipopolysaccharide onto an insoluble carrier binding surface, but if the immobilization density is too low, blood activation is too low and only blood with low antitumor activity is obtained. . Therefore, it is desirable that the lipopolysaccharide density in the immobilized lipopolysaccharide is 0.01 mg/g or more, more preferably 1.0 mg/g or more. The immunostimulant used in the present invention is Corynebacterium pervum (Corynebacterium pervum).
parvum), Mycobacteria,
Nocardia, BCG (Bacillus
Mycobacteria (Calmette Guerin), Mycobacterium tuberculosis methanol-insoluble fraction (MER), Wax D, Mycobacterium tuberculosis total cell wall component (WCW), Mycobacterium tuberculosis cell wall basic component (CWS), water-soluble adjuvant (WSA), etc. Mycobacteria and their bacterial components, Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa, Brucella abortus, Bordetella
pertussis), Escherichia coli, Salmonella typhi, Shigella dysenteriae, Klebsiella pneumoniae, Serratia
Gram-negative bacteria such as Proteus marcescens, Proteus vulgaris, Yersinia enterocolitica, and Vibrio cholerae,
Gram-positive bacteria such as Staphylococcus and Streptococcus, viruses such as Picibanil and vaccinia viruses, interferon, poly I:C (poliI:C), and polyA:U
(poliA:U), but BCG is especially good. Preparation of immobilized lipopolysaccharide is achieved by mixing an insoluble carrier with a solution of lipopolysaccharide, or by further adding to this mixture a condensing agent for peptide synthesis such as dicyclohexylcarbodiimide. In the present invention, contact between blood and immobilized lipopolysaccharide is preferably carried out under physiological conditions that do not cause deactivation of complement or damage to blood cells. The contact time is not particularly limited, but is usually carried out for 10 to 180 minutes. The specific manufacturing method for antitumor blood products is to first administer an immunostimulant to a mammal, and then 1 to 3 weeks later (1)
A method of collecting blood from the animal after extracorporeal circulation (hereinafter abbreviated as DHP) of whole blood in a column filled with immobilized lipopolysaccharide; (2) collecting blood from the mammal and adding the blood to the immobilized lipopolysaccharide; and (3) the method of contacting the serum or blood with the body to obtain plasma.
There is a method of centrifuging the blood obtained in (1) and (2). Of course, it is also possible to further purify and concentrate the antitumor component. A specific example of the use of an antitumor blood product is a method of treating cancer in a mammal bearing a tumor of the same or different species by administering it intravenously or directly into the tumor. (Effects of the Invention) Blood donor animals died when endotoxin was used, but they no longer died when immobilized lipopolysaccharide was used. Examples are shown below. Example 1 Polypropylene (Mitsui “Noblen” J3HG)
50 parts as an island component, polystyrene (“Styron”)
666) 46 parts, polypropylene (Sumitomo “Noblen”)
Sea-island composite fiber containing 4 parts of WF-727-F) as a sea component (number of islands: 16, monofilament fineness: 2.6 denier,
Tensile strength 2.9g/d, elongation 50%, number of filaments
42) 50g was immersed in a mixed solution consisting of 50g of N-methylol-α-chloroacetamide, 400g of nitrobenzene, and 0.85g of paraformaldehyde, and reacted at 20°C for 1 hour. The fibers were taken out from the reaction solution and poured into 5 liters of ice water at 0° C. to stop the reaction, washed with water, and then the nitrobenzene adhering to the fibers was extracted and removed with methanol.
This fiber (fiber A) was vacuum dried at 50° C. to obtain 71 g of chloroacetamidomethylated fiber (fiber A). 40g of fiber A was soaked in ethylenediamine at 15℃ and reacted for 24 hours at a temperature of 15~20℃ to produce ethylenediaminoacetamide methylated fiber (fiber B).
I got it. This fiber had 1.8 mmol/g of ethylene diamino groups, and the water content at pH 7.4 was 1.0 g per 1.0 g of dry fiber, and the diameter of the single yarn in this state was 40 to 44 μm. (Preparation of immobilized lipopolysaccharide) After swelling 32 g of the above fiber B in 300 ml of water for a day and night, a 0.4 mg/ml aqueous solution of Escherichia coli 055:B5 lipopolysaccharide (trichloroacetic acid extraction method, manufactured by Difco Laboratories) was prepared. 500 ml and then add 1-ethyl-3- while keeping the pH between 4.5 and 6.0 with 1N hydrochloric acid and 1N sodium hydroxide.
(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide
5.0g was added little by little and dissolved. After shaking this mixture at room temperature for 2 days, the fibers were taken out and
After 3 times immersion in 1L of boiling water for 30 minutes, the lipopolysaccharide was fixed by washing with 0.07M phosphate buffer (PH7.4) until the pH of the washing solution reached 7.4. Fiber (immobilized lipopolysaccharide) was obtained. The concentration of lipopolysaccharide in the immobilization mother liquor and washing solution was determined by the phenol/sulfuric acid method (1 ml of sample solution + 1 ml of 5% phenol water + 5 ml of concentrated sulfuric acid; 485 mμ). The amount of lipopolysaccharide immobilized in the immobilized lipopolysaccharide is 5.0
It was mg/g. After washing 0.6 g of this immobilized lipopolysaccharide with 200 ml of pharmacological saline, immersing it in 50 ml of pharmacological saline and warming it at 38°C for 3 hours, the presence of endotoxin in the physiological saline was confirmed. The amount was determined by the Limulus Pregel method and was less than 1 nanogram/ml. (Preparation of anti-tumor blood products) 2 to 9 domestic rabbits (Japanese white breed; weight 2.4-3.0 kg)
mg of BCG (manufactured by Japan BCG Association; viable bacterial count approximately 4.7×10 7
) was dissolved in 1 ml of physiological saline and administered through the ear vein. Three days later, 1×10 5 VX-2 tumor cells (1 ml PBS buffer) were inoculated into the left quadriceps. After 14 days, 0.6 of the above immobilized lipopolysaccharide
DHP (under somnopentyl anesthesia, right femoral artery-ear vein shunt, blood flow rate 10 ml/min., heparin 500 units/Kg) was performed for 60 minutes using a polypropylene column with an internal volume of 10 ml. As a comparison group, four domestic rabbits were subjected to DHP using a column packed with 0.6 g of fiber B. In the comparison group, all died within 30 days, whereas
In the group treated with DHP using an immobilized lipopolysaccharide column, all the tumors survived after 90 days, and the tumor diameter (femoral muscle width)
compared to the untreated group (no BCG vaccination). Blood was collected from two animals in the group treated with DHP using the above-mentioned immobilized lipopolysaccharide column before and after DHP ( VSV) (compared to the National Institutes of Health (NIH) standard) was measured, and both were 0 before DHP, but after DHP, activity was 495 units and 161 units. . Example 2 Two BCG-sensitized tumor-bearing rabbits prepared in the same manner as in Example 1 were subjected to DHP in the same manner as in Example 1 using the above-mentioned immobilized lipopolysaccharide column. Blood was collected before and after DHP, and the cytotoxicity of the serum obtained from the serum to tumor cells and the endotoxin concentration contained in the serum [Toxicolor Kit; manufactured by Seikagaku Corporation] were examined.
The following results were obtained.
【表】
但し、表中腫瘍細胞に対する細胞障害性の数字
は夫々の細胞を１週間培養した後の細胞増殖を対
照の半分にする試料の血清の希釈倍率である。
〔エンドトキシン濃度〕[Table] However, the numbers for cytotoxicity against tumor cells in the table are the dilution factor of the sample serum that makes the cell proliferation half that of the control after culturing each cell for one week. [Endotoxin concentration]
【表】
上記結果から抗腫瘍性血液製剤は異種哺乳動物
の癌細胞に対して明らかな細胞障害性を示すこと
がわかる。[Table] The above results show that the antitumor blood products exhibit clear cytotoxicity against cancer cells of different species of mammals.