JPH0677016B2 - 改良された癌スクリーニング診断用ミロン試薬 - Google Patents
改良された癌スクリーニング診断用ミロン試薬Info
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- JPH0677016B2 JPH0677016B2 JP1026826A JP2682689A JPH0677016B2 JP H0677016 B2 JPH0677016 B2 JP H0677016B2 JP 1026826 A JP1026826 A JP 1026826A JP 2682689 A JP2682689 A JP 2682689A JP H0677016 B2 JPH0677016 B2 JP H0677016B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の目的］ （産業上の利用分野） 本発明は癌患者の尿中において増加するフェノール性代
謝物質を確認し、癌のスクリーニング診断に簡便に用い
られるミロン試薬に関するものである。
謝物質を確認し、癌のスクリーニング診断に簡便に用い
られるミロン試薬に関するものである。
（従来の技術及び発明が解決しようとする課題） 癌は現代の進歩した医療技術によっても未だ解決できな
い難治性の致命的疾患の一つであり、他の如何なる疾患
より早期発見かつ早期治療の重要性が切実に要求されて
いるが、大部分の癌が相当に進展もしくは転移した状態
で診断されるがため早期完治の機会を失う場合が多い。
これは従来の診断方法の正確度が劣っているか、もしく
は核磁気共鳴断層撮影機等高価な装備を用いるがため患
者の経済的な負担が大になり、また組織検査等の精密検
査を受けるため患者が入院するという煩わしさがあり、
早期診断の活用には多くの難点を有する。
い難治性の致命的疾患の一つであり、他の如何なる疾患
より早期発見かつ早期治療の重要性が切実に要求されて
いるが、大部分の癌が相当に進展もしくは転移した状態
で診断されるがため早期完治の機会を失う場合が多い。
これは従来の診断方法の正確度が劣っているか、もしく
は核磁気共鳴断層撮影機等高価な装備を用いるがため患
者の経済的な負担が大になり、また組織検査等の精密検
査を受けるため患者が入院するという煩わしさがあり、
早期診断の活用には多くの難点を有する。
最近、CEA,α−フェトプロテイン等癌の標的物質検査と
単一クローン抗体等を利用した診断方法が活用されてい
るものの、癌の種類により診断率の差が大きく、また正
常人中喫煙者と妊婦からも検出されるなど全般的に正確
度が非常に劣るとともに、高価であるから癌の初期スク
リーニング診断方法として活用するには適当なものとい
うことができない。
単一クローン抗体等を利用した診断方法が活用されてい
るものの、癌の種類により診断率の差が大きく、また正
常人中喫煙者と妊婦からも検出されるなど全般的に正確
度が非常に劣るとともに、高価であるから癌の初期スク
リーニング診断方法として活用するには適当なものとい
うことができない。
本発明は先行技術の韓国特許第21558号の癌診断用ミロ
ン試薬の欠点と問題点を改善した、従来の方法より簡便
かつ迅速に癌スクリーニング診断に活用できうる診断試
薬を提供するものである。
ン試薬の欠点と問題点を改善した、従来の方法より簡便
かつ迅速に癌スクリーニング診断に活用できうる診断試
薬を提供するものである。
尿検査は試料採取が簡便であるがため最も普遍的に活用
されている疾病の診断方法である。人体の尿中には体内
の種々の代謝物質が排泄されるが故に、患者の尿中には
疾患固有の病態により特定代謝物質の排泄が増加するこ
とは周知の事実であり、癌患者の場合ミロン試薬により
呈色するチロシン及びチロシンを末端に有するペプチド
並びに蛋白類等のフェノール性代謝物質等の過多排泄が
予想されるがため、先行技術にて癌患者の尿中にミロン
試薬を反応させて癌診断に応用したことは非常に興味の
あることである。
されている疾病の診断方法である。人体の尿中には体内
の種々の代謝物質が排泄されるが故に、患者の尿中には
疾患固有の病態により特定代謝物質の排泄が増加するこ
とは周知の事実であり、癌患者の場合ミロン試薬により
呈色するチロシン及びチロシンを末端に有するペプチド
並びに蛋白類等のフェノール性代謝物質等の過多排泄が
予想されるがため、先行技術にて癌患者の尿中にミロン
試薬を反応させて癌診断に応用したことは非常に興味の
あることである。
従って、本発明者はミロン試薬を臨床的に癌診断用とし
て活用せんがため、先行技術である韓国特許第21558号
の癌診断用ミロン試薬を先ず検証し、その結果15％硫酸
に硫酸水銀を溶解した溶液の原液もしくは希釈液にゼラ
チンを加えてゲル状になった試薬を用いて、チロシン標
準液及び癌患者の尿を試したが呈色反応を示さず、また
金属水銀と濃硝酸とを用いて得た試薬の希釈液にゼラチ
ンを加えてゲル状になった試薬による結果は、癌患者の
尿に対しては呈色反応があったものの、反応色相が弱く
かつ反応時間が長くて癌患者と非癌患者とを区別する客
観的な判別基準設定に困難があり、実際の臨床検査に応
用するには不適であった。
て活用せんがため、先行技術である韓国特許第21558号
の癌診断用ミロン試薬を先ず検証し、その結果15％硫酸
に硫酸水銀を溶解した溶液の原液もしくは希釈液にゼラ
チンを加えてゲル状になった試薬を用いて、チロシン標
準液及び癌患者の尿を試したが呈色反応を示さず、また
金属水銀と濃硝酸とを用いて得た試薬の希釈液にゼラチ
ンを加えてゲル状になった試薬による結果は、癌患者の
尿に対しては呈色反応があったものの、反応色相が弱く
かつ反応時間が長くて癌患者と非癌患者とを区別する客
観的な判別基準設定に困難があり、実際の臨床検査に応
用するには不適であった。
元来ミロン試薬はフェノール、チロシンのように3,5−
位が置換されていないｐ−ヒドロキシフェニル誘導体の
呈色確認に用いるチロシンの非特異的確認試薬として、
金属水銀を濃硝酸又は発煙硝酸に溶解させた後、蒸溜水
で適切な濃度に希釈して用いるか、もしくは硫酸水銀の
硫酸溶液を試料に加えて水浴中で加熱した後、亜硫酸ナ
トリウム又は亜硝酸カリウム水溶液を加えて発色させる
二つの方法が知られている。
位が置換されていないｐ−ヒドロキシフェニル誘導体の
呈色確認に用いるチロシンの非特異的確認試薬として、
金属水銀を濃硝酸又は発煙硝酸に溶解させた後、蒸溜水
で適切な濃度に希釈して用いるか、もしくは硫酸水銀の
硫酸溶液を試料に加えて水浴中で加熱した後、亜硫酸ナ
トリウム又は亜硝酸カリウム水溶液を加えて発色させる
二つの方法が知られている。
しかしながら、前者の場合、金属水銀を濃硝酸又は発煙
硝酸に溶かす時、多量発生する二酸化窒素（NO2）ガス
による公害問題と有毒性金属水銀を取り扱う作業者の安
全問題が生じ、更に試薬として用いる際、水銀塩の組成
と酸濃度の標準化が困難である。なお、後者の場合、加
熱操作が随伴し煩わしくなるのみならず、尿試料中の蛋
白が加水分解されてトリプトファンのような発色妨害物
質が遊離する欠点がある。
硝酸に溶かす時、多量発生する二酸化窒素（NO2）ガス
による公害問題と有毒性金属水銀を取り扱う作業者の安
全問題が生じ、更に試薬として用いる際、水銀塩の組成
と酸濃度の標準化が困難である。なお、後者の場合、加
熱操作が随伴し煩わしくなるのみならず、尿試料中の蛋
白が加水分解されてトリプトファンのような発色妨害物
質が遊離する欠点がある。
［発明の構成］ （課題を解決するための手段及び作用） 本発明者はかかる欠点を改善せんがため、癌患者と非癌
患者並びに正常人の尿中からのフェノール性代謝物質と
ミロン試薬との反応が濃度と相関関係があることに着眼
し、ミロン試薬の配合の割合を色々と変えてみた結果、
（＋）一価の水銀塩の硝酸溶液と（＋）二価の水銀塩の
硫酸溶液との混合液を癌患者の尿中に加えると、最も安
定した赤色乃至赤褐色の沈殿が生じることを認めた。こ
れは一価水銀塩がフェノール性代謝物質と反応し赤色沈
殿を得る反応に関与するものの、試料中に含まれている
無機塩類の妨害を受けやすく、一方、二価水銀塩は赤色
反応には関与しないが、無機塩類との沈殿物を割りによ
く生成するがため二価水銀が試料溶液中の無機塩類を沈
殿、除去することにより一価水銀による発色を促進させ
る二つの試薬の長所を組合せた結果とみなすのである。
患者並びに正常人の尿中からのフェノール性代謝物質と
ミロン試薬との反応が濃度と相関関係があることに着眼
し、ミロン試薬の配合の割合を色々と変えてみた結果、
（＋）一価の水銀塩の硝酸溶液と（＋）二価の水銀塩の
硫酸溶液との混合液を癌患者の尿中に加えると、最も安
定した赤色乃至赤褐色の沈殿が生じることを認めた。こ
れは一価水銀塩がフェノール性代謝物質と反応し赤色沈
殿を得る反応に関与するものの、試料中に含まれている
無機塩類の妨害を受けやすく、一方、二価水銀塩は赤色
反応には関与しないが、無機塩類との沈殿物を割りによ
く生成するがため二価水銀が試料溶液中の無機塩類を沈
殿、除去することにより一価水銀による発色を促進させ
る二つの試薬の長所を組合せた結果とみなすのである。
本発明は少量の被検者の尿中に、一価水銀塩の硝酸溶液
と二価水銀塩の硫酸溶液を一定の割合である混合液を加
えた時、生成する沈殿物の色相により癌の罹病可能性が
あるか否かを診断するものであり、癌患者においては赤
色乃至赤褐色の沈殿が生成するが、正常人の場合は白色
の沈殿のみ生じる。
と二価水銀塩の硫酸溶液を一定の割合である混合液を加
えた時、生成する沈殿物の色相により癌の罹病可能性が
あるか否かを診断するものであり、癌患者においては赤
色乃至赤褐色の沈殿が生成するが、正常人の場合は白色
の沈殿のみ生じる。
本発明試薬組成物の各成分の組成比には特に限定されな
いが、一価水銀塩の硝酸溶液と二価水銀塩の硫酸溶液と
を約１対0.1〜３の割合で混合したものを用いることが
できるが、一価水銀塩の硝酸溶液は通常Hg2（NO3）２又
はその水和物を１〜２モルの硝酸に溶解させたものを用
いるのが好ましく、二価水銀塩の硫酸溶液は硫酸水銀
（HgSO4）もしくは酸化水銀（HgO）を濃硫酸に溶解した
ものを用いるのが好ましい。
いが、一価水銀塩の硝酸溶液と二価水銀塩の硫酸溶液と
を約１対0.1〜３の割合で混合したものを用いることが
できるが、一価水銀塩の硝酸溶液は通常Hg2（NO3）２又
はその水和物を１〜２モルの硝酸に溶解させたものを用
いるのが好ましく、二価水銀塩の硫酸溶液は硫酸水銀
（HgSO4）もしくは酸化水銀（HgO）を濃硫酸に溶解した
ものを用いるのが好ましい。
本発明試薬組成物において、二価水銀イオンは直接呈色
反応に関与しないがため試料中の無機塩類及び他の不純
物を除去するに必要な量であればよい。一価水銀イオン
対二価水銀イオンの組成比には特に限定されないが、一
般的に約１対0.1〜２が好ましく、より好ましい割合は
約１対0.3〜１である。この時、二価水銀イオンの組成
比が大過ぎると相対的に一価水銀イオンの試薬中含量が
低下し色相が弱くなり、また少な過ぎると本発明の効果
が減少するので好ましくない。
反応に関与しないがため試料中の無機塩類及び他の不純
物を除去するに必要な量であればよい。一価水銀イオン
対二価水銀イオンの組成比には特に限定されないが、一
般的に約１対0.1〜２が好ましく、より好ましい割合は
約１対0.3〜１である。この時、二価水銀イオンの組成
比が大過ぎると相対的に一価水銀イオンの試薬中含量が
低下し色相が弱くなり、また少な過ぎると本発明の効果
が減少するので好ましくない。
（発明の実施例） 実施例１ 濃硝酸20mlにHg2（NO3）２・2H2O 14gを溶解した溶液
（すなわち、1.25モル濃度＝2.5モルイオン濃度）と、6
N硫酸100mlにHgSO415gを溶解した溶液（すなわち、0.50
6モル濃度＝0.5モルイオン濃度）とを容積比1:2の割合
で混合した。従って上記混合溶液中の第一水銀イオンと
第二水銀イオンの比率は、1:0.4である。別に、試験管
内に被検者の尿5mlを採り、前記の割合で組成された試
薬約0.6mlを加えてよく振った後、１〜２分間放置する
と癌患者の場合には赤色沈殿が生じ、一方、非癌患者も
しくは正常人の場合には白色沈殿が生じた。
（すなわち、1.25モル濃度＝2.5モルイオン濃度）と、6
N硫酸100mlにHgSO415gを溶解した溶液（すなわち、0.50
6モル濃度＝0.5モルイオン濃度）とを容積比1:2の割合
で混合した。従って上記混合溶液中の第一水銀イオンと
第二水銀イオンの比率は、1:0.4である。別に、試験管
内に被検者の尿5mlを採り、前記の割合で組成された試
薬約0.6mlを加えてよく振った後、１〜２分間放置する
と癌患者の場合には赤色沈殿が生じ、一方、非癌患者も
しくは正常人の場合には白色沈殿が生じた。
実施例２ 濃硝酸20mlにHg2（NO3）２・2H2O 14gを溶解した溶液
（すなわち、1.25モル濃度＝2.5モルイオン濃度）と、
硫酸100mlにHgO10gを溶解した溶液（すなわち、0.46モ
ル濃度＝0.46モルイオン濃度）とを1:2の割合で混合し
た。従って上記混合液中の第一水銀イオンと第二水銀イ
オンの比率は1:0.37である。
（すなわち、1.25モル濃度＝2.5モルイオン濃度）と、
硫酸100mlにHgO10gを溶解した溶液（すなわち、0.46モ
ル濃度＝0.46モルイオン濃度）とを1:2の割合で混合し
た。従って上記混合液中の第一水銀イオンと第二水銀イ
オンの比率は1:0.37である。
本発明により組成された試薬の臨床的効能は実施例１と
同様な方法で、癌と診断された患者34名と他の疾病患者
33名を対象に午前最初の尿を採取し、検査を行った結
果、次の表１に記載された如くSensitivity85.3％,Spec
ifity90.9％の高い診断率を得た。
同様な方法で、癌と診断された患者34名と他の疾病患者
33名を対象に午前最初の尿を採取し、検査を行った結
果、次の表１に記載された如くSensitivity85.3％,Spec
ifity90.9％の高い診断率を得た。
なお、表１の一連番号においてカッコを付したものは癌
患者であることを示す。
患者であることを示す。
更に、定期身体検査で正常に判定された職場人118名を
標本として行った検査において、偽陽性（False Positi
ve）率が2.54％で極めて低い結果を得た。従って、本試
薬は癌患者の区別診断のみならず定期身体検査の際、簡
単な尿検査により簡便でかつ迅速に早期の癌発生可否に
対するスクリーニング診断用として活用度が非常に優れ
た診断用試薬である。
標本として行った検査において、偽陽性（False Positi
ve）率が2.54％で極めて低い結果を得た。従って、本試
薬は癌患者の区別診断のみならず定期身体検査の際、簡
単な尿検査により簡便でかつ迅速に早期の癌発生可否に
対するスクリーニング診断用として活用度が非常に優れ
た診断用試薬である。
Claims (3)
- 【請求項１】一価水銀塩の濃硝酸溶液及び二価水銀塩の
濃硫酸溶液からなる癌診断用試薬組成物。 - 【請求項２】一価水銀塩がHg2（NO3）２であり、二価水
銀塩がHgSO4又はHgOである請求項１に記載の癌診断用試
薬組成物。 - 【請求項３】組成物中の一価水銀イオン対二価水銀イオ
ンの割合が1:0.1〜２である請求項１又は２に記載の癌
診断用試薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019880002510A KR900002747B1 (ko) | 1988-03-11 | 1988-03-11 | 암스크리닝 진단용의 개량된 밀론시약 |
| KR2510/1988 | 1988-03-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01311271A JPH01311271A (ja) | 1989-12-15 |
| JPH0677016B2 true JPH0677016B2 (ja) | 1994-09-28 |
Family
ID=19272745
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1026826A Expired - Lifetime JPH0677016B2 (ja) | 1988-03-11 | 1989-02-07 | 改良された癌スクリーニング診断用ミロン試薬 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0341803B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0677016B2 (ja) |
| KR (1) | KR900002747B1 (ja) |
| DE (2) | DE68908257T2 (ja) |
| ES (1) | ES2055678T3 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102004103B (zh) * | 2010-10-13 | 2012-02-29 | 朱建华 | 用于检测人体尿液中酪氨酸类酚代谢物的试剂盒 |
| CN104390974B (zh) * | 2014-10-31 | 2016-03-02 | 江苏东博生物医药有限公司 | 一种尿液中肿瘤标志物色氨酸检测试剂及制备方法 |
| CN104390975B (zh) * | 2014-10-31 | 2016-03-02 | 江苏东博生物医药有限公司 | 尿液中肿瘤标志物5-羟吲哚乙酸检测试剂及制备方法 |
| CN104535565B (zh) * | 2014-12-25 | 2016-03-02 | 江苏东博生物医药有限公司 | 单羟酚类代谢物尿液检测试剂及其制备方法 |
| CN105181687A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-23 | 朱建华 | 对羟基苯丙氨酸酪氨酸尿液检测试剂 |
| CN105158248A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-16 | 苏州锐霖生物科技有限公司 | 一种尿液单羟酚类代谢物检测试剂的制备方法 |
| CN105136793A (zh) * | 2015-09-21 | 2015-12-09 | 苏州锐霖生物科技有限公司 | 一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法 |
| CN106093033A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-09 | 江西格朗生物技术有限公司 | 广谱肿瘤尿检试剂的制备方法 |
| CN107703304B (zh) * | 2017-08-26 | 2019-05-24 | 深圳瑞达生物股份有限公司 | 羟苯衍生物检测试剂、其制备方法及肿瘤筛查试剂 |
-
1988
- 1988-03-11 KR KR1019880002510A patent/KR900002747B1/ko not_active Expired
-
1989
- 1989-01-23 EP EP89300587A patent/EP0341803B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-23 ES ES89300587T patent/ES2055678T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-23 DE DE89300587T patent/DE68908257T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-01-23 DE DE198989300587T patent/DE341803T1/de active Pending
- 1989-02-07 JP JP1026826A patent/JPH0677016B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE68908257D1 (de) | 1993-09-16 |
| EP0341803A1 (en) | 1989-11-15 |
| KR900002747B1 (ko) | 1990-04-28 |
| KR890015022A (ko) | 1989-10-28 |
| DE341803T1 (de) | 1990-07-26 |
| DE68908257T2 (de) | 1993-12-09 |
| EP0341803B1 (en) | 1993-08-11 |
| ES2055678T3 (es) | 1994-11-01 |
| JPH01311271A (ja) | 1989-12-15 |
| ES2055678T1 (es) | 1994-09-01 |
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